DESARROLLO DE PRACTICA 011. Investigue acerca de la simbologa de bioseguridad y anexe a su protocolo los principales smbolos y su significado.

RIESGO BIOLGICO

2. GLOSARIO DE TERMINOS Radiacin oxidanteAccin o efecto de oxidar. Emanacin de sustancias radioactivas.

Radiaciones ultravioleta germicidasSon aquellas radiaciones emitidas por lmparas de radiacin ultravioleta, las cuales tienen accin germicida sobre agentes microbiolgicos presentes en el aire y las superficies.La mximaemisinse produce auna longitudde onda de2537 nm.

RiesgoEs la posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud de las personas causado a travs de accidentes, enfermedades, incendios, etc.

Sustancias alergizantes.Son agentes qumicos que porcontacto, inhalacino ingestin, provocan una reaccin sensibilizante de tipo alrgico en un nmero significativo de personas.

Sustancias corrosivas.Son agentes qumicos que causan destruccin visible o alteraciones irreversibles en el lugar de contacto con los tejidos.

Sustancias explosivas.Sonsustanciasqueporunareaccinqumicaexotrmica,producengasesovaporesqueinvolucranunrpidoaumentodevolumenyliberacindeenerga;enconsecuencia, seproducen ondasexpansivasde sonidoycalor.Estasreacciones se desencadenan por percusin, inflamacin o chispa.

Sustancias incompatiblesSon sustancias que al estar en contacto, pueden reaccionar en forma violenta con desprendimiento de calor y produccin de productos inflamables y txicos.

Sustancias infecciosasSon aquellas que contienen microorganismos viables, incluidas bacterias, virus, rickettsias, parsitos, hongos o recombinantes, hbridos o mutantes que pueden causar enfermedades tanto en el hombre como en los animales.Se excluyetoxinas, queno contienensustancias infecciosas

Sustancias inflamables.Son sustancias qumicas que producen gases o vapores que a una temperatura dada, alcanzan una concentracin en el aire que les permite inflamarse sobre el envase o recipiente.

Sustancias irritantes.Son agentes qumicos que provocan una alteracin primaria sobre la piel, mucosas y ojos.

Sustancias txicas.Son agentes qumicos que al introducirse al organismo por va oral, inhalacin, contacto con la piel, producen dao al ser humano por accin de mecanismos fsicos, qumicos ofisiolgicos(enzimticos) opor combinacin deambos.

REFERENCIAS: Manualde bioseguridad paralaboratorios clnicos, Republica de honduras secretaria de salud departamento delaboratorio nacionalde vigilancia de la salud.2009.

