cultivos celulares como simulación del hábitat de algunos parásitos. dr. rodrigo morchón
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7/29/2019 Cultivos celulares como simulación del hábitat de algunos parásitos. Dr. Rodrigo Morchón
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de algunos parásitos.
Morchón, R.1, González‐Miguel, J.1, Carretón E. 3, Bossetti, E.2, Fernández‐Serafín C.1
1 Grupo de
dirofilariosis animal
y humana,
Universidad
de
Salamanca,
Instituto
de
Investigación
Biomédica
de
Salamanca (IBSAL), Facultad de Farmacia, Campus Miguel Unamuno s/n, Salamanca.2 Universidad de Milán, Programa Leonardo da Vinci, Milán, Italia.
, , .
AUTOR RESPONSABLE (correo-E): [email protected]
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Ciclo biológico
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Patología crónicaVermes vivos
Endarteritis
proliferativa
Lesiones pulmonares (edema)
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Patología crónica y agudaMuerte masiva de vermes adultosVermes vivos
Tromboembolismos
Endarteritis
proliferativa
Lesiones pulmonares (edema)
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Corte transversal de la arteria pulmonar
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Problemas
- Mucho tiempo en expandir un cultivo.
- Estimulación de cultivos.
- Detección de moléculas (PG, Tx y LT) en el
-
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Cultivo de células endotelialesDía 1
(40%)
Día 3
(80%)
Día 2
(60%)
Día 4
(90%)
Día 5
(95%)
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Cultivo de células musculares
Día 1
(40%)
Día 5
(60%)
Día 7-8 Día 10
(90%) (95%)
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Cultivo de células endoteliales
control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA
COX-1
-tubulina
1,51,5
0,5
1
C O X - 1
N i v e l d e e x p r e s i ó n
1
0,5 C O X - 1
( U A )
control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μg
COX-2
DiSA
eNOS
control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA
0control 100 ng 500 ng 1 µg 10 µg 50 µg 100 µg 500 µgcontrol 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA
0
6
ó n
***
** **6
-tubulina
**3
ó n **
*
-tubulina
2
4
C O X - 2
N i v e l d e e x p r e s i
4
2 C O X - 2
( U A )
1 e N O S
N i v e l d e e x p r e s i
e N O S
( U A )
0
control 100 500 1 10 50 100 500
0
DiSA control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μg
0control 100 500 1 10 50 100 500control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA
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Cultivo de células endoteliales
DiSA - + DiSA- DiSA+
COX-2
5-LO 2,5
***
2,522 O X
- 2
( U A
)
*
5 - L O
( U A
)
0
1
α-tubulina00
1
0
DiSA - + DiSA - +
* ***
0,5 11 4
( μ g / m l )
0,5 2 (
μ g / m l )
0,25 2
( μ g / m l )
,
0,25
0 00
L T
0
T x B
0
- - -
P G
0
x
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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Identificación de proteínas
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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Identificación de proteínas
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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Análisis de espectrometría de masas
MS
Proteína
completa:
determinación
masa
molecular Péptidos: huella peptídica (PMF)
MS/MS
Pé tidos: LC MS MS