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CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA

FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN

EL PERIODO 1998 - 2002

MINISTERIO DE SALUDINSTITUTO NACIONAL DE SALUDCENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA

2006

RENÉ EDGAR CONDORI CONDORIRICARDO LUIS LOPEZ INGUNZA

SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº52

CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002

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CODIGO OGITT N° 2-01-05-02-020

CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL

VIRUS DE LA RABIA EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002

Autores:

René Edgar Condori Condori

Ricardo Luis Lopez Ingunza

EJECUCION: CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA 2003 – 2006

RESUMEN

La incidencia anual de casos de rabia en el departamento de Puno en estos últimos años y

variabilidad de huéspedes afectados tales como canes, porcinos, Bovinos y el hombre ha

permitido realizar el estudio de caracterización antigénica y genética del virus de la rabia, para

ello se empleo la técnica de anticuerpos monoclonales y el secuenciamiento genético de una

región del gen de la Nucleoproteína “N”, se incluyeron en el estudio 75 muestras positivas a

Inmunofluorescencia Directa correspondiente a diferentes especies de animales y casos

humanos entre 1998 y 2002 de estos solo fue posible reactivar 44 cepas de los cuales 40

fueron caracterizados como variante antigénica 1, y 04 que no fue posible determinar la

variante (03 porcinos y 01 humano), para el estudio genético fueron seleccionados 12 cepas

caracterizadas como variante antigénica 1 y 03 cepas no definidas, además se incluyo como

control cepas de laboratorio CVS y PV y una cepa del año 2003, las técnicas moleculares RT -

PCR y el secuenciamiento genético permitieron confirmar que este departamento solo circula la

variante antigénica 1 que a su vez presenta 03 sub variantes al que denominamos Var 1a, Var

1b y Var 1c los cuales se diferencia en temporalidad y ubicación geográfica siendo la que tuvo

mayor distribución en área de cobertura la sub variante antigénica Var 1c que se distribuyo

desde las provincias fronterizas con Bolivia (Chuchito y Yunguyo) hasta las Provincias de

Melgar y Azangaro, y desapareció para el año 2001 simultáneamente en ese año aparece una

nueva sub variante Var 1b que suponemos que aun circula en la actualidad, la presión de

selección en cada especie, juega un rol preponderante en la variabilidad genética del virus lo

que fue observado al analizar la filogenia de los casos de rabia en este departamento.


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INTRODUCCION

La enfermedad de la Rabia es causado por un virus neurotrópico que presenta un genoma de

tipo ARN cadena simple y de polaridad negativa, toda la información genética está contenida

en aproximadamente 12000 nucleótidos, formado por cinco genes que codifican cinco

proteínas estructurales en el siguiente orden N, NS, M, G y L (Wunner et al. 1988; Tordo) El

genotipo rabia presenta once variantes antigénicas de los cuales el perro es el reservorio de la

variante antigénica 1 y variante antigénica 2, la rabia presenta dos ciclos de transmisión bien

diferenciados en el Perú, el perro domestico es el principal reservorio activo del ciclo urbano y

el murciélago hematófago desmodus rotundus es el principal reservorio el ciclo silvestre, la

transmisión de esta enfermedad ocurre de un mamífero a otro incluyendo al hombre

espontáneamente

Durante los últimos años continuamente se viene presentando casos de rabia humana

transmitida por perro en el departamento de Puno, asi como casos en bovinos, Porcinos,

perros (can) y Camélidos sudamericanos (Alpaca), por lo tanto cobra importancia la necesidad

de realizar la caracterización antigénica y genética del virus de la rabia para determinar la

filogenia y establecer genéticamente el reservorio de los casos de rabia entre 1998 y 2002 en

los diferentes animales afectados objetivos que fueron parte del presente estudio

MATERIALES Y METODOS

En el estudio fueron incluidos 75 muestras con resultado positivo por Inmunofluorescencia

