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PRÁCTICA 2
CONSERVACIÓN DE UNA CEPA DE INTERES BIOTECNOLÓGICO
INTRODUCCIÓN
Para la conservación de microorganismos existen diferentes métodos para su preservación.
Estos se pueden clasificar a largo plazo, métodos alternativos y métodos restringidos, entre
los que se destacan como favoritos el cultivo periódico en cuñas de agar, bajo aceite
mineral, conservación de esporas en tierra, arena o silica gel, cepas liofilizadas,
congelación en nitrógeno líquido y en agua destilada o de mar. Para la elección de alguno
de estos métodos se deben de tomar en cuenta varios factores, según sea el objetivo de la
colección. Si el objetivo es clasificar taxonómicamente los cultivos se precisan métodos que
garanticen la estabilidad morfológica de los microorganismos. Así mismo una colección de
interés para la industria debe hacer énfasis en los métodos que mantengan la estabilidad
genética.
Los tres objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas
microbianas en los laboratorios de microbiología son: que el cultivo a conservar sea puro,
evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservación; que
durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células, y por
último, que estas células permanezcan genéticamente estables. Los dos primeros objetivos
no son muy difíciles de conseguir cuando se conoce bien la técnica microbiológica, pero el
tercero puede presentar dificultades, y este es el motivo por el cual existen varios métodos
de conservación para los microorganismos, y ninguno de ellos es de utilización general.
OBJETIVO
Realizar la conservación de una cepa de interés industrial, utilizando diferentes técnicas de
conservación para determinar el mejor método de preservación evaluando la viabilidad de
células.
METODOLOGÍA
Material sesión 1.3 Matraz Erlenmeyer de 125 mL1 Asa recta2 Vasos de precipitados de 250 mL 1 Mechero 1 Piceta para agua destilada 1 Probeta de 100 mL 1 Espátula Algodón Industrial Manta de cielo Papel estraza
Equipo Autoclave Balanza Analítica Reactivos y medios de cultivo Agar Papa DextrosaAgua Destilada Alcohol etílico al 70%
Material Biológico. Muestra problema (S. maydis, Trichoderma harzianum,Trametes sp., Penicillium rockeforti, Aspergillus nigger)
PROCEDIMIENTO
1. Preparar PDA tal y como indica el proveedor. 2. Esterilizar en autoclave, a 1 atm, durante 15 minutos, los matraces PDA.3. Pasar 250 μl de cada una de las diluciones perfectamente homogéneas a una
caja Petri con PDA. 4. Sembrar por picadura el hongo elegido.5. Incubar a temperatura ambiente durante una semana.
Material sesión 2.1 Cámara de Neubauer1 Agitador megnético2 Pipeta de 5 mL1 Propipeta7 Tubos de 10 x 100 con tapa rosca9 Tubos eppendorf de 1.5 mL2 Vasos de precipitados de 250 mL 1 Matraz Erlenmeyer de 125 mL1 Mechero 1 Piceta para agua destilada 1 Probeta de 100 mL 1 Probeta de mL1 Espátula Puntas amarillasPuntas azulesAlgodón Industrial Manta de cielo Papel estraza
Equipo Autoclave Balanza Analítica MicroscopioParrillaMicropipeta Reactivos y medios de cultivo Tween 20Agua Destilada GlicerolÁcido sulfúricoAlcohol etílico al 70%
Material Biológico. Muestra problema (S. maydis, Trichoderma harzianum,Trametes sp., Penicillium rockeforti, Aspergillus nigger)
PROCEDIMIENTO
1. Tratar la arena con una solución de ácido sulfúrico al 0.5 N y realizar de dos a tres lavados con agua destilada. Ponerla a secar.
2. Ya con la arena seca colocarla en los tres tubos eppendorf hasta llenar la mitad de éste.
3. Llenar los tubos de 16 x 150 mm con mL de agua.4. Preparar Tween 20 al 0.1%, y colocarlo en un matraz Erlenmeyer. 5. Esterilizar en autoclave, a 1 atm, durante 15 minutos, el matráz, los tubos, el glicerol,
las puntas.6. Realizar la cosecha de esporas del hongo elegido. 7. Realizar el conteo en la cámara de Neubauer. 8. De acuerdo a este conteo realizar diluciones si es necesario hasta obtener una
concentración de 104 a 105 esporas/mL.
Para realizar la conservación de esporas hacerla por triplicado para da una de las técnicas.
9. En los tubos eppendorf con arena colocar 300 µL. 10.Colocar en los tubos eppendorf 70% de glicerol y 30% de esporas (300 µL). 11.Colocar en los tubos eppendorf 70% de agua estéril y 30% de esporas (300 µL). 12.Conservarlo a 4°C.
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