Articulo original QUiMICA CLINICA 1999: 18 (5) 260-265

Enzimas antioxidantes en una poblacion femenina espanola

M. Fit6 Colomer 1. M. I. Covas Planells1.2. L. Coca Fabregasu . M. Pavesi l, M. Alcantara Delgado!.

J. Marrugal de la Iglesia I

Resumen _

Las en;.i",as 511peTariJa dismutasa y gilltarioll peroxidasa es­tun cotlsideradas como uno de los sistemas alll;oxidantes en·d6ge"o.~mas importo1ltes del organismo Ire",e a fa produc­cio" de radicales Iibre.~.

£1 objetivo de este eSll/diu fue ablener el ;,,'en'alo de refe­rencia del cOl/leI/ida cotafitico de super6xido dismutasa en eri­,rocitos)' de 10 c01lce1ltmcion coraUtieo de gilltation perorida.sa en sal/cre ell ,,,,a pob/adon/eme"i,," espatiola (n=264) deedad comprendida elltre /8 y 60 ai/os. Asimismo Sf! e~'alu6Ia

;nflumcia de 10 edadY factores asociados 01 estilo de )'ida so­bre to actividad de estas enDmas alllioxidallles. Los resultadosobtenidos en el anti/isis de regraion linealmulliple mostraronuna osocwcio,t posilil'a de to edad COli to acril'idad de los enD­mas anlioxidalltes y ulla osociacion negatil'a del consumo detabaco con Ia acril'idad de superoxido dismutosa, Se obtuvie­roll los in/en'alos de referellcia por grupos de edad: entre 18)'39 a;;os 873 (571-1334) arb.uJg de hemoglobina para super6­xido dismutusay /01 (51-150) JJlmtlLpara glutarion peroxida­so) y elllre 40 y 60 oMs (938 (597-1475) arb.uJg de hemoglo­bina para super6xido dismulasa y /09 (56-162) jJkallLparDgllltatiOlI peroxidasa). ellcolllrondose diferenciaj' significali­vas de las cO/Icenlraciones de fmzjmas ulllioxidalltts elltre am­bos grupos de edad (p= 0,015).

Inlroducci6n

EI estres oxidativo resultante de la formaci6n de radicales li­bres en el organismo ha sido vinculado con el proceso de enve­jecimienlo (l) y con la patogenesis de diversas enfermedadescomo la anerioesclerosis. neoplasias. trastomos neurodegene­rativos y enfermcdades inflammorias (2. 3). Los efeclos biol6­gicos de eSIOS radicales Iibres eslan conlrolados por un amplioespeclro de mecanismos anlioxidanles de origen ex6geno (vi­taminas E y C. polifenoles....) y end6geno (enzimas anlioxi­dantes. glutation. acido lirico. albumina....) (3). Las enzimasantioxidanles super6x.ido dismutasa y glulation peroxidasa son

, Unital <It: Upids i Epidcmiologia Canlio\'ascula, (ULEC).lnSliM Municipal d'lnve'ligaci6 Medica (1M 1M). Barcelona.'L:lbonuori de Rdc,""""ia <k Ca'alunya.L'Hu,p;lalc' del L1obrcgal. Barcelona.Rccibido: 22·12·9HAccplad", 1?~.\l'I

Abrc\'ialUr~s no (Slandari~ad"s;

CuZn.SOO I MII.SOD: Supc,<:hido di,mulasaGSIl·Px: Glulat;o" I"'roxid:l.<a

260 Quirnica Clinica 1999: 18 (5)

Summary _

Oxidative slress resulting from lire production offree radi­cals in tI,e organism has been associated with aging alld Wilhthe pathogenesis ofseveral disease,\'. The ellzYmes !iuperoxidedislll/ltm'e WId glutathione peroxidase are considered olle oftlte most importallt endogen scavengers againsl tile prodllc­liol/ offree radicals.

