electroforesis
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Electroforesis
Análisis Instrumental 2Equipo:Gabriela Guadalupe Padilla EscobedoMaría Josse Vásquez MejíaSendar Daniel Nery Flores
Fundamento
La electroforesis es un método de separación que se basa en la diferente velocidad de migración de especies cargadas dentro de un campo eléctrico de corriente directa.
Fundamento La electroforesis es un método de
laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Fundamento Cuando una mezcla de moléculas ionizadas
y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).
Fundamento
El movimiento de las moléculas esta gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia denominado difusión.
Fundamento El gel consiste de un polímero soluble de
muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será mas lenta, pero el ensanchamiento del frente se vera reducido también.
Historia
El químico sueco Arne Tiselius investigó por primera vez está técnica de separación en los años treinta para estudiar las proteínas séricas.
Técnica Electroforesis
Una separación electroforética se lleva a cabo mediante la inyección de una pequeña banda de la muestra en una solución amortiguadora alojada en un tubo estrecho o en un medio de soporte poroso y plano, por ejemplo: papel o un gel semisólido.
Técnica Electroforesis
Se aplica un alto voltaje a lo largo de la solución amortiguadora mediante dos electrodos ubicados en los extremos. El campo impulsa los iones de la muestra a emigrar hacia uno u otro de los electrodos.
Técnica Electroforesis
La velocidad de migración de una especie depende de su carga y también de su tamaño.
Las separaciones se basan en las diferencias de la relación carga-tamaño entre los diferentes analitos de la muestra.
Equipo de Electroforesis.
Equipo de Electroforesis. Fuente de poder, corriente
constante y directa para indicar y controlar el alto voltaje de suministro como el consumo de corriente.
Ensamble electroforético con aditamentos especiales para soportar la muestra.
Electrodos de platinos conectados por medio de cables aislados y sellados a las paredes del tanque.
Canales que se llenan con el electrolito indicado.
Tipos de geles
El tipo de gel más utilizado es un polímero de poliacrilamida, formado por polimerización de la acrilamida.
Otros geles empleados son la agarosa, metilcelulosa, alcohol polivinílico, óxido de polietileno, dextrano, polietilenglicol.
Tipos de Electroforesis Electroforesis ordinaria
Electroforesis capilar
Electroforesis ordinaria
Se efectúa sobre una placa delgada y plana, de gel semisólido y poroso. Dichas muestras se introducen en la forma de manchas o bandas sobre la placa y se aplica un campo eléctrico de corriente continua a la placa durante un período fijo.
Volumen de la muestra de micro litros. Las especies separadas se tiñen para poder
verlas.
Electroforesis ordinaria
Es la técnica de separación más ampliamente utilizada en biología y bioquímica.
Electroforesis capilar
Surgió a mediados de los años ochenta. Produce separaciones de alta velocidad y
de alta resolución. Volúmenes de muestra pequeños, de 0.1 a
10 nL. Las especies separadas son eluidas desde
uno de los extremos del capilar, se pueden usar detectores cuantitativos.
Electroforesis
Aplicaciones Se aplica a una diversidad de problemas de
separación analítica difícil:- Aniones y cationes inorgánicos.- Aminoácidos.- Vitaminas.- Carbohidratos.- Péptidos, proteínas.- Ácidos nucleicos.
Aplicaciones
Bibliografía
1) D. Skoog, Principios de análisis instrumental, sexta edición México DF 2008, Pág. 867 – 877.
2)http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/electroforesis.html (11/05/10)