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TÉCNICAS DE
AGLUTINACIÓN
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INDIRECTASDIRECTAS
el antígeno es por sí mismo particulado, por lo que no
requiere fijación a soportes inertes.
•Rápida, en placas•Lenta, en tubos o microplacas
antígenos solubles unidos aglóbulos rojos o partículas
inertes como el poliestireno, látex y bentonita. En ocasiones,
pueden utilizarse bacterias como soporte (Micrococcus
lysodeikticus).
•Rápida, en placas•Lenta, en tubos o microplacas
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Aglutinación indirecta en placas:
• Aglutinación de partículas de látex-ASO• látex-PCR• látex-AR
Aglutinación indirecta en policubetas:
– Hemaglutinación para Tripanosoma cruzi– Hemaglutinación para Toxoplasma gondii– Aglutinación de partículas de gelatina para HIV– Aglutinación de partículas de gelatina para Treponema
pallidum (TPPA)
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PROTEÍNA C REACTIVA
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Características
• Peso molecular 62.000
• Compuesta por una cadena larga y una
pesada
• Sintetizada en el hígado, dependiente de
Vitamina K
• Se llamó proteína C por su capacidad para
reaccionar con el polisacárido C del
Streptococcus pneumoniae
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Participación
• Indicador importante en inflamaciones agudas
• Factor importante de la coagulación, función anticoagulante que inactiva a los factores V y VIII de la coagulación.
• En el sistema inmune tiene participación con el sistema del complemento.
• Eleva la producción de la enzima PAI-1 (Inhibidora del activador del plasminógeno), producida por las células endoteliales aórticas, inhibiendo trombólisis.
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Aumento de PCR
• Estados inflamatorios agudos: • Infecciones• Cirugía• El rechazo de transplante de órganos ó de médula ósea. • Traumatismos, fracturas ó quemaduras.• Estados inflamatorios crónicos:• Obesidad• En el Síndrome Metabólico con insulinorresistencia• En la DM tipo 2, • En las enfermedades inflamatorias del tejido conectivo, como
LES, AR
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PCR puede disminuir cuando:
• Presencia de enfermedad hepática
• Quimioterapia
• Uso de Warfarina (anticoagulante)
• Trastornos de la coagulación
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PCR-látex
• Ag: Partículas de látex-poliestireno sensibilizadas con anticuerpos anti-PCR
• MUESTRA: suero, en caso de ser lipémicos o contaminado puede dar falsos +
• VALOR DE REFERENCIA: hasta 6 mg/dL
• PCR: título x sensibilidad (6 mg/dL)
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Fiebre reumFiebre reumááticatica
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CONCEPTOEs una enfermedad inflamatoria aguda, autolimitada con gran tendencia a la recidiva. Afecta principalmente corazón, sinovial, sistema nervioso central, piel y tejidos conectivos. La manifestación clínica más frecuente es la artritis y la más grave la endocarditis.
ETIOLOGÍA estreptococo beta hemolítico del grupo A
FIEBRE REUMÁTICA
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Estreptococo
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cápsula: ac. hialurónico
capa externa: fimbrias
capa media: carbohidrato
capa interna: mucopéptidos
membrana protoplasmática:
lipoproteínas
ESTREPTOCOCOAntígenos de pared
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CCáápsula psula
• Los grupos A y C poseen cápsula de ácido hialurónico, responsable de la colonia de tipo mucoide.
• La cápsula, es un polímero de ácido glucurónico y N-acetilglucosamina, probablemente no es antigénico.
• La cápsula posee propiedades antifagocíticas.
• Las propiedades antifagocíticas juegan un papel crítico en las invasiones.
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FIMBRIAFIMBRIA
• Proyecciones filamentosas (fimbrias) han sido observadas por microscopía electrónica.
• Estas fimbrias son responsables de unir a las células epiteliales a los Streptococcus mediante la colonización.