Directa (IFD) provenientes del departamento de Puno entre los años 1998 y 2002, (17

muestras 1998, 29 muestras 1999, 05 muestras 2000, 21 muestras 2001 y 03 muestras 2002)

estas muestras se encuentran guardadas a – 80°C, se proceso la muestra siguiendo el

procedimiento descrito en el manual de diagnostico de rabia del INS, la suspensión de tejido

encefálico se inoculo en ratones albinos de 21 días y de 11 – 14 gramos de peso, por cada

muestra se emplearon 8 ratones, cuando los ratones presentaron los síntomas fueron

sacrificados y se extrajo el cerebro como material de estudio para la caracterización antigénica

y genética como control positivo se utilizo cepa de laboratorio CVS (Challenger Virus Standard)

y PV (Pasteur Virus)


4

La caracterización antigénica se realizo mediante la técnica de inmunofluorescencia Indirecta

para lo cual se realizaron 8 improntas de cerebro de ratón infectados (aislamiento) en 8

laminas portaobjeto por cada muestra, estas fueron fijados en acetona por 30 minutos, se

colocó en cada una de las improntas un anticuerpo monoclonal distinto proporcionado por el

Centro de Control y prevención de enfermedades (CDC) de Atlanta Georgia (EUA) y se incubó

por 30 minutos a 37°C las laminas fueron lavadas en Buffer Fosfato Salino pH 7.2 – 7.4 por 10

minutos y agua destilada, se revela la reacción con un suero polivalente hiperinmune

comercial, elaborado en cabra contra ratón conjugado con Isotiocianato de Fluoresceína y se

observó al microscopio de luz ultravioleta la reacción positiva se observo mediante la presencia

de color verde.

Los resultados para cada lamina fueron comparados con los patrones de reacción frente a los

anticuerpos monoclonales (cuadro 1).

Para realizar la caracterización genética, se extrajo ARN viral de los aislamientos obtenidos

(muestra encefálica de ratón) mediante el método trizol – cloroformo se siguió las instrucciones

del fabricante,

Para obtener el ADN complementario se realizó la transcripción reversa (RT por sus siglas en

ingles Reverse Transcriptase) del ARN viral extraído a partir de los aislamientos, se utilizó 1 ul

del primer 10g (5’CTACAATGGATGCCGAC-3) 5um en un tubo de 0.2 ul donde se agregó 5 ul

de ARN viral, esta mezcla se calentó a 94°C por 1 minuto en el termociclador de marca

Thermolyne e inmediatamente se enfrió en hielo, luego se agregó 14 ul de un mix que

contenía: 2.16ul de dNTP 10 uM, 0.4 ul de Inhibidor de ARNasa 20 U/ul 1 ul de Transcriptasa

reversa 10 U/ul, 4 ul de buffer 5X y 6.44 ul de agua de Ultra pura, posteriormente se colocó

nuevamente en el termocilador a 42° C por 60 minutos y un ciclo final de 70° C por 15 minutos.

La Reacción en cadena de la polimerasa por sus siglas en ingles PCR (Polimerase Chain

Reacction) se realizo a partir de del ADN complementario obtenido previamente para lo cual se

preparó un tubo de 0.2 ul que contenía una mezcla de 2 ul de buffer 10X, 1.6 ul de dNTP 10 uM

1.2 ul de Magnesio 25mM, 0.2 ul de Taq polimerasa 5U/ul, 1.08 de primer 10g 20 uM, 1.08 de

primer 304 (5´TTGACGAAGATCTTGCTCAT-3´) 20 uM, 10.84 de agua ultra pura, y finalmente


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se agregó 2 ul de ADN complementario y se colocó en el termociclador con el siguiente perfil

denaturación inicial a 94° C por 2 minutos, 30 ciclos de 94° C por 30 segundos, 54° C por 40

segundos y 72° por 1 minuto y una extensión final de 72° por 10 minutos, en cada corrida se

utilizo un control del sistema que contenía agua PCR.

Para verificar que el RT – PCR amplifico correctamente se realizó una corrida electroforetica en

gel de agarosa al 1.5% por 45 minutos a 100 voltios se utilizo el marcador de peso molecular

Estándar PHI 174 Hae III y se coloreo en bromuro de etidio por 10 minutos finalmente se

observó en un transiluminador el producto amplificado.

Terminado la PCR se procedió a purificar el ADN obtenido, para ello se empleo del kit de

purificación Wizard de la marca promega y se siguió las instrucciones del fabricante, el ADN

purificado fue cuantificado en un espectrofotometro (Bio Mate) a longitudes de onda de 260 nm

y 280 nm.

