bouvardia ternifolia

}

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE

OAXACA

Facultad de Ciencias Qumicas

Asignatura: Fitoqumica

Titular: M.C. Elizabeth Escobar Chvez

Evaluacin Fitoqumica de la Especie:

Bouvardia ternifolia

Alumnos: Cruz Hernndez Diego Sait

Patricio Jimnez Vctor Eduardo Ros Ros William de Jess

Ruiz Ros Brbara Grisel Zrate Ramos Rosa Andrea

7mo Semestre Grupo: A

Ciclo Escolar: 2014 2015

Enero de 2015, Oaxaca de Jurez; Oaxaca

Fitoqumica. Facultad Ciencias Qumicas- UABJO

1

NDICE

1. INTRODUCCIN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2. OBJETIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.1 General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4

2.2 Especficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4

3. MARCO TERICO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5

3.1 Antecedentes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

3.2 Generalidades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5

3.2.1 Localizacin del lugar de muestreo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

3.2.2 Especie recolectada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

3.3 Marco Referencial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

3.3.1 Colecta y Herborizacin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

3.3.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

3.3.3 Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . 9

3.3.4 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo. . . . . . . . . . . . 10

3.3.5 Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes

disolventes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

4. MARCO METODOLGICO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

4.1 Colecta y Herborizacin de las plantas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11

4.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

4.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo. . . . . . . . . . . . . . . . . 12

4.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . 12

4.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes. . . .13

4.5.1 Fraccin A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

4.5.2 Fraccin B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

4.5.3 Fraccin C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

4.5.4 Fraccin D. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

4.5.5 Fraccin E. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

4.6 Determinacin de metabolitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

4.7 Determinacin de saponinas, Cumarina y aminocidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

4.7.1 Saponinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

4.7.2 Protenas-Aminogrupos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15

4.7.3 Reconocimiento de cumarinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

5. RESULTADOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

5.1 Colecta y Herborizacin. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

5.2 Diafanizado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

5.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo. . . . . . . . . . . . . . . . . 16

5.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . 17

5.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes. . . .18

5.6 Determinacin de metabolitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18

5.6.1 Fraccin A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18


2

5.6.2 Fraccin B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

5.6.3 Fraccin C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

5.6.4 Fraccin D. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

5.6.5 Fraccin E. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

5.7 Determinacin de saponinas, Protenas-Aminogrupos y Cumarinas. . . . . . . . . . . . . . . .21

6. CONCLUSIONES. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

7. GLOSARIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23

8. ANEXOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

9. REFERENCIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36


3

1. INTRODUCCIN

La herbolaria, conocida tambin como medicina alternativa, es una tradicin mdica muy

antigua, basada en el uso de plantas y hierbas para prevenir y curar enfermedades, la

Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce su efectividad al incluirla en los esquemas

pblicos de salud.

La tradicin herbolaria es el conocimiento de las propiedades curativas de las plantas en

Mxico ha sido y sigue siendo un recurso para buscar la cura a las enfermedades ms comunes.

Nuestro pas ha sido geogrficamente privilegiado, ya que posee una de las floras ms ricas en el

planeta. Y su herbolaria se ha enriquecido por la observacin y paciencia de los pueblos que

durante siglos, han buscado su poder en la curacin. Todos los pueblos del mundo han usado las

plantas medicinales para atender sus problemas de salud y una gran mayora, siguen haciendo uso

de ellas actualmente. Los mdicos tradicionales y sus plantas medicinales han dejado de ser

calificados negativamente y comienzan a establecerse programas y proyectos para la

investigacin, aplicacin e industrializacin de los productos.

La Herbolaria Mexicana es muy variada y antigua, los indgenas mexicanos la utilizaban y lo

siguen haciendo hasta nuestros das. La importancia y relevancia de las plantas medicinales en

Mxico es conocida a nivel mundial. Desde tiempos antiguos la naturaleza ha sido la fuente de

recursos ms valiosa que el ser humano ha tenido a su disposicin, le ha proporcionado no solo

alimento sino que adems, le ha ayudado a recuperar o mantener su salud.

El hombre primitivo empez a utilizar las hojas, races, frutos y semillas de las plantas, probando

y experimentando, sin saber para qu servan ni cmo funcionaban, pero aprendiendo de sus

experiencias y trasmitiendo ese conocimiento de generacin en generacin. Hoy tenemos acceso a

diferentes fuentes de informacin y contamos tambin con estudios que confirman como las

plantas adems de servir de alimento nos pueden ayudar a mejorar nuestra salud.

Cada planta posee un aroma caracterstico, un grupo de propiedades e indicaciones en la que

puede ser utilizada. Los aceites esenciales obtenidos de diferentes plantas han sido usados para

propsitos teraputicos desde hace cientos de aos. Chinos, hindes, egipcios, griegos y romanos

usaron los aceites esenciales en medicinas, cosmticos y perfumes.


4

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo general

Llevar a cabo la identificacin de la especie recolectada, as como sus propiedades

fitoqumicas; mediante las pruebas qumicas, pruebas estructurales macroscpicas y

microscpicas.

2.2 Objetivos especficos

Colecta y herborizacin

Desarrollar una coleccin de plantas con el objetivo de emplearlas como material didctico.

Desarrollar la tcnica de colecta y herborizacin, llevando a cabo el proceso de prensado,

secado, identificacin, etiquetado y encamisado; para su entrada al herbario.

Diafanizado

Desarrollar la tcnica de Dizeo de Strittmater (diafanizado) permitiendo la clarificacin del material vegetal para el grado de resolucin en la identificacin y caracterizacin de la

especie de la planta. Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna:

Familiarizarse con las tcnicas ms comunes que existen para preparar una columna

cromatografa, la tcnica de elusin y recoleccin de fracciones.

Obtener destreza en separar componentes de una muestra vegetal.

Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo:

Reconocer una droga vegetal a travs de una marcha que involucre pruebas microscpicas.

Realizar pruebas de identificacin de estomas, tricomas, oxalato de calcio, carbonato de

calcio y almidn.

Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes disolventes:

Aplicar una marcha sistemtica y establecer los principales grupos fitoqumicos presentes.

Obtener un extracto total (crudo o bruto) del material vegetal seco y molido.

Fraccionar el extracto total para su posterior anlisis qumico.


5

3. MARCO TERICO

3.1 Antecedentes

En el siglo XVI, Bernardino de Sahagn refiere: se usa como antipirtico, posteriormente,

Francisco Hernndez comenta: dado que la naturaleza de esta planta es caliente, seca y

astringente, se administra en los que sufren cansancio, ya que los fortalece y reanima; de igual

modo el polvo de las races cura eficazmente las llagas antiguas, encontrndose ms informacin

hasta el siglo XX en Maximino Martnez, que indica que es antidisentrico, antiespasmdico,

antirrbico, antitusgeno, para calor de corazn, estimulante y en hematemesis.

