UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA
Evaluación del crecimiento micelial de Ganoderma Spp. en suero de leche.
“
AUTORA: Br. BLANCA INES SANJURJO JIMENEZ
ASESOR: Ms C. JULIO CÉSAR ARELLANO BARRAGÁN
TRUJILLO-PERÚ
2015
TESIS
PARA OBTENER POR EL TÍTULO DE:
BIÓLOGO MICROBIÓLOGO
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
ii
DEDICATORIA
A mis padres, Sergio y Patricia, a mis hermanos, por su
inmenso amor, sus sabios consejos, su gran confianza,
constante apoyo y su comprensión, por estar siempre a mi
lado. Gracias por su esfuerzo y dedicación, me enseñaron a
nunca darme por vencida ante las adversidades que se me
han presentaron en la vida. Gracias por regalarme la
oportunidad de ser alguien y de ser profesional.
¡LOS AMO MUCHO!
A Dios porque nunca me abandonó en el largo
andar de mi aprendizaje, porque aun cuando
tuve muchos obstáculos, nunca dudaste en
darme fuerzas e hiciste más llevadero mi
caminar.
¡MUCHAS GRACIAS!
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
iii
A mis profesores, los cuales me brindaron e
inculcaron conocimientos para lograr los
mejores resultados en mi vida profesional.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
iv
AGRADECIMIENTO
Expreso mi especial agradecimiento a mi asesor de tesis; al Mg. Maestro Julio
César Arellano Barragán; por su valioso apoyo y haberme brindado la
oportunidad de aprender nuevos conocimientos, así mismo por orientarme en
la realización y culminación del presente estudio, muchas gracias profesor por
su calidad humana brindarme su amistad desinteresada.
A la Universidad Nacional de Trujillo, a la Facultad de Ciencias Biológicas y de
manera especial a la Escuela Académico Profesional de Microbiología y
Parasitología, por haberme brindado el espacio y el lugar para crecer
profesionalmente y conocer buenas personas, momentos inolvidables y
terminar mi carrera.
A mis amigos y compañeros de la universidad que me permitieron compartir
cosas y momentos inolvidables, jamás olvidare esos años que convivimos,
gracias por su amistad.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
v
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves
VICERRECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVRSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO
Dr. Rubén Vera Veliz
VICERECTOR DE INVESTIGACION
Dr. Weyder Portocarrero Cardenas
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Dr. José Mostacero León
DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADEMICO PROFSIONAL D MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA
Dra. Bertha Soriano Bernilla
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
vi
CERTIFICACION DEL ASESOR
El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la tesis Evaluación del
crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche.
CERTIFICA
Que la presente tesis ha sido ejecutada conforme a los objetivos propuestos y
con las orientaciones pertinentes al Tesista.
En cuanto al informe, éste ha sido revisado y acogidas a las observaciones y
sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo a la bachiller BLANCA INES
SANJURJO JIMENEZ para continuar con los trámites correspondientes.
……………………………………………………………..
Ms C. Julio César Arellano Barragán
Profesor Principal D.E.
Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
vii
PRESENTACIÓN Señores miembros del jurado:
En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la
Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la
Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado
criterio, el presente trabajo de investigación titulado.
Evaluación del crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche.
Con el cual cumplo uno de los requisitos indispensables para obtener el título
de Biólogo Microbiólogo.
Trujillo, 15 de Mayo del 2015
……………………………………………………………..
Br. BLANCA INES SANJURJO JIMENEZ
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
viii
JURADO DICTAMINADOR
PRESIDENTE
Dr. Marco Salazar Castillo
SECRETARIO
Mg.C. Julio César Arellano Barragán
VOCAL
Mblgo. Gerardo Alayo Espinoza
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
ix
APROBACION
Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaramos
que el presente informe de la tesis ha cumplido con los requisitos
fundamentales exigidos; siendo aprobado por unanimidad.
PRESIDENTE
Dr. Marco Salazar Castillo
SECRETARIO
Mg.C. Julio César Arellano Barragán
VOCAL
Mblgo. Gerardo Alayo Espinoza
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
x
RESUMEN
La gran demanda de producción de hongos comestibles, por su poder
nutricional y medicinal, ha llevado a buscar nuevos sustratos económicos y
ecológicos, es una alternativa confiable para el tratamiento de diversas
enfermedades que afectan al humano. El uso suero de leche, como medio de
cultivo, puede suministrar gran cantidad de fuentes de carbono y de energía
necesaria para el desarrollo de muchos microorganismos. Por esta razón, con
el finalidad de evaluar el crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de
leche, se establecieron ocho medios de cultivo que permitieron la medición del
crecimiento radial del hongo en agar papa dextrosa (APD), agar suero de leche
más extracto de levadura (ASLEL), agar suero de leche (ASL), agar sabouraud
dextrosa (ASD) y a la vez, se midió el peso seco del micelio formado en caldo
papa dextrosa.(CPD), caldo suero de leche más extracto de levadura (CSLEL),
caldo suero de leche (CSL) y caldo sabouraud dextrosa (CSD) para determinar
la biomasa desarrollada. Los medios donde la cepa presentó el mayor
crecimiento radial fue con el agar suero de leche (ASL) con 52.88 mm y mayor
biomasa fue el caldo de suero de leche (CSL) con 1.6 g. a los 14 días de
incubación.
