Determinacin de Bilirrubina Directa e Indirecta en Sangre

Determinacin de Bilirrubina Directa e Indirecta en SangreI. Introduccin

La hemoglobina de eritrocitos envejecidos o daados se convierte, por una serie de reacciones en el pigmento biliar bilirrubina. La vida del eritrocito es de 100 das y diariamente se libera un total de 6gr aproximadamente.

La hemoglobina procedente de la desintegracin de clulas envejecidas, las clulas del sistema retculo endotelial, en especial el bazo, hgado y mdula sea, primero fagocitan a los eritrocitos y luego se convierten en bilirrubina la hemoglobina liberada. La bilirrubina atraviesa los micros vellosidades sinusoides y pasa a la clula heptica. La protena se separa del complejo y la bilirrubina se convierte a una forma ms soluble mediante reacciones de conjugacin, proceso que tiene lugar en el retculo endoplasmtico liso, catalizado por la UDP-glucuroniltransferasa.

Normalmente en la bilis de mamferos se encuentra como diglucoronido y monoglucoronida de bilirrubina, predominando el primero.

La conjugacin con el cido glucornido es un pre-requisito para la eliminacin de bilirrubina en la bilis, en el intestino sufre la accin reductora de enzimas bacterianas, los productos de reduccin, colectivamente se designan como urobilingenos, en el ileon terminal y en el colon una parte de urobilingeno, es reabsorbida y excretada por el hgado constituyendo un ciclo entero heptico.

Normalmente la mayor parte de este pigmento formado es oxidado a urobilina, compuesto de color pardo anaranjado, las urobilinas son excretadas por las heces.

Normalmente no se excreta bilirrubina por la orina y las cantidades de urobilingeno que se elimina por orina es de alrededor de 0.4 mg por 24 horas.

Bilirrubina

Es un producto de la descomposicin o de desecho de la hemoglobina. Por lo general, se mide la bilirrubina total y la directa para explorar o monitorear una disfuncin del hgado o la vescula biliar.

El metabolismo de la bilirrubina comienza con la descomposicin de los glbulos rojos por los fagocitos. Los glbulos rojos contienen hemoglobina, la cual se descompone en Hem y globina; el Hem se convertido en bilirrubina y es transportado por la albmina en la sangre hasta el hgado, donde la mayor parte de la bilirrubina se conjuga (liga qumicamente) con un glucurnido antes de excretarse en la bilis. La bilirrubina conjugada se denomina bilirrubina directa, mientras que la no conjugada se llama bilirrubina indirecta, y la suma de las dos conforma la bilirrubina srica total.

La bilirrubina conjugada es excretada en la bilis por el hgado y almacenada en la vescula biliar o transferida directamente al intestino delgado. La bilirrubina sigue su proceso de metabolizacin por bacterias en los intestinos y se convierte en urobilinas, las cuales contribuyen al color de las heces. Un pequeo porcentaje de estos compuestos se reabsorbe y aparece finalmente en la orina, donde se conoce como urobilingeno.VALORES NORMALESBilirrubina total es de 0,25 a 1 mg /dl %

Bilirrubina directa es de 0,1 a 0,4 mg /dl %.

Bilirrubina indirecta: 0,3 a 1,9 mg/dl

Los valores normales pueden variar levemente entre laboratorios.

La bilirrubina se secreta en la Bilis. La secrecin en la bilis de la bilirrubina conjugada tiene lugar mediante un mecanismo de transporte activo, que puede ser el limitante de la velocidad de todo el proceso del metabolismo heptico de la bilirrubina. El transporte heptico de la bilirrubina conjugada hacia la bilis es inducible por los mismos frmacos capaces de inducir la conjugacin de la bilirrubina. Por tanto, los sistemas de conjugacin y de excrecin se comportan como una unidad funcional coordinada.

En condiciones fisiolgicas, bsicamente la totalidad de la bilirrubina secretada a la bilis se encuentra conjugada. Slo despus de la fototeraputica es posible encontrar en la bilis cantidades importantes de bilirrubina no conjugada.

En el hgado existen sistemas para la secrecin a la bilis de compuestos naturales y farmacuticos, una vez que stos se metabolizan. Algunos de estos sistemas secretores son compartidos con el diglucurnido de bilirrubina, pero otros operan independientemente.

Estructura de la bilirrubina

1. Objetivos

La presente prctica tiene como finalidad: Determinar la bilirrubina total, directa e indirecta de la suero sanguneo.II. Materiales y Reactivos

A. Materiales

Materiales:Reactivos:

Pipetas Graduadas Alcohol metlico

Gradilla Bilirrubina total

Tubos de Ensayo Bilirrubina indirecta

Micropipetas- Suero sanguneo

Equipos:Otros:

Centrfuga- Alcohol

Bao Mara- Algodn

Espectrofotmetro_ agujas N21

III. Mtodo-procedimiento1. BILIRRUBINA TOTALMTODO DE AUDIT DIAGNOSTIC

Preparar el siguiente sistema de tubos de ensayo:

I

(Blanco)II

(Muestra)

Reactivo 11.5ml1.5ml

Reactivo 250ul

Muestra100ul100ul

Mezclar, leer la densidad ptica despus de 5 minutos de incubacin.

