directrices para la calibrac de equipos enac

G-ENAC-04Rev. 2 Marzo 97

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GUIA PARA LA ACREDITACIN DELABORATORIOS QUE REALIZAN ANLISIS MICROBIOLGICOS

G-ENAC-04 Rev. 2 Marzo 97


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GUIA PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE REALIZAN ANALISISMICROBIOLGICOS

Indice--------------------------------------------------------------------------------------------------------------Apartado Pgina--------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Introduccin y contenido del documento . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32. Alcance de la acreditacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .43. Personal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44. Locales y condiciones ambientales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 55. Equipos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . 86. Medios de cultivo y reactivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127. Mtodos y procedimientos de ensayo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 148. Validacin de mtodos y verificacin de los resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .149. Aseguramiento de la calidad de los resultados/control de calidad . . . . . . . . . . . . . . 1510. Auditorias internas y revisin del sistema de calidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . 1711. Manipulacin e identificacin de muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1812. Eliminacin de residuos contaminados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1913. Incertidumbre de la medida. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 1914. Uso de ordenadores: Sistemas de Gestin Informtica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1915. Glosario de trminos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2016. Referencias bibliogrficas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

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Anexo A1 Utilizacin de cepas de referencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 23Anexo A2 Cepas de referencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 24Anexo B1 Directrices para la calibracin de equipos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26Anexo B2 Directrices para la puesta en servicio y verificacin de equipos . . . . . . . . . 27Anexo B3 Directrices para el mantenimiento de equipos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29--------------------------------------------------------------------------------------------------------------


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1- INTRODUCCIN Y CONTENIDO DEL DOCUMENTO

1.1 Los requisitos generales para la acreditacin de laboratorios aparecen definidos en eldocumento CGA-ENAC-LE, "Criterios generales de acreditacin, competencia tcnicade los laboratorios de ensayos", el cual incluye los requisitos establecidos en la normaUNE 66.501 "Criterios generales para el funcionamiento de los laboratorios deensayo", equivalente a la norma europea EN45001 y los incluidos en la Gua ISO/CEI25 "Requisitos generales para la competencia tcnica de los laboratorios de ensayo".

Estos requisitos deben ser cumplidos por los laboratorios que deseen ser acreditados.

1.2 Esta gua ha sido elaborada por la Comisin Sectorial Agroalimentaria de la EntidadNacional de Acreditacin (ENAC) y est basada en el documento EAL-G18"Acreditation for Microbiological Laboratories". Esta gua revisa y sustituye aldocumento Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan ensayosmicrobiolgicos G-CSMic-01 Rev. 1 Marzo 93. Esta gua complementa a losdocumentos citados en el punto anterior ofreciendo directrices especficas, tanto paraauditores como para laboratorios que llevan a cabo ensayos microbiolgicos.

Asimismo, contiene directrices detalladas para la interpretacin del documento CGA-ENAC-LE destinadas a aquellos laboratorios que realizan ensayos microbiolgicos. Lanorma UNE 66.501 sigue siendo el documento que prevalece y en caso de conflictoconstituir la base para su resolucin por parte de ENAC.

Esta gua es aplicable a laboratorios que realizan mediciones objetivas ya sean o norutinarias, o como parte de actividades de investigacin y desarrollo. Las directricescontenidas en este documento pueden tambin utilizarse para la inspeccin delaboratorios segn normas de calidad, tales como BPL, BPF, BPC y certificacin segnISO 9000.

1.3 Se considera que los ensayos microbiolgicos incluyen ensayos de esterilidad,deteccin, aislamiento, recuento e identificacin de microorganismos y sus metabolitosen diferentes materiales y productos o cualquier otro tipo de ensayo en el que utilicenmicroorganismos como parte de un sistema de deteccin, as como la utilizacin demicroorganismos para ensayos ecolgicos. De ello se deriva que algunas de lasdirectrices contenidas en el presente documento, por ejemplo, las referentes a labioseguridad del laboratorio, debern ser interpretadas en consecuencia.

Este documento puede tambin servir de gua para los laboratorios que utilizan tcnicasen reas relacionadas con la microbiologa, como bioqumica, biologa molecular ycultivos celulares. Sin embargo, los laboratorios con actividades no consideradas eneste documento pueden tener que cumplir tambin otros requisitos adicionales.


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1.4 En el presente documento, se hace referencia a la calidad de los resultados de losensayos y no se abordan especficamente los aspectos relacionados con la salud y laseguridad. Sin embargo, las prcticas de los laboratorios deben cumplir la legislacinvigente al respecto. Es importante recordar que, en algunos casos, los aspectosrelacionados con la salud y la seguridad pueden influir en la calidad y el laboratoriotiene que tener este hecho en cuenta.

1.5 Las definiciones de los trminos utilizados se facilitan en el glosario del apartado 15.

1.6 ENAC invita a todas aquellas personas que deseen emitir comentarios a estedocumento a que los remitan por escrito a:

ENAC C/ Serrano, 240, 7 28016-MADRID

Att.: Direccin Tcnica de Laboratorios

2- ALCANCE DE LA ACREDITACINEN 45002, puntos 4 y 12

El alcance de la Acreditacin de un laboratorio consiste en la definicin formal de lasactividades para las que el laboratorio ha sido acreditado; dicho alcance se establece en unanexo tcnico entregado junto con el certificado de acreditacin. El alcance debe ser definidocon la mayor precisin posible de manera que todas las partes implicadas conozcan conexactitud y sin ambigedad la serie de ensayos y/o anlisis cubiertos por la acreditacin dedicho laboratorio.

3- PERSONALEN 45001, punto 5.2Gua ISO 25, apartado 6

3.1 Cada laboratorio dispondr de una estructura organizativa y contar con personaladecuado a los diferentes campos analticos en que desarrolla su actividad. El personaldeber contar con conocimientos, experiencia y competencia adaptados a las tareas yresponsabilidades que tenga otorgadas.La direccin del laboratorio debe definir los niveles mnimos de titulacin, cualificaciny experiencia necesarios para las personas que ocupan puestos de trabajo clave en ellaboratorio.

El Director Tcnico ser un titulado experto en el rea de trabajo del laboratorio y su actividad.

Los responsables de las diferentes divisiones operativas y de Garanta de Calidaddebern tener titulacin y experiencia adecuada en el rea que dirigen.

Los analistas y personal sin titulacin acadmica especfica podrn realizar ensayos siempre que se demuestre documentalmente que han recibido la preparacin adecuada o trabajen bajo supervisin.


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La competencia del personal debe ser evaluada de forma continua, por ejemplo,mediante tcnicas de Control de Calidad.

3.2 El laboratorio deber asegurar la formacin permanente de su personal y mantendractualizado el curriculum vitae y, los registros de formacin que recibe cada uno de susmiembros.

La formacin deber encaminarse a garantizar la competencia en las tcnicas analticas y mtodos que sean responsabilidad de cada trabajador.