Para la reacción de secuenciamiento genético se utilizo el kit de secuenciamiento BigDyeTM

TM (Applied Biosystems, CA, USA), se seguido las instrucciones del fabricante y las

secuencias fueron determinadas con el secuenciador automático de capilar (ABI model 310,

Applied Biosystems, CA, USA

Cada una de las secuencias obtenidas fueron comparadas con la información existente en el

GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/), posteriormente estas secuencias fueron

alineadas empleando el software gratuito ClustalW (http://www.ebi.ac.uk/clustalw/index.html),

para determinar la filogenia se utilizo el software gratuito Molecular Evolutionary Genetics

Analysis (MEGA) versión 3.1 El método utilizado fue el de máxima parsimonia.

RESULTADOS

Aislamiento Viral

Se empleo la prueba biológica “inoculación en ratones” para lo cual se procedió a inocular en

ratones albinos vía intracraneal una suspensión de tejido encefálico de cada una de las 75


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muestras procedentes del departamento de Puno una vez concluido la prueba se pudo aislar

44 cepas activas,

Caracterización Antigénica

Para determinar la variante antigénica se utilizó la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta

(IFI) y se utilizó un panel de ocho anticuerpos monoclonales proporcionados por el CDC,

finalmente se determinó que la mayoría de las muestras (40) corresponden a la variante

antigénica 1 y 4 muestras (3 porcinos y 01 humano de 1999) no concordaron con los patrones

de reactividad conocidos, específicamente frente al monoclonal 12 (cuadro Nº 2)

Caracterización genética

Se seleccionaron 12 cepas identificadas como variante antigénica 1 y 03 cepas que no fue

posible determinar la variante antigénica, para la selección se consideró procedencia, especie y

año, además se incluyo 01 muestra de alpaca procedente de Yunguyo - Bolivia del año 2003 y

cepas de laboratorio CVS y PV como cepas de referencia; a todas las muestras seleccionadas

y cepas de referencia se les extrajo ARN viral mediante el método trizol cloroformo. (Cuadro Nº

3)

Para la amplificación del gen de la Nucleoproteina N, Primeramente se estandarizo la técnica

de RT – PCR y posteriormente se procesaron la totalidad de las muestras seleccionadas y

estas fueron amplificadas exitosamente, la identificación del producto amplificado se visualizo

mediante electroforesis en gel de agarosa al 1.5%. (Imagen Nº 1)

Los productos amplificados por RT – PCR fueron purificados mediante el kit de purificación

Wizard de la marca promega y se siguió el protocolo del fabricante, Para el secuenciamiento

genético se empleo el primer 304 a una concentración de 2 pico moles/ul y 5 ul de ADN de la

muestra a secuenciar Todas las muestras fueron secuenciadas exitosamente analizándose en

cada una de ellas 509 nucleótidos del gen de la Nucleoproteina N posteriormente todas las


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secuencias obtenidas fueron comparadas con el banco de datos del GenBank para confirmar

que se trata de secuencias que corresponden al virus de la rabia.

Por ejemplo las cepas fijas de de laboratorio CVS y PV al ser comparados con secuencias

reportadas en el GenBank presentaron para el caso del CVS una identidad del 99% con la

cepa avirulenta AVO1 que es un derivado de la cepa original CVS y para el caso de la cepa

PV presento una identidad del 100% con otra cepa PV reportado por N. Tordo, y para el caso

de las cepas de aislamientos que corresponde a la variante antigénica 1 y aquellas que no fue

posible determinar la variante, la comparación con la secuencias reportadas en el GenBank

mostraron que estas presentan una identidad que está entre el 92 al 96% con los reportes

donde mencionan que el hospedero es el perro, confirmándose por lo tanto que todos los casos

corresponde al ciclo urbano..

Análisis de secuencias obtenidas:

Para el análisis de las secuencias primeramente se alineo con el software ClustalW y

posteriormente dicha información fue cargado al software MEGA, el método utilizado fue el de

Máxima Parsimonia y la robustez o confianza del árbol filogenético generado fue realizado

utilizando un análisis de 1000 replicas (bootstrap).