En sus estudios fitoqumicos realizados, se han aislado de las partes areas de esta planta

componentes peptdicos como el bouvardn que es un hexapptido cclico, formado por 2 L-

alaninas, una D-alanina y 3 N-metil-L-tirosinas modificadas, adempas posee un anillo formado por

el acoplamiento oxidativo del oxgeno fenlico de una tirosina por el carbono orto del grupo

hidroxil fenlico de una tirosina adyacente (Jolad et al 1997) adems de los derivados desoxi y

metilados (Shivanand et al., 1997). En la su raz existe una elevada concentracin de los cidos

urslico y oleanlico (Prez et al.- 1998.), los cuales poseen actividades antiinflamatorias,

analgsicas, sedantes, hepatoprotectoras y sobretodo de inhibicin de la enzima acetil

colinesterasa (Chung et al., 2001; Jimpenez- Ferrer et al., 2015 (este ltimo utilizado como

tratamiento para contrarrestar la prdida progresiva de la memoria: Alzheimer).

Estudios farmacolgicos comprueban que el extracto metablico de las partes areas

presentan actividad antitumoral y citotxica; mediante una evaluacin en ratn administrados por

va intraperitoneal. La actividad citotxica fue observada en clulas tumorales de carcinoma in

vitro a una concentracin de 20 g/ml (Argueta, 1994). Los extractos hexnico y metanlico

presentaron efecto inhibitorio de la accin txica del veneno de Centruroides limpidus limpidus en

ratones (Jimnez- Ferrer et al., 2005). Se demostr en estudios preliminares que el Bouvardn

tiene alta efectividad contra la leucemis P388 y es ligeramente activo contra el melanoma B16.

Como antitumoral inhibe de la sntesis de protenas (Johnson et al., 1978). Adems tien un elevado

efecto contra el ciclo de divisin celular en el cultivo de clulas de Hmster Chino (Tobey et al.,

1978)

3.2 Generalidades

3.2.1 Localizacin del lugar de muestreo

Municipio de Ixtln de Jurez.

El lugar que se elijio para llevar a cabo la recoleccion de la planta a identificar fue el minicipio

de Ixtln de Jurez en el centro ecoturstico denominado Ecoturixtln que pertenece a este

municipo, el cual se encuentra aproximadamente a 3.1 km de distancia del centro de este

minucipio y aproximadamente a 2.5 km de distancia de la localidad de capilalpan de mendez. Es

sitio exacto donde se llevo a cabo la recoleccion tiene las siguentes coordenadas: latitud

1719'46.15"N y longitud 9627'27.04"O.


6

El lugar de recoleccin se encuentra a unos 500 metros de la entrada del centro ecoturstico ECOTURIXTLN

El municipio de Ixtln de Jurez se encuentra hacia el noroeste de la cuidad de Oaxaca de

Jurez que es la cudidad capital (ruta en color rojo) aproximadamente a 39 km de distancia; el sitio

elejido para la recoleccion de igual manera se encuentra hacia el noroeste de la ciudad capital en

el centro ecoturstIco ECOTURIXTLN (ruta amarilla) aproximadamente a 41.3 km de distancia.

Fig 1. Localizacin geografa del lugar de muestreo. Cortesa Google earth

Fig 2. Lugar de entrada al sitio de muestre; Ecoturixtlan. Cortesa Google earth


7

3.2.2 Especie Recolectada

Bouvardia ternifolia

Reino: Plantae

Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares)

Superdivisin: Spermatophyta (plantas con semillas)

Divisin: Magnoliophyta (plantas con flor)

Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas)

Subclase: Asteridae

Orden: Rubiales

Familia: Rubiaceae

Gnero: Bouvardia

Especie: Bouvardia ternifolia

Descripcin

Es una planta herbcea, que llega a alcanzar los 3 m de altura, en el tallo y ramos hay presencia

de pelos blancos y cortos, sus hojas pueden ser de forma linear, lanceoladas o elpticas pero en la

mayora de los casos son de forma elptico-lanceoladas, llegan a medir de 1 a 10 cm de largo y 0.2

a 2.5 cm de ancho, tienen un pice agudo, base cuneiforme, nervacin pinnada y comnmente

verticiladas, en nmero de 3 a 4 por nodo, los peciolos miden entre 0.5 y 11 mm de largo, su

inflorescencia se encuentra de la parte terminal de las ramas en nmero de 3 a 40, con pedicelos

de 2 a 14 mm de largo. Las flores tienen corola de forma tubular de color salmn, rojo o naranja,

Fig 3. Distancia entre el la capital Oaxaca de Jurez y el sitio de muestreo Ecoturixtlan. Cortesa Google earth

Fig 4. Especie recolectada; Bouvardia ternifolia. Cortesa de www.Conabio.gob


8

en raras ocasiones de color blanco, el tubo mide de 5 a 30 mm de largo, con un anillo velloso

interno hacia la base, sus anteras miden de largo entre 2 y 4 mm, los lbulos de cliz son de forma

lanceolada o lineares con una longitud de 2 a 10 mm. . El fruto es una cpsula de 4.5 a 9mm de

largo y de 5 a 10 mm de ancho sin pelos; sus semillas miden de 2 a 3.5 de ancho (Rzedowski et al.,

2001).

Usos

Es utilizada para problemas del sistema circulatorio y digestivos, infecciones, desrdenes

mentales, nerviosos, inflamacin, problemas en el embarazo, parto, desrdenes del sistema

respiratorio, envenenamientos y dolor, as como para la disentera, rabia, clicos y diarrea,

sangrado, tambin se usa como tnico cardiaco, sus hojas y flores se usan para la erisipela, en

forma de cataplasma o ingerida como infusin es usada contra piquetes de insectos (plantas

completa o semillas). Hervida y tomada como t se usa contra el prurito. (Argueta, 1994; Aguilar-

Contreras et al., 1998).

Distribucin geogrfica

Es originaria de Mesoamrica y de Mxico. Se distribuye en zonas de bosque de pino-encino,

pastizales y matorral xerfilo, se le ha encontrado hasta los 300 msnm. En los Estados Unidos de

Amrica se ha localizado en los condados de Texas, Nuevo Mxico y Arizona, en Mxico en los

estados de Chihuahua, Coahuila, Distrito Federal, Durango, Guanajuato, Hidalgo, Estado de

Mxico, Michoacn, Morelos, Nayarit, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, Quertaro, San Lus Potos,

Sinaloa, Sonora, Tamaulipas, Tlaxcala, Veracruz (Villaseor et al., 1998). En Mxico se le conoce

como Donita, nucppuetel, candelilla, doto, en el estado de Sinaloa se le conoce como hierba del

indio, hierba de pasmo, en Coahuila y Durango se le conoce como mirto, Trompetilla, hierba del

burro, mirto de campo (Aguilar-Contreras et al., 1998; Martnez 1979).

3.3 Marco referencial

3.3.1 Colecta y Herborizacin

La palabra herbario originalmente se refera a un libro de plantas medicinales, pero en la

actualidad denota una entidad que maneja una coleccin de ejemplares vegetales en una

secuencia de clasificacin aceptada, que est disponible para su consulta (Lpez y Rosas, 2002).