4- LOCALES Y CONDICIONES AMBIENTALESEN 45001, punto 5.3.2Gua ISO 25, apartado 7

4.1 Locales

4.1.1 La ubicacin, el diseo y la distribucin de las diferentes dependencias del laboratoriodebe ser tal que el peligro de contaminacin de las muestras, ya sea derivado de lascondiciones ambientales, contaminacin cruzada u otras causas, sea mnimo.

Una de las formas ms efectivas de reducir al mnimo el riesgo de contaminacincruzada es mediante la construccin del laboratorio segn un diseo "sin camino deregreso". Cuando esto no sea posible, deben tomarse medidas alternativas, como lassiguientes:

(i) realizar los procedimientos de manera secuencial, tomando las debidas precauciones para garantizar la integridad de los ensayos y de las muestras;(ii) separacin de actividades en el tiempo o en el espacio.

4.1.2 Es recomendable que los laboratorios dispongan de dos tipos de dependencias:

(i) reas auxiliares (oficinas de administracin, aseos, guardarropas, almacenes,archivos, etc.)(ii) reas de ensayo, donde se llevan a cabo las actividades especficas de un laboratoriode microbiologa.

En general, es conveniente que existan reas separadas o claramente designadas paralas siguientes actividades:

- recepcin y almacenamiento de muestras.- preparacin de muestras.- reas analticas diferenciadas de las reas de apoyo.- reas de apoyo (preparacin de medios de cultivo y reactivos, esterilizacin y

descontaminacin, almacenamiento, lavado de material, etc.).

El rea de lavado (despus de la descontaminacin) puede compartirse con otras partesdel laboratorio, siempre que se tomen las debidas precauciones para evitar la


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transferencia de trazas de substancias que podran afectar negativamente al crecimientomicrobiano. La conveniencia de la separacin fsica debe juzgarse considerando losparmetros especficos del laboratorio ( por ejemplo, nmero de ensayos realizados,tipo de ensayos, etc.).

4.1.3 Con el objetivo de reducir el riesgo de contaminacin y facilitar las labores de limpiezay desinfeccin, se recomiendan a continuacin y a ttulo de ejemplo, una serie demedidas. Estas no son exhaustivas y no todas ellas podrn aplicarse en todas lassituaciones.

(i) referentes al diseo:- las reas de trabajo deben ser suficientemente espaciosas como para poder

mantenerse limpias y ordenadas. El espacio requerido depender del volumen deanlisis realizados y de la organizacin interna del laboratorio;

- uniones cncavas entre suelo, paredes y techos;- iluminacin empotrada en los techos;

- las reas de trabajo deben estar debidamente ventiladas, lo que puede conseguirsemediante ventilacin natural o forzada, o mediante el uso de unidades de aireacondicionado, equipadas con filtros para el polvo en la entrada de aire;

- disponer de suficiente espacio para almacenamiento;- las tuberas que transportan lquidos no deben pasar por encima de las superficies de

trabajo, a no ser que estn provistas de un revestimiento hermticamente sellado;- no se recomienda el empleo de cortinas y /o persianas internas en las ventanas. Si

esto fuera inevitable, deben estar incluidas en el programa regular de limpieza dellaboratorio;

- utilizacin de pantallas solares exteriores.

(ii) referentes a materiales:- las paredes, techos, suelos y superficies de trabajo deben ser lisas, de material no

absorbente y fcil de limpiar y desinfectar;- las superficies de madera de instalaciones y accesorios deben estar debidamente

protegidas y selladas. Evitar las maderas rugosas y sin revestir;- no se recomiendan los azulejos como material de recubrimiento de las superficies de

trabajo.

(iii) otras:- minimizar la apertura de puertas y ventanas durante la realizacin de los ensayos;- los armarios, estanteras, equipos y material de laboratorio deben estar colocados de

forma que se evite la acumulacin de polvo y se facilite su limpieza. Se recomienda eluso de armarios hasta el techo;

- para facilitar las labores de limpieza, los telfonos y ordenadores que se encuentrendentro del rea de ensayo pueden estar provistos de un protector. El sistema deventilacin de los equipos informticos debe estar orientado de manera que se evitela contaminacin. Por ejemplo, el flujo de aire no debe dirigirse hacia las superficiesde trabajo;


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- utilizar lavamanos de accionamiento no manual;- ausencia de mobiliario, documentos y objetos que no sean los estrictamente

necesarios para la realizacin de los ensayos. No debe haber plantas y objetospersonales innecesarios en las reas de trabajo.

4.1.4 Cuando el trabajo en condiciones estriles sea limitado o tenga lugar sloocasionalmente, puede ser suficiente con utilizar una superficie de trabajo limpia,siempre que se apliquen tcnicas aspticas rigurosas.

4.1.5 Deber establecerse un programa documentado de limpieza y desinfeccin dellaboratorio que tenga en cuenta los resultados de la vigilancia de las condicionesambientales y la posibilidad de contaminacin cruzada.

4.1.6 Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el acceso al laboratorio demicrobiologa debe restringirse al personal autorizado. Cuando existan este tipo derestricciones, el personal deber conocer:

a) el uso restringido de una determinada rea;b) las restricciones impuestas al trabajo que puede realizarse en dichas reas;c) las razones para imponer esas restricciones.

4.1.7 En el laboratorio de microbiologa, debe utilizarse la indumentaria apropiada para eltipo de ensayos que se realicen. El personal debe despojarse de esta indumentaria antesde abandonar el rea.

4.2 Condiciones ambientales

4.2.1 Las condiciones ambientales bajo las cuales se realizan los ensayos microbiolgicos nodeben invalidar los resultados. Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, ellaboratorio debe disponer de un programa adecuado de vigilancia de las condicionesambientales, tanto del aire como de las superficies de trabajo, con la finalidad deconocer las tendencias en los niveles de biocontaminacin.

4.2.2 El laboratorio debe definir los recuentos mximos de microorganismos que considereaceptables y disponer de un procedimiento documentado en el que se describan lasmedidas a tomar para corregir las situaciones en que se sobrepasen estos lmites. Estasmedidas incluyen, por ejemplo:

- limpieza y desinfeccin a fondo del laboratorio (incluyendo superficies de trabajo yfiltros del aire acondicionado);

- incremento de la frecuencia de las operaciones de limpieza y desinfeccin;- modificaciones en los procedimientos de limpieza y desinfeccin;- la instalacin de unidades de aire acondicionado.


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5- EQUIPOSEN 45001, punto 5.3.3 Gua ISO 25, apartados 7 y 9

5.1 Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio debe documentar e implantar unprograma para la limpieza, mantenimiento, calibracin y/o verificacin y esterilizacinde los equipos, cuando sea necesario.

Los equipos habituales de un laboratorio microbiolgico pueden clasificarse comosigue:

- material de uso general: material de vidrio o plstico ( matraces, tubos de ensayo,placas de Petri), instrumentos de muestreo, asas de siembra, etc.

- baos termostticos, estufas, cabinas de seguridad biolgica, autoclaves,homogeneizadores, frigorficos, congeladores, equipos de filtracin, etc.

