7/17/2019 Electro for Es Is

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ELECTROFORESIS (anais)

La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza unacorriente eléctrica controlada con la nalidad de separar biomoléculassegún su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.Fue empleado por primera vez por en el año 19!" pero su importanciavino a incrementarse cuando en los años cincuenta #urrum y $iselius "impulsaron la electroforesis de zona" nombre que se asign% a laseparaci%n de materiales en un campo eléctrico en presencia de algúntipo de soporte& aunque este término se limit% originalmente al an'lisisde coloides y part(culas submicroscopicas " se )a convertido en estosúltimos años en una metodolog(a aplicada a sustancias de ba*o pesomolecular.La separaci%n puede realizarse sobre la supercie )idratada de unsoporte s%lido" como por e*emplo la electroforesis realizada en acetatode celulosa" a través de una matriz porosa como lo son la electroforesis

realizada en gel de agarosa o poliacrilamida" o bien en disoluci%nconocido como electroforesis libre.

+na aplicaci%n muy importante para la electroforesis en gel es en la

tecnolog(a del ,#-.

sta técnica es una de las m's importantes )erramientas en biolog(a

molecular y es de valor cr(tico en muc)os aspectos de la manipulaci%n y

estudio genético.

l principal uso es la separaci%n y puricaci%n de fragmentos

individuales conteniendo genes interesantes" los cuales pueden ser

recuperados del gel con actividad biol%gica completa.

La electroforesis en gel )ace posible determinar la diferencia genética y

la relaci%n evolutiva entre especies y plantas y animales. +sando esta

tecnolog(a es posible separara e identicar las prote(nas que dieren en

por lo menos en un solo amino'cido. 

Electroforesis del ADN (pato)

/ediante la electroforesis podemos separar fragmentos de arn y adn enfunci%n de su tamaño" visuaizandolos mediante una sencilla tinci%n" y de estaforma determinar el contenido de los ac. -ucleicos de una muestra" teniendo

una estimaci%n de su concentracion y el grado de entereza.

0odemos adem's etraer del gel los fragmentos de adn que sean de interés"para asi" posteriormente" utilizarlos en diferentes aplicaciones.

La electroforesis de adn fue y sigue siendo una )erramienta de primordialimportancia en desarrollo de técnicas del adn recombinante o ing. genetica

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La electroforesis el gel de agarosa y poliacrilamida son unas de lasmetodolog(as mas utilizadas )oy en dia en los laboratorios bioqcos. 2 en todolo relacionado con traba*os de ac. -ucleicos

Electroforesis en gel de agarosa (pato)

La agarosa es un polisac'rido 3originalmente obtenido de algas" como el agar4agar" pero de composici%n )omogénea5" cuyas disoluciones 3t(picamente de 6.7a 8 5 poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 76 grados :y formar un gel" semis%lido al enfriarse. ste gel esta constituido por unamatriz o trama tridimensional de bras poliméricas embebida en gran cantidadde medio l(quido" que retarda el paso de las moléculas" se usa usualmente paraseparar moléculas grandes de alrededor 86.666 nucle%tidos.

sta electroforesis es la mas utilizada y se aplica en la separaci%n defragmentos que se transeran a una membrana gelosa" y la separaci%n defragmentos que resultan de la digesti%n con diferentes enzimas de restricci%n.

La utilizaci%n de este gel es un método est'ndar para separar y puricarfragmentos de adn cuando no se requiere un alto poder de resoluci%n

Electroforesis en gel de poliacrilamida.(anais)

Los geles de poliacrilamida se forman por polimerizaci%n de la acrilamida poracci%n de un agente entrecuzador" es qu(micamente inerte" de propiedadesuniformes" capaz de ser preparado de forma r'pida y reproducible. Forma"adem's" geles transparentes con estabilidad mec'nica" insolubles en agua"relativamente no i%nicos y que permiten buena visualizaci%n de las bandasdurante un tiempo prolongado. ,dem's tiene la venta*a de que variando laconcentraci%n de pol(meros" se puede modicar de manera controlada en el

tamaño del poro" lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnosticodebido a su neurotoocidad.

sta membrana permite la obtenci%n de adn de alta pureza que puedeutilizarse para aplicaciones que requieran un adn totalmente libre deimpurezas.

!todo (pato)

el anailisis de los geles de agarosa y poliacrilamida se realizanpreferentemente en un equipo documentador de geles" los cuales tienenincorporado un soft;are que permite guardar fotograf(as del gel en formatos

 $<FF"=0>" etc.