Leer la absorbancia de los Blancos de Muestra a 555 nm frente a agua destilada.

NOTA: La estndar es de 0.014

2. BILIRRUBINA DIRECTAMTODO DE AUDIT DIAGNOSTIC

Preparar el siguiente sistema de tubos de ensayo:

Blanco MuestraMuestra

Reactivo 11.5ml1.5ml

Reactivo 250ul

Muestra100 ul100ul

Mezclar, leer la densidad ptica despus de 5 minutos de incubacin.

Leer la absorbancia contra el blanco de la muestra a 555 nm.NOTA: La estndar es de 0.014

VII. Clculos y Resultados Para poder analizar cuanto de ( Bilirrubina ( hay en la sangre se debe realizar la siguiente frmula:

DETERMINAMOS LA BILIRRUBINA TOTAL

Absorbancia = 0.006 Absorbancia estndar = 0.014BILIRRUBINA TOTAL mg/dl = (D.O. muestra / D.O. estndar) x 2 mg/dlBILIRRUBINA TOTAL mg/dl = (0.006 / 0.014) x 2 mg/dlBILIRRUBINA TOTAL mg/dl = 0,857mg/dl DETERMINAMOS LA BILIRRUBINA DIRECTA Absorbancia = 0.026 Absorbancia estndar = 0.014BILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = (D.O. muestra / D.O. estndar) x 2 mg/dlBILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = (0.026 / 0.014) x 2 mg/dlBILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = 3,714mg/dlDETERMINAMOS LA BILIRRUBINA INDIRECTABILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = BILIRRUBINA TOTAL - BILIRRUBINA DIRECTABILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = 0,857mg/dl 3,714mg/dlBILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = -2,857mg/dlVIII. Resumen y Conclusiones

El metabolismo de la bilirrubina comienza con la descomposicin de los hemates en el sistema reticuloendotelial. La hemoglobina es liberada desde los hemates y descompuesta en las molculas heme y globina. El heme es catabolizado despus para formar biliverdina, que se transforma en bilirrubina. Esta forma de bilirrubina se denomina no conjugada (indirecta). En el hgado, la bilirrubina indirecta es conjugada con glucurnido para producir bilirrubina conjugada o directa. La bilirrubina conjugada se excreta despus por las clulas hepticas hacia los canalculos intrahepticos, que acaban conducindola a los conductos hepticos, el conducto biliar comn y el intestino. La mayor parte de la bilirrubina de la bilis que alcanza el intestino est conjugada. La bilirrubina conjugada no es apreciablemente absorbida por el intestino. La accin de las bacterias intestinales sobre la bilirrubina da por resultado la desconjugacin y la oxidacin o reduccin, con formacin de compuestos que colectivamente se denominan urobilingeno. Estos compuestos estn no conjugados, lo que permite su absorcin. La mayor parte del urobilingeno absorbido es excretado por el hgado, aunque pueden aparecer pequeas cantidades normalmente en la orina. Cantidades mayores se encuentran en la orina cuando la excrecin de bilirrubina por la bilis est aumentada, como en la hemlisis. O cuando el hgado enfermo no puede segregar fcilmente urobilingeno absorbido por el intestino.La ictericia es una coloracin amarillenta de piel y mucosas causada por niveles sanguneos de bilirrubina anormalmente altos. El color amarillo se aprecia cuando la bilirrubina srica total es superior a 1,6 mg por 100 ml en los casos de origen heptico o biliar, requirindose cifras mayores para que se manifieste en ictericia una hiperbilirrubinemia de origen hemoltico.

IX. Referencias Bibliogrficas

MURRAY R,K. GRANNER D.K. MAYES, P.A. y RODWELL V,W. 2001. Bioqumica de Harper. 16a Ed. Edit El Manual Moderno. Mxico.

PLUMMER P,T 1981. Bioqumica Prctica. 13a Ed. Edit. El Manual Moderno S.A. De C.V. Mxico D.F.

RONDONI, P. Compendio de Bioqumica con Aplicacin a la Patologa y al Diagnstico. 4ta Edicin. Editorial LABOR S.A. Madrid Espaa.

Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005. 1993-2004 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Ao de las Cumbres Mundiales en el Per

Universidad Nacional de la Amazona Peruana

Facultad de Farmacia y Bioqumica

PRACTICA DEL LABORATORIO # 16 Grupo: jueves (11 a 1pm)Titulo : Determinacin de la Bilirrubina Total, Directa e Indirecta en Suero Sanguneo. Asignatura :Bioqumica

Docentes:Q.F. Wilfredo O. Gutirrez Alvarado

Q.F. Henry Delgado Wong Alumna : Vsquez Rodrguez Gnesis Del Rosario

Fecha de

Ejecutacion:jueves 17 de abrilFecha de Presentacin: jueves 24 de abril Iquitos-0-Per

2008

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