Palabras claves: crecimiento micelial, Ganoderma spp., micelio,
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
xi
ABSTRACT
The whey demand for production of edible fungi, for its nutritional and medicinal
power, has led to seek new economic and ecological substrates, It´s a reliable
alternative for the treatment of various diseases that affect human The use of
milk serum as culture medium can supply many sources of carbon and energy
to the development of many microorganisms. Therefore, in order to evaluate the
mycelial growth of Ganoderma spp. in whey. Eight half culture allowed
measurement of radial growth of the fungus on potato dextrose agar (PDA)
were established, more whey agar yeast extract (WYEA), whey agar (WA),
sabouraud dextrose agar (SDA) and while, the dry weight of the mycelium
formed in potato dextrose broth was measured. (PDB), milk whey broth plus
yeast extract (WYEB) broth milk serum (WB) and sabouraud dextrose broth
(SDB) to determine biomass developed. Were obtained which means that the
strain had the highest growth rate were whey agar (WA) with 52.88 mm and
whey broth (WB) with 1.6 g. at 14 days of incubation.
Key words: mycelial growth, Ganoderma spp., mycelium.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
xii
INDICE
DEDICATORIA.................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO .......................................................................................... iv
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .................. v
CERTIFICACION DEL ASESOR ....................................................................... vi
PRESENTACIÓN .............................................................................................. vii
JURADO DICTAMINADOR .............................................................................. viii
APROBACION ................................................................................................... ix
RESUMEN .......................................................................................................... x
ABSTRACT ........................................................................................................ xi
INDICE .............................................................................................................. xii
I. INTRODUCCION ..........................................................................................1
II. MATERIALES Y METODOS ........................................................................7
2.1. MATERIAL .........................................................................................7
2.1.1. Material Biológico. ..............................................................................7
2.1.2. Medios de Cultivo. ..............................................................................7
2.1.3. Reactivos. ..........................................................................................7
2.2. METODO ...........................................................................................7
2.2.1. Reactivación de las esporas de Ganoderma spp. ..............................7
2.2.2. Obtención de cultivo monospórico de Ganoderma spp. .....................8
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
xiii
2.2.3. Preparación de suero de leche. .........................................................8
2.3. EVALUACION DEL CRECIMIENTO RADIAL Y BIOMASA. ...............9
2.3.1. Medición de crecimiento radial ...........................................................9
2.3.2. Medición de la biomasa (peso seco). ...............................................10
2.4. ANÁLISIS ESTADISTICOS. .............................................................10
3. RESULTADOS ...........................................................................................11
4. DISCUSION................................................................................................19
5. CONCLUSIONES .......................................................................................22
6. RECOMENDACIONES ..............................................................................23
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...........................................................24
ANEXOS ...........................................................................................................28
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
1
I. INTRODUCCION
Los hongos son organismos que se encuentran en todos los ambientes y
sobre una gran variedad de sustratos. La existencia de los hongos se registra
en zonas desérticas, tropicales, templadas incluyendo ambientes acuáticos 1,
siendo un grupo muy variado y polimórfico 2. Mientras que, cuando se hace
referencia a ellos se habla de organismos con núcleo portadores de esporas,
que a diferencia de las plantas carecen de clorofila y se reproducen sexual y
asexualmente, poseen un cuerpo formado por un conjunto de filamentos
llamados hifas, que en conjunto forman una masa algodonosa blanca llamada
micelio 1.
Existe gran cantidad de hongos que han sido identificados, entre los
cuales, muchos se consideran comestibles. De las 150 especies conocidas de
hongos comestibles, algunos contienen propiedades medicinales solo la mitad
es cultivada, con fines comerciales, mientras que la otra mitad se encuentra de
manera silvestre 3. Sin embargo, es poco conocido su gran potencial como
alimento funcional con propiedades nutricionales y medicinales que promueven
la salud. Estas propiedades son únicas y diferentes a las aportadas por otros
alimentos ampliamente consumidos 4.
El interés por los hongos con propiedades medicinales en especial los
que se refieren al género Ganoderma,spp. representa un grupo perteneciente a
la división Basidiomycotina. Crecen sobre la madera en descomposición
absorbiendo los nutrientes a través en pequeños tubos conocidos como hifas y
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
2
que desarrollan los cuerpos fructíferos sobre los troncos. Este género de
hongos puede crecer en condiciones elevadas de calor y humedad 1.
En la actualidad en algunas partes del mundo el hongo Ganoderma spp.
se cultiva artificialmente como en china, país que ocupa el primer lugar en
cuanto a su producción – 4.300 toneladas anuales siguiéndole Corea, Taiwán,
Japón, Estados Unidos, Malasia, Vietnam, Indonesia y Sri Lanka, siendo los
más conocidos en occidente el Shiitake (Lentinula edodes) y el Reishi
(Ganaderma spp.). Este último, ha sido estudiado intensamente en los últimos
años, por la gran cantidad de propiedades medicinales y compuestos
bioactivos que se le atribuyen a los carpóforos, en los que se encuentran
incluidos más de 119 tipos de tripertenos diferentes y varios tipos de
polisacáridos 5.