TI,e objective ofthi.~ sllldy M'as to defille Ihe reference in­tervals of tI,e catalitic comel/l of sllperoxide dismlllase inerytlrroc)'leS and Ihe catalilic cOluelllration ofglutathioneperoxidase ill blood in a sample ofSpanish female popula­tion (n=264) aged between 18 and 60 j'ears. The influellu ofage and life-sl)'le factors on Ihe aClivity ofantioxidanl enzY­mes M'OS also e.·aluated. Resulls ofmulliple lillear regressionanalysis slJQwed a posilive association ofage with activity ofthe antioxidant enzYmes and a negalive association of supe­roxide dismutau activilY with smoking. The reference inter­vals for superoxide dismutase and glutatMone peroxidasewere 873 (572-1334) arb.u./g ofhemoglobine and /01 (51­150) pkatlL in women aged 1810 39 years alld, 938 (597­1475) arb.u./g ofhemoglobine alld 109 (56-162) jJkallL inwomen aged 40 to 60 years, respeclively, Significative diffe­rences were obtained in tire cOllcelltralion of antioxidantenzYmes between botlr age groups (1'= 0.015).

considcT'"das como uno de los sistemas anlioxidantes end6ge­nos mas imponanles del organismo frente a la producci6n deradicales libres (3. 4).

La supcroxido dismutasa (CuZn-SOD citoplasmalica yex·traeelular y Mn-SOD de locali7..aci6n milocondrial) calaliza ladismulaci6n del ani6n super6xido (<T-) a HzOz. El HzO! es de­saClivado por la glutalion peroxidasa (GSH-Px) asi como porla catalasa. Asimismo la GSH-Px conviene los hidroperoxidosformados por los radicales libres en alcoholes no t6xicos (3).La aClividad de eslaS enzimas eSla siendo in\'estigada en la ac­tualidad como posible marcador biol6gico de di\"ersa.<; palOle­glas como el alcoholismo (5). sindrome de Down (6). cancer(7) 0 aterosclerosis (8). Sin embargo. se ha observado que suaClividad se ve afeclada por diversos factorcs como la cdad (9·/2), el sexo (9-12), el cicio ovulatorio (/3). cl cmbarazo y latoma de anticonccptivos orates (14, /5). En un eSlUdio previoreali7.ado por nuestro grupo (/6). el coeficientc de \'ariaci6nbiol6gica interindividual de 13 CuZn-SOD cn critrocitos fuesuperior en mujeres (750%) que en varoncs (2.43%) indican­do unrl diferencirl de comportamienlO de estas enzimas entreambos sexos. Variacioncs en la actividad de CuZn-SOD y

aSH-px han sido descritas lambien en relaci6n con la lorna desuplemenlOs vilamlnkos (J2). asi como con factores de estilode vida como la pr.ktica de ejercicio fisico (/8. J9). eI consu­mode alcohol (9) y el tabaco (9. JO. 12). Dado que los resulta­dos obtenidos en diversos estudios no son siempre concordan­tes. es imponante obtener los intervalos de referencia propiosde cada sexo y poblaci6n a la hora de evaluar la potencialidadde estas enzimas como marcadores de las diversas palOlogfasasociadas al estres oxidativo.

En estc cstudio se obtuvo el intervalo de referencia del con­tenido cataHtico de CuZn-SOO en eritrocitos y de la concen­traci6n catalftica aSH-px en sangre en una poblaci6n femeni­na espanola dc edad comprcndida enlre 18 y 60 anos.Asimismo se evalu6 la influencia de la edad y factores asocia­dos al estilo de vida sabre la actividad de estas enzimas antio­xidantes.

Material y metodos

Tipo de estudioEstudio transversal con reclutamiento por cuotas.

