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San Diego, Mayo de 2009San Diego, Mayo de 2009
ElectroforesisElectroforesis
Es un método que se utiliza para separar Es un método que se utiliza para separar biomoléculas, empleando una corriente biomoléculas, empleando una corriente eléctrica.eléctrica.
Esta separación se puede realizar:Esta separación se puede realizar:
Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel Electroforesis en Gel Electroforesis en Gel
Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel
Se emplea en la separación de sustancias Se emplea en la separación de sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos.péptidos.
Es muy útil en los laboratorios clínicos por Es muy útil en los laboratorios clínicos por su fácil manipulación y su rápido desarrollo.su fácil manipulación y su rápido desarrollo.
Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel
Pueden hacerse en tiras de acetato de Pueden hacerse en tiras de acetato de Celulosa, Que son químicamente más Celulosa, Que son químicamente más homogéneas y son transparentes.homogéneas y son transparentes.
El acetato de celulosa se utiliza también El acetato de celulosa se utiliza también para separar lipoproteínas. para separar lipoproteínas.
Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel
Proceso con electroforesis en papel.Proceso con electroforesis en papel.
La muestra se aplica sobre una tira de La muestra se aplica sobre una tira de papelpapel de filtro de filtro humedecido con una 2 disoluciones tampón, bien en el humedecido con una 2 disoluciones tampón, bien en el centro o en cualquiera de los extremos del centro o en cualquiera de los extremos del papelpapel, , dependiendo de las sustancias a separar y del pH del dependiendo de las sustancias a separar y del pH del tampón. Los extremos de la tira se sumergen en dos tampón. Los extremos de la tira se sumergen en dos recipientes separados que contienen la disolución tampón recipientes separados que contienen la disolución tampón y en los que se hallan colocados los electrodos. y en los que se hallan colocados los electrodos.
Electroforesis en PapelElectroforesis en Papel
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Se conectan los electrodos a una fuente de Se conectan los electrodos a una fuente de tensión continua y se aplica una diferencia de tensión continua y se aplica una diferencia de potencial durante el tiempo adecuado. Al potencial durante el tiempo adecuado. Al aplicar una corriente directa, las moléculas aplicar una corriente directa, las moléculas cargadas de la mezcla emigran hacia los cargadas de la mezcla emigran hacia los electrodos de polaridad opuesta formando electrodos de polaridad opuesta formando bandas en el bandas en el papelpapel. La velocidad de . La velocidad de emigración de una molécula, depende emigración de una molécula, depende preferentemente de su carga. preferentemente de su carga.
Electroforesis en gelElectroforesis en gel
Se basa en:Se basa en:El tamañoEl tamañoLa formaLa formaEl Punto IsoeléctricoEl Punto Isoeléctrico
Puede ser una técnica preparativa para purificar Puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas antes de aplicar espectrometría de moléculas antes de aplicar espectrometría de masas, clonación o secuenciación de ADN.masas, clonación o secuenciación de ADN.
Electroforesis en gelElectroforesis en gel
El gel en muchos casos es un polímero El gel en muchos casos es un polímero entrelazado de porosidad controlable.entrelazado de porosidad controlable.
Está compuesto por diferentes Está compuesto por diferentes concentraciones de:concentraciones de:
acrilamida/bis-acrilamidaacrilamida/bis-acrilamida iniciador de la polimerizacióniniciador de la polimerización
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Aplicaciones con electroforesis en gel.Aplicaciones con electroforesis en gel.
Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.
Aplicaciones en Proteínas.Aplicaciones en Proteínas.
Electroforesis en gelElectroforesis en gel
Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.Aplicaciones en Ácidos Nucleicos.
En los fragmentos de ADN doble, la velocidad de En los fragmentos de ADN doble, la velocidad de migración es inversamente proporcional al tamaño.migración es inversamente proporcional al tamaño.
En los fragmentos simples de ADN y ARN se utilizan En los fragmentos simples de ADN y ARN se utilizan compuestos como hidróxido de sodio y formamida q compuestos como hidróxido de sodio y formamida q rompen los enlaces de puente de hidrógeno y permiten rompen los enlaces de puente de hidrógeno y permiten que la velocidad dependa únicamente del tamaño.que la velocidad dependa únicamente del tamaño.
Electroforesis en gelElectroforesis en gel
Aplicaciones en Proteínas.Aplicaciones en Proteínas.
Al aplicar una fuerza electromotriz y las proteínas Al aplicar una fuerza electromotriz y las proteínas no migran, hay que desnaturalizarlas, no migran, hay que desnaturalizarlas, añadiendo:añadiendo:
- DetergenteDetergente: (SDS/SDP).: (SDS/SDP).- Agente ReductorAgente Reductor: 2-mercaptoetanol.: 2-mercaptoetanol.