- equipos volumtricos, como pipetas, distribuidores automticos, sembradores enespiral, etc.

- instrumentos de medida, como termmetros, cronmetros, balanzas, pH-metros,contadores de colonias, etc.

5.2 Mantenimiento (Ver anexo B3)(En el documento ISO 7218, se facilitan directrices sobre el mantenimiento de losequipos).

5.2.1 El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a los intervalosespecificados dependiendo de factores tales como la frecuencia de uso, mantenindoseun registro detallado de todas las operaciones efectuadas.

5.2.2 Debe considerarse la posibilidad de contaminacin cruzada causada por los equipos.Por ejemplo:

- el material desechable debe estar limpio o estril, en funcin de su uso;- el material de vidrio reutilizable debe estar debidamente limpio o estril, en funcin

de su uso;- lo ideal es que los laboratorios dispongan de ms de un autoclave. Sin embargo,

siempre que se tomen las debidas precauciones para separar las cargas dedescontaminacin y esterilizacin, y siempre que exista un programa documentadode limpieza para controlar las condiciones ambientales tanto externas como internasdel autoclave, el laboratorio puede utilizar un nico autoclave.


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5.3 Calibracin y/o verificacin de los equipos

5.3.1 El laboratorio debe establecer un programa para la calibracin y/o verificacin de losequipos que tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos. Lafrecuencia de estas calibraciones y/o verificaciones se establecer en funcin de laexperiencia documentada y se basar en el uso, tipo y resultados previos de lascalibraciones de los equipos. Los intervalos entre sucesivas calibraciones y/overificaciones deben ser ms cortos que el perodo de tiempo durante el cual seobservan desviaciones del equipo fuera de los lmites aceptables. En el Anexo B, seofrecen ejemplos de los intervalos de calibracin y las verificaciones tpicas de lascaractersticas tcnicas para diferentes instrumentos de laboratorio.

5.3.2 Equipos para medir la temperatura

- Cuando la precisin de la medida de la temperatura tenga un efecto directo en elresultado del anlisis, los equipos como termmetros de columna lquida, termopareso termmetros de resistencia de platino (TRP) utilizados por ejemplo, en estufas yautoclaves, debern tener una calidad adecuada para cumplir las especificaciones delmtodo de ensayo. La calibracin de los equipos de medida de la temperatura debeser apropiada para la precisin que se requiere.

- La trazabilidad de la medida de la temperatura puede garantizarse mediante lacalibracin del equipo de medida frente a un patrn de referencia adecuado, ya seaun termmetro, termopar o termmetro de resistencia de platino, de acuerdo con unprocedimiento documentado, siempre que la incertidumbre global del patrn dereferencia sea apropiada para la calibracin.

- Cuando la precisin de la medida de la temperatura no tenga un efecto directo en elresultado del ensayo, por ejemplo, en el caso de frigorficos y congeladores, loslaboratorios pueden cumplir tambin los requisitos de acreditacin utilizandotermmetros de trabajo debidamente verificados por el laboratorio.

- El laboratorio debe realizar una verificacin independiente de los indicadores ytermmetros integrados en preparadores de medios y autoclaves para demostrar suprecisin. Cuando no sea posible utilizar dispositivos como termopares, se puedeninstalar en el autoclave termmetros de temperatura mxima que hayan sidocalibrados dentro del rango necesario de temperaturas, para vigilar las temperaturasalcanzadas en el interior del autoclave. De esta forma se pueden comparar latemperatura indicada en el autoclave con la temperatura mxima alcanzada en elinterior del mismo. Debe mantenerse un registro de todos los controles realizados ydetalles sobre cualquier accin correctora adoptada.


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5.3.3 Estufas y baos termostticos

La estabilidad y la uniformidad de la temperatura, as como el tiempo necesario paraalcanzar condiciones de equilibrio en baos termostticos, estufas y salas contemperatura controlada deben establecerse inicialmente y documentarse. La constanciade las caractersticas registradas durante la verificacin inicial del equipo debecomprobarse y registrarse despus de cada reparacin o modificacin. El laboratoriodebe mantener un registro adecuado de las medidas de temperatura de los equiposutilizados en los ensayos.

5.3.4 Autoclaves

- Los autoclaves deben cumplir las tolerancias de temperatura especificadas. No serecomienda la utilizacin de autoclaves provistos slo de un manmetro paraesterilizar medios o descontaminar residuos.

- La estabilidad y la uniformidad de la temperatura, as como el tiempo necesario paraalcanzar condiciones de equilibrio en los autoclaves debe verificarse inicialmente ydocumentarse. La constancia de las caractersticas registradas durante la verificacininicial del equipo debe comprobarse y registrarse despus de efectuar unamodificacin o reparacin, por ejemplo al sustituir el termostato o el programador.

- Cuando sea necesario, el ciclo de esterilizacin/descontaminacin debe tener encuenta el perfil de calentamiento de la carga. Deben darse instrucciones claras defuncionamiento basadas en los perfiles de calentamiento determinados para los usosque lo requieran.

- Debe mantenerse un registro de las operaciones realizadas en el autoclave,incluyendo la temperatura y el tiempo. Esto debe realizarse para cada ciclo,indicando su aceptacin o rechazo.

El control de la temperatura puede realizarse mediante una de las siguientes formas:(i) utilizando un termopar y un aparato registrador para obtener un grfico impreso;(ii) utilizando un termmetro de temperatura mxima;(iii) por observacin directa y registro de la temperatura mxima alcanzada.

Adems de controlar directamente la temperatura del autoclave, puede comprobarsela eficacia de su funcionamiento durante cada ciclo, mediante la utilizacin deindicadores qumicos o biolgicos para fines de esterilizacin y descontaminacin.

Debe utilizarse un sistema para distinguir que una carga ha sido procesada, pero nocomo un indicador para demostrar que ha finalizado un ciclo de esterilizacinaceptable.


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5.3.5 Pesas y balanzas

Las pesas y balanzas deben calibrarse a intervalos regulares y demostrar su trazabilidad a patrones nacionales o internacionales.

Adems de la calibracin completa, las balanzas se deben verificar rutinariamente (adiario o antes de usar) para asegurarse que estn en condiciones adecuadas de uso;estas verificaciones deben quedar registradas. En el caso de balanzas de precisin debentenerse en cuenta las condiciones ambientales y/o de ubicacin.

5.3.6 Material volumtrico

El laboratorio debe realizar una verificacin inicial de los equipos volumtricos talescomo dispensadores y pipetas automticas, y realizar controles peridicos paragarantizar que los equipos cumplen en todo momento las especificaciones requeridas.Debe mantenerse un registro actualizado de estas operaciones.

La verificacin no ser necesaria para el material de vidrio que haya sido certificadopara una tolerancia especifica.

El material volumtrico de vidrio y el desechable "de un solo uso", se recomienda que provenga de empresas certificadas segn 1SO 9000. Es conveniente realizar controles aleatorios de su precisin.