El árbol filogenético generado por el Software MEGA permitió evidenciar 02 grupos bien

definidos del virus de la rabia un grupo donde se encuentran los virus fijos de laboratorio cepas

CVS y PV al que denominaremos “Outgrup” y el otro grupo de cepas que provienen de

aislamientos de animales domésticos y el hombre al que denominaremos Grupo Variante 1, el

análisis filogenético además permite evidenciar que este ultimo grupo se puede observan sub

grupos de transmisión del virus de la rabia según año y especie. (Imagen N° 2)

En el grupo Variante 1 se puede observar 3 sub grupos bien definidos al que denominaremos

Var 1a, Var 1b, Var 1c y un sub grupo al que denominaremos de transmisión el cual se

encuentra dentro del sub grupo Var 1c, en el grupo Var 1a se encuentran todas las cepas del

año 1998 y dos cepas del año 1999 los cuales corresponden a muestras procedentes de las

provincias de San Román, Azangaro y Yunguyo y que tuvieron como animal afectado a los


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canes, en el grupo Var 1b se encuentran cepas de los años 2001 al 2003, estas proceden de

las provincias fronterizas con Bolivia como son Chuchito y Yunguyo y las muestras

corresponden a canes y alpaca, el grupo Var 1c agrupa cepas de los años 1999 al 2002 que

proceden de las provincias de Azangaro, Chuchito y Melgar y los afectados fueron el hombre,

canes y porcinos, este grupo presenta la mayor distribución geográfica en el departamento que

va desde la provincia fronteriza con Bolivia hasta las provincias de Azangaro y Melgar, además

dentro de este grupo se encuentran aquellas cepas que no reaccionaron con el monoclonal 12

observándose también que las cepas 221-99 y 9807-99 son idénticas y que se diferencias de la

cepa 10104-99, además dentro de este sub grupo se encuentra el grupo de transmisión el cual

se extinguió en el año 2001.

El árbol filogenético también mostró que la cepa del Bovino 22144-01 procedente del Distrito de

Puno presenta diferencias significativas con los grupos antes mencionados por lo que es

ubicado fuera de los grupos antes mencionado pero corresponde al grupo de la variante 1.

CONCLUSIONES

El uso de anticuerpos monoclonales dirigidos contra determinantes antigénicos de la

nucleocápside viral del virus rábico ha permitido determinar la variante antigénica que circula

en este departamento, la caracterización genética y filogenia demostró la presencia de sub

variantes antigénicas los que se diferencian según distribución geográfica y temporalidad

además de determinar la interrelación que se establece entre las especies que actúan como

reservorio o transmisores de la enfermedad en la naturaleza. Estos resultados son

determinantes en las actividades de vigilancia, prevención y control de esta enfermedad para

orientar los planes de vacunación del ganado y las mascotas.

Además nuestro estudio demostró que la única variante antigénica que circula en el

departamento corresponde la variante antigénica 1 que a su vez presenta sub variantes de

acuerdo a la ubicación geográfica y al tiempo en el cual aparecieron. Asi por ejemplo en el

lapso de tiempo del año 1999 y 2001 se presento una sub variante Var 1c el mismo que


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desapareció el año 2001, y simultáneamente para ese año apareció una nueva sub variante

Var 1b que perduro solo en los distritos de Chuchito y Yunguyo hasta el 2003.

Las cepas que no fueron identificados como variante definida corresponden a una sub variante

antigénica Var 1c y es además el que tuvo mayor distribución en lo referente a área geográfica.

El secuenciamiento genético demostró que en este grupo Var 1c están las muestras 221-99,

9807-99 que son idénticas y 10104-99 que se diferencias de las dos anteriores pero que

pertenecen a la misma sub variante y todas estas muestras provienen de la provincia de

Chucuito y circularon en el año 1999; es probable que el linaje viral en esta provincia haya sido

particular comparado con los otros virus que circulaban en otras provincias de Puno en ese

mismo año, esta hipótesis se ve reforzado por el análisis antigénico que no pudo determinar la

variedad de estos virus, por otro lado no se puede descartar que la presión de selección del

sistema inmune del porcino y el humano pudieran también actuar como un determinante de

diferenciación frente a los virus circulantes en otros lugares.