DESARROLLO DE PRACTICA 02

1. Reactivos en biologa molecular: VA-044En biologa molecular se utiliza para la separacin de las protenas la electroforesis en gel de poliacrilamida. Esta tcnica conocida como PAGE por sus siglas en ingls, polyacrylamide gel electrophoresis, se basa en que las diferentes protenas migrarn a una velocidad distinta en un medio cargado elctricamente. lVA-044 (2,2' - Azobis [2- (2-imidazolin-2-il) propano]dihidrocloruro) es un iniciador de la polimerizacin de la acrilamida, soluble en agua. Las condiciones en que se produce la polimerizacin usando este iniciador son suaves, a una baja temperatura y usando agua como disolvente.Entre las aplicaciones delVA-044estn la polimerizacin de la acrilamida y de otros monmeros. Cuando se compara con otros iniciadores hidrosolubles en la polimerizacin de la acrilamida se observa que es un producto recomendado para llevar a cabo esta reaccin. Este reactivo puede ser usado para el mtodo de anlisis cerebral desarrollado por Chung y colaboradores que permite realizar una exploracin estructural y molecular de los sistemas biolgicos intactos. TAPSOtro buffer comercializado por Wako es el cido N-[tris(hidroximetil)metil]-3-aminopropanosulfnico (TAPS). El TAPS tiene capacidad reguladora entre pH 7.7 y 9.1. Puede ser usado para electroforesis capilar de ADN, como fase mvil para cromatografa y en otras tcnicas de biologa molecular. HEPESEl HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperaznetanosulfnico) es uno de los tampones zwitterinicos ms usados en experimentos biolgicos. Tiene capacidad reguladora entre los valores de pH de 6.8 y 8.2 y su pKa vara con la temperatura, disminuyendo la disociacin a temperaturas ms bajas, caracterstica que no tienen otros tampones con grupos funcionales como el fosfato y el carbonato y por esto se usa para mantener las enzimas a bajas temperaturas, se comporta igual que el agua en este aspecto. Por su baja toxicidad y no interaccin con sustratos metlicos es el buffer de eleccin para muchos cultivos de rganos y tejidos (donde adems mantiene el cultivo sin cambios de pH debidos a la liberacin de dixido de carbono que se produce), para tcnicas de deposicin de protenas en microscopa electrnica y cuando son usadas disoluciones de Hanks y Earle. Bis-TrisBis-Tris es la forma abreviada de llamar al bis(2-hidroxietil)amino-tris(hidroximetil)metano usado en biologa molecular para gran cantidad de ensayos. En su estructura qumica se encuentra una amina terciaria que es la encargada de mantener el equilibrio cido base que le confiere capacidad reguladora a esta sustancia en el rango de pH de 5.8 a 7.3. Puede ser usado en el ensayo de la creatina quinasa, como medio protector de biomolculas refrigeradas y en la biosntesis de muchas otras molculas de inters en la investigacin biomdica. mRNA Cloning Kit WakoEstereactivo de laboratorioes til para la amplificacin del ARN mensajero cuando se cuenta con pocas molculas de este. Est especialmente diseado para utilizar con losanticuerpos monoclonales anti Ago2comercializados por Wako. Puede ser usado para cuantificar la cantidad de ARN etiquetado que est presente en un cultivo. Adems se ha visto que es una herramienta muy til para clonar ADN complementario obtenido a partir de ARN mensajero asociado al complejo RISC (complejo silenciador inducido por el ARN, en ingls: RNA-inducedsilencingcomplex). PIPESEl nombre comn del PIPES es cido piperazn-N,N-bis(2-etanosulfnico) y se usa tambin como tampn en ensayos biolgicos. Es uno de los buffers estudiados por Good y colaboradores en la dcada de los 60. Este tampn cido tiene una constante de equilibrio cercana al pH fisiolgico por lo que es muy til en experimentos que precisan del cultivo de clulas, resiste el paso por la autoclave, lo que le confiere una ventaja adicional para ser seleccionado como tampn cido en estudios que requieren la fijacin de clulas. ACESACES o cido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfnico es un tampn zwiterinico con capacidad reguladora en el rango de pH entre 6.4 y 7.4. Es til para la separacin de protenas por electroforesis de enfoque isoelctrico (IEF) en dos dimensiones. ADAEl cido N-(Carbamoilmetil)iminodiactico o ADA es un tampn biolgico til en el rango de pH entre 6.4 y 7.4, usado para la preparacin de gradientes de pH con sustratos inmovilizados, por ejemplo en una columna capilar monoltica. BESEl tampn conocido como BES es el cido N,N-Bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanosulfnico, este buffer biolgico tiene utilidad en mucho procesos dependientes del pH, entre los que se encuentra la separacin por electroforesis capilar. GoldMANGoldMANes una solucin de nanopartculas magnticas de hierro con coloides de oro. Estas nanopartculas pueden utilizarse para transferir biomolculas como ADN, ARN y oligonucletidos a las clulas. Permite lograr la sensibilizacin directa de los vectores vricos en la regin de oro de la nanopartcula, una alta eficiencia en la transferencia de genes a las clulas sin que contengan el receptor del virus y pueden utilizarse para separar por magnetismo y purificar aquellas clulas donde se han expresado los genes del virus. Adems no presentan citotoxicidad y se pueden usar en varios tipos de clulas. TESEl cido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfnico, conocido como TES que es usado, entre otras aplicaciones, para el crecimiento de clulas epidrmicas a pH entre 7.4 y 7.9. Es tambin un buffer de Good. BicineEl bicine, nombre con el que se conoce a la N,N-bis(2-hidroxietil)glicina es un tampn recomendado para ensayos bioqumicos que se realicen a bajas temperaturas. Tiene un pKa de 8.35 y ha sido usado en ensayos de cristalografa, determinacin cuantitativa de biomolculas y muchos otros experimentos de biologa molecular. TricineLa N-tris-(hidroximetil)metilglicina conocido como Tricine es un buffer usado en el rango de pH de 7.4 a 8.8. Este buffer se usa en la separacin de pptidos y protenas de bajo peso molecular, por la tcnica de electroforesis, en gel y de membrana. Su gran fuerza inica causa mayor movilidad de las especies inicas y una menor velocidad de migracin de las protenas. Adems es usado con gran eficacia en los ensayos de biologa molecular que utilizan luciferasa para cuantificar la expresin de un vector de expresin transfectado mediante la catlisis de la reaccin del ATP con la luciferina. MESEl buffer preparado con MES (cido 4-morfolnetanosulfnico) es til para el cultivo celular de plantas en el rango de pH entre 5.8 y 6.5. Es usado como fase mvil para aislar la tubulina de cerebro por cromatografa de gel. Como otros tampones biolgicos de los denominados buffers de Good presenta alta solubilidad en agua y poca en otros disolventes, fcil de sintetizar, es estable y tiene poca absorcin en el visible. Vector de expresin de protenas fluorescentes bsicas Evrogen (TagFP)El marcaje o etiquetado de protenas u otras biomolculas con compuestos fluorescentes es necesario para diversos estudios moleculares. Wako es distribuidor delvector de expresin de protenas fluorescentesdesarrollado por Evrogen (empresa rusa liderada por cientficos que se dedican a producir productos para biologa molecular y celular). Se puede realizar el etiquetado de las protenas de inters con otras que fluorescen a diferentes longitudes de onda, lo que posibilita hacer estudios de localizacin e interaccin de estas. El hecho de contar con protenas que fluorescen en todo el rango del espectro visible hace que se puedan marcar diferentes estructuras subcelulares con varios colores para diferenciarlas entre s.