Los ejemplares contenidos en los herbarios son imprescindibles para la realizacin de estudios

florsticos, ecolgicos, fitogeogrficos y sistemticos.

Para esto debe de llevarse un proceso que consta de puntos importantes, como lo son: colecta,

prensado y secado, montaje, identificacin y etiquetado. Siguiendo pues estos pasos podemos

llegar a tener una especie lista para poder ser ingresada a un herbario

3.3.2 Diafanizado

El mtodo consiste fundamentalmente en la utilizacin de hidrxido de sodio (NaOH) diluido.

Aunque para el estudio de un sistema vascular complicado sean indispensables cortes en serie, la

diafanizacin de las flores en una solucin dbil de NaOH permite su observacin por

transparencia y puede servir, adems, como control de ejemplares seleccionados. (Mtodo

sencillo ideado por los doctores Irving W. Bailey y Charlotte G.) El NaOH no slo restablece la


9

forma y tamao originales del material seco, sino que tambin hace desaparecer las inclusiones

celulares que no dejan ver con claridad los haces. Tambin sirve para ablandar el material que

luego podr ser incluido y cortado en serie.

Se puede aplicar a hojas y a flores enteras o parte de flores (spalos, ptalos, carpelos,

estambres, etc.), para ver el sistema vascular y otros detalles. En el caso de las hojas, si son

pequeas pueden tratarse enteras, pero si son grandes conviene cortarlas en trozos transversales.

Se debe controlar el tiempo segn la consistencia de la flor u hojas.

Por lo comn el sistema vascular se ve ms claramente en alcohol por que los ejemplares sin

montar pueden ser fcilmente manejados para examinarlos desde cualquier ngulo. Para obtener

preparaciones definitivas se puede montar el material sin colorear pasndolo por alcohol absoluto

(96%). La claridad de la disposicin de los hacecillos depende del ndice de refraccin del medio y

de la consistencia de los tejidos. La solucin de hidrato cloral se aade con el propsito de

quitarle opacidad. Los doctores Irving W. Bailey y Charlotte G. han credo que la tcnica de

diafanizado ha pasado a ser inadvertida ya que al ser una tcnica sencilla puede ser de utilidad

aadiendo observaciones personales a materiales de herbario.

3.3.3 Separacin de pigmentos vegetales por cromatografa en columna

La cromatografa en columna se emplea en la separacin de mezclas y purificacin de

sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa generalmente, slice o almina

contenida en una columna. El disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o

bien por aplicacin de la presin. El tamao de la columna est determinado por la cantidad de

mezcla a separar. La velocidad a la cual el disolvente fluye a travs de la columna se denomina

velocidad de elusin y es importante en la efectividad de la separacin.

El tiempo que la mezcla a separar permanece en la columna es directamente proporcional a la

magnitud de equilibrio entre la fase mocil y estacionaria. Compuestos similares pueden

eventualmente separarse si permanecen en la columna el tiempo suficiente. El tiempo que una

sustancia permanece en la columna, depende de la velocidad de flujo del disolvente y esta es

afectada en gran medida por el empaquetamiento de la fase estacionaria dentro de la columna y,

en menor medida, por la presin y temperatura del sistema.

Pasos a seguir en una cromatografa en columna:

1. Preparacin de la columna: se mezcla el adsorbente con el disolvente y se vierten en el

interior de la columna. Previamente se coloca en el extremo inferior un trozo de algodn

o lana de vidrio, para evitar que el absorbente se escape por el extremo de la columna.

Existe una gran variedad de absorbentes como son: silica gel, oxido de aluminio, carbn

activado, silicato de magnesio, celulosa, almidn, etc.

2. Siembra de la columna: la muestra, disuelta en el disolvente, se introduce por la parte

superior de la columna y se deposita sobre la superficie del adsorbente. Deber

presentar un aspecto de disco de espesor delgado y uniforme. Si la muestras es lquida se

puede sembrar directamente, si es slida se siembra una solucin concentrada de la

misma es un disolvente adecuado de baja polaridad.

3. Desarrollo/elusin de la muestra: una vez sembrada la muestra se permite el paso de la

fase mvil a travs de la fase estacionaria y se van recogiendo fracciones consecutivas

del eluyente, que sern examinadas posteriormente para determinar su composicin.


10

3.3.4 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en drogas en polvo

Los estomas son pequeos poros de las plantas localizadas en la superficie de sus hojas.

Constan de dos grandes clulas de guarda y oclusivas rodeadas de clulas acompaantes. La

separacin que se produce entre las dos clulas de guarda llamada ostiolo regula el tamao total

del poro y, por tanto, la capacidad de intercambio de gases y de prdida de agua de la planta.

Los tricomas son apndices epidrmicos de forma, estructura y funciones muy diversas dentro

de los tricomas se consideran los pelos granulares y protectores, las escamas, diferentes tipos de

papilas, y tambin los pelos radicales.

El carbonato de calcio puede encontrarse impregnado o incrustado en las paredes de las

clulas o como proyecciones de dichas paredes, conocidas como cistolitos. Se encuentra en las

hojas de Cannabis sativa y en plantas de las familias Urticaceae, Moraceae, Cannabinaceae,

Acanthaceae y otras. El carbonato de calcio se identifica por el hecho de que se disuelve con

efervescencia en presencia de cido actico, clorhdrico y sulfrico.

El oxalato de calcio se encuentra en forma de cristales caractersticos de mucha importancia en

el diagnstico para identificar las drogas vegetales; estos cristales se forman a causa del exceso de

oxalato de calcio en las clulas o del exceso del cido oxlico en las clulas. Las formas ms

comunes de oxalato de calcio son: prismas (en hojas de sen, hiosciano, madera de cuasia, races de

glicirrhiza, corteza de cscara sagrada), rosetas (en rizomas de ruibarbo, hojas de estramonio)

agujas (races de ipeca y corteza de canela), rafidios o grupos de agujas (bulbos de escila) y

microcritales o arena.

Fig 5. Preparacin de una Columna para CC.

Fig 6. Diferentes cristales que pueden encontrarse en la prueba de oxalato de calcio.


11

Estos cristales se identifican por su insolubilidad en una solucin de cido actico o de

hidrxido de sodio y su solubilidad sin efervescencia en una solucin de cido clorhdrico.

El almidn tiene una importancia farmacutica considerable. Existe en forma de granos de

varios tamaos en casi todos los organismos de la planta, en especial en las races, rizomas, frutos

y semillas. El almidn se identifica mediante examen microscpico y se confirma por el color azul

que se desarrolla frente a una solucin de lugol. El almidn es un polisacrido vegetal formado por

dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo

debido no a una reaccin qumica sino a la adsorcin o fijacin de yodo en la superficie de la

molcula de amilosa. Como reactivo se usa una solucin de Lugol que contiene yodo y yoduro de

potasio.