Ganoderma spp. tiene una amplia distribución y poder medicinal, sobre
todo a partir de la toma de conciencia por su valor en la prevención y
tratamiento de enfermedades 3, sin efectos secundarios a diferencia de los
fármacos sintéticos, convirtiéndolo en un producto natural y beneficioso para la
industria. Investigaciones recientes demostraron el efecto a nivel molecular en
la prevención y terapia del cáncer 6. Así como la actividad en la protección del
hígado, hipoglucemia e inhibición en la agregación plaquetaria posee también
la capacidad de regular la respuesta inmunológica. Además de su uso en la
hipertensión y neoplasia 7.
Estas observaciones han generado el cultivo masivo de Ganoderma spp.
4. La creciente demanda que han generado los carpóforos de Ganoderma spp.
por sus comprobadas propiedades y para la obtención de sus metabolitos, ha
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
3
creado la necesidad de encontrar alternativas a las desventajas que presenta el
cultivo sólido convencional, tales como, tiempo de fructificación, dificultad para
controlar las plagas y elevados costos de los substratos. El uso de medios de
cultivo para el crecimiento y desarrollo de organismos, tales como bacterias y
hongos ha ido en aumento, debido a que hoy en día existen organismos, de los
cuales es indispensable su aislamiento para su estudio fisiológico, morfológico,
entre otros 8.
Así mismo, los medios de cultivo convencionales como agar papa
dextrosa, agar sabouroud dextrosa, han ayudado en la investigación en el
campo de la micología. El medio de cultivo agar papa dextrosa (APD), ha
demostrado en una investigación ser un medio eficaz en la evaluación del
crecimiento y esporulación de Aschersonia aleyrodis webber 9. Estudios
realizados con Botrytis cinerea y Monilia fructicula en el año 2006 indicaron
que estos hongos presentan un crecimiento rápido en un medio libre de
compuestos o sustancias que puedan alterar o impedir su crecimiento, y que a
cambio de esto, le aporta los nutrientes necesarios para continuar con su
normal desarrollo, siendo el medio utilizado agar papa dextrosa 8.
Los hongos desempeñan un papel muy importante en la naturaleza en
especial los saprobios, ya que ayudan a la degradación de la materia orgánica
y la reincorporación de los nutrientes al suelo ,además algunos contienen
potentes compuestos bioactivos tales como: los polisacáridos del tipo β-
glucanos y los ácidos ganodérmicos 3 los cuales se producen en mayor
cantidad, los triterpenoides ;los cuales se han utilizado en la medicina
tradicional y moderna por muchos países para el tratamiento y prevención del
cáncer y tienen la capacidad de regular el sistema inmune; se han identificado
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
4
proteínas bioactivas, adenosinas, ácidos nucleicos y otras sustancias. Hay un
grupo de interés particular, que son proteínas inmuno-moduladora, las que se
han aislado de Ganoderma spp. y otros hongos con efectos inmunológicos 10.
Los medios de cultivo utilizados para la producción de Ganoderma spp.
son los medios convencionales que nos permiten el ahorro de tiempo y costos
y lo más importante la obtención de metabolitos para lo cual tenemos el agar
papa dextrosa (APD). La aplicación del agar papa dextrosa como medio de
cultivo, para hongos, ha resultado muy eficiente por poseer los componentes
nutricionales y esenciales para el crecimiento de hongos, tal es así que se han
realizado innumerables trabajos de investigación, referente al aislamiento,
producción de micelio, entre otros que ha permitido a la ciencia avanzar en el
campo de la micología, al igual que el agar sabouroud ; ya que gracias a estos
medios convencionales se ha encontrado buenos resultados 11, 12, 13. La
utilización de materiales orgánicos agroindustriales para los cultivos de los
hongos es el reflejo de su extraordinaria actividad metabólica 13.
La búsqueda de nuevas alternativas para la gestión y la utilización de los
residuos derivados de las actividades agrícolas y pecuarias han generado la
necesidad de transformar los residuos en beneficio de la producción de
hongos a partir de la descomposición de restos orgánicos o procesos
agropecuarios, los cuales son altamente contaminantes para el medio
ambiente. Los sustratos más utilizados recientemente para el crecimiento y
desarrollo de los hongos son las maderas, cáscaras, pajas de cereales 9, los
cuales resultan económicos, ecológicos y de fácil acceso.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
5
El suero de leche es uno de los residuos orgánicos representativo del
sector lechero y además uno de los contaminantes más severos a nivel
ambiental 14. En ocasiones el suero es vertido directamente en ríos u otros
cuerpos de agua. Esta práctica causa serios problemas de contaminación en
dichos afluentes acuíferos, ya que posee una alta demanda biológica de
oxígeno (DBO) y un alto contenido de sólidos totales. En otros casos el suero
es utilizado como complemento en la dieta de algunos animales pecuarios,
debido a que posee alto contenido de nutrientes, tales como carbohidratos y
proteínas. El suero se destina también para la alimentación de cerdos 15.
Debido al alto valor nutricional, el suero puede ser utilizado en la manufactura
de algún sub-producto lácteo 16.
El suero de leche es un líquido obtenido en el proceso de fabricación del
queso y de la caseína, después de la separación de la cuajada o fase miceliar.
Sus características corresponden a un líquido fluido, de color verdoso
amarillento, turbio, de sabor fresco, débilmente dulce, de carácter ácido, con un
contenido de nutrientes o extracto seco del 5,5 al 7% proveniente de la leche 17.
Conteniendo en promedio 4.9% de lactosa, 0.9% de proteína, 0.6% de cenizas
18.