Si las empresas proveedoras no estn certificadas segn ISO 9000, el laboratoriodebera verificar cada lote de equipos.

5.3.7 pH-metros, conductivmetros, medidores de oxgeno y equipos similares

Los pH-metros, conductivmetros, medidores de oxgeno y otros equipos similaresdeben verificarse peridicamente o antes de ser utilizados.En el caso de los pH-metros la verificacin se har diariamente o cada vez que vayan autilizarse si su uso no es diario. Peridicamente se verificar el funcionamiento correctode los electrodos.Estas verificaciones debern quedar registradas.

5.3.8 Cabinas de flujo laminar y de seguridad biolgica

En las cabinas de flujo laminar debe verificarse peridicamente la velocidad del aire, estado de los filtros y control microbiolgico de esterilidad del aire. En las cabinas de seguridad biolgica debe comprobarse adems su estanqueidad.

Estas verificaciones deben quedar registradas.


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5.3.9 Otros equipos

Cuando la humedad influya en el resultado del ensayo, debern calibrarse loshigrmetros para garantizar la trazabilidad a patrones nacionales o internacionales.

Los cronmetros, incluidos los de los autoclaves, deben verificarse utilizando uncronmetro calibrado o seal horaria nacional.

6- MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOSGua ISO 25, apartado 8.1

6.1 Los medios de cultivo pueden prepararse en el laboratorio a partir de diferentesingredientes qumicos o a partir de productos en polvo deshidratados comerciales, perotambin pueden adquirirse medios listos para su uso.

6.2 El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los medios de cultivo y reactivos esapropiada para los ensayos realizados. Se recomienda que provengan de empresas certificadas segn ISO 9000. El laboratorio debe asegurarse de que la certificacincubre todas las operaciones relevantes, entre ellas las de suministro y entrega, cuandoestas influyan en la calidad de los productos, deber solicitar tambin, una copia delcertificado de registro ISO 9000 a los proveedores de los productos.

6.3 Se recomienda realizar controles adicionales con carcter aleatorio, para asegurarse deque los productos siguen cumpliendo las especificaciones requeridas. Estos controlespueden incluirse en el programa interno de control de calidad.

Si las empresas proveedoras no disponen de certificacin segn ISO 9000, ellaboratorio debera verificar cada uno de los lotes suministrados.

6.4 Los medios de cultivo, productos en polvo deshidratados y reactivos comerciales debenconsumirse antes de la fecha de caducidad. El laboratorio debe registrar la fecha derecepcin, la fecha de caducidad y la fecha de apertura del envase.

El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas. Todos los envases,especialmente los que contengan medios deshidratados, deben estar hermticamentecerrados. No deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento o uncambio de color.


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6.5 El fabricante debera aportar, inicialmente, una "especificacin de calidad" que incluya el mayor nmero posible de los puntos siguientes:a) caducidad del productob) condiciones de almacenamientoc) plan y frecuencia de muestreod) control de esterilidad, incluyendo criterios de aceptabilidade) controles de la eficacia, incluyendo el microorganismo usado, referencia de la coleccin de cultivos y criterios de aceptabilidadf) fecha de emisin de la especificacinCuando esta informacin sufra modificaciones, el fabricante deber entregar una nueva especificacin.Cada lote de productos suministrado debe incluir una garanta de que cumple laespecificacin.

6.6 Para la preparacin de medios, soluciones y tampones, debe utilizarse agua destilada,desionizada o de smosis inversa, y que haya sido sometida a controles peridicos queaseguren su calidad (conductividad, pH y contaminacin microbiana) y llevar unregistro actualizado de los mismos.

6.7 Los medios de cultivo, soluciones y reactivos deben prepararse, almacenarse yutilizarse de acuerdo con un procedimiento documentado. En el documento ISO 7218,se incluyen una serie de directrices para la preparacin y esterilizacin de medios, ascomo los tiempos de almacenamiento recomendados.

6.8 Los lotes de medios preparados segn formula en el laboratorio deben verificarse paracomprobar que facilitan el crecimiento de determinados cultivos microbianosprocedentes de una coleccin reconocida y debe verificarse que los medios selectivosinhiben el crecimiento de microorganismos no deseados. En lugar de utilizar el mtodofrecuente de cultivo en lnea, se recomienda utilizar un procedimiento cuantitativo queconsiste en inocular en el medio un nmero conocido, normalmente pequeo, demicroorganismos y evaluar el nmero de microorganismos recuperados. Este mtodopuede utilizarse para establecer el nivel de recuperacin por debajo del cual se rechazaun lote.

6.9 Debe verificarse la esterilidad de los medios y diluyentes preparados en el laboratorio.

6.10 El laboratorio debe asegurarse de que los medios y reactivos ( incluidas las solucionesmadre) estn debidamente etiquetados para garantizar su identificacin, concentracin,condiciones de almacenamiento, caducidad y/o perodos recomendados dealmacenamiento. Asimismo, debe poder identificarse a la persona que ha preparado elmedio o reactivo, la fecha de preparacin y la fecha de caducidad, ya sea por medio deuna etiqueta o de un registro apropiado.


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7- MTODOS Y PROCEDIMIENTOS DE ENSAYOEN 45001, punto 5.4Gua ISO 25, apartado 10

7.1 El laboratorio puede utilizar mtodos oficiales, mtodos normalizados nacionales einternacionales o mtodos internos desarrollados por l mismo. El laboratorio no debesentirse obligado a utilizar un mtodo normalizado si dispone de un mtodo interno queobtenga resultados equivalentes o superiores, utilice tecnologa ms moderna ypresente un grado de validacin adecuado. El laboratorio debe demostrar que unmtodo es adecuado para la finalidad pretendida.

7.2 La precisin, repetibilidad/reproducibilidad, especificidad, sensibilidad, lmite decuantificacin,efectos matriciales y facilidad de uso son caractersticas que debentenerse en cuenta antes de seleccionar un determinado mtodo de ensayo. Ellaboratorio debe elegir unos mtodos que sean adecuados para sus objetivos (verseccin 8 -Validacin de mtodos y verificacin de los resultados).

7.3 Los mtodos utilizados por el laboratorio deben ser debidamente documentados. Eldocumento ISO 78/2 -Layouts for Standards. Parte 2 contiene recomendaciones enrelacin con estos procedimientos.

8- VALIDACIN DE MTODOS Y VERIFICACIN DE LOS RESULTADOS

8.1 En el caso de que se utilicen mtodos oficiales, mtodos normalizados o mtodos deorganismos nacionales o internacionales reconocidos, o basados en ellos, es posible queno se requiera validacin. Cuando se utilicen estos mtodos los laboratorios debernantes de analizar ninguna muestra verificar su capacidad para cumplir de formasatisfactoria todos los requisitos establecidos en dichos mtodos.

8.2 Los sistemas de ensayo que se venden en el mercado (kits) pueden no requerir unanueva validacin si se dispone de datos sobre validacin procedentes de fuentesalternativas. El laboratorio debe solicitar a los fabricantes datos sobre validacin yevidencias de que cumplen un sistema reconocido de aseguramiento de la calidad.Cuando no se disponga de datos completos sobre la validacin, el laboratorio deberacompletar la validacin del mtodo antes de utilizarlo con carcter rutinario.

