electroforesis

República Bolivariana de VenezuelaRepública Bolivariana de VenezuelaUniversidad Arturo MichelenaUniversidad Arturo MichelenaFacultad de Ciencias de La SaludFacultad de Ciencias de La SaludEscuela de Patología MédicaEscuela de Patología Médica

San Diego, Mayo de 2009San Diego, Mayo de 2009

ElectroforesisElectroforesis

Es un método que se utiliza para separar Es un método que se utiliza para separar biomoléculas, empleando una corriente biomoléculas, empleando una corriente eléctrica.eléctrica.

Esta separación se puede realizar:Esta separación se puede realizar:

Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel Electroforesis en Gel Electroforesis en Gel

Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel

Se emplea en la separación de sustancias Se emplea en la separación de sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos.péptidos.

Es muy útil en los laboratorios clínicos por Es muy útil en los laboratorios clínicos por su fácil manipulación y su rápido desarrollo.su fácil manipulación y su rápido desarrollo.


Pueden hacerse en tiras de acetato de Pueden hacerse en tiras de acetato de Celulosa, Que son químicamente más Celulosa, Que son químicamente más homogéneas y son transparentes.homogéneas y son transparentes.

El acetato de celulosa se utiliza también El acetato de celulosa se utiliza también para separar lipoproteínas. para separar lipoproteínas.


Proceso con electroforesis en papel.Proceso con electroforesis en papel.

La muestra se aplica sobre una tira de La muestra se aplica sobre una tira de papelpapel de filtro de filtro humedecido con una 2 disoluciones tampón, bien en el humedecido con una 2 disoluciones tampón, bien en el centro o en cualquiera de los extremos del centro o en cualquiera de los extremos del papelpapel, , dependiendo de las sustancias a separar y del pH del dependiendo de las sustancias a separar y del pH del tampón. Los extremos de la tira se sumergen en dos tampón. Los extremos de la tira se sumergen en dos recipientes separados que contienen la disolución tampón recipientes separados que contienen la disolución tampón y en los que se hallan colocados los electrodos. y en los que se hallan colocados los electrodos.


Se conectan los electrodos a una fuente de Se conectan los electrodos a una fuente de tensión continua y se aplica una diferencia de tensión continua y se aplica una diferencia de potencial durante el tiempo adecuado. Al potencial durante el tiempo adecuado. Al aplicar una corriente directa, las moléculas aplicar una corriente directa, las moléculas cargadas de la mezcla emigran hacia los cargadas de la mezcla emigran hacia los electrodos de polaridad opuesta formando electrodos de polaridad opuesta formando bandas en el bandas en el papelpapel. La velocidad de . La velocidad de emigración de una molécula, depende emigración de una molécula, depende preferentemente de su carga. preferentemente de su carga.

Electroforesis en gelElectroforesis en gel

Se basa en:Se basa en:El tamañoEl tamañoLa formaLa formaEl Punto IsoeléctricoEl Punto Isoeléctrico

Puede ser una técnica preparativa para purificar Puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas antes de aplicar espectrometría de moléculas antes de aplicar espectrometría de masas, clonación o secuenciación de ADN.masas, clonación o secuenciación de ADN.


El gel en muchos casos es un polímero El gel en muchos casos es un polímero entrelazado de porosidad controlable.entrelazado de porosidad controlable.

Está compuesto por diferentes Está compuesto por diferentes concentraciones de:concentraciones de:

acrilamida/bis-acrilamidaacrilamida/bis-acrilamida iniciador de la polimerizacióniniciador de la polimerización


Aplicaciones con electroforesis en gel.Aplicaciones con electroforesis en gel.

Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.

Aplicaciones en Proteínas.Aplicaciones en Proteínas.


Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.

En los fragmentos de ADN doble, la velocidad de En los fragmentos de ADN doble, la velocidad de migración es inversamente proporcional al tamaño.migración es inversamente proporcional al tamaño.

En los fragmentos simples de ADN y ARN se utilizan En los fragmentos simples de ADN y ARN se utilizan compuestos como hidróxido de sodio y formamida q compuestos como hidróxido de sodio y formamida q rompen los enlaces de puente de hidrógeno y permiten rompen los enlaces de puente de hidrógeno y permiten que la velocidad dependa únicamente del tamaño.que la velocidad dependa únicamente del tamaño.


Aplicaciones en Proteínas.Aplicaciones en Proteínas.

Al aplicar una fuerza electromotriz y las proteínas Al aplicar una fuerza electromotriz y las proteínas no migran, hay que desnaturalizarlas, no migran, hay que desnaturalizarlas, añadiendo:añadiendo:

- DetergenteDetergente: (SDS/SDP).: (SDS/SDP).- Agente ReductorAgente Reductor: 2-mercaptoetanol.: 2-mercaptoetanol.

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