La utilización de este residuo orgánico como el lacto suero es una
alternativa biotecnológica, además como medio de cultivo, suministra las
fuentes de carbono y de energía necesaria para el desarrollo de diferentes
microorganismos y la producción de la industria alimentaría reduciendo así los
problemas ambientales que generan sus componentes 19.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
6
El crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche, presenta
una alternativa de estudio para la obtención de nuevos medios de cultivo de
bajo costo y alta eficiencia en el crecimiento micelial de hongos comestibles. Es
una buena oportunidad de darle un valor agregado importante a este producto
residual de la industria láctea ya que contiene casi todos los nutrientes
necesarios entre carbohidratos y proteínas para el crecimiento de un organismo
y evitando así un potencial contaminante ambiental.
Con la finalidad de evaluar el efecto del suero de leche como sustrato en
el crecimiento micelial In vitro de Ganoderma spp. en la presente investigación
se realizó la evaluación del crecimiento micelial, en ocho medios de cultivos en
condiciones de laboratorio.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
7
II. MATERIALES Y METODOS
2.1. MATERIAL
2.1.1. Material Biológico.
En el presente estudio se utilizó 5 litros de suero de leche, la
muestra de Ganoderma spp. y esporas fueron donadas por el
Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal de la
Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional de Trujillo.
2.1.2. Medios de Cultivo.
Los medios de cultivo empleados fueron preparados en el laboratorio
de Tecnología enzimática, entomopatógenos y productos naturales
de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de
Trujillo.
2.1.3. Reactivos.
Ácido láctico, fenol, azul de lactofenol.
Alcohol etílico al 70%, KOH 10%, Hipoclorito de Na al 1%,
clorofenicol, agua destilada estéril, Cuajo “torero”
2.2. METODO
2.2.1. Reactivación de las esporas de Ganoderma spp.
Se pesó 20 mg de esporas en un volumen de 5 mL de agua
destilada estéril (ADE) más cloranfenicol (50ug/mL). Luego se
centrifugó a 500-600 rpm por 10 minutos. Se eliminó el sobrenadante
y al sedimento obtenido, se diluyó en 5 mL de ADE más
cloranfenicol. Se centrifugó nuevamente a 500-600 rpm por
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
8
10minutos. El paquete de esporas obtenido fue sometido a un
tratamiento de limpieza y desinfección con lejía al 1% durante 5
minutos. Se centrifugó a 500-600 rpm por 10 minutos; se realizó un
lavado con 5 mL de ADE y se centrifugó nuevamente a 500-600 rpm
por 10 minutos. Seguidamente, se sometió a un tratamiento con
alcohol al 70% durante 5 minutos. Seguidamente se centrífugo y lavó
con ADE. Finalmente, al paquete de esporas obtenidas se le sometió
a un tratamiento térmico (60-70ºC) por 5 minutos enfriado en agua
helada y nuevamente se centrifugó y lavó con ADE.
2.2.2. Obtención de cultivo monospórico de Ganoderma spp.
Se determinó el número de esporas/mL con la cámara de
Neubauer. Finalmente se sembró por superficie 0.1mL.
Concentración de esporas 102, se suspendió las esporas en placas
con agar sabouraud, agar papa dextrosa, agar extracto de levadura y
agar suero de leche más extracto de levadura.
Se dejó incubar por 5 días. Transcurrido este tiempo se encontró
una espora germinada la cual se cortó en un cuadradito de agar y se
trasladó a una placa con Agar sabouraud Se sembró por puntura
central dejándose a incubación por 7 días a temperatura ambiente
(27ºC±1) en un ambiente oscuro hasta la formación de la colonia de
Ganoderma spp 20, 21.
2.2.3. Preparación de suero de leche.
Se utilizó 10 litros de leche fresca calentándola a 40°C y luego se
agregó un ¼ de pastilla de cuajo (Torero). Se dejaron en reposo por
30 minutos y se produjo la separación de la caseína del suero, el
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
9
mismo que fue separado de la fase liquida. El suero que presento un
color amarillento fue separado en frascos de 500 mL, tindalizados y
guardados en congelación hasta su uso.
2.2.4. Selección de los medios de cultivo para el crecimiento micelial
del hongo Ganoderma spp.
Se utilizaron ocho medios de cultivo. Cuatro sólidos y
cuatro líquidos. Los medios solidos fueron: el agar suero de leche
(ASL), el agar suero de leche con extracto de levadura (ASLEL),
agar sabouraud dextrosa (ASD) y agar papa dextrosa (APD).Los
medios líquidos fueron: Caldo suero de leche (CSL), caldo suero
de leche más extracto de levadura (CSLEL), caldo de papa
dextrosa (CPD),y caldo sabouraud dextrosa (CSD).
2.3. EVALUACION DEL CRECIMIENTO RADIAL Y BIOMASA.
2.3.1. Medición de crecimiento radial
A partir de un cultivo joven se extrajo en una porción de micelio
(inóculo, consistente en un pequeño fragmento de la colonia de
aproximadamente 5mm de diámetro). El cual se sembró por puntura
en la parte central de las placas. Se incubó en medio ambiente (26-
28°C) y en oscuridad. Luego se midió interdiariamente, un total de 4
diámetros de crecimiento de cada colonia, a partir del segundo día de
siembra hasta el decimocuarto día de siembra, obteniendo el
diámetro promedio de crecimiento para los días 2, 4,6, 8, 10, 12 y 14
respectivamente y finalmente el radio promedio de crecimiento para
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
10
los mismos días de siembra 11 (se midieron los crecimientos radiales
de 5 placas por medio de cultivo investigado).