Poblaci6n estudiadaSe eslUdi6 una poblaci6n formada por 264 mujeres reclutadasen la primera fase de un estudio tmnsversal sabre factQres pro­tectores de riesgo cardiovascular (Proyecto MARATOON).Las edades de las mujeres de la muestra estaban comprendidasentre 18 y 60 anos. siendo la media 40 anos (desviaci6n tfpica:11.27 anos). Esle valor medio de edad sc utiliz6 como punto decorle para la estratifkaci6n de la muestra en dos grupos deedad: de 18 a 39 OlOOS Yde 40 a 60 anos. Los criterios de exclu­si6n comprendian la loma de anticonceptivos orales 0 trata­miento honnonal sustitutivo. la cxistencia dc enfermedad car­dfaca coronaria. neoplasias. hipenensi6n. dislipemias.enfermedades innamatorias y traslOmos neurologicos. A fin deevitar posibles influencias de los distintos perfiles hormonalesdependiendo de la fase del cicio menstrual (15). las extraccio­Jtes de sangre sc rcalizaron en cI punto medio de la ra.~e luteini­ca en d casu de las mujcres premenopausica.~. la actividad fi­ska sc evaluo mediante el Cuestionario de Actividad Ffsica enel tiempo libre de Minnessota (/9). Para obtencr informaciondel consumo dc tOlbaeo (numero de cigarrillos/dfa) e ingesti6nde alcohol. se administr6 un cuestionario eSlandarizado (/9).Cuarenta y ocho mujercs notificllron tomar distintos tipos demedicaci6n. Los farmacos rcfcridos mas frecuememente. c1a­sificados seglin el criterio de la OMS. fucron antidepresivos(n= 7). ansioHticos (11= 5). hierro (11= 8). y firmacos analgesi­cos. antipiriticos y/o antinflamalorios (11= 6). Dado cl eseasonumero de datos. dichos valorcs asi como los correspondientesala toma dc suplemcmos vilamfnicos (11= 5). fueron excluidosdel dlculo de los intervalos de referencia y el Olnalisis de re­grcsi6n multiple. Se respetaron los protocol os de laDeclaraci6n dc Helsinki y cl proyecto fue aprobado por elCornite Etico del InstitulO Municipal de Asistencia SanitariOl(1M AS).

Oblenci6n. conservaci6n y preparaci6n de las mueslrasLos especfmenes de sangre se obtuvieron por extracci6n veno­sa en decubito supine y rccoltx.'ci6n en tubos con heparinato delitio (Venojecl. Lcuven. Belgica). entre las 8 y 10 horas de lamanana y tras 12 horas dc ayuno. Las muestras recibidas secongelaron a -80 ''C (los eritrocitos lavados para CuZn-SOO yla sangre para GSH-Px). realizandosc las determinaciones an­tes de 10 dias. Se dcscanaron las l1luestms hemolizadas. icteri­cas 0 lipemicas. No sc recogieron mucstras desde el 30 de ju­nio III 15 de septiembre. para evitar la influencia de

modificaciones en la dietOl y estilo de vida dumnte el pl:riodoestival.

Para la detcrminacion de la actividad de aSH·px. se lisaron50)1L de sangre con I ml de agcnte diluyentc (Ransel diluentRS 1318. Randox Labor,uories. Crumlin. Nonh Ireland) y tr.lS5 minutos de incubaci6n a temperatura ambieme se anadi6 ImL de Reactivo Drabkin (Randox Laboratories) p.1ra inhibir lainterfercncia por pcroxidasas. Para determinar la actividad deCuZn-SOO. se centrifug6 una alfeuota de 0.5 mL de sangre ,I1000 g dur,mte 15 minutos y. sc separo cl plOlsllla. Los eritroci­tos se lu\'aron 3 veces con soluci6n salina isot6nica (0.9% plvNaCI) y sc lisaron mediante la adici6n (1/4) de agua deSlila­da frfa ultrapura (MilliQ plus reagent grade: !\4illipore.Bedford. EEUU). Tras 15 minutos a 4 "C eI Iisado se diluy6(1/25) con soluci6n amortiguadora de fosfato (KPO-l-) 0.01mollL pH = 7.00 (SDI24. Randox Laboratories).

ProcedimicntoLa concentmci6n de hemoglobina fue determinada en un ana­lizador SyslTlex K IOOO@(Toa Electronics. Kobe. Jap6n). Lasdeterminaciones de la actividad de CuZn-SOD y aSH-px serealizaron en un analizador Cobas Mira Plus· (F. Hofmann-LaRoche. OiOlgnostic Systems. Ba.~ilea_ Suiza) a 37 "c.ACfil'idad t'n:imtilica dt' GSH-Px en sangre: se determin6 me­diante una modificaci6n del metodo de Paglia and Valentine(20). utilizando hidroper6xido de cumeno como sustrato(Ransel RS 505 . Randox Laboratories). Se siguieron las rcco­mendaciones de los fabricante.~ en cuamo a concemracioncs fi­nales de los reactivos. EI volumen de la muestra fue de 5 j.lLdel hemolizado diluido seis veccs. EI \'olumen total de la reac­ci6n fue de 285 J.lL. La absorbanciOl se monitoriz6 a 340 nmdurante 3 minutos y la aClividad de GSH-Px se exprcs6 enJ.l katlL (microkatalesll).ACfil'idad ell:ill/litiCli de GUbl - SOD ell erifmcitos: se utiliz6un procedimiento ba.~ado en el metodo de McCord)' Fridovkh(21). detenninando el grade dc inhibicion del tNT. 12-(4-yo­dofenil)-3-(4-nilrofenol)-5-fenil tetrazolio) (Ransod SO 125.Randox laboralOries). Se siguieron las recom~ndaciones delos fabricantes en cuanto a concentraciones finales de los rcac­tivos. EI volumen de muestr.t fue de 5 I-ll diluido cuatro \'eces.EI volumen total de la reacci6n fue de 230 mL. Se uliliz6 solu­ci6n amortiguadora dc fosfato (KPO~) 0.01 mol/L pH = 7.00(SOI24. Randox Laboratories) como calibrador (grado 100%de inhibici6n). Se definio una unidad arbitmria (arb.u.) de acti­vidad dc CuZn-SOD en eritrocitos como la actividad de cnzi­ma capaz de inhibir la fonnaci6n de formazan 31 50%. La at>­sorbancia se monilOriz6 a 500 nm durante 4 minutos y laaetividad <k Clla-SOD se exprcs6 en arb.uJg de hemoglobina.