3.3.5 Extraccin selectiva de componentes en un material vegetal con diferentes disolventes

El estudio fitoqumico de una droga vegetal de la que se conocen usos populares o informacin

de toxicidad, se realizan con la finalidad de aislar y poder identificar los diferentes tipos de

compuestos que en la planta se llegan a biosintetizar (cuales pueden tener o no alguna actividad o

toxicidad); proceso que recibe el nombre, tamizaje fitoqumico, marcha fitoqumica, estudio

fitoqumico sistmico, o screening fitoqumico.

El proceso de screening fitoqumico consiste en poder efectuar una extraccin del material

vegetal que permita obtener la mayor parte de los constituyentes qumicos (extracto total). Por

esta razn es conveniente usar un solvente universal que solubilice la mayora de los compuestos,

siendo los ms usados, el metanol y el etanol. El extracto total se fracciona mediante cambios de

pH y particin con solventes de menor polaridad (generalmente usado el cloroformo), obteniendo

as una serie de fracciones sobre las que se realizaran ensayos, los cuales nos permitirn obtener

datos sobre los grupos fitoqumicos presentes en la muestra vegetal.

4. MARCO METODOLGICO

4.1 Colecta y Herborizacin de las plantas

El primer paso consisti en la colecta de la planta a estudiar, donde para ser considerada,

aparte de la subjetividad por parte d equipo de trabajo, como es la apariencia agradable, se tom

encueta que el sitio deba ser hmedo y que la planta ocupara suficiente rea alrededor del sitio.

Se cortaron 5 ejemplares de manera cuidadosa localizadas en un rea de 1 metro, cuidando que

estuviera en condiciones adecuadas (se excluyeron las plantas maltratadas tanto por predadores

como por el ambiente) y se colocaron por separado entre un pliego de papel peridico, se rotulo el

papel enumerando del 1 al 5, se anot la fecha, la temperatura prxima y habiendo terminado de

rotular colocamos los peridicos entre dos pedazos de cartones con un tamao similar al contorno

de la prensa donde se aseguraron y guardaron los ejemplares para su trasporte, conservacin y

secado antes de realizar los estudios. Tambin se recolectaron de manera arbitraria una gran

cantidad de aproximadamente 200 gramos de los ejemplares, para realizar las extracciones

necesarias. Una vez trasportado las muestras al laboratorio se continu con el secado. Para esto se

sigui el siguiente curso: a) durante los 5 das siguientes a la colecta el peridico fue cambiado


12

diariamente y siendo rotulado, registrando la fecha para llevar el curso del secado; b) a partir del

da seis posteriores a la colecta, se cambiaba cada dos das el papel peridico. En este momento la

planta y presentaba mayor sequedad; y pasados 15 despus de la colecta, los ejemplares estaban

completamente secos y ya no se les cambiaron los peridicos.

Una vez seco, montamos una de las plantas sobre cartulina y la sujetamos con hilo de algodn

para fijarlo a la cartulina. Despus de haber montado la planta, etiquetamos con todas sus

caractersticas y propiedades despus de haber hecho todos los estudios correspondientes.

4.2 Diafanizado

Se toman 3 hojas de la planta, cortndolo desde del brazo que lo une a la rama. Introducimos

las hojas en un vaso de precipitado de 100 ml, las cubrimos con etanol completamente y dejamos

ebullir el etanol durante 10 minutos (el tiempo en que las hojas se decoloraron) Inmediatamente

agregamos sobre el vaso un volumen de hidrxido de sodio al 5% similar a la cantidad de alcohol

sobrante despus de la ebullicin y mantenemos en calentamiento. Cuando se evaporo la mayor

parte de la mezcla alcoho-hidroxido lavamos 3 veces con agua destilada, y adicionamos hipoclorito

de sodio comercial hasta cubrir las hojas realizando pequeas movimientos. Desechamos y

lavamos con agua destilada 3 veces una vez que se observa el aclaramiento de las hojas. Despus

de aclarar las hojas, las colocamos en una placa de vidrio y vertimos sobre ellas hidrato de clorato

hasta baarlas por completo y dejamos secar.

4.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo

Despus diafanizado se realizaron una serie de procedimientos (pruebas) para determinar

primeramente la observacin de estomas, el en cul con ayuda de un bistur se ras la parte

superior de la hoja diafanizada, agregando safranina por un minuto y posteriormente un lavado

con agua para la eliminacin de exceso llevndolo directamente al microscopio a 10x con el fin de

observar y clasificar al tipo de estoma perteneciente. Para la presencia de carbonatos de calcio en

nuestra hoja, se coloc una pequea cantidad de muestra en un tubo de ensayo y adicionamos

cido sulfrico diluido con el fin de determinar la presencia de carbonatos de calcio al haber

efervescencia. En nuestra tercera prueba; la determinacin de almidn se mont en un

portaobjetos con un poco de muestra en agua y se llev al microscopio para la observacin de

grnulos seguido de la adicin de una gota de Lugol para observar si stos (los grnulos) se tenan

en azul con el fin de confirmar la presencia de almidn en nuestra muestra. En nuestra ltima

prueba, la observacin de tricomas epidrmicos (pelos) en un portaobjeto se coloc un poco de

muestra donde adicionamos hidrato de cloral que posteriormente se calent suevamente (en

parrilla elctrica); la observacin se hizo al microscopio 10x y 40x.

4.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna

Se elabor una columna cromatografa haciendo uso de una pipeta Pasteur. Para ello, primero

se coloc un poco de algodn en la punta de la pipeta, posteriormente se llen a la mitad con

silica gel, luego se le agregaron partes iguales (de la mitad restante) primero de carbonato de

calcio y posteriormente de azcar glass. En el extremo final se le coloc otro pequeo tapn de


13

algodn. Simultneamente a la elaboracin de la columna cromatogrfica, en un mortero se

coloc un poco de muestra de la planta recolectada y se tritur agregndole un poco de ter de

petrleo. Despus de triturada, a esa misma mezcla se le agreg 1 ml de CCl4 y 1 ml de metanol.

La columna cromatogrfica elaborada se fij a un tubo, despus se le agreg la cantidad suficiente

de la muestra (que previamente fue mezclada con los disolventes antes mencionados) hasta que el

algodn de la parte superior de la columna se humedeci, posteriormente se le agreg disolvente

(una mezcla de ter de petrleo, tetracloruro de carbono y metanol) hasta casi llenar el espacio

sobrante de la pipeta Pasteur. Con ayuda de una jeringa se efectu vaco. La mezcla de disolvente

se agreg en fracciones hasta que se lograron observar los cuatros colores, lo que indic la

separacin de los distintos componentes de nuestra muestra.