2.3.2. Medición de la biomasa (peso seco).
De una placa Petri con crecimiento micelial se tomó una muestra
de la parte más externa del crecimiento radial de 5mm de diámetro
con un sacabocado estéril, que luego se siembra en el medio líquido.
Se inoculó en matraces conteniendo el medio líquido con las
concentraciones de los tratamientos. Se incubó los matraces en
forma estacionaria bajo las condiciones de temperatura y tiempo
requerido por el hongo. Una vez desarrollado el micelio se filtró con
una bomba al vacío a través de un papel de filtro previamente
pesado y sobre un embudo Buchner de porcelana. Luego se colocó
en un horno a una temperatura de 75 y 80°C manteniendo y pesando
varias veces hasta alcanzar un peso constante. Luego se determinó
el peso seco de la biomasa fúngica obtenida por la diferencia entre el
peso inicial y el final 22 (se determinó el peso (biomasa) de 5
matraces por cada medio de cultivo líquido utilizado).
2.4. ANÁLISIS ESTADISTICOS.
Los promedios obtenidos de los crecimientos y de peso seco de la
biomasa micelial, fueron analizados mediante el t student comparativo
entre las muestras y la prueba de comparación múltiple Diferencia
Mínima Significativa – DSM (para saber que media difiere de la otra);
utilizando el programa estadístico SPPS Ver. 21, para comparar si
existió diferencia significativa en el crecimiento micelial de Ganoderma
spp. en los medios usados.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
11
3. RESULTADOS
Tabla 1. Promedio del crecimiento radial del micelio (mm) de Ganoderma spp.
en medios de cultivo sólidos: Agar Papa Dextrosa (APD), Agar suero
de leche más Extracto de Levadura (ASLEL), Agar Suero de leche
(ASL) y Agar Sabouraud dextrosa (ASD) a los 14 días de incubación.
Los datos representan el promedio de cinco repeticiones en cada
medio de cultivo.
* Si = siembra inicial 5 mm.
Xi = Promedio inicial
Xf = Promedio final
MEDIO
DE
CULTIVO
Crecimiento radial (mm) PROMEDIO
(xf = xi – Si) REPETICIONES
1 2 3 4 5 xi Si
ASL 50.5 56.8 57.3 61.3 63.5 57.88
5
52.88
APD 51.5 52.3 55.3 64 65.5 57.72 52.72
ASLEL 48 48.3 51.3 54.8 55.8 52.24 47.24
ASD 45.8 47.5 48.8 52 56 50.02 45.02
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
12
Tabla 2. Promedio del peso seco (g) de la biomasa formada por Ganoderma spp.
en medios de cultivo líquidos : Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo suero de
leche más Extracto de Levadura (CSLEL), Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo
Sabouraud dextrosa (CSD) a los 14 días de incubación. Los datos representan
el promedio de cinco repeticiones en cada medio de cultivo.
MEDIOS
DE
CULTIVO
Peso seco en gramos (biomasa)
PROMEDIO REPETICIONES
1 2 3 4 5
CSL 1.54 1.56 1.59 1.64 1.67 1.60
CPD 1.52 1.52 1.54 1.55 1.56 1.54
CSLEL 1.24 1.47 1.49 1.51 1.56 1.45
CSD 1.49 1.51 1.53 1.55 1.58 1.53
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
13
La Figura 1: Se muestra el crecimiento radial del micelio de Ganoderma
spp., a los 14 días de incubación, alcanzangdo 52.88 mm de diámetro
micelial en el agar de suero de leche, 52.72 mm en agar papa dextrosa,
47.24 mm agar suero de leche con extracto de levadura, 45.02 mm en
Agar Sabouraud dextrosa.
-
8.00
16.00
24.00
32.00
40.00
48.00
56.00
2 dias 4 dias 6 dias 8 dias 10 dias 12 dias 14 dias
Crec
imie
nto(
mm
)
Tiempo (Días)
ASL
APD
ASLEL
ASD
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
14
La Figura 2: Se muestra el promedio del peso seco de la biomasa formada
por Ganoderma spp., en Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo suero de leche más
Extracto de Levadura (CSLEL), Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo Sabouraud
dextrosa (CSD), obteniendo el mayor valor en caldo suero de leche, a los 14
días de incubación.
1.54
1.45
1.53
1.6
1.2
1.25
1.3
1.35
1.4
1.45
1.5
1.55
1.6
CPD CSLEL CSD CSL
Biom
asa
(∛PS
g)
Tiempo (14 Días)
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
15
Tabla 3. Analisis estadístico de T-student del crecimiento radial del micelio (mm)
de Ganoderma spp. en medios de cultivo sólidos entre Agar Suero de
leche (ASL) y el Agar Papa Dextrosa (APD), Agar suero de leche más
Extracto de Levadura (ASLEL), y Agar Sabouraud dextrosa (ASD) a
los 14 días de incubación.
* La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
X Desviación
(σ)
Error típ.
de la
media
95% Intervalo de
confianza para la
diferencia tcal. gl Sig.