Se utiliz6 un sistema de control interno mediante un controlcomcrcial de sangre liofilizada (Ransod control SO 126 YRansel control SO 692. Randox Labor.ttorics) para la valida­ci6n de las serics analiticas. Sc efectuo una diluci6n de los ma­Icria1cs de control con soluci6n amortiguadonl dc fosfato(KPO~) 0.01 molll pH = 7.00 (SDI24. ROlndox Laboratories)pam obtener varias actividOldes enzimaticas. La evaluaci6n dcla imprecisi6n intraserial se efcclU6 con 3 contmles dc distintaactividad. determinandose 20 \'eces cada uno. Para la evalua­ci6n de la imprecisi6n interscrial se detcrminaron los tres con­troles durantc 20 dfas consecutivos.

Analisis eSladfsticoSe siguieron las recomendaciones de la sociedad Espanola deBioqufmica Clfnica y PalOlogia Molecular (22). Los calculosse dcctuaron mediantc el paquelc estadfstico SPSS/PC (SPSSInc. Chicago. EEUU).Deleccioll de los posib/es wI/ores (lberrall1es: Se utiliz6 el me­todo de los multiplos de la dcsviaci6n tfpica. eliminando eI

Qufmica ClfnK:;l 1999: 18 (5) 261

d:!.lo que cumpli~lassiguiellles inecuaciones:x+k·.~'.5x(» x-k·J

donde xe~ la medi:I..f 1'1 desvi:lCi6n tipiea)' k cs 3.703 para 1'1aelividad de CuZn~SOD )' GSH-Px. No sc deleclaron valoresaOClT.lllte1'> en nucslros datos.Prllr/)(l.f til' GlIlI.uifmidm/: Sc ins(X:ccionaroli lo~ grMicos denonn:llidad. se compr0b6la :lsimClria y curto~is en 1:ls descrip­ti"as y sc aplic61a prueba de Kolmogorov-Smirnov con la co-­rreeci6n de la signifieaei6n de Lillicfors. La dislribuci6n devalore~ de GSH·Px se ajusI6 a los crilerios de normalidad. fC­

quirielillo hi distribuci6n de CuZn-SOD. y aClividad fisie:'!transform:lci6n logOiritlllica llepcri'll1<l.CIi/l'ldo de /(1.1' /flllil!',\' dc I"I'!i'I'I'IIr'ia y .1'11.1' I'I'.I'pl'('li\,(I.I' in/l'n'II'

10.1' d" l'fIIljillll:a: Se determill6 el intervalo de rcferencia (lR)rnedi,tnte eI l',ilculo de los fractiles 0.025 y 0.975 (pcrl'entilcs2.5 y 97.5). p,lrol un intcrvllln de confianZ<l del 95'i'>. Sc ,lplic6lu f6rmulu:IR=111 ±l.-J

donde III e1'> la eSlirnadon nx'dia Jl de la poblaci6n. Zcs cl valorcrllicode la di~tribuci6n nonnal (J.96 ~i eseogcrnolo una prob<l­bilid,KI del 951k). y.f e~ la c1'>limaci6n de la de1'>viaci6n lipica 0de la \XIblaci6n.