Lo planteado anteriormente se visualiza mejor al analizar el árbol consenso que se obtiene de

todos los árboles mas parsimoniosos que se obtuvieron al hacer el análisis filogenético. En este

árbol se observa claramente que los virus de la variante 1 no tienen un ancestro común o por lo

menos no lo hemos encontrado y que todos aparecieron en un tiempo determinado, esto es

consistente con el alto intercambio de animales (canes) entre Puno y Bolivia ha genera un

elevado flujo de cepas virales entre las ciudades fronterizas (Imagen N° 3)

Finalmente ha de notarse que el virus obtenido de un Bovino es completamente diferente a las

muestras analizadas, esto nuevamente es una clara evidencia que la presión de selección del

sistema inmune del bovino puede jugar un rol preponderante en la variación genética del virus

y refuerza lo mencionado anteriormente.

Finalmente Los estudios filogenéticos de muestras de perro en otros países comparados con

los resultados obtenidos demuestran que forman un grupo monofiletico claramente

diferenciado.


10

Referencia Bibliografica

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Anexos

Cuadro N° 1

Patrones de reacción de las diferentes variantes antigénicas con los anticuerpos monoclonales

C1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 19 Ag V

CVS + + + + + + + + Lab.

Perro/mangosta + + + + + + - + 1

Perro + + - + + + - + 2

Vampiro - + + + + - - + 3

Tadarida Brasiliensis - + + + + - - - 4

Vampiro - + V + + V - V 5

Lasiurus cinereus V + + + + - - - 6

Zorro de Arizona + + + - + + - + 7

Zorrilo Centro/ Sur - + + + - + + + 8

Tad. Bra. Mex. + + + + + - - - 9

Zorrillo + + + + - + - + 10

Vampiro - + + + - - - + 11

Clasificación de Mattos y de MattosV: variable.


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Cuadro N° 2 Resultados frente al panel de Anticuerpos Monoclonales

Panel de Anticuerpos Monoclonales

N° Cod Lab/INS

Provincia Distrito Especie1 4 9 10 12 15 18 19

Var Antig

1 7314-98 San Román Juliaca Can + + + + + + - + 12 7456-98 San Román Juliaca Can + + + + + + - + 13 8153-98 Azangaro J.D. Choquehuanca Can + + + + + + - + 14 8418-98 Azangaro J:D Choquehuanca Can + + + + + + - + 15 8801-98 San Roman Juliaca Can + + + + + + - + 16 8901-98 San Roman Juliaca Can + + + + + + - + 17 9331-99 Puno Acora Can + + + + + + - + 18 9806-99 Chuchito Juli Porcino + + + + - + - + ?9 9807-99 Chucuito Juli Porcino + + + + - + - + ?

10 10104-99 Chucuito Zepita Porcino + + + + - - - + ?11 10105-99 Chucuito Zepita Porcino + + + + + + - + 112 221-99 Chucuito Kelluyo Humano + + + + - + - + ?13 352-99 Lampa Lampa Sin Esp. + + + + + + - + 114 426-99 Yunguyo Yunguyo Can + + + + + + - + 115 504-99 Chucuito Pomata Can + + + + + + - + 116 709-99 Azangaro Arapa Can + + + + + + - + 117 906-99 Puno Puno Can + + + + + + - + 118 1923-99 Puno Puno Can + + + + + + - + 119 1924-99 Puno Puno Can + + + + + + - + 120 2640-99 Yunguyo Yunguyo Can + + + + + + - + 121 2900-99 Puno Santa Rosa Can + + + + + + - + 122 3737-99 Puno Puno Can + + + + + + - + 123 3793-99 Huancane Huancane Bovino + + + + + + - + 124 4174-99 Puno Puno Can + + + + + + - + 125 4425-99 Azangaro Saman Can + + + + + + - + 126 4692-99 Azangaro Arapa Can + + + + + + - + 127 5787-99 Yunguyo Yunguyo Can + + + + + + - + 128 4384-00 Azangaro Asillo Can + + + + + + - + 129 4387-00 Azangaro Azangaro Can + + + + + + - + 130 7012-01 Melgar Orurillo Can + + + + + + - + 131 7013-01 Melgar Orurillo Can + + + + + + - + 132 7015-01 Yunguyo Yunguyo Can + + + + + + - + 133 22144-01 Puno Puno Bovino + + + + + + - + 134 40777-01 Melgar Umachiri Can + + + + + + - + 135 40778-01 Azangaro Azangaro Can + + + + + + - + 136 40781-01 Chucuito Pomata Bovino + + + + + + - + 137 40782-01 Chucuito Zepita Porcino + + + + + + - + 138 40783-01 Chucuito Desaguadero Can + + + + + + - + 139 40784-01 Chucuito Zepita Can + + + + + + - + 140 40787-01 Chucuito Desaguadero Can + + + + + + - + 141 40788-01 Chucuito Huacullani Can + + + + + + - + 142 40789-01 Chucuito Pomata Can + + + + + + - + 143 40790-01 Chucuito Huacullani Porcino + + + + + + - + 144 37476-02 Yunguyo Pomata Can + + + + + + - + 1