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ProteProteíína Mna M
• Esta asociada a las fimbrias, es un importante antígeno de la pared celular, especialmente a los grupos A y C.
• Esta proteína es lábil a la tripsina y otras enzimas proteolíticas, pero puede ocurrir resíntesis.
• El antígeno esta relacionado directamente a la virulencia del organismo porque su acción antifagocitica protege la célula de la ingestión de los leucocitos PMN.
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PATOGPATOGÉÉNESISNESIS
• Cápsula, fimbria, y proteína M son de importancia para la colonización
de los Streptococcus.
• Otros factores de virulencia son la estreptolisina O y S.
• S. pyogenes produce toxina eritrogénica, asociado con la fiebre
escarlata, shock letal y citotoxicidad.
• La fiebre reumática es el resultado de lesión del tejido inmune que
ocurre después de una infección a la garganta.
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PATOGÉNESIS
• Las reacciones inmunes producen gama globulina que se fija en los vasos sanguíneos a lo largo del miocardio en pacientes afectados.
• La proteína de M produce trombos, a nivel del músculo. .
• Esta proteína, causante de la nefritis tiene un peso molecular de aproximadamente 46,000 Da.
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Factores de virulencias: proteínas, toxinas y
enzimasFactor de virulencia Características
Hemolisinas O Antigénica, responsable de la β hemólisis, tóxica a las células.
Hemolisina S No antigénica, tóxica a las células.
Hialuronidasa Despolimeriza la sustancia fundamental de tejido conectivo para diseminarse por continuidad.
Estreptocinasa Hidroliza coágulos de fibrina, impide la formación de fibrina en lesiones.
Exotoxinas estreptocócicas pirógenas (SPE)
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ASO-látex
• Ag: suspensión de partículas de látex poliestireno recubiertas con estreptolisina O.
•• MUESTRA: suero
• Los sueros lipémicos o con contaminantes dan falsos +
• VALOR DE REFERENCIA: 200 UI/mL
• ASO (UI/mL)= título x sensibilidad (200 UI/mL)
• El título comienza a subir al 5º ó 6º día de la infección, es máximo a las 4 semanas (mes) y de ahí comienza a bajar, pudiendo normalizarse a los 3 ó 6 meses.
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ARTRITEST
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• Los Ac contra el FR son de tipo IgM se detecta en presencia de gamma-globulina humana adsorbida sobre un soporte inerte de látex- poliestireno.Placa de vidrio fondo negro.
• MUESTRA: sueroHemólisis y ciertas proteínas (distintas al FR) puede ser causa de resultados erróneos.
• FR(UI/mL)= título x sensibilidad (1 UI/mL)
ARTRITEST
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ARTRITIS REUMATOIDE
La AR es una enfermedad inflamatoria que afecta a las pequeñas articulaciones de las extremidades dedos, articulaciones mayores (hombro, codo,
rodilla y tobillo).Caracterizada por: inflamación sinovial, asociada a
destrucción del cartílago y hueso articular.
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Activaciónmonocitos/macrófagos
Activació ncondrocitos
Inducciónproliferación de
fibroblastos
Activaciónosteoclastos
Inflamación Engrosamiento de la membrana
Fragmentacióndel cartílago
Resorción ósea
IL-1
Paper de IL-1 en el proceso inflamatorio en la destrucción articular
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• El FR no es exclusivo de AR, porque también puede estar presente en el LES (30%) y en el Síndrome de
Sjogren (90%) y con menor frecuencia en otras enfermedades autoinmunes, así como en afecciones
inflamatorias e infecciones crónicas.
• Presencia de Factor Reumatoideo (FR), tanto en líquido sinovial como en suero. Son responsables
también de las manifestaciones extraarticulares de la enfermedad, como la vasculitis.
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• •
Manos en rManos en rááfagafaga
Dedos en cuello de cisne: note las deformaciones en las manos, con
hiperextensión a nivel de IFP y flexión en IFD. Clásicas secuelas de AR de larga data.
