“Establecimiento y multiplicación in vitro de

segmentos nodales de Cordia trichotoma (Vell.)

Arráb. Ex Steud (Borragináceas).”

Autor:

Ing. Santiago José Elías Velazco

Coautores:

M. Sc. Patricia Rocha.

M. Sc. Fernando Niella.

¿Por qué Peteribí? • Especie de interés forestal

• Explotación selectiva

• Inconvenientes con su establecimiento in vitro.

¿Por qué propagación in vitro?

• Producción en masa durante todo el año

• Intercambio de germoplasma

• Útil para programas de mejoremiento genético

Objetivo:

Lograr un protocolo de desinfección eficiente para

el establecimiento in vitro de segmentos nodales

de Cordia trichotoma, y analizar distintas variables

de condiciones de cultivo, que promuevan una

mayor proliferación de brotes.

Materiales y métodos

• Rebrote de plantas madre de 4 años

• Medios de cultivo Murashige y Skoog

• WPM

• 20 gr. L-1 de sacarosa y 8 gr. L-1 de agar

• pH a 5.8 ± 0.05

• Condiciones de cría: 25 ºC fotoperiodo de

16 hs.

• 7 días bajo oscuridad.

Fase de establecimiento:

Variables de estudio.

• Número de explantes contaminados por hongos

• Número de explantes contaminados por bacterias

• Número de explantes fenolizados

• Número de explantes sobrevivientes, (verde sin contaminación o fenolización).

• Evaluación, luego de 7, 14 y 21 días de establecidos los ensayos.

Experimento 1

• Objetivo: Evaluar un protocolo de

desinfección en el que se utiliza etanol

fungicida, antibióticos, cloruro de mercurio

y lavandina.

•Dos tratamientos con 20 repeticiones cada

una.

•primer paso, inmersos en una solución de

etanol al 70 % v/v.

•fungicida (Captan® 0.5 g/l) 30 min.

•solución de antibioticos (50 mg/l de sulfato

de estreptomicina, cefotaxima y

gentamicina) 3 Hs.

•exposición a ClHg (0.3 mg/l) 10 min.

•hipoclorito de sodio al 20% v/v por 10 min.

Tratamientos y resultados

Trat. Hipoclorito

de sodio n

Contaminación % Feno-

lización

%

Sobre-

viviente

% Hongos Bacterias

T1 No 20 100 0,00 45,00 0

T2 Si 20 95 0,00 70,00 5

Explantes fenolizados

•Se logra controlar la aparición de

bacterias

•Solución de tres antibióticos se

utilizó en otras investigaciones con

buenos resultados :

Papaya, Peteribi.

• Fenolización:

ClHg , Lavandina

Experimento 2:

• Objetivo: Evaluar el aislamiento de las plantas

madres como método para disminuir la carga

microbiana de los brotes formados posterior a la

decapitación y/o poda. Además el efecto sobre la

contaminación que se obtiene con una última

inmersión sin enjuague, en una solución de

antibiótico, antioxidante y fungicida.

Pretratamiento:

• T1a y T1b decapitación de

las plantas madres y la posterior

aplicación de Captan® (20 gr L-1),

se procedió a envolver las

plantas madres con

polietileno transparente.

• T2a y T2b, decapitación de las plantas madres,

y aplicación semanal de Captan® (20 gr L-1) una

vez que los brotes tuvieron una longitud de 0.5

cm.

Tratamiento y diseño experimental

• Cuatro tratamientos con 25 repeticiones cada

una y con distribución factorial.

Protocolo de desinfección:

• Etanol (70% v/v) durante 30 seg.

• Captan® 5 g/l, durante 1 hora.

• Inmersión antibióticos. (50 mg./l sulfato de

estreptomicina, cefotaxima y gentamicina), 3 hs

• ClHg 0.03% p/v 10 min.

• T1b y T2b los explantes inmersos en una

solución de Alliette® (250 mg/l), gentamicina

(250 mg/l) y ácido ascórbico (50 mg/l), sin

posterior enjuague.

Tratamientos y resultados

Trat. Planta

madre

Inmersión

en

solución.

n

Contaminación % Feno-

lizados

%

Sobre-

vivencia

% Hogos Bacterias

T1a No

Cubierta Sin 25 8.0a 52.0 c 20.0a 40.0 a

T1b No

Cubierta Con 25 0.0 a 28.0 b 24.0a 64.0 ab

T2a Cubiertas Sin 25 12.0 a 12.0 ab 4.0a 72.0 ab

T2b Cubiertas Con 25 0.0 a 4.0 a 12.0 a 84.0 b

Total 100 5.0 24,0 15.1 65,0

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

Explantes contaminados por bacterias

Cubrir las platas madres no es practico a

nivel operativo

Experimento 3:

• Objetivo: Evaluar si la juvenilidad del

brote es un factor de alta implicancia en el

grado de contaminación de los explantos.

Tratamiento y diseño experimental:

• Decapitación plantas madres y aplicación

semanal de Captan® (20 gr L-1)

• Utilizo protocolo de desinfección

experimento 2 (T1a).

• T1 consistió en la recolección y

establecimiento de los brotes una vez que

esto alcanzaron una longitud de 5cm.

• T2 la recolección a los 10 días de haberse

efectuado el establecimiento T1.

• Completamente aleatorizado con 150

repeticiones por tratamiento.