4.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes

4.5.1 Fraccin A

Para obtener la primera fraccin de la marcha se pesan 50 gramos de la muestra, se pulverizan

en un mortero, enseguida agregando etanol al 70% maceras la muestras y dejamos reposar 24

horas. Pasadas las 24 horas despus e la maceracin la muestra se llev a reflujo durante 1 hora,

posteriormente se filtra en caliente. El residuo obtenido fue lavado con una cantidad necesaria de

alcohol y filtramos nuevamente. Tanto el segundo filtrado como el primero realizado se guardaron

como fraccin A y de esta fraccin tomamos la mitad del volumen que se almaceno como fraccin

residual, mientras que el resto se llev a sequedad. Una vez seco redisolvemos con 20 ml de agua

caliente (a una temperatura entre 50-60 oC) y filtramos para obtener un filtrado acuoso cuyo

volumen fue divido en dos porciones iguales, uno para ensayar FL y LE, el otro se filtr

nuevamente para obtener u filtrado acuosos utilizado para analizar compuestos fenlicos y

taninos.

4.5.2 Fraccin B

La fraccin residual obtenida a partir de la fraccin A se llev a sequedad y despus que este

paso anterior se cumpli se le adicionaron 30 ml de HCl al 5% mientras se calentaba a una

temperatura entre 60-70 oC permaneciendo de esta manera durante 15 minutos. Filtramos en

caliente pasado el tiempo de calentamiento. El residuo obtenido del filtrado fue lavado con 20 ml

de HCl y nuevamente filtrado, donde el filtrado acuoso de este se almacena junto el filtrado

acuoso del primer filtrado en forma de filtrado acuoso cido I, mientras que el residuo se disolvi

en 30 ml de cloroformo y fue deshidratado con sulfato de sodio anhdrido, obteniendo la fraccin

B utilizado para ensayar esteroides y flavonoides.

4.5.3 Fraccin C

Al filtrado acuoso cido se le agrego 35 ml de hidrxido de amonio, alcalinizndolo a pH de

10.3. Despus realizamos una particin de la fase en dos ocasiones, en cada ocasin se le agrego

15 ml de cloroformo, conteniendo todo en un embudo de separacin y despus de mezclar

rigurosamente separamos la fase orgnica la cual fue lavada con 10 ml de agua destilada,

separando la fase orgnica de la acuosa, este ltimo se almaceno con la fase acuosa separada con

cloroformo. La fase orgnica obtenida se deshidrat con sulfato de sodio y fue filtrado, lo que se


14

almaceno como fraccin C. De este filtrado separamos una cantidad de 5 mililitros para ensayar

esteroides y cardiotnicos. El resto llevo a sequedad, se redisolvi con 10 ml de cido clorhdrico y

filtramos. Con el filtrado obtenido ensayamos alcaloides.

4.5.4 Fraccin D

De nueva cuenta la fase orgnica de esta fraccin se obtuvo haciendo uso de la fase acuosa a la

cual se le efecto una particin con 2x15 ml de cloroformo, posteriormente la fase orgnica

obtenida se lav con 20 ml de solucin semisaturada de cloruro de sodio. Despus de efectuar

dicho procedimiento se deshidrato con sulfato de sodio anhidro y se filtr. El filtrado se reparti

en tres fracciones iguales de 5 ml cada uno aproximadamente. Se guardaron en frascos mbar

rotulados como D1 utilizada para evaluar flavonoides, carotenos y leucoantocianinas, D2 para

esteroides Y D3 para alcaloides, los tres se llevaron a sequedad.

4.5.5 Fraccin E

Obtencin de la fraccin E: esta fraccin se obtuvo haciendo uso la fase acuosa a la cual se le

efecto una particin con 2x15 ml de cloroformo, posteriormente la fase orgnica obtenida se

lav con 20 ml de solucin semisaturada de cloruro de sodio. La fase acuosa despus de realizar

este procedimiento se almacena como fraccin E. A esta fraccin obtenida se le determin su pH

el cual fue de 9.9 (bsico). Despus en 7 tubos de ensayo diferentes se agregaron 1 ml de dicha

fraccin a los cuales se le agregaron gotas de HCl concentrado hasta que el contenido de 2 tubos

alcanzara pH neutro utilizado para ensayar taninos, 2 con pH ligeramente cido para ensayar

compuestos fenlicos y 3 con pH cido para ensayar flavonoides, alcaloides y leucoantocianinas.

4.6 Determinacin de metabolitos

i. Flavonoides: se tomaron 0.5 ml de la fraccin correspondiente a determinar, directamente

sin retomar con igual volumen de agua agregamos unas pequea cantidad de granallas de Zn

y 0.2 ml de HCl. Dejamos reposar durante 1 hora y esperamos a observar la aparicin de

coloracin. Despus de una hora el cambio de color purpura estaba presente. Para confirmar

adicionamos 0.2 ml de alcohol amillico con 2 ml de agua destilada para diluir.( Reaccin de

shinoda).

ii. Compuestos fenlicos: para la reaccin de FeCl3 tomamos 3 ml de la muestra y agregamos 3

gotas de FCl3 al 1%. Mientras que para la reaccin con gelatina tomamos 3 ml de muestra y

agregamos 10 gotas de solucin acuosa de gelatina al 0.5%.

iii. Esteroides: Se mezclaron 1 ml de anhdrido actico y 1 ml de cloroformo (volmenes iguales)

y se dejaron enfriar a 0C en bao de hielo. Posteriormente 2 ml de la fraccin

correspondiente se pusieron en contacto con la mezcla de reactivos anteriores y el tubo fue

colocado en bao de hielo. Se agregaron por las paredes 1 gota de H2SO4 previamente

enfriado a 0C. Enfriamos y observamos la coloracin. (Prueba de Liebermann-Burchard).

iv. Antraquinonas: Se agitaron suavemente 3 ml de la fraccin correspondiente con 5 ml de NaOH 5% y se observ el color. (Reaccin de Borntrger).


15

v. Lpidos: colocamos una gota de la fraccin correspondiente en papel de filtro y lo dejamos secar. Previamente se expuso a vapores de I2.

vi. Hidratos de carbono: se toman 2 ml de la fraccin correspondiente, le agregamos 0.5 ml de

fenol al 5%, inmediatamente sobre las paredes del tubo lentamente adicionamos 2.5 ml de H2SO4.

vii. Alcaloides: tomamos 0.2 ml de la fraccin correspondiente y agregamos 2 gotas del reactivo

de Dragendorff.

viii. Cardenlidos: sobre papal filtro agregamos una gota de la fraccin correspondiente, agregamos 0.1 ml del reactivo de Kedde.

ix. Leucoantocianinas: se toman 2 ml de la fraccin correspondiente, le agregamos 1 ml de HCl

concentrado, mezclamos y se calent en Bao Mara durante 10 minutos. Un vez enfriado le agregamos 1ml de alcohol amlico.

4.7 Determinacin de saponinas, Cumarina y aminocidos

4.7.1 Saponinas

Se calent a bao Mara aproximadamente 0.5 g de droga seca y pulverizada con 8 ml de agua

en un tubo de ensaye, durante 30 minutos. Despus se dej enfriar y el tubo de ensaye se tap

con el dedo y se agit fuertemente por 15 segundos. Se observ si se present o no la formacin

de burbujas.