Lo~ inlervalos de confi:mza (lC). de modo que alxlrquen IInapmb<lbilidad del 9O'k. ~c eakularon <ll)anir de la f6rmula:Ie = fmClil ± /·.I'/..r"([omit.: I C~ cI valor ('rftico de una distribucion gausialla de Vil­riallcia descunocid,l (2.X I si eseogelllos lIna probOibi Iid,ld del9[)%). J es la desviaci6n tipica y Il el tamaiin de la muestra.ClIlI!lJlIl'lldril/ 1'1111'1' ~1'II/1fI.1' Y 1I.l'(will!.'im/{',I' 1'/1/1'1' di,I'lil//(/.\' 1'11­

1';lIhll'S: La comparaci6n de las aetividadcs de CuZn-SOD yGSH-Px entre grupos ~c efcctu6 Illcdi,lI11e 1:1 prueba I deStudent. Dada 1:1 desigualdad entre c1lamaiio de los gml)()S ell­Ire fumaooms y no furnador:.ls. sc calegoriz6 la variable mjme-

ro de cigarrillosldfa (cigldia) para su allalisis en CU:ltro grupos:no fUllmdoras. cOllsumo de I a 10 eigldia. consumo de II :120y superior a 20 cigldf:l. L:IS asociaciones simple~ entre las aCli­vidades enzirnalicas de CuZn-SOD y de GSH-Px (expresadascomo comenido y coneenlmci6n catalfliea. rcs(X:etivamellle).Ja edad y cI gasto energctico en actividad ri~ica sc evaluaronmediame cI cocfieiemc de eorrcl:lci6n de Pearson y mediante1.'1 eocficicnte de correlaei6n de Spe:lrnHlll para la variablecigldfa y el consumo de akohol. Se realiz6 un analisis de re­gre~i6n linealmultiplc parol invcsligar la innuenci<l de las dife­rcntes v:lriablcs sobre las aclividlldcs enzimnticas. EI criteriode exclusi6n de variables del rnodclo fllc de I' < O. J en el estu­dio de asociaciones simples,

Rcsult.tdos

L:ls car:.lelerislicas de las panicipanle~ ~e pre~L·ntan en la labiaI. La medi<l de cdad fuc de -m anos (de~\'iaci6n tipic<l: 11.27anolo). EI pon:enlajc de tllujeres menopalhica1'> fue del 20.8'k.Wl pre\'a1cncia del h5bilO tabaquieo (21.2~) fue inferior a lanotifieada pamla poblaci6n femenin .. de c~te inler\'alo de t.'d"d(23). C:IOC deSlaC:lr un" alt .. incidcnc;:1 de ga~to enel'dclico enaClividild fiska. ~icndo e~le superior a 300 h'al/dfa cn cI52.3~ de las panicipilllIC1'>.

La imprceisi6n analiticu del procedimiellto se representa enIn tabla [1. Lu impre<:isi6n intraseri:t1 oscil6 entre 4.44%)' 5.03 0i­para CuZn~SOD y cntre 3.16% y 4.04% para GSH-Px. La im·precisi6n interserial oscil(l entre 5.l)2% y 6.25% para CUZIl­SOD, Yentre 4.27~ y 6.5R"#> piln, GSH-Px.

La labia [II mue~tra las aloociaciones simples oblenidas entrela~ variables eSllldiadas. EI eOlllenido calalflieo de CuZn·SODy la ("Oncelllmc16n eatalilica de GSI-l-Px sc asodaron positiva-

Tabla I. Caracteristicas de las participanlcs en el estudio (,,= 264)

Vari:IIJlcs

edad (alios)ll1ell!lpmlsiatabmlllislllOnlllllcro de eigarril\osldia (',('tlllMI1110 tle alcoholgram(l~ de <llcoholltlia (~)

acti"itlad fisica (kcal/dia)aelh'as (>300 kcalldfa)

x (s)

40(11.27)

12.38 (9.CJlJ)

10.55 (8.80)~2J.61 (353.16)

'Iedimm(interv~llo)

41 (IR-60)

8 (2-75)311 (12-1.'68)

Si No

::W.X 110 16.9%21.2% 72.3 %

58 % 34.1 %

52.3':f.