Tratamientos y resultados

Trat. Tiempo n Contaminación% Feno-

lizados

%

Sobre-

vivencia

% Hogos Bacterias

T1 Hasta

los 5 cm 150 7,3 a 1,3 a 0 a 91,3 a

T2 Luego de

10Días 150 6,6 a 1,3 a 6,6 b 85,3 a

Total 300 7 1,3 3,3 88,3

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

Brote de Cordia tichotoma (Vell.) Arráb. Ex

Steud

•Importante: Tiempo

del brote en la

planta madre.

•Diferentes a los

anteriores

experimentos

•Resultados

semejantes en

Incienso.

Fase de multiplicación:

Variables de estudio.

• Número de explantes con brotes,

• Número de brotes por explante,

• Número de hoja por brote

• Largo de los brotes.

Experimento 1:

• Objetivo: Determinar que concentración

de hormonas BAP y ANA son las que

promueven una mayor brotación de los

explantes.

• Tratamiento y diseño experimental: diseño

completamente aleatorizado con 36

repeticiones por tratamientos con una

distribución factorial.

Tratamientos y resultados

Trat. Nivel

del factor

mg/l

Nivel

del factor

mg/l n

Fenolizados

%

Explantes

Brotados %

T1 ANA 0 BAP 0 36 44,4 ab 25,0 a

T2 ANA 0 BAP 2,5 36 22,2 a 36,1 a

T3 ANA 0 BAP 5 36 50,0 b 16,7 a

T4 ANA 0,01 BAP 0 36 47,2 b 16,7 a

T5 ANA 0,01 BAP 2,5 36 22,2 a 33,3 a

T6 ANA 0,01 BAP 5 36 36,1 ab 25,0 a

Total 216 37,0 25,5

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

Tratamientos y resultados

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

Trat. ANA

mg/l

BAP

mg/l n

Nº Medio

de brotes

Nº Medio

de hojas

Largo

medio

(cm)

T1 Testigo ANA 0 BAP 0 9 1,11 a 2,33 a 1,07 ab

T2 ANA 0 BAP 2,5 13 1,00 a 2,69 a 0,62 ab

T3 ANA 0 BAP 5 6 1,00 a 2,33 a 1,20 b

T4 ANA 0,01 BAP 0 6 1,00 a 2,33 a 0,42 a

T5 ANA 0,01 BAP 2,5 12 1,00 a 2,42 a 0,50 a

T6 ANA 0,01 BAP 5 9 1,11a 2,44 a 0,42 a

Total 55 1,04 2,45 0,68

• Diferentes conclusiones

en la bibliografía

consultada.

• Fick (2007) semejantes

resultados.

• Schendelbeck (2007) y

Montavani (2001) mejores

resultados con hormonas.

Explantes con brotes.

Experimento 2:

Objetivo: Evaluar el efecto que causa el aumento

de la concentración de sacarosa combinado con

distintas frecuencias de subcultivos.

Tratamiento y diseño experimental:

• completamente aleatorizado al azar con 50

repeticiones por tratamiento,

• se evaluó dos dosis de sacarosa, combinados

con dos frecuencia de subcultivos

• testigo consistió en la utilización de 30 gr/l de

sacarosa y sin subcultivos.

Tratamientos y resultados

Trat. Sacarosa

gr/l

Repique

Días n

Explantes

Brotados %

T0 Testigo 30 no 28 53,5 a

T1 30 7 35 42,8 a

T2 30 14 27 40,7 a

T3 45 7 36 38,9 a

T4 45 14 24 12,5 b

Total 150 38,6

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

Tratamientos y resultados

Trat. Sacarosa

gr/l

Repique

Días n

Nº de

brotes

Nº de

hojas

Largo

Media

(cm)

T0 30 no 15 1,1 a 3,16 ab

0,44 a

T1 30 7 15 1 a 3,33 a

0,59 a

T2 30 14 11 1 a 3,27 a

0,48 a

T3 45 7 14 1 a 2,92 ab

0,52 a

T4 45 14 3 1 a 2 b 0,33 a

Total 58 1 3,11 0,50

Valores identificados con distinta letra en sentido vertical son estadísticamente

diferentes (Duncan, p<0.05)

• Mejor resultado testigo

• En Yerba mate brotación disminuye con el

aumento de las concentraciones de

sacarosa

• Estudios en papaya incremento en el

numero de brotes con el aumento de

sacarosa

Conclusiones: Fase de Establecimiento • Es posible la desinfección de segmentos

nodales de Peteribí provenientes de brotes de plantas madres de 4 años de edad, con el uso de brotes jóvenes recolectados apenas hayan alcanzado los 5 cm de longitud, más el empleo de un protocolo de desinfección que utiliza, etanol, tween 20, fungicidas, antibióticos, cloruro de mercurio y cloruro de calcio.

• El aislamiento con polietileno de los brotes de las plantas, no contribuye en forma significativa sobres los niveles de contaminación de los explantes.

Conclusiones:

Fase de Multiplicación

• El uso de hormonas BAP y ANA no promovió

una mayor brotación de los explantes, respecto

al tratamiento sin hormonas.

• El aumento de la frecuencia de subcultivos y

mayores concentraciones de sacarosa no

lograron incrementar la brotación en la fase de

multiplicación de peteribi.

Gracias por su

atención !