DIEGO FERNANDO LOPEZ MUÑOZ

Docente de bacteriología

Master en biomedicina experimental

Medios de cultivo

MEDIOS DE CULTIVO

• Conjunto de nutrientes, factores de crecimiento que crean condiciones necesarias para el desarrollo de M.O

• Diversidad metabólica de los M.O enorme.

• Al igual que la variedad de medios de cultivo

CARACTERISTICAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Se comercializan liofilizados – rehidratarlos.• Preparación se reduce a pesar y redisolverlos.• Seguir las instrucciones del fabricante para su

uso.• Importante: las sustancias termolábiles se

esterilizan por filtración y luego se añaden a los medios de cultivo previamente esterilizados – autoclave.

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Agar• Azucares• Extractos• Peptonas• Fluidos corporales

• Sistemas amortiguadores

• Indicadores de PH• Agentes reductores• Agentes selectivos• Metales y minerales

esenciales.

AGAR

• Agente gelificante.• Polisacárido que

se obtiene de algas marinas

• Características bacterias no lo degradan.

AZUCARES

• Carbohidratos• Fuente de carbono

para el M.O• Los mas usados son:• Glucosa• Lactosa• sacarosa

EXTRACTOS

• Son preparados de órganos y tejidos animales o vegetales obtenidos de agua y calor.

• Carne• Levadura• Malta

PEPTONAS

• Son proteínas hidrolizadas

• Se obtienen por digestión química o enzimática

• Estas pueden ser de origen animal o vegetal.

FLUIDOS CORPORALES

• Se adicionan a los medios para el cultivo de M.O. patógenos

• Sangre completa• Sangre desfibrinada• Plasma/suero

SISTEMAS AMORTIGUADORES

• Son sales que se añaden para mantener el pH optimo.

• Dentro de un rango pre-establecido.

• Favorezca crecimiento• Mas usados son:• Fosfatos, acetatos

INDICADORES DE PH

• Indicadores acido – básico

• Se adicionan para detectar los cambios de PH.

• Mas usados:• Rojo fenol• Purpura de

bromocresol

AGENTES REDUCTORES

• Sustancias que se añaden para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes.

• Microarofilicos y anaerobios.

• Cisteína y tioglicolato

AGENTES SELECTIVOS

• Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares que a determinadas concentraciones actúan como agentes selectivos

• Ejemplo : productos químicos y antimicrobianos

METALES Y MINERALES

• Son esenciales para el crecimiento de M.O.

• Condición optima.• Se añaden en trazas

al medio• Los mas usados:• Ca, Mg, Fe.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

• Solidos y líquidos• Solidos: contienen

un agente solidificante.

• Se preparan en cajas de Petri o en tubos con la superficie del tubo inclinado.

Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración.

Medios líquidos

Medios sólidos

Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% , forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC

SEGÚN SU UTILIZACIÓN

Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales.

Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.

Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana.

Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor.

Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies

Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.

Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtención de vacunas, en la investigación y en la industria

Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología

Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart

AGAR SANGRE

• Medio no selectivo.• Para aislamiento y cultivo

variedad de M.O.• Bacterias patógenas y no

patógenas.• Mantener cepas de cultivo

almacenados – corto tiempo.• Enriquecido con sangre de

cordero-desfibrinada.• Determinacion Rxn

hemoliticas.

AGAR MACCONKEY

• Selectivo y diferencial.• Aislamiento de bacterias del

genero Gram Negativo.• Mx. Clínicas, alimentos,

aguas, productos lácteos, farmacéuticos.

• M.O. tales como Salmonella, Shiguella, Escherichia coli.

• Sales biliares y cristal violeta inhibidores Gram positivos.

AGAR TSI

• Medio para diferenciar enterobacterias.

• Basado producción de sulfuro de hidrogeno.

• Fermentación lactosa, sacarosa, dextrosa.

• Interpretación:• Roja/Amarilla indica

fermento dextrosa.• Amarilla/Amarilla • Roja/Roja.

AGAR MOTILITY

• Medio de cultivo semi-solido.

• Utilizado para detectar movilidad bacteriana y producción de Indol

• Útil para diferenciar miembros de la familia enterobacterias.

• Producción de acido sulfhídrico, Indol y Movilidad.

TUBOS CALDO BHI

• Brain, Heart, Infusion.• Medio liquido• Útil para el cultivo de

estreptococos, pneumococos, meningococos y otros M.O. exigentes.

• Este medio se le adicionan otras sustancias para el uso de hemocultivos.