4.7.2 Protenas-Aminogrupos

Reaccin de la Ninhidrina

A 1 gramo (aproximadamente) de droga se le agrega 50 ml de agua y se calent a ebullicin

durante 2 minutos. Se filtr en caliente y se concentr a 5 ml. Sobre papel filtro se coloc 1 gota

de la solucin y se dej secar. Posteriormente se adicion una gota de solucin etanlica de

Ninhidrina al 0.2 %. Por ltimo se calent en estufa a 110-120 C.

4.7.3 Reconocimiento de cumarinas

En un tubo de ensaye se coloc aproximadamente 1 gramo de material vegetal macerado y se

agreg cantidad suficiente de etanol hasta cubrir el material. Se cubri la boca del tubo de ensayo

con un papel filtro blanco y se sujet con unas pinzas para tubo de ensaye. Al papel filtro se le

adicionaron unas gotas de NaOH diluido. Y se calent hasta ebullicin por 5 minutos, se enfri y

retir el papel filtro. El papel filtro se observ bajo luz ultravioleta a 365 nm.


16

5. RESULTADOS

5.1 Colecta y Herborizacin

Se recolectaron 10 plantas completas de nuestra

especie, se prensaron y se llevaron a la facultad.

En base a las publicaciones de Diederich Franz

Leonhard von Schlechtendal, la planta recolecta es

llamada Bouvardia ternifolia, esto en base a la

comparacin de las partes de la planta como lo son:

pice: Acuminado

Borde: Aserrado

Peciolo: Peciolado

Forma: Falcada

Base: Oblicua

Lo anterior se realiz en base a unas hojas de referencia que la titular de la materia nos

proporcion (Ver anexo D)

5.2 Diafanizado

Producto obtenido durante el diafanizado. Hojas blancas,

algunas partes un tanto transparentes, producto de los cambios

qumicos contenidos en las hojas, compuestos insaturados, que al

exponerse a reactivos como el hipoclorito se producen reacciones

qumicas que dan como resultado este cambio de color o

descoloramiento. Tal y como se describi anteriormente, este

mtodo sencillsimo y que dadas a las grandes dificultades que

existen para interpretar sistemas vasculares, en base a cortes

seriados nos facilita y acelera considerablemente investigaciones

de materiales de herbario, mtodo creado por los doctores Irving

W. Bailey y Charlotte G y que adems de citar las grandes ventajas

se cree que ha pasado ser inadvertida.

5.3 Deteccin de adulteraciones y/o falsificaciones en droga en polvo

De acuerdo a Dennis Bray, 2006; los estomas son aberturas en la epidermis, localizados sobre todo en la superficie interior de la hoja, que tiene a su cargo el intercambio de gases del vegetal; este echo nos dice que entre ms cantidad de estomas estn presentes en la planta existir un mayor intercambio de gases, nuestra especie posee un estoma del tipo anisoctico o crucfera, y encontrados en pequeas cantidades, lo que nos hace pensar que el intercambio de gases de nuestra planta recolectada es poco.

Es el mismo Dennis Bray, 2006, quien menciona que los tricomas cumplen funciones de proteccin, absorcin y secrecin. En el caso de los tricomas encontrados en la especie analizada,

Fig 8. Producto terminado del proceso de diafanizado, de la especie recolectada.

Fig 7. Especie Bouvardia ternifolia. Recolectada en el lugar llamado: Ecoturixtlan.


17

Fig 11. Cromatografa en columna a escala en pipeta Pasteur.

son del tipo unicelular; esto nos hace pensar que fungen con la funcin de proteccin y almacenamiento de algunos metabolitos o componentes de la especie.

El hecho que el almidn y carbonatos nos arrojen un resultado negativo significa pues,

hablando primeramente del almidn que no posee grnulos de almidn, segn Rodrguez Ramos,

2007, el almidn juega un papel importante en la identificacin de las plantas y con un gran

inters de los arquelogos, por la evolucin que ha presentado diversas plantas con este

contenido.

Determinacin Resultado

Estomas Tipo II; anisoctico o crucfera

Tricomas Unicelulares; en forma de espinas o garras.

Almidn Negativo

Carbonatos Negativa

5.4 Separacin de compuestos vegetales por cromatografa en columna

CLOROFILA B

CLOROFILA

A

XANTOFILA

S

ANTOCIANINAS

CAROTENOS

Fig 9. Estomas observadas de la especia recolectada.

Fig 10. Tricomas que se apreciaron en la muestra.

Tabla 1. Determinaciones y resultados en la identificacin de adulteraciones o falsificaciones en drogas.

Segn Alicia Lamarque, la cromatografa

en columna es til en la separacin de

componentes, en este resultado, se puede

apreciar las diferente bandas, y por ende los

diferentes compuestos separados. Que de

acuerdo a Jimnez Suarez, estos

compuestos son en su mayora clorofilas y

carotenos.


18

5.5 Extraccin selectiva de componente en un material vegetal con diferentes disolventes

Segn Gabriel Rodrguez, 2008 (et al. Universidad Politcnica de Madrid) la extraccin con

disolventes orgnicos permite obtener extractos completos de plantas, o de las fracciones

deseadas, de calidad alimentaria y fitofarmacutica sin demasiados costos de produccin. Adems

con la finalidad de poder determinar en cada una, metabolitos que sean de utilidad.

As pues, se extrajeron los componentes de nuestra muestra para poder obtener fracciones con

diferentes tipos de solventes, que permitirn realizar pruebas especficas de identificacin de

algunos metabolitos.

Fraccin Tipo de disolucin

Fraccin A Etlica (Etanol)

Fraccin B Acida (HCl)

Fraccin C Clorofrmica (CHCl3)

Fraccin D Clorofrmica (CHCl3)

Fraccin D1 Etlica (Etanol)

Fraccin D2 Clorofrmica (CHCl3)

Fraccin D3 Acida (HCl)

Fraccin E Acuosa (H2O)

5.6 Determinacin de metabolitos

5.6.1 Fraccin A

La polaridad ser un propiedad importante de los metabolitos, pero de igual manera su

solubilidad en cada uno de los disolventes utilizados para obtener los extractos (etanoico,

clorofrmico, acuoso, cido y bsico); de modo que depender de estas propiedades que los

metabolitos estn presente en uno o en algunos de los extractos o en ninguno.

En el caso de los flavonoides, hubo presencia en el extracto etanlico debido al llevar a cabo la

reaccin de Shinoda se observ una coloracin rosa. En lo que respecta a los taninos, estos se

encontraron presentes en el extracto etanlico, llevando a cabo la reaccin con gelatina, en la que

se observ la aparicin de turbidez hasta la formacin de un precipitado. En lo que respecta a los

taninos, estos se encontraron presentes en el extracto etanlico, llevando a cabo la reaccin con

gelatina, en la que se observ la aparicin de turbidez hasta la formacin de un precipitado.

Mientras que en el extracto acuoso, su presencia fue mucho menor, ya que al llevar a cabo la

prueba con FeCl3 el cambio de color fue poco notable.

