“Determinación de grupo sanguíneo ABO y Rh”

Introducción:

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto al sistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre ambos sistemas. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en muerte. Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO. Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal. Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal. Material y equipo:

40 tubos de ensayo de 12 x 75

4 pipetas Pasteur

1 gradilla de unicel

3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA

1 tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante

Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *

Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O

1 centrifuga

*Reactivos: Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal Lafon

Lote:9662 Lote: 8764

Cad: 09NOV08 Cad: 31OCT08

Aspecto: transparente Aspecto:transparente

Color: azul Color: incoloro Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE

Lote: 9762A Lote: NDMG04305

Cad:09NOV08 Cad: 29MAR08

Aspecto: transperente Aspecto: transperente

Color: amarillo Color: incoloro

Técnica Método directo

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el

tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500

r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números

en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya

traía la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo: 1,

13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestras

restantes.

3. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua

destilada,

de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría.

4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y una

gota de antisuero, según corresponda.

5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15

segundos

a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo

(formación de un botón). OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 4

6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los

datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Metodo inverso

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el

tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500

r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números

en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya

traía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A1, A2, B y O.

Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestras

restantes.

3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponda

y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.

4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15

segundos

a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo

(formación de un botón).

5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los

datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo. Resultados:

Muestra Método directo Método inverso

Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O

Grupo y

Rh

1 - - - + + + + - O +

2 - + + + + + - - B +

3 + + - + - - + - A +

4 + + + + + - - - AB + Interpretación: Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antigenoanticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinación querrá decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B), ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al presentarlo (Rh +) o no (Rh -). Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre inverso.