. CAPSSe conoce como CAPS al cido 3-(ciclohexilamino)-1-propanosulfnico, buffer utilizado en experimentos de biologa molecular, de naturaleza zwiterinica, que puede usarse en el rango de pH entre 7.9 y 11.1. Entre otras aplicaciones se encuentra el secado de protenas, la secuenciacin y anlisis de aminocidos y todos aquellos experimentos donde la glicina puede actuar como interferente. CHESEl cido 2-(ciclohexilamino)etanosulfnico (CHES) es un tampn muy utilizado en enzimologa. Puede ser usado como buffer en el rango de pH entre 8.6 y 10, por lo que es til en procesos que ocurren en medio bsicos o cuando se quiere estudiar un proceso determinado a varios valores de pH para conocer su dependencia con el pH. EPPSEl EPPS (cido 3-[4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil]propanosulfnico), tambin conocido como HEPPS, tiene un pKa de 8. Es usado como buffer en la regin entre 7.6 y 8.6, comnmente en enfoque isoelctrico ultrafino. MOPSSe conoce como MOPS al cido 3-(N-morfoln)propanosulfnico. Es un buffer cuyo pKa es de 7.2, por lo que se usa en muchos experimentos biolgicos que se realizan a un pH cercano al pH neutro. Este buffer se recomienda para la electroforesis en gel de acrilamina. Es uno de los tampones que componen la disolucin de corrida para el fraccionamiento del ARN. pEBMultiElpEBMulties un vector de expresin de genes para ser usado en primates y tambin en lneas celulares provenientes de perros. Entre las ventajas que reporta la utilizacin de este producto se encuentra el menor tiempo que se necesita para lograr una lnea celular estable.Adems permite la eliminacin de plsmidos transfectados de las lneas celulares y no es necesario llevar a cabo la confirmacin de que el vector se ha integrado correctamente en el genoma hospedero como en el caso de otros vectores de expresin.REFERENCIAS: http://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/post/20-reactivos-de-laboratorio-para-biologia-molecular/