8.3 Los mtodos internos desarrollados por el propio laboratorio deben validarse paragarantizar la fiabilidad de los resultados obtenidos y, en caso posible, conocer ladispersin de los mismos. Cada laboratorio establecer los requisitos que deben cumplirestos mtodos, con objeto de demostrar que son adecuados para la finalidadpretendida.

8.3.1 Los mtodos de ensayos microbiolgicos cualitativos (en los que la respuesta seexpresa en trminos de presencia/ausencia), deben validarse estimando, cuando seaapropiado, la especificidad, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite dedeteccin y efecto matricial (ver definiciones en el glosario).


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8.3.2 En el caso de ensayos microbiolgicos cuantitativos, debe considerarse laespecificidad, sensibilidad, precisin relativa, desviacin positiva, desviacin negativa,repetibilidad, reproducibilidad y lmite de cuantificacin dentro de una variabilidadestablecida y, en caso necesario, determinar cuantitativamente estos parmetros. Lasdiferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos demuestras. Los resultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos apropiados.

8.4 Para demostrar que una versin modificada de un mtodo cumple las mismasespecificaciones que el mtodo original, deben realizarse comparaciones utilizandoreplicados.

8.5 Todos los datos sobre validacin de los mtodos deben registrarse y almacenarse,como mnimo mientras estos sean vigentes y siempre que sea necesario para asegurar laadecuada trazabilidad de los datos primarios y resultados.

8.6 La participacin en, o la organizacin de, ensayos intercolaborativos, ensayos deaptitud o ensayos de intercomparacin, ya sean formales o informales, es tambin unaforma de comprobar la validez de los mtodos, aunque se reconoce que no siempre esposible. El anlisis de muestras utilizando el nuevo mtodo propuesto y los mtodos yaexistentes para realizar la misma determinacin puede ayudar a establecer la validez delprimero.

8.7 Incluso cuando se haya realizado una validacin, el laboratorio tendr que verificarperidicamente que se cumplen los parmetros documentados, por ejemplo, utilizandomuestras inoculadas, etc.

9- ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS/CONTROL DE CALIDADEN 45001, Punto 5.4.2 e y fGua ISO 25, apartado 5.6

En el glosario, se incluye la definicin de aseguramiento de la calidad segn ISO.

9.1 El aseguramiento de la calidad es un programa de actividades llevadas a cabo por unlaboratorio con la finalidad de mejorar en conjunto su funcionamiento. Estasactividades incluyen promocin del uso rutinario del control de calidad interno, apoyo aprogramas de ensayos de aptitud y todas las medidas adoptadas para mejorar lareproducibilidad, tanto dentro del laboratorio como entre diferentes laboratorios, ya seapor medio de cursos de formacin, conferencias o estudios intercolaborativos demtodos de laboratorio.

9.2 Control de calidad interno

9.2.1 El laboratorio debe disponer de un programa de control de calidad interno para evaluarcon carcter continuo sus actividades. Dicho programa puede incluir: recuentoscruzados entre analistas, anlisis duplicados de una misma muestra por distintosanalistas, uso de materiales de referencia, tcnicas estadsticas, etc.


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9.3 Cepas de referencia

Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio debe utilizar cepas de referencia demicroorganismos suministrados por una coleccin nacional o internacional reconocida.(Ver anexo A2, cepas de referencia).

Las cepas de referencia se reconstituirn y sometern a los controles de pureza yensayos bioqumicos que sean necesarios. Sern subcultivadas una sola vez paraobtener las cepas de reserva, de las que se obtendrn las cepas de trabajo. Las cepas dereserva deben conservarse utilizando, una tcnica que mantenga las caractersticasdeseadas de las cepas de referencia, como por ejemplo, liofilizacin, ultracongelacin (-70C), conservacin en nitrgeno lquido, etc.

Las cepas de trabajo, se conservarn en refrigeracin durante un perodo de tiempo queasegure la viabilidad del microorganismo (ver anexo A1 sobre utilizacin de cepas dereferencia). Cuando se descongelan las cepas de reserva no deben volverse a congelar yreutilizar.

En general, las cepas bacterianas de trabajo no deben ser subcultivadas, sin embargo, pueden ser subcultivadas hasta un nmero determinado de veces cuando:

a) as lo requieran los mtodos normalizados

b) el laboratorio pueda aportar evidencias documentadas que demuestren que no se haproducido prdida de viabilidad (cuando sea importante), cambios en la actividadbioqumica y/o cambios en la morfologa.

Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas para sustituir a las cepas de reserva.

9.4 Materiales de referencia y materiales de referencia certificados.

Los materiales de referencia y los materiales de referencia certificados (ver definicinen el glosario) proporcionan la trazabilidad esencial en las mediciones y son utilizados,por ejemplo, para demostrar la precisin de los resultados, calibrar equipos y mtodos,validar mtodos y permitir la comparacin de mtodos al ser utilizados como patronesde referencia. Se recomienda su utilizacin siempre que sea posible.

Los materiales y substancias de referencia, as como los materiales de referenciacertificados, deben almacenarse y manipularse en unas condiciones que no alteren suintegridad, de acuerdo con un procedimiento documentado y el mtodo de ensayocorrespondiente.


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9.5 Control de calidad externo (ensayo de aptitud)

9.5.1 Los programas de ensayos de aptitud organizados externamente constituyen un medioindependiente por el cual un laboratorio puede evaluar objetivamente y demostrar lafiabilidad y precisin de los resultados obtenidos con sus mtodos analticos. Laparticipacin en estos ensayos permite al laboratorio comparar sus resultados frente alos de otros laboratorios. Es importante evaluar los resultados obtenidos en los ensayosde aptitud como una manera de comprobar la calidad de los ensayos, adoptando lasmedidas oportunas, si son necesarias.

9.5.2 ENAC reconoce los beneficios de estos programas y recomienda enrgicamente a loslaboratorios que participen en ensayos de aptitud como una parte importante de susprocedimientos de aseguramiento de la calidad. Se recomienda que los laboratoriosparticipen regularmente en programas relacionados con el alcance de su acreditacin;en algunos casos concretos, esta participacin puede ser un requisito.

10- AUDITORAS INTERNAS Y REVISIN DEL SISTEMA DE CALIDADEN 45001, PUNTO 5.4.2Gua ISO 25, apartados 5.3-5.5Documento G-ENAC-01

10.1 La auditora y la revisin son dos aspectos importantes en el funcionamiento de unsistema de calidad. La auditora de calidad es el control peridico que hace ellaboratorio de su sistema de calidad para asegurar su implantacin, eficacia ycumplimiento por todos los miembros del personal del laboratorio. La revisin delsistema de calidad consiste en la verificacin peridica del mismo para asegurarse quecumple las necesidades del laboratorio y los requisitos de las normas de calidad.