¿Qué podemos observar?
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TOXOPLASMA GONDII
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![Page 33: Laboratorio TPNº 6 Segunda Parte](https://reader030.vdocuments.co/reader030/viewer/2022020213/588b08dd1a28ab09338b5aab/html5/thumbnails/33.jpg)
TOXOTEST-HAI
• Ag: Liofilizado de GR de carnero sensibilizados con Agcitoplasmático y de superficie de T. gondii.
• GR no sensibilizados: Suspensión al 1% de GR de carnero no sensibilizado para absorción de heterofilia.
• Buffer: PH 7,5 solución fisiológica con fosfato.
• Solución proteica: albúmina bovina.
• 2-ME al 1%
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1/16
1/32
1/64
1/128
1/256
1/512
1/1.024
150 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
+ 10 µL suero
20 µL
desechar
GR no sensibilizados20 µL
GR sensibilizados20 µL
TOXOPLASMOSIS- HAI
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ELIMINAR HETEROFILIA
1/16
1/32
1/64
1/128
1/256
1/512
1/1.024
150 µL 2-ME + 10 µL suero
20 µL buffer
20 µL buffer
20 µL buffer
20 µL buffer
20 µL buffer
desechar
GR no sensibilizados
GR sensibilizados
20 µL
20 µL buffer
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Ciclo BiolCiclo Biolóógico del Tripanosoma gico del Tripanosoma cruzicruzi
Tripomastigote Epimastigote
Amastigote
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Pruebas Convencionales - HAI
�Utilizada desde 1962
�Detección de Ac IgG
� Bajo costo
� Lectura visual
- Subjetiva
� Valor de corte en el escrutinio: 1/32
- Alto % de RFN y RFP
� Estuches diagnósticos con desempeño y componentes variables
+
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Duplas serológicas
HAI-ELISAHAI-IFI
ELISA-IFI
Sensibilidad: 99,8%
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GR sensibilizados
Ag de Trypanosoma cruzi inactivado
+ Ac Anti-T. cruzi AGLUTINACIÓN
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Pruebas treponémicas
• Detecta Treponema pallidum mediante la
aglutinación de partículas (TP-PA). Están
dirigidas a anticuerpos específicos contra esta
espiroqueta y son más sensibles debido a que
los anticuerpos contra T. pallidum preceden
por lo general a los anticuerpos antilipídicos.
En general, la sensibilidad de la prueba TP-PA
es mayor que la de VDRL y la de RPR (88%
frente a 78% y 86%, respectivamente).
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TP-PA
• PARTÍCULAS SENSIBLIZADAS: Partículas de gelatina recubiertas con Treponema pallidum.
• PARTÍCULAS NO SENSIBILIZADAS: Partículas de gelatina coloreadas.
• DILUYENTE DE MUESTRA
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TP-PA
1/5
1/10
1/20
1/40
80 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de buffer
20 µL de suero
desechar
Partículas no sensibilizadas
Partículas sensibilizadas
20 µL
![Page 43: Laboratorio TPNº 6 Segunda Parte](https://reader030.vdocuments.co/reader030/viewer/2022020213/588b08dd1a28ab09338b5aab/html5/thumbnails/43.jpg)
HETEROFILIA
0,95 mL partículas no sensibilizadas + 50 µL suero
T ambiente 20 min centrifugarusar el sobrenadante
como muestra
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HIV-CUALITATIVO
• Diluyente de muestra
• Partículas sensibilizadas: Partículas de gelatina sensibilizadas con Ag recombinantes de VIH-1 y VIH-2.
• Partículas no sensibilizadas: Partículas de gelatina con extracto de E. coli.
• Técnicas menos complejas metodológicamente que
los ELISA, más rápidas y baratas.
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1/4
1/8
1/16
30 µL buffer + 10 µL suero
20 µL buffer
20 µL buffer
desechar
Partículas no sensibilizadas
Partículas sensibilizadas
20 µL