DESARROLLO DE PRACTICA 03

1. Determinar el peso molecular de cada reactivo empleado en la prctica y antelos en su protocolo.

Tris HCl157,56 g/mol

EDTA292,24g/mol

NaCl58,44g/mol

SDS288,372g/mol

TBE475.21g/mol

NaOH39,997g/mol

ETANOL46,06844g/mol

HCl36,46094g/mol

KOH56,1056g/mol

2. Investigar acerca de los diferentes materiales (o equipos) que pueden emplearse para la medicin de volmenes en funcin de la precisin y exactitud requeridas en biologa molecular. Anxelo a su protocolo. Matraz Erlenmeyer

Es un recipiente que permite contener sustancias o calentarlas. Matraz Aforado

En qumica, un matraz volumtrico o aforado es un recipiente con forma de pera, fondo plano y un cuello largo y delgado. Suelen fabricarse enmaterialescomo vidrio, vidrio borosilicatado o polipropileno. Algunos tienen unamarcagrabada alrededor del cuello que indica ciertovolumende lquido que es el contenido a una temperatura concreta (usualmente 20C), Pipetas Normal y Volumetrica

Son utensilios que permiten medir volmenes. Las hay en dos presentaciones: Pipetas graduada:Es un elemento de vidrio que sirve para dar volmenes exactos, con esta pipeta, se pueden medir distintos volmenes de lquido, ya que lleva unaescalagraduada. Pipeta volumtrica:Es un elemento de vidrio, que posee un nicovalorde medida, por lo que slo puede medir un volumen.Las pipetas graduadas permiten medir volmenes intermedios, pues estn graduadas, mientras que las pipetas vulumtricas slo miden el volmen que viene indicado en ellas. Probeta Normal y Graduada

Es un utensilio que permite medir volmenes estn hechas normalmente de vidrio pero tambin las hay de plstico. As mismo las hay de diferentes tamaos (volmenes). Bureta

Es un utensilio que permite medir volmenes, es muy til cuando se realizan neutralizaciones. Vasos de precipitado

Son utensilios que permiten calentar sustancias hasta obtener precipitados.

3. Elabore una tabla con las ecuaciones empleadas en los clculos para preparacin. Anxela a su protocolo.

REFERENCIAS: http://portalecuador.ec/module-Pagesetter-viewpub-tid-2-pid-14.php http://www.uia.mx/campus/publicaciones/quimanal/pdf/formulario.pdf

DESARROLLO DE PRACTICA 041. Investigue acerca de las funciones que cumplen cada uno de los reactivos empleados en la extraccin de ARN, segn el protocolo desarrollado.

TRIZOL: El Trizol es un lquido rosa brillante o rosa translucido. El olor del fenol es extremadamente fuerte. El TRIzol mantiene la integridad de los cidos nucleicos durante la homogeneizacin del tejido. Adems rompe clulas y componentes celulares. La homogenizacin del tejido tiene que hacerse en frio para evitar la degradacin del ADN o el ARN, pero una vez aadido el Trizol su degradacin se ve seriamente reducida. CROROFORMO: afina la interfase y disuelve lpidos ISOPROPANOL: precipita el ARN.2. Investigue acerca de las funciones que cumplen cada uno de los reactivos empleados en la extraccin de ADN, segn el protocolo desarrollado. FENOL: El fenol es, naturalmente, un poco soluble en agua, y da una interfaz difusa, que se afila por la presencia de cloroformo y alcohol isoamlico reduce la formacin de espuma. La mayora de las soluciones tambin tienen un antioxidante, como oxidado daos fenol los cidos nucleicos. Para la purificacin de ARN, el pH se mantiene a alrededor de 4, que retiene ARN en la fase acuosa preferentemente. Para la purificacin del ADN, el pH es por lo general cerca de 7, momento en el que todos los cidos nucleicos se encuentran en la fase acuosa. CROROFORMO: afina la interfase y disuelve lpidos ISOPROPANOL: precipita el ADN. SDS: se utiliza para purificacin en eliminacin de membranas. 3. Foto de resultados :

REFERENCIAS:

https://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01/practica-no-3-extraccion-de-arn.pdf http://www.fbmc.fcen.uba.ar/materias/ingen/practicos/arn/clases/Extraccion%20ARN.pdf http://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-biologia/trizol