10.2 El laboratorio deber establecer un programa de auditoras internas adaptado a lasdiferentes reas de trabajo, (como documento de consulta puede utilizarse la "Guapara la realizacin de auditoras internas y revisiones del sistema de calidad enlaboratorios" G-ENAC-01).

Esta actividad ser realizada por personal cualificado de una forma peridica ydebidamente documentada.

Regularmente y al menos una vez al ao se realizar una revisin del sistema de calidadcomprobando su cumplimiento e implantacin aplicando las acciones correctorasoportunas cuando procedan.

Se mantendr actualizado el Manual de Calidad introduciendo los procedimientosnormalizados nuevos y las modificaciones.


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11- MANIPULACIN E IDENTIFICACIN DE MUESTRASEN 45001, punto 5.4.5Gua ISO 25, apartados 10 y 11

11.1 Hay que tener en cuenta que la flora microbiana puede ser sensible a factores talescomo temperatura o duracin del almacenamiento y transporte, por lo que esimportante verificar y registrar el estado de la muestra cuando se recibe en ellaboratorio.

11.2 El laboratorio debe disponer de un procedimiento que incluya la entrega de muestras.Si la muestra es insuficiente o si se encuentra en mal estado debido a deterioro fsico,temperatura incorrecta, envase roto o etiquetado defectuoso, el laboratorio deberechazarla o (si es posible realizar el trabajo) describir su estado en el informe delensayo.

11.3 El laboratorio debe registrar la siguiente informacin:

a) una identificacin nica y sin ambigedades que pueda utilizarse para el seguimiento de la muestra desde su llegada al laboratorio hasta el final del proceso analtico;

b) fecha y, cuando sea oportuno, hora de la llegada de la muestra;

c) nombre del solicitante;

d) nmero de identificacin de la muestra asignado por la persona que realiza la tomade muestras (si es que existe alguno);

e) Descripcin del producto;

f) lista de ensayos requeridos;

y, siempre que sea necesario,

g) temperatura y estado de la muestra a su llegada;

h) caractersticas de la operacin de muestreo (fecha de muestreo, condiciones del muestreo, etc.)

11.4 Las muestras que se encuentran a la espera de ser analizadas deben almacenarse encondiciones adecuadas para reducir al mnimo cualquier modificacin en la poblacinmicrobiana presente.

11.5 El envase y etiquetado de las muestras puede estar, en potencia, altamente contaminadoy las muestras deben manipularse y almacenarse con precaucin para evitar que sepropague la contaminacin.


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11.6 La preparacin de las muestras y porciones de ensayo deben realizarse segnprocedimientos documentados basados en normas nacionales o internacionalesaplicables a los productos que son objeto del ensayo, si es que existen, y segn lasdirectrices generales contenidas en los documentos ISO 6887 e ISO 7218.

11.7 Debe existir un procedimiento documentado para la conservacin y eliminacin demuestras. Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayo estn altamentecontaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminacin. Si es necesario, lasmuestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del ensayo, oms tiempo.

12- ELIMINACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS

12.1 La correcta eliminacin de los materiales contaminados puede no afectar directamentea la calidad del anlisis de la muestra. Sin embargo, es un aspecto de la correcta gestinde un laboratorio, debindose respetar las normas nacionales e internacionales sobremedio ambiente, salud y seguridad (ver tambin ISO 7218).

13- INCERTIDUMBRE DE LA MEDIDA

13.1 La definicin internacional de la incertidumbre de la medida puede encontrarse en la referencia bibliogrfica nmero 11.

13.2 Se reconoce que los actuales conocimientos sobre la incertidumbre de la medida varasegn las disciplinas microbiolgicas. Por esta razn, es posible que los laboratorios notengan actualmente acceso a unas directrices apropiadas para estimar la incertidumbrede la medida en su disciplina particular. Esta situacin est siendo abordada en laactualidad por la comunidad de laboratorios y se espera que en un futuro se dispongade unas directrices ms claras en el campo de la microbiologa.

14- USO DE ORDENADORES: SISTEMAS DE GESTIN INFORMTICAEN 45001, puntos 5.3.3 y 5.4Gua ISO 25, apartado 10.7

14.1 Los sistemas de gestin informtica debern incluir los procedimientos deautorizacin, y validacin de las partes de que consta. Asimismo tendrn capacidadpara comprobar el seguimiento de la muestra.

Toda aplicacin informtica deber ser convenientemente documentada medianteinformacin detallada que permita demostrar que no se produce prdida, manipulacino corrupcin de los datos. Ser capaz de mantener la inviolabilidad del sistemamediante control de acceso.

Se obtendrn copias peridicas de seguridad con el objeto de asegurar su registro yarchivo durante el tiempo reglamentado.

(Los ordenadores adaptados al control de equipos no estn incluidos en este apartado).


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15- GLOSARIO DE TRMINOS

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD (QA): Conjunto de acciones planificadas ysistemticas que son necesarias para proporcionar la adecuada confianza de que un producto oservicio satisfar los requisitos dados sobre la calidad. [ISO 8402:1986 Vocabulariorelacionado con la calidad]

CALIBRACIN: Conjunto de operaciones que permiten establecer, en condicionesespecficas, la relacin existente entre los valores indicados por un instrumento de medida o unsistema de medida, o los valores representados por una medida material o un material dereferencia, y los valores correspondientes a una magnitud obtenidos mediante un patrn dereferencia. [ UNE-EN 30012-1, 3.23: 94] [ISO/IEC GUIDE 25, 3.4:90]

NOTA1: El resultado de una calibracin permite la estimacin de los errores de indicacin delinstrumento de medida, sistema de medida o medida material, o la asignacin de valores a lasmarcas de escalas arbitrarias.

CEPAS DE REFERENCIA: Microorganismos obtenidos de una coleccin nacional ointernacional reconocida.

CEPAS DE RESERVA: Cepas obtenidas a partir del cultivo de una cepa de referenciapreparada y conservada por un laboratorio.

CEPAS DE TRABAJO: Subcultivos de microorganismos obtenidos a partir de las cepas dereserva para ser utilizados en los ensayos que lo precisen.

CONTROL DE CALIDAD (QC): Tcnicas y actividades operacionales que se usan paracumplir los requisitos de calidad. [ISO 8402:1986 Vocabulario relacionado con la calidad]

DESVIACIN NEGATIVA: Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado negativosin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado positivo. Esta desviacin seconvierte en un resultado negativo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdaderoes positivo.

DESVIACIN POSITIVA: Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado positivo sinconfirmacin y el mtodo de referencia da un resultado negativo. Esta desviacin se convierteen un resultado positivo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero esnegativo.

ESPECIFICIDAD: Grado en que un mtodo se ve afectado por los otros componentes enuna muestra con mltiples componentes. Un mtodo especfico es el que no se ve afectado porninguno de los otros componentes.

LIMITE DE CUANTIFICACIN: Nmero mnimo de organismos dentro de unavariabilidad definida que pueden determinarse bajo las condiciones experimentales del mtodoevaluado.