De acuerdo con los resultados obtenidos, la planta estudiada posee compuestos fenlicos en su

mayora (flavonoides, OH fenlicos y taninos). Lo cual de acuerdo con Gracia Nava Manuel, 2011

los compuestos fenlicos, entre los cuales se encuentran los flavonoides, presentan una amplia

ubicuidad en la naturaleza. Son responsables del buen funcionamiento de las plantas. Poseen una

estructura qumica adecuada para ejercer actividad antioxidante, la cual est ntimamente

relacionada con tales propiedades, por lo tanto la planta analizada tendra dichas propiedades.

Tabla 2.Fracciones obtenidas de la muestra y el tipo de disolucin obtenida (solvente).


19


Flavonoides Positivo

Taninos Positivo

OH Fenlicos Positivo

Leucoantocianinas Negativo

Lpidos Positivo

Hidratos de Carbono Positivo

5.6.2 Fraccin B

De la fraccin B, con respecto a las antraquinonas (quinonas) fue el grupo de metabolitos que

no se encontraron en la planta estudiada. Por otra parte, los triterpenos y esteroides solo se

encontraron presentes en el extracto cido, los cuales se detectaron por medio de la prueba de

Liebermann-Buchard, en dnde se obtuvo una coloracin verde azulado, lo que indica la presencia

de esteroides. Con esto se comprueba que la planta posee este tipo de metabolito y segn

Viviana castilla 2009, las plantas sintetizan una gran variedad de esteroides, los cuales le dan

ciertas capacidades como una funcin hormonal y capacidad de participar en el mecanismo de

defensa frente a la infeccin con microorganismos patgenos.


Esteroides Positivo

Antraquinonas Negativo

5.6.3 Fraccin C

De la cual lo que respecta a los alcaloides, fue el grupo de metabolitos que no se encontraron

en la planta estudiada, al igual que las quinonas y las saponinas. En lo que se refiere a las

leucoantocianinas, esteroides y cardenlidos tambin estuvieron ausentes.


Alcaloides Negativo

Cardenlidos Negativo

Esteroides Negativo


5.6.4 Fraccin D

En esta fraccin solo en la D1 dieron positivos los flavonoides con la prueba de shinoda, que

como ya se haba mencionada estos metabolitos le otorgan un buen funcionamiento a las plantas

y de acuerdo a la estructura que poseen pueden ejercer una actividad antioxidante (Gracia Nava

Tabla 3. Determinaciones y resultados realizados a la Fraccin A

Tabla 4. Determinaciones y resultados realizados a la Fraccin B

Tabla 5. Determinaciones y resultados realizados a la Fraccin C


20

Manuel, 2011 ) y los metabolitos de tipo cardiotnicos que se presentaron en una porcin

considerable, debido a que en la prueba con el reactivo de Kedde se observ una coloracin

prpura demostrando as la presencia de dichos metabolitos. De este tipo de metabolitos no se

tiene registro en esta especie pero de acuerdo a Zeinsteger 2009 los glucsidos cardiotnicos se

encuentran en varios gneros pertenecientes a las familias Apocynaceae, Asclepiadaceae,

Celastraceae y otras, existen dos grupos bsicos de glucsidos en las plantas: Cardenlidos y

bufadienolicos, ambos con efectos directos sobre a funcin cardiaca, por lo que debido a que la

prueba fue positiva se pretende creer que junco con la capacidad de las leucoantocianinas estos

compuestos le brindan una propiedad importante a la planta en el control de desrdenes

cardiovasculares.

Fraccin D1


Flavonoides Positivo

Cardiotnicos Positivo


Fraccin D2


Triterpenoides y/o esteroides

Negativo

Fraccin D3


Alcaloides Negativo

5.6.5 Fraccin E

Respecto al anlisis de compuestos fenlicos, este tipo de metabolitos fueron los ms

abundantes, debido a que se encontraron presentes en el extracto etlico y el extracto acuoso

cido. En lo que se refiere a las leucoantocianinas, hubo presencia muy considerable en el

extracto acuoso cido, llevando a cabo la reaccin de Rosenheim para su reconocimiento, y

obteniendo la presencia de un color rosa.

Con los resultados obtenidos, la planta estudiada posee compuestos fenlicos y

leucoantocianinas en su mayora a diferencia de la fraccin A que no pose estas ltimas por lo

cual de acuerdo con Gracia Nava Manuel, 2011 los compuestos fenlicos, entre los cuales se

encuentran los flavonoides, presentan una amplia ubicuidad en la naturaleza. Son responsables

del buen funcionamiento de las plantas y con la presencia de las leucoantocianinas, en su relacin

con el hombre, son utilizados para tratar desordenes cardiovasculares y prevenir algunos

cnceres. Al igual que la fraccin A se mencionara que de igual manera poseen actividad

antioxidante, se confirma en esta fraccin y que por lo tanto posee estas propiedades.

Tabla 6. Determinaciones y resultados realizados a la Fraccin D (D1, D2 y D3)


21

Fraccin E a pH neutro


Reaccin con FeCl3 Positivo

Reaccin con gelatina Negativo

Fraccin E a pH ligeramente cido (pH de 4.3)


Reaccin con FeCl3 Positivo

Reaccin con gelatina Positivo

Fraccin E a pH cido (pH de 1.3)


Flavonoides (FL) Ligeramente Positivo

Leucoantocianinas (LE) Positivo

Alcaloides Negativo

5.7 Determinacin de saponinas, Protenas-Aminogrupos y Cumarinas

El extracto se obtiene a partir de un infusin de la planta disecada con etanol, obteniendo un

extracto etanlico con el cual se evaluaron las saponinas, protenas-aminogrupos y cumarinas.

Donde se encontr presencia de protenas-aminogrupos, mediante la reaccin de la Ninhidrina al

obtener un color violeta. Mientras que la presencia se saponinas no se comprob y la presencia de

cumarinas fue muy poca. En este caso la presencia de protenas es algo lgico de encontrarse

positivas; en el caso de las cumarinas que son productos naturales que poseen una estructura que

consiste en un anillo bencnico unido a una pirona, la doctora Olga Lock de Ugaz menciona en su

manual de fotoqumica que las cumarinas son compuestos ampliamente distribuidos en las

plantas, principalmente en las familias Umbeliferae y rutaceae y que se encuentran distribuidas en

todas las partes de las plantas, y que de las cuales se ha comprobado un amplio grado de accin

biolgica, por ejemplo la accin anticoagulante, la accin antibacterial adems de aplicaciones

como saborizantes y su uso en perfumera ya que las cumarinas son aromatizantes. De igual

manera sea descrito que disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las

paredes capilares, actan como un tnico venoso por lo tanto nuestra planta poseera estas

propiedades solo en porcentaje bajo debido a que en la prueba no fue tan marcada la positividad.


Saponinas Negativo

Protenas-Aminogrupos Positivo

Cumarinas Ligeramente Positivo

Tabla 7. Determinaciones y resultados realizados a la Fraccin E, realizado a diferentes pH

Tabla 8. Resultados de las determinaciones de saponinas, protenas-Aminogrupos y Cumarinas


22

6. CONCLUSIONES

Para la caracterizacin, identificacin y/o clasificacin de una planta, los estudios fitoqumicos

correspondientes a la identificacin y valoracin de diversos metabolitos patrones, son pruebas

qumicas rudimentarias en el estudio biolgico y en el caso que nos concierne en el presente

trabajo, para la determinacin de las posibles propiedades farmacolgicas que presentan algunas

especies de acuerdo a los metabolitos que poseen.