.1': l!1<.otJi<l:.I': des"iaci6n tipica: • \'alore.~ ~~\XIrldicnk'~ a fUI1l;ldom~: ~ \'alores c{Jrrespondil:ntc.~ a consurniooms de <llcohol

T'lbl~l II. Imprecision del procedimicnto de Illcdida de CuZn-son), GSH·I)x (11 = 20)

Imprecisiilll Intraserial Imprccision Intcrscrhll

, , CV(%) , , CV(%)

366 " 5.03 310:6 '4 6,25CIIZn-SOD 610:5 32 ·t67 '" " 6.08

(arb.u.lg de Hb) 1650 7.1 H-l 1592 HO 5.02

GSII-Px 56 2.05 3.66 5. 3.90 6.58

(JlkallL)115 ~.65 .t!>-l II • 6.21 5.22215 6.R 3.16 230 9.82 ~.27

.r: 1I1t."<.Ila:~: dcs\'iaci6" lfpic<l: CV: eocficicnle de \ariaelon: CuZn-SOD: ~upcr6xido di~mU1aS<l: arb.uJg de Hb: unrdatl arbitmnalgmmode hCrlloglobina: GSH-Px: glutalion pem.~id ..sa

262 QlIirnil'a Cllntea ]')1)1): 110: (51

Tabla III. Coeficienlt'S de correlaci6n de Pearson entre las enzimas anlioxidantcs )' las \':Iriables potencialmentcasociadas

CuZn-SOD GSH·Px cdad cigldia alcohol GEAF(arb.uJg de Hb) (~k"tJL) (uilos) (girl;,,) (kcalldfu)

CuZn-SOD ,GSH-Px 0.103 ,Edad 0.2~'" 0.131' ,eig/dia ·o.l·n·' ·0.035' ·0.159'" ,Alcohol ·0.063' -0.015' -0.039' 0.122"" , ,OEAF 0.017 0."" -0.231· -0.078 ·0.071

CuZn·SOD: ~upcr6"ido di~mula~a: arb,ulg de Hb: unid;,d arbilrarialgl"i,mo de hemoglobina: OSH·I'.~: glulalion pi.·roxida.'a: eig/dia:lItimero de dg:lrrillolo conlou111ido~ por lIia: GEAF: ga~lO encrgclico en :Iclh'idad ffxic:1 en c1liempo libre'" 1'< O,lXII, ';' P<O,05, Coclicicnlc de currcl"ci(llI de Spcann;1ll

Tahhl IV. Amilisis de regrcsi6n multiple de las cnzimus antioxidantcs CuZn·SOJ) )' GSI-I·llx )' 1:.1S \'l.lri<lbh.'Spotcncialmcnte influyelltes

Variables GSH-I'x (~k"tJL) CuZn·SOD (arb.uJg de Hb)

b (e~) I' b (e~) I'

Edad UI.:\-I (Y.U65) 0.0-1-1 O.lXl4 (O.(Xll) (l.oml'igldi.. ·0.0-12 (0.021) O.~-I

Inlcrscn:i<in 5595 6.67YR! aju~laJa 0.013 0.051

OSII·I)x: glulation pcroxida....: CuZn·SOD: ~uper6xidodi~mula....: arb.ulg de Hb: unidad arbitrarialgr:uno de henlO',;lobina: dgldia:mimcro de ciganillos con,"Ullli~ por dra: b (e,): codicientc de regrc:-i<'J.n (error elolandar): R~ ajulotad,l: eocfici...nle de det...nuinaci6n ajll~tado

Tabla V, Inter\'ulos de rcrcrcncia de la CuZn·SOD y 1:1 GSH·Px dctermimldas en critrocitus )' sangre rt'Spccti.Vlunclltc, cn la IJOIJ1:1Ci{1Il femcnillll estudi:ula

CuZn-SOD (arb.ulg de lib)

GlobalIfl· 39 anOlo40 - 60 anos

OSH·Px: (1JIWI/L)

Global19 - 39 ano~

-10 - 60 aiiO!>

"

236

"'125

232'03129

x

W5'873"938""

105~ (s: 27)IOI~ (s: 25)109" (or: 27)

XO~'23(lC del 90%)

582 (559 - (07)572 (540 . 6(6)597 (563 . (32)

53 (-18 . 8)52 (-15 - 59)56 (50 - 63)

XO•1I75

(IC del 90%)

1-106 (1350 - I-IM)133-1(1259-1-113)1475 (1392 - 15(3)

158 (153· 163)150(1-13·156)162(156· 169)