,dem's de llevar a cabo an'lisis densitometricos cuando se necesite realizaruna cuantigcacion precisa de la intensidad de las bandas en el gel.

sta cuanticaci%n puede tener distintas aplicaciones" por e*emplo" laestimaci%n de la concentracion del adn en una muestra mediante comparaci%ncon otra muestra de concentracion conocida" y la comparaci%n de cantidad deladn? en un eperimento @$40:@.

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Los programas de an'lisis pueden realizar una estimaci%n del tamaño de losfragmentos por comparaci%n con los marcadores de peso molecular utilizado.

"enta#as $ des%enta#as de los m!todos en matri& gelosa.($icel)

l principal problema que afecta la estabilidad y la resoluci%n en todos los

medios de electroforesis es la absorci%n y desorci%n. Las caracter(sticas de

tamiza*e del gel est'n fundamentalmente dirigidas por el tamaño del poro ycuando el medio absorbe agua" el tamaño medio del poro se incrementa" esto

)ace que las moléculas puedan migrar m's r'pido a lo largo del gel y

disminuye la resoluci%n. 0ero como la absorci%n de agua no es uniforme en

cada porci%n del gel" casi siempre es mayor en la regi%n central que en los

etremos" por lo que las moléculas localizadas en esta migran a través del gel

m's rapido que las que est'n en los etremos" lo que deforma y afecta la

reproducibilidad de la electroforesis.

"enta#as $ des%enta#as de la electroforesis en gel de agarosa ($icel)

Las venta*as son que el gel es f'cilmente vertido" no desnaturalizas las

muestras y las muestras pueden ser también recuperadas.

0or otra parte" las desventa*as son que los geles puede fundirse durante la

electroforesis" el buAer puede agotarse" y diferentes formas de material

genético pueden tratarse cuando su forma no es predecible.

"enta#as $ des%enta#as de la electroforesis en gel de poliacrilamida

($icel).

 $odos los geles de poliacrilamida absorben agua durante el proceso depolimerizaci%n y durante la conservaci%n" pero la tendencia se incrementa conel aumento del porcenta*e de acrilamida. n el sistema de electroforesis contamp%n y gel )eterogéneos" la diferencia de concentraci%n entre los gelesconcentrador y separador crea un potencial osm%tico entre los 8 geles" lo queprovoca que el agua pase del gel concentrador 3regi%n de ba*o acrilamida5)acia el separador 3regi%n de alto de acrilamida5. ste proceso es muy

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r'pido y continúa )asta que se establezca un equilibrio entre ambos gelescomo resultado de la difusi%n del agua al gel separador" por lo que elporcenta*e de acrilamida no es estable en el gel separador y es necesarioemplear los geles en el d(a de su preparaci%n. :uando se mantiene en tamp%n"el gel absorbe r'pidamente agua de este )asta llegar al equilibrio" lo queprovoca inestabilidad en este y diculta su comercializaci%n. +n gel no tieneuna calidad aceptable si presenta poros no uniformes como resultado de ladifusi%n de agua entre el gel de alto porcenta*e y la atm%sfera.1B 0or todo loanterior se )a planteado la utilizaci%n de compuestos que restringen ladifusi%n" los que pueden ser polioles" polisac'ridos" alco)oles poliméricos" etc.stos compuestos se adicionan en la parte del medio de electroforesis en quese quiere inmovilizar el agua" en el caso de la electroforesis en poliacrilamidacuando est' sintetizando el gel concentrador" lo que no afecta C el procesoelectroforético que se puede seguir según el método convencional. Di se deseaprevenir la difusi%n de agua desde el tamp%n )asta el gel" es necesario añadirestos compuestos al tamp%n.

Factores 'e afectan a la electroforesis (po&o)

La electroforesis es una técnica muy sensible y puede ser afectada por muc)oserrores eperimentales" como la temperatura durante la polimerizaci%n y lacorrida del gel" velocidad de la polimerizaci%n" niveles de catalizador" purezadel reactivo" tiempo de corrida y preparaci%n de las muestras.

Conclsiones (po&o)

Las técnicas de electrforesis de adn son b'sicas e insustituibles para eldesempeño de cualquier traba*o en biolog(a molecular" bioqca y biotecnolog(a"referente a ensayos con acidos nucleicos" por lo que seguir'n utiliz'ndosepreviamente durante muc)o tiempo.

:on el pasar de los años se )an ido desarrollando grandes avances en este tipode técnica" como la 0F>" y aplicaciones nuevas" tales como la -D,.

l continuo desarrollo de las técnicas bioqu(micas y biotecnol%gicas" )aceprever que se desarrollaran aun mas aplicaciones para los diversos métodos deelctroforesis des acidos nucleicos en gel.

Lamentablemente la electroforesis es una técnica demasiado sensible" por lo

que es necesario tener ba*o control cada uno de los factores asociados aerrores en el método" adem's de la debida preparaci%n del personal.