Inferior Superior
ASL -
APD 0.16 3.01 1.34 -3.58 3.90 0.11 4 0,911
ASL -
ASLEL 6.24 2.31 1.03 3.37 9.10 6.03 4 0,012
ASL -
ASD 7.92 1.94 0.86 5.50 10.33 9.10 4 0,004
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
16
Tabla 4. Analisis estadístico de T-student del peso seco (g) de la biomasa
formada por Ganoderma spp. en medios de cultivo líquidos entre el
Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo
suero de leche más Extracto de Levadura (CSLEL), y Caldo Sabouraud
dextrosa (CSD) a los 14 días de incubación.
* La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
X Desviación
(σ)
Error típ.
de la
media
95% Intervalo de
confianza para la
diferencia tcal. gl Sig.
Inferior Superior
CSL -
CPD
-0.062 0.040 0.018 -0.011 -0.112 -3,39 4 0.27
CSL -
CSLEL
0.084 0.119 0.053 -0.064 0.232 1.56 4 0.192
CSL -
CSD
0.060 0.050 0.022 -0.056 0.068 0.26 4 0.803
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
17
Tabla 5. Prueba DMS para determinar la diferencia significativa entre los
promedios del crecimiento radial de Ganoderma spp. en los cuatro
medios de cultivo sólidos.
(I) Grupo experimental
(II) Grupo experimental
Diferencia de medias (I-ll)
Error típico
Sig.
ASL
APD 3,40 6,37 0,95
ASLEL 11,74 6,37 0,29
ASD 19,28 6,37 0,04
* La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
La tabla 5 muestra que los grupos experimentales son estadísticamente iguales
entre sí, dado que la prueba estadística DMS, nos da un valor de significancia
(sig.) mayor que 0.05 (p = 0.001) y solo en el caso de ASL Y ASD hay una
diferencia estadística significativa lo que nos permite afirmar que ASL es
diferente a ASD.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
18
Tabla 6. Prueba DMS para determinar la diferencia significativa entre los
promedios de la biomasa de Ganoderma spp. en los cuatro medios
de cultivo líquidos.
(I) Grupo experimental
(II) Grupo experimental
Diferencia de medias (I-ll)
Error típico
Sig.
CSL CPD 0.068 0,044 0,447
CSLEL 0.15 0,044 0,184
CSD 0.07 0,044 0,895
* La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.
La tabla 6 muestra que los grupos experimentales son estadísticamente iguales
entre sí, dado que la prueba estadística DMS, nos da un valor de significancia
(sig.) mayor que 0.05 (p = 0.001).
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
19
4. DISCUSION
El cultivo comercial de Ganoderma spp. representa en la industria mundial
un crecimiento constante ya que sus compuestos bioactivos purificados y
aislados de los carpóforos son una alternativa confiable para el tratamiento de
diversas enfermedades que afectan al humano tales como la hipertensión,
diabetes, hipoglicemias, cáncer y algunas enfermedades producidas por virus.
En la evaluación del crecimiento radial de Ganoderma spp. en suero de
leche. El hongo presentó a los 14 días de incubación, un mayor diámetro micelial
en agar suero de leche (ASL) de 52.88 mm, tal como se observa en la tabla 1.
Al mismo tiempo de incubación se obtuvo un diámetro micelial en agar papa
dextrosa (APD) de 52.72 mm, lo cual nos indica que no se encuentra variación
dispersa y que la utilización de residuos orgánicos como el suero de leche
produce un desarrollo de los hongos Ganoderma spp. ligeramente superior al
medio APD de referencia 4.
El hongo Ganoderma spp. a los 14 días de incubación alcanzó la mayor
cantidad de biomasa micelial en el caldo de suero de leche (CSL). Presentó un
peso seco de 1.6 g como se observa tabla 2, donde en el mismo período de
incubación, el caldo de suero de leche más extracto de levadura (CSLEL) obtuvo
1.45 g , lo cual nos indica que no se necesita adicionar concentraciones de
carbohidratos (lactosa y glucosa) y nitrógeno (extracto de levadura y proteínas
del suero lácteo) para su crecimiento, como lo indica Moya (1995) quien
concluye que los carbohidratos y nitrógeno presentes como componentes
propios del suero lácteo son suficientes nutrientes para el crecimiento de los
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
20
hongos. Para el experimento se usó suero dulce que puede presentar una
composición media de lactosa al 4.74 % y proteína al 0.86% 16.
Es pertinente analizar el promedio de crecimiento de CSL y CSLEL, en este
caso el cecimiento del hongo Ganoderma spp. en CSLEL es significativamente
más bajo que CSL .Si consideramos que el extracto de levadura, se usa en
muchos medios como un potencial activador del crecimiento y en este caso
resulta contradictorio el pobre crecimiento en el CSL enriquecido con Extracto de
levadura,una tentativa explicación de este pobre crecimiento podría deberse al
extracto de levadura con muchos años en la estantería que podría estar
generando compuestos que atrasan el crecimiento del hongo.
Estudios realizados en Pleurotus perteneciente a la división
basidiomycotina, al igual que Ganoderma spp., demuestran que la glucosa,
manosa y galactosa son más preferidas entre sus fuentes de carbono a
diferencia de la xilosa y la arabinosa que producen un crecimiento lento y
deficiente. Demostrando que la mayoría de especies pertenecientes al mismo
género que Ganoderma spp tienen a un mejor crecimiento con lactosa, pectina y
almidón 1,22.