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LIMITE DE DETECCIN: Nmero mnimo de organismos que pueden ser detectados, peroen cantidades que no pueden ser estimadas con precisin.

LINEALIDAD: Capacidad del mtodo cuando se utiliza con una determinada matriz para darresultados proporcionales al nmero de microorganismos presentes en la muestra.

MATERIAL DE REFERENCIA: Material o substancia, en la cual uno o ms valores de suspropiedades son suficientemente homogneos y estn claramente establecidos como para poderser utilizados en la calibracin de un aparato, la evaluacin de un mtodo de medida o laasignacin de valores a materiales. [Gua ISO 30:1992 Trminos y definiciones utilizados enrelacin con los materiales de referencia].

MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO: Material de referencia acompaado deun certificado, en el cual uno o ms valores de sus propiedades han sido certificados medianteun procedimiento que establece su trazabilidad con una realizacin exacta de la unidad en laque se expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado se acompaa de unaincertidumbre con las indicaciones de un nivel de confianza. [Gua ISO 30:1992 Trminos ydefiniciones utilizados en relacin con los materiales de referencia]

PRECISIN RELATIVA: Grado de concordancia entre los resultados del mtodo evaluadoy los obtenidos utilizando un mtodo de referencia, como los proporcionados por losOrganismos Nacionales de Normalizacin o el Organismo Internacional de Normalizacin(ISO) .

REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones delmismo mesurando realizadas en las mismas condiciones de medicin. [ISO Vocabulariointernacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993]

REPRODUCIBILIDAD: Grado de concordancia entre los resultados de mediciones delmismo mesurando realizadas en diferentes condiciones de medicin. [ISO Vocabulariointernacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993]

SENSIBILIDAD: Capacidad del mtodo para detectar ligeras variaciones en el nmero demicroorganismos dentro de una determinada matriz.

VERIFICACIN: Confirmacin mediante examen y aportacin de pruebas de que se hancumplido unos determinados requisitos. [Gua ISO/IEC 25: 1990 Requisitos generales para lacompetencia de laboratorios de calibracin y ensayo, 3 edicin]


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16- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. CGA-ENAC-LE. Criterios generales de acreditacin. Competencia tcnica de los laboratorios de ensayo.

2. UNE 66.501:1991. Criterios generales para el funcionamiento de los laboratorios de ensayo.

3. EN 45001: 1989. Criterios generales para el funcionamiento de laboratorios de ensayo.

4. Gua ISO/IEC 25: Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo y calibracin. Tercera edicin: 1990.

5. EAL G-18. Acreditation for microbiological laboratories.

6. ISO 9000-1: 1994. Normas de gestin de calidad y aseguramiento de la calidad. Parte 1- Gua para la seleccin y uso.

7. Borrador ISO/DIS 7218. Microbiologa - Directrices generales para anlisismicrobiolgicos. [Revisin de la primera edicin ISO 7218: 1985].

8. ISO 78/2: 1982. Layouts for standards.

9. ENAC G-RELE-01 rev.0. Mayo 1993. Gua para la realizacin de auditorias internas y revisiones del sistema de calidad en laboratorios de ensayo y calibracin.

10. ISO 6887: 1983. Preparacin de diluciones.

11. Gua ISO 30: 1992. Trminos y definiciones utilizadas en relacin con los materiales dereferencia.

12. NIS 31 Edicin 2, Mayo 1992. NAMAS Executive.

13. ISO 8492: 1986. Vocabulario sobre la calidad.

14. ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993.

15. Organizacin Mundial de la Salud (1980). Laboratory Biosafety Manual. Ginebra:OMS.

16. ISO 3534-1:1993. "Estadsticas - Vocabulario y smbolos.Parte 1: Probabilidad y trminos estadsticos generales".

17. Manual of Methods for General Bacteriology. Philipp Gerhard y cols. American Society for Microbiology, Washington 1981.


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ANEXO A1

UTILIZACIN DE CEPAS DE REFERENCIA

CEPA DE REFERENCIA?

RECONSTITUCIN?

Cultivada una sola vez?

( * )?

OBTENCIN DE LAS CEPAS DE RESERVA?

CONSERVACIN POR DISTINTOS MTODOS(liofilizacin, nitrgeno lquido, ultracongelacin rpida, etc.)

(especificar tiempo y condiciones de almacenamiento)?

( * )?

DESCONGELACIN/RECONSTITUCIN?

( * )?

CEPAS DE TRABAJO(Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento).

?UTILIZACIN EN EL CONTROL DE CALIDAD Y EN ENSAYOS QUE LO PRECISEN

( * ) Deben realizarse los controles de pureza y los ensayos bioqumicos que sean necesarios.

Todas las fases del proceso han de estar documentadas y se debe mantener un registrodetallado de todas las operaciones realizadas.


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ANEXO A2

CEPAS DE REFERENCIA.

Las cepas de referencia pueden obtenerse de:

1. Coleccin espaola de cultivos tipos (CECT)Laboratorio de microbiologa de la facultad de Biologa de la Universidad de Valencia.Avda. de la Moreras, s/nBurgasot (Valencia)

2. National Collection of Type Cultures (NCTC) ( Coleccin Nacional de cultivos tipo), Central Public Health Laboratory, 61 Colindale Avenue, London NW9 5HT. Tel. 081-299-4400(Bacterias, bacterifagos, micoplasmas, plsmidos)

3. National Collection of Pathogenic Fungi (NCPF) ( Coleccin Nacional de Hongos Patgenos), PHLS Mycological 91 Reference Laboratory, Avenue, London NW95HT Tel: 081-200-4400 (Hongos patgenos)

4. CAB International Mycological Institute (CMICC); Ferry Lane, Kew, Surrey TW93AF. Tel: 081-940-4086(Hongos aislados, distintos a patgenos humanos y animales y, levaduras)

5. National Collection of Yeast Cultures (NCYC) (Coleccin Nacional de Cultivos de Levaduras), Food Research Institute, Colney Lane, Norwich, Norfolk NR4 7 UA. Tel Norwich (01603) 255000, fax: (01603) 507723.(Levaduras distintas a las patgenas conocidas)

6. National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd. (NCIMB) (Colecciones Nacionales de Bacterias Industriales y Marinas). 23 St. Machar Drive, Aberdeen AB2 1RY. Tel. Aberdeen (0224) 273332, Fax: 0224 487658 UNIABN G: Telecom Gold/Dialcoms 75: DB10271(Bacterias no patgenas, actinomicetos y plsmidos)

7. National Collection of Food Bacteria (NCFB) (Coleccin Nacional de Bacteriasalimentarias), AFRC Institute of Food Research, Reading Laboratory, Berks. 23 St.Machar Drive, Aberdeen AB24 3 RY, Gran Bretaa. . Tel: (0734) 883103(Bacterias)


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8. Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP). (Coleccin de cultivos de algas y protozoos). Dunstaffnage Marine Laboratory, PO Box, 3 OBAN, Argyll PA34 4AD, Scotland. Tel: 0631 62244(Hongos Marinos)

9. Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP). (Coleccin de Cultivos de algas y protozoos). Institute of Freshwater Ecology. The Windermere Laboratory, Far Sawrey Ambleside, Cumbria LA22 OLP. Tel: 09662 2468/9(Hongos)

10. European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC). (Coleccin Europea deCultivos de clulas animales). PHLS. Centre for Applied Microbiology and Research,Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG. Tel: 0980 61391(Clulas animales)

11. European Collection of Plant Pathogenic Bacteria (NCPPB). (Coleccin Nacional de Bacterias patgenas de plantas). Central Science Laboratory, Hatching Green, Harpenden, Hertfordshire AL5 2BD. Tel: 0582715241.(Patgenos)

12. National Collection of Wood Rotting Fungil (NCWRF). ( Coleccin Nacional deHongos que carcomen la madera). Bio-deterioration Section, Timbeer Division,Building Research Establishment, Garston, Watford, Hertfordshire WD2 7JR. Tel:0923 894040(Hongos)

13. Central Bureau Voor Shimmelcultures (CBS). (Oficina Central de Cultivos de Mohos), PO Box 273, Oosterstraat 1, NL-3740 AG Baarn, Netherlands. Tel: 31-2154-81211(Hongos, actinomicetos)

14. American Type Culture Collection (ATCC). (Coleccin Americana de cultivos tipo) 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852, USA

15. Microbial Strain Data Network. An international network of Microbial and cell lineinformation resources. (Red de datos de cepas microbiolgicas. Una red internacionalde bancos de microbios y lineas celulares). Institute of Biotechnology, CambridgeUniversity, 307, Huntingdon Road, Cambridge CB3 OJX Tel: 0223 276622. BarbaraKirsop.

16. CNCM. Collection Nationale de Cultures de MicroorganismesINSTITUR PASTEUR25 Rue du Docteur Roux75724 PARIS CEDEX 15


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ANEXO B1

DIRECTRICES PARA LA CALIBRACIN DE EQUIPOS.

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipoy resultados previos de las calibraciones del equipo.

Tipo de aparato Requisitos Frecuencia sugerida

Termmetro de referencia

Termopar de referencia

Recalibrado plenamentetrazable.Punto nico (p.ej., punto decongelacin)

Cada 5 aos

Anualmente

Termmetros de trabajo

Termopares de trabajo

Frente a termmetro dereferencia en punto decongelacin y/o rangos detemperatura de trabajo

Anualmente

Balanzas Calibracinplenamente trazable

Anualmente

Pesas de calibracin Calibracin plenamentetrazable

Bianualmente/anualmentedependiendo de la clase

Pesa(s) de control Frente a pesa calibrada overificar en la balanzainmediatamente despus dela calibracin trazable

Anualmente

Cronmetros Frente a seal horarianacional

Anualmente


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ANEXO B2

DIRECTRICES PARA LA PUESTA EN SERVICIO Y VERIFICACIN DEEQUIPOS.

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipoy resultados previos del equipo.


Equipos con temperaturacontrolada (incubadoras,baos, refrigeradores,congeladores)

a) Verificar la estabilidad yuniformidad de la temperaturab) Verificar la temperatura

a) Inicialmente y despusde reparacin/ modificacinb)Diariamente/ con cadauso

Estufas de esterilizacin a) Verificar laestabilidad/uniformidad de latemperaturab) Verificar la temperatura

a) Inicialmente y despusde reparacin/modificacinb) Con cada uso

Autoclaves a) Verificar laestabilidad/uniformidad de latemperaturab) Verificar la temperaturac) Verificar el tiempo

a) Inicialmente y despusde reparacin/modificacin

b) Con cada usoc) semestralmente

Cabinas de seguridad a) Verificar las caractersticastcnicasb) Verificar la velocidad delairec) Verificar el recuento departculas

a) Inicialmente y despusde reparacin/modificacinb) Anualmente

c) Anualmente

Cabinas de flujo laminar a) Verificar las caractersticastcnicasb) Verificar la esterilidad

a) Inicialmente y despusde reparacin/modificacinb) Mensualmente

pH metros Ajuste de la respuestautilizando como mnimo 2tampones y verificacinposterior

Diariamente/con cada uso

Balanzas Ajuste del cero y verificacincon la pesa de control

Diariamente/con cada uso

Destilador, desionizador yunidad de smosis inversa

a) Conductividadb) Contaminacin microbiana

a) Semanalmenteb) Mensualmente


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Diluidores gravimtricos a) Peso y volumen (peso)distribuidob) Verificar coeficiente dedilucin

a) Diariamente

b) Mensualmente

Distribuidores de medios Verificar el volumendistribuido

Inicialmente yperidicamentedependiendo de lafrecuencia y naturaleza deuso.

Pipetas automticas Verificar la precisin yexactitud del volumendistribuido

Inicialmente yperidicamentedependiendo de lafrecuencia y naturaleza deuso.

Sembradores en espiral a) Verificar caractersticastcnicas frente a mtodoconvencionalb) Verificar el estado delpunzn y puntos de inicio yfinc) Verificar volumendistribuido

a) Inicialmente yanualmente

b) Diariamente/con cadauso

c) Mensualmente

Contadores automticos decolonias

Verificar frente al recuentomanual

Anualmente

Jarra de anaerobiosis Indicador anaerbico Con cada uso


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ANEXO B3

DIRECTRICES PARA EL MANTENIMIENTO DE EQUIPOS

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipoy resultados previos del equipo.

Tipo de aparato Requisito Frecuencia sugerida

Incubadoras, refrigeradores,congeladores y estufas

Limpiar las superficiesinternas y desinfectar si esnecesario

Semestralmente

Baos mara Vaciar, limpiar, desinfectar yrellenar

Cada mes o cada 6 meses sise utiliza un biocida

Centrfugas Limpiar y desinfectar Trimestralmente

Autoclaves Verificar visualmente lajunta, limpiar/drenar lacmara

Mensualmente

Cabinas de seguridad y deflujo laminar

Revisin/cambio de filtros Anualmente

Microscopios Limpieza de objetivos Anualmente

pH metros a) Limpiar electrodosb) Revisar/rellenarelectrolito

a) Con cada usob) Cuando sea necesario

Balanzas/Diluidoresgravimtricos

a) Limpiarb) Revisar

a) Con cada usob) Anualmente

Destilador Limpiar y desincrustar Segn sea necesario

Desionizador, unidad desmosis inversa

Sustituir cartucho ymembrana

Segn las recomendacionesdel fabricante

Jarra de anaerobiosis Limpiar/desinfectar Despus de cada uso

Distribuidores de medios,equipos volumtricos,pipetas, equipos defiltracin de membrana, etc.

Limpiar y desinfectar segnsea apropiado

Con cada uso

Sembradores en espiral a) Revisarb) Descontaminar, limpiar yesterilizar

a) Anualmenteb) Con cada uso

directrices para la calibrac de equipos enac

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