;, media: s: de~\'illCi6n lipka: CuZn-SO[); ~upcr6xidodislllulasa: arb.u./g de Hb; unidad llrbitl"i,ria/grJlllo de helllOglobim,: GSH-I'x;gltll:lliun peroxida~:t: IC: imerv:ll0 de eonfi:url.a, mcdi" gcom~lric.. : ~ mcdia :lri1m~lil""

'" P = 0,015 respeclo 'II grupll Iii· 39 .lnos, prueba I de S1udent

mente con la edad (r = 0.20..L P < 0.001 Y r = 0.131. I' < 0.05re~po:("tival\lente).EI contenido l'atalitk'o de CuZn-SOD .'Iea~oci6 negativamcnte con la variable numcro de cigldf;l (r =-0.147. I' < 0.05). No ~ obloer,,6 asociaci6n con ell'on~umodealcohol ni con d gaslO energctko en actividad fi~ica. Lo~ reosultados del an;\lixis de rcgrl'si6n multiple vienen cxprexados...n la 1;lbla [V. Se obluVO una rdaci6n pOSiliv;l dd COnl ... nidocUI:t1itico de CuZn·SOD y la concenlraci6n calalitic;l de GSH·P.x: con la edad (1'= 0,007 Y 1'= 0.0-14 re~po:eti\'all1enle) y un;lrclad6n negaliva. e indcpclldicnte de la edad. del contenidocat;llilico de CuZn·SOD con cI numem de cigldia W= 0.0-14).

La lab!:l V rnuC~lra lo~ intervalo~ de referencia glob;11 y e~­

tr:uificadox por grupo~ de edad de CuZn·SOD l'n crilrocilO~ y

de GSH-Px en sangre. asi como SUlo inten'alO!> de conliam:a del90% en la poblaci6n femenina e~ludiada. Lo~ valore:> deCuZn·SOD y GSH-Px fucron ~upcriorescn cl grupo de cdadde 40 a 60 ailos respeclO al grupo de 18 a 39 ailo~ (1'=0.013para la CuZn-SOD y 1'=0.015 pam I:i GSH-P.~). No se ob~er­

varon difcrenci;ls signilicalivas C1l1rc 1<1 aoivid;lll de las enl.i­mas anlio.xid'lIlICS Clllrl' lIlujcres pr..: y posl1lellopauxil'alo,

Discusi6n

En eSlc c~lUdio se h:m obtenido 10' inler\"alo~ de referencia delcontenido c~tlalilieode CuZn-SOD en erilrocilO~ y de 1:1 con·

Quimic:1Clini...a 1(91): 18(5) 2(,3

centraci6n catalitica de GSH-Px en sangre en una poblacionfemenina espanola de edad comprendida entre 18 y 60 anos.Dado que la edad fue la variable asociada mas consistentemen­Ie a la actividad de CuZn-SOD y GSH-Px, se determinaron losintervalos de refcrencia por grupos de edad. Utilizando comopunto de corte la media de edad de la pobladon (40 anos). elintervalo de referenda de CuZn-SOD en eritrocitos y GSH-Pxen sangre. fue significativamenle superior en eI grupo de muje­res de edad comprendida entre 40 y 60 anos.

Aunque existen numerosos estudios en los que se han ex a­minado estas enzimas en pobl<ldon geneml. su reladon con laedad y factores de estilo de vida. pocos de ellos present<ln un<l<lmplia casuistica de poblacion femenina. refiricndose en gene­rallas asociaciones obtenidas " datos pertenecientes a indivi­duos de ambos sexos. Los resultados obtenidos por diversosautores son discrepantes refiriendose ascensos (9. 10. 25). des­censos (9. fI, /2) 0 ausencia de variacion can la edad (/2. 24)de las enzimas antioxidantes. Resultados dispares han sido asi­mismo descritos con el consurno de tabaco (9. /0. /2). En elpresente estudio observamos un incremento del contenido yconcentracion cataHticas de CuZn-SOD y GSH-Px con laedad, y un descenso de CuZn-SOD asociado al mayor consu­mo de tabaco. Nuestros resultados coinciden con los rcferidospor Maklund et al. (/0). estos autores observaron un ascensodel cOl1!enido catalf!ico de CuZn-SOD extracelular con la edady un descenso asociado al consumo de tabaca. en 4900 indivi­duos. inc1uyendu 2397 mujeres de edad camprendid" entre 25y 64 anos. Por otra parte. Guemori et al. (9) describcn en 1782individuos (922 de ellos mujeres) un incremento de la concen­Iradon catalflica de GSH-Px eritrocitaria y GSH-Px plasm.iti­ca con la edad. en una poblacion de edad comprendida entre 4y 64 anos. estos autores sin embargo. refieren una asociadonnegativa con la edad en cuanto a la actividad de CuZn-SODextracelular. y no encuentran relacion entre la actividad deCuZn-SOD en eritrocitos y la edad.