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Cuadro N° 3

Muestras seleccionadas para el estudio genetico

N° Cod Lab/INS

Provincia Distrito Especie

1 7314-98 San Román Juliaca Can2 7456-98 San Román Juliaca Can3 8153-98 Azangaro J.D. Choquehuanca Can4 8801-98 San Roman Juliaca Can5 9807-99 Chucuito Juli Porcino6 10104-99 Chucuito Zepita Porcino 7 221-99 Chucuito Kelluyo Humano8 426-99 Yunguyo Yunguyo Can9 709-99 Azangaro Arapa Can

10 4387-00 Azangaro Azangaro Can11 7012-01 Melgar Orurillo Can12 7015-01 Yunguyo Yunguyo Can13 22144-01 Puno Puno Bovino14 40787-01 Chucuito Desaguadero Can15 37476-02 Yunguyo Pomata Can16 5020-03 Yunguyo - Bolivia Yunguyo - Bolivia Alpaca17 CVS18 PV


15

Imagen N° 1 Amplificación del gene de la nucleoproteina por RT – PCR

PM Marcador de Peso Molecular1 = Muestra 12 = Muestra 23 = Muestra 34 = Muestra 45 = Muestra 56 = Muestra 67 = Muestra 7

Imagen N° 2 Árbol generado por Máxima Parsimonia


16

Imagen N° 3 Árbol parsimonico consenso


17

Secuencias genéticas de cepas de virus fijo y cepas del departamento de Puno en el periodo 1998 – 2002

Muestra N° 7314-98catgatggatatgcacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattcatcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtctcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatctgccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttccttttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagggatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa

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Muestra N° 10104-99catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattcatcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatctgccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttccttttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagggaactgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacgtgaccaacggcatttgaggaatta

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Muestra N° 7012-01catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcaatctctttagtcgacctccattcatcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtctcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatctgccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttccttttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagggatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatggaata

Muestra N° 7015-01catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattcatcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatctgccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttccttttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagggatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa

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Cepa CVScatgatggatatatacaatctatagatttctgggcaccctggtcaatcaactccttatgagtcattcgaatacgtcttggtttaaaaattcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgactgagacatatctccgtatatgagatctcttcagtcgacctccattcatcatgattcgagtatagacagcttctggacttctggtttcaccagagaaatagtcctcgtcatcagagttgacggttccgtcatctgccagtgccacgtcggactttgttagttcagccgcctcatattcttgaagttctttctcgtctctgaagaaccttctttcaaatgtcccttttccgaagaattcctctcccaaatagccccctagaacagacatctcatgaggggcacatgcagcaataaccgtcgcatttagagatctgacttgacccatgtagcatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccgacagcattcgatgaataa


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Efecto o impacto de los resultados obtenidos

En la actualidad en nuestro país la ejecución de programas de vacunación antirrábica en perros

ha permitido que los casos de rabia en animales domésticos disminuya considerablemente, y

solo se circunscriba a determinadas áreas tales como el departamento de Puno, sin embargo

con los resultados obtenidos en este estudio es importante efectuar investigaciones mas

detalladas y ver la evolución del virus y determinar el porcentaje de mutación que ocurre en

todo el gen de la nucleoproteína N. también es importante continuar con estudios de

epidemiología molecular para determinar la fuente de donde proceden el cual podría realizarse

realizando trabajos con el vecino país de Bolivia en donde los casos de rabia urbana son mas

abundantes.

Estrategias de divulgación

Los resultados serán divulgados en la revista institucional

caracterizacion antigenica y genetica para determinar la … · caracterizacion antigenica y...

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