De acuerdo al análisis de t-student y comparación múltiple para comparar
el crecimiento en los cuatro medios liquidos APD, ASLEL, ASL y ASD (Tabla 3
y 5) se determinó que existen diferencias significativas (p<0.05) entre ASL y
ASD y que no hay diferencia significativa en ASL y los demás medios de cultivo,
lo que nos indica que podemos reemplazar con ventaja al APD por el ASL.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
21
En el caso del peso seco de la biomasa micelial formada en CPD, CSL,
CSLEL y CSD (Tabla 4 y 6) también se obtuvo diferencias significativas (p<0.05)
entre el CSL y CSD a diferencia de los otros medios que no hay diferencia
significativa es decir que la biomasa formada en cada uno de estos medios nos
indica que son estadísticamente iguales y que CSL es diferente a CSD.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
22
5. CONCLUSIONES
De los resultados y discusión del presente informe se concluye:
El suero de leche resulto ser el medio de cultivo más productivo para
Ganoderma spp. Que el medio papa dextrosa sólido o líquido.
Los medios de cultivo más adecuados para el crecimiento de Ganoderma
spp. en el laboratorio, son el agar y caldo suero de leche y agar y caldo
papa dextrosa.
La utilización del suero de leche para el crecimiento y producción de
Ganoderma spp. implica disminuir la contaminación en el medio ambiente
y generar mayores ingresos económicos en la producción de este hongo.
.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
23
6. RECOMENDACIONES
- Evaluar el efecto del pH, y la temperatura sobre el crecimiento del hongo
Ganoderma spp. en suero de leche, a efecto de encontrar las mejores
condiciones ambientales para su desarrollo.
- Evaluar la concentración de lactosa en suero de leche para encontrar la
dilución optima de suero de leche.
- Evaluar el crecimiento de la cepa de Ganoderma spp. en otros medios de
cultivo sólidos con la finalidad de encontrar el mejor soporte para la
producción de inóculos.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
24
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Tello, S. Diversidad de los recursos genéticos mexicanos del hongo
funcional Ganoderma (Fungi, Ganodermataceae), conocido como Reishi
en los mercados internacionales y relevancia para el desarrollo regional.
Instituto de enseñanza e investigación en ciencias agrícolas. Puebla.
2010. 35p.
2. Domínguez, R. Obtención de cepas silvestres de Ganoderma lucidum y
la caracterización de una cepa nativa para la cuantificación de
exopolisacáridos en cultivo de células en suspensión. Universidad de
Guadalajara. Zapopan, Jalisco. 2012.
3. Figlas D. Curvetto N. Monografía sobre las propiedades medicinales del
hongo Reishi (Ganoderma lucidum). Laboratorio de Biotecnología de
Hongos Comestibles y Medicinales, Bahía Blanca. Argentina. 2008.
4. Guzmán G. Tropical Fungi of México. Diversity and Distribution.
Symposium Tropical Mycology. Liverpool. 1993. 25-29 p.
5. Soto C., López C., Vásquez E. y Álvarez I. 2002. Cultivation of
Ganoderma lucidum and its effect on the production of lymphocytes. In:
Sanchez et al. (Eds). Mushrooms Biology and Mushroom Products Word
Society for Mushroom biology and mushroom products. Cuernavaca,
México. 379-382 p.
6. Shufeng Z., Yihuai G., Guoliang Ch. A Phase I y II study of a Ganoderma
lucidum extract in patients with advanced cancer. Rev. Wood Science and
Technology. 2014.4(3) 80p.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
25
7. Suarez J., Rodríguez L., Mendoza G. Caracterización morfológica y
molecular de una cepa silvestre mexicana perteneciente al género
Ganoderma. Revista Mexicana de Micología. México. 2012.
8. Cañedo V, Ames T. 2004 Manual de Laboratorio para el Manejo de
Hongos Entomopatógenos. Centro internacional de la Papa (CIP).
9. Martínez D., Sobal M., Morales P., Martínez W., y Mayett Y. Los hongos
comestibles: propiedades nutricionales, medicinales y su contribución a la
alimentación mexicana. El Shiitake. Colégio de Postgraduados Campus
Puebla, Biotecnología de Hongos comestibles. 2004. 48 pp.
10. Mier T, Toriello C, Ulloa M. Hongos microscópicos, saprobios y parásitos:
Métodos de Laboratorio. México: Metropolitana. 2002.
11. Armando L. Hongos comestibles y medicinales de México. Editorial
Posada. 1986.
12. Suárez C., Nieto J. Cultivo biotecnológico de macrohongos comestibles:
una alternativa en la obtención de nutracéuticos Rev. Iberoam Micol.
2013. 30(1):1–8.
13. Moraima H., Pérez J., Faria J., Boscán F. y Luis A. Variación de los
valores proteicos en muestras de leche de la región zuliana (Venezuela).
Ver. Científica (FVC-LUZ). 1992. 2 (1):49-52.
14. Sánchez L., Gil M., Giraldo F., Milán L. y Villada M. Aprovechamiento del
suero lácteo de una empresa del norte antioqueño mediante
microorganismos eficientes. Grupo de investigación de Alimentos.
España. 2009. 4(2).