Las discrepanci"s entre los resullados obtenidos en los di­versos eSllldios podrian debcrse a las diferendas de metodolo­gfa utilizada en las determinadones. asi como a la diversidadde intervalos de edad de las poblaciones examinadas. Guemoriet al. (9) esliman un punto de corte de 65 anos de edad para eldescenso del contenido y la eoncentracion catalitica de las en­zimas antioxidantes. Este dato. ya observado previamente(25), no ha sido corroborado por olros "utores que no encuen­tran difcrcncias en ambas enzimas con la edad (26) 0 refierenasccnsos de GSH-Px en poblaci6n de edad superior a 65 anos(27). Olro factor importame p.tra explicar la diversidad de re­sultados obtenida podrf.t ser el estildo de salud de las poblacio­nes eSlltdiad.ts. su eSlado nutricional y fllctores llsociados al es­lilo de vida que. junto con la cdad. incidirian por una parte enel estrcs oxidativo de la poblacion y por Olra en el eswdo antio­xidante de la misma.EI grado de pcrol>idaci6n lipidica incrementa con la edad (28).Las actividades de las enzimas antioxidantcs dependen delequilibrio entre su con sumo 0 inactivaciOn. y su inducci6n.TrilS procesos gcneradores de rudic.tles libres como la repcrfu­sion en el infarto de miocardio (29) 0 el ejereieio agudo (30) seha observado un desccnso y una posterior induccion de estasenzimas. Lil induccion lllantenida de enzimas antioxidantes re­prescntllrfa un factor protector frente a la generaei6n de rudica­ies libres (3/). Asi cl incremel1\o de actividad de CuZn-SOD yGSH-Px se eonsidcra uno de los cfeelOs benefidosos del pre­eondieionamiento isquemico sobre el miocardio (29). Tambicnse han observado lllayores actividades de CuZn-SOD y GSH·Px en individuos enlrenados frel1\c a sedcntarios aun con ungrado inferior de peroxidacion lipfdica en los prirneros (/8.32).

La poblacion felllenina estudiada presenlaba una edad igual

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o inferior a 60 anos. pertenecia al area rnediterdnea. caracteri­zada por un elevado aporte de antioxidantes en la dieta. pre­sentaba una baja prevalencia de habito tab<iquico. moderadoconsumo de alcohol y un c1evado nivcl de pr<ictica de activi­dad Hsica regular. EI incremento de actividad de las enzimasal1\ioxidantes con la edad en esta poblaci6n podrfa interpretar­se como una respuesta protectora inducida por el incrementoen la generdci6n de radicales libres asociado a la edad (28). Laasociacion Ilegativll encol1\rada cmre la CuZn-SOD y el nurne­ro de cigldfa. apuma el consurno regular de tabaco como unode los factores generadores de radicales libres capaces de redu­cir la actividad de esta enzima en nuestm poblacion.

En conclusion, en una poblacion femenina espanola de edadcomprendida cntre 18 y 60 anos de cdad observamos una aso­ciaci6n positiva de la edad con el contenido cataHtico deCuZn-SOD en eritrocitos y la concentracion catalftica deGSH-Px en sangre y una "sociacion neglltiva del consumo detabaco con el contenido cataHtico de CuZn-SOD en eritrocitos.Se obtuvieron los intervalos de referenda para los grupos deedad cornprendidos entre 18 y 39 anos. y entre 40 y 60 anos.La actividad de CuZn-SOD en eritrocitos y GSH-Px en sangre.fue significativamenle superior en el grupo de lllujeres de edadcomprendida entre 40 y 60 anos.

Correspon<len<·iu;M" I. Covus PlaocllsCI Dr. Aicua<lcr 800lKJ()3 Barcelonac_mail: mcovas@imim.es

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