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
26
15. Bom F. Conservación de suero de leche. Programa de Investigación en
alimentos. Departamento de Bioquímica. 2008.
16. Habijanic J., Berovic M., Boh B., Wraber B., Production of biomass and
polysaccharides of Lingzhi or Reishi medicinal mushroom, Ganoderma
lucidum (W.Curt.:Fr.) P. Karst. (Higher Basidiomycetes), by submerged
cultivation. International Journal of Medicinal Mushrooms 2013. 15(1):81-
90.
17. Baena S., Campos C. y Rojas G. Aguas residuales de la industria láctea:
naturaleza y composición de las aguas residuales. Revista Ambiente y
Desarrollo. Pontificia Universidad Javeriana. 1994. 2 (3): 83-93.
18. Boh B., Berovic M., Zhang J., Zhi-Bin L. Ganoderma lucidum and its
pharmaceutically active compounds. Rev. Biotechnoly. 2007. 13:265-301.
19. Echandi E. Manual de laboratorio para Fitopatología General; Instituto
Interamericano de Ciencias Agrícolas-Turrialba, Costa Rica. 1967. 44 p.
20. Kino k., Yamashita A., Yamaoka K., Watanabe J., Tanaka S., Shimizu K,
Tsunoo, H. Isolation and characterization of a new inmunomodulatory
protein, ling zhi-8, from Ganoderma lucidum. Biol. Chem. 1989. 264 (1):
472- 478.
21. García M, Villamizar L, Torres L, Cotes L. Efecto de subcultivos sucesivos
de Beauveria bassiana sobre sus características y actividad contra
Premnotrypes vorax. Manejo integrado de Plagas y Agroecología. 2006.
22. Raypeck V. Chemical composition of hemicellulose as a factor
participating in the substrate specificity of wood destroying fungi. Wood
Sci. Technol. 1977. 11 – 59 p.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
27
23. Van der Schans Valorización del suero. Universidad de Ciencias
Aplicadas del Occidente, Departamento de tecnología de alimentos,
Suiza. 2002.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
28
ANEXOS
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
29
ANEXO 1. Esporas de Ganoderma spp.
Anexo 1. Se observa las esporas de Ganoderma spp. visto a 400x fue
teñido con azul de lactofenol (Fuente: Autor).
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
30
ANEXO 2. Cultivo monospórico de Ganoderma spp.
ANEXO 3. Medios de cultivos líquidos CPD, CSD, CSL y CSLEL.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
31
ANEXO 4. Crecimiento radial de Ganoderma spp. a los 2 días (A), 8 días (B) y a los 14 días (C) (Fuente: Autor).
ANEXO 4. A. adverso y B. reverso de crecimiento radial en agar suero de leche de Ganoderma spp. a los 14 días (Fuente: Autor).
A B
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
32
ANEXO 7. Medición de la biomasa del hongo Ganoderma spp.
ANEXO 5. Secado del hongo Ganoderma spp entre 70° y 80 ° por 10 minutos.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
33
ANEXO 6.Composición de los medios de cultivo utilizados en el presente
estudio.
AGAR PAPA DEXTROSA (APD)
Componentes Cantidad por litro
Infusión de papa 200 g
Dextrosa 20 g
Agar bacteriológico 15 g
Agua destilada C.S.P 1 000 mL
AGAR SUERO DE LECHE (ASL)
Componentes Cantidad por litro
Agar bacteriológico 15 g
Suero de leche 1 000 mL
AGAR SUERO DE LECHE CON EXTRACTO DE LEVADURA (ASLEL)
Componentes Cantidad por litro
Extracto de levadura 5 g
Agar bacteriológico 15 g
Suero de leche 1 000 mL
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
34
AGAR SABOURAUD (ASD)
Componentes Cantidad por litro
Agar Saburoad 3 g
Agua destilada C.S.P 1 000 mL
CALDO SUERO DE LECHE (CSL)
Componentes Cantidad por litro
Suero de leche 1 000 mL
CALDO PAPA DEXTROSA
Componentes Cantidad por litro
Dextrosa 200 g
Papa 20 g
Agua destilada C.S.P 1 000 mL
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
35
CALDO SUERO DE LECHE CON EXTRACTO DE LEVADURA (CSLEL)
Componentes Cantidad por litro
Extracto de levadura 10 g
Suero de leche 1 000 mL
CALDO SABOURAUD DEXTROSA (CSD)
Componentes Cantidad por litro
Pectona 10 g
dextrosa 40 g
Agua destilada C.S.P 1 000 mL
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N
36
ANEXO 7. Composición del suero de leche.
Fuente: Van der Schans.
ANEXO 8. Composición de la proteína del suero de leche.
PROTEÍNA CONCENTRACIÓN (g/L)
β-Lactoglobulina 3.2
a-Lactoalbúmina 1.2
Inmunoglobulinas 0.8
Lactoferrina 0.2
Lactoperoxidase 0.03
Fuente: Van der Schans.
COMPONENTE CONCENTRACIÓN
% de Agua 94- 95
% Grasa 0
% Proteína 0.9
% Lactosa 3.8 – 4.4
% Ácido Láctico 0.8
% Minerales 0.7 – 0.8
pH 4.5 – 5.0
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DIRECCIO
N DE S
ISTE
MAS DE IN
FORMÁTI
CA Y C
OMUNICACIÓ
N