Los resultados fsicos, micro y macroscpicos realizados a la planta recolectada determina que

se trata de la especie Bouvardia ternifolia perteneciente a la familia Rubiaceae y al gnero

Bouvardia, con nombres triviales como vara de flor, sombra de la virgen, trompetilla, lengua de

vbora, entre otras. En cuanto a sus metabolitos, al igual que en estudios retrospectivos, se tiene

que la especie contiene flavonoides, compuestos fenlicos positivos, posee esteroides entre otros

metabolitos concomitantes a otras especies con propiedades teraputicas en su gnero, validado

por los estudios previos. En este sentido podemos concluir que Bouvardia ternifolia es una especie

de planta que con los cuidados, manejos y usos adecuados, es un producto natural con

propiedades que estn en funcin de los metabolitos que posee. Siendo esta especie por su

amplia distribucin, una fuente considerable para la obtencin drogas con miras a la aplicacin

teraputica con actividades antioxidantes, siendo ensayadas y aplicadas principalmente en

afecciones cardiovasculares por dicha propiedad.


23

7. GLOSARIO

Alcaloides: se trata de compuestos nitrogenados de carcter alcalino, son producidos casi

exclusivamente por los vegetales (aunque tambin pueden producirlos algunos animales, hongos,

as como sintetizarlos qumicamente). Algunos derivaran de aminocidos (lisina, tirosina y

triptfano).

Almidn: compuesto que sirve a casi todas las plantas como reserva de carbohidratos para uso

metablico, para el embrin vegetal de las semillas y para la hibernacin natural o los periodos de

sequa.

Aminocidos: como su nombre lo indica, son molculas; cidos orgnicos que tiene un grupo

carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters,

sern aquellos que formen parte en la estructura de las protenas.

Antocianinas: compuestos localizados en las vacuolas de las clulas vegetales. Clasificados como

flavonoides; son glucsidos que tiene un azcar en posicin 3. Son los responsables de la

pigmentacin de flores, frutas, dando colores como: rojo, rosa. Morado y azul.

Antraquinonas: compuestos orgnicos aromticos. Se localizan en vegetales superiores. Aunque

se han encontrado en insectos y microorganismos.

Cardiotnicos: son sustancias que producen mejora del trabajo cardiaco con menor consumo de

oxgeno y el mismo gasto de energa, haciendo que el corazn insuficiente recupere la fuerza de

contraccin, o inotropismo positivo, y la eficiencia mecnica.

Colecta herbaria: Colecta de recoleccin de ejemplares herbarios, en un espacio abierto o en un

espacio delimitado.

Compuestos fenlicos: los compuestos fenlicos constituyen un amplio grupo de metabolitos

secundarios de las plantas. Se caracterizan por presentar en su estructura un anillo de benceno, al

menos, un grupo hidroxilo (fenlico), generalmente funcionalizado. Productos secundarios del

metabolismo de las plantas y suelen ser, en parte, los responsables del color, el aroma y el sabor

de los alimentos que contienen.

Cromatografa en columna (CC): Cromatografa en donde la fase estacionaria esta uniformemente

situada en una columna cromatografa.

Cumarina: Las cumarinas son productos naturales que poseen una estructura que consiste en un

anillo bencnico unido a una pirona (un anillo heterocclico de seis miembros que contiene un

tomo de oxgeno y cinco carbonos sp2).


24

Diafanizado: proceso por el cual una muestra vegetal se hace difana o transparente, mediante

tcnicas que igualan a los ndices de refraccin de la luz del interior del rgano con el medio que lo

contiene. Existen dos principios para realizar una diafanizacin; por maceracin y por

deshidratacin.

Droga: sustancia generalmente de origen vegetal, como la ofrece la naturaleza u obtenida a partir

de sencillas manipulaciones, siendo el principio activo la sustancia responsable de la actividad

farmacolgica de esta.

Esteroides: Los esteroides son un tipo de compuestos orgnicos derivados del ncleo del

ciclopentanoperhidrofenantreno; formando cuatro anillos fusionados, tres con seis tomos y uno

con cinco; posee en total 17 tomos de carbono.

Estomas: derivado de griego estoma que significa boca, son aberturas en la epidermis,

localizadas sobre todo en la superficie inferior de la hoja, que tienen a su cargo el intercambio de

gases del vegetal. Estas estructuras estn compuestas por dos clulas epidrmicas especializadas

denominadas clulas oclusivas que regulan el dimetro del poro.

Flavonoides: son compuestos, generalmente amarillos, que se encuentran en los jugos celulares y

en los ptalos de las flores de algunas plantas en forma de glucsidos de diversos azucares

(glucosa, galactosa, ramnosa o una pentosa) y cuyos aglucones son derivados del ncleo

fundamentalmente de la fenilbenzopirona.

Leucoantocianinas: son compuestos qumicos incoloros relacionados con antocianidinas y

antocianinas (flavan-3,4-dioles). Poseen una gran importancia en la elaboracin de los vinos ya

que son responsables de la astringencia y adems son los sustratos de las polifenoloxidasas nativas

de la una en la reaccin de oscurecimiento enzimtico del mosto.

Lpidos: conforman un grupo grande y heterogneo de sustancias de origen biolgico fcilmente

solubles en disolventes orgnicos como el metanol, acetona, cloroformo y el benceno. Pueden

clasificarse en hidrolizables, es decir que se rompen ante la agregacin de agua, y no hidrolizables.

Quinonas: son compuestos que normalmente existen en las plantas y resultan de la oxidacin de

compuestos fenlicos.

Saponinas: son compuestos que al agitarse en agua producen abundante espuma. Debido a esta

propiedad, a las plantas que las contienen se les usa como jabn desde pocas prehispnicas y aun

actualmente.

Tricomas: son apndices derivados de clulas epidrmicas que pueden presentar diversas formas

y suelen hallarse en todas las partes del vegetal. Los Tricomas cumplen funciones de proteccin,

absorcin y secrecin.


25

8. ANEXOS

A)


26

B)

RECOLECCIN Y HERBORIZADO

DIAFANIZADO

Nuestra Planta se puede observar el color

verde intenso que tena al principio.

En la segunda imagen se observa el

producto obtenido durante el diafanizado.

Hojas blancas, algunas partes un tanto

transparentes, producto de los cambios

qumicos contenidos en las hojas,

compuestos insaturados, que al exponerse a

reactivos como el hipoclorito se producen

reacciones qumicas que dan como resultado

este cambio de color o descoloramiento.

Plantas recolectada en el municipio de

Ixtln de Jurez en el centro recreativo

ECOTURIXTLN el da 13 de septiembre

de 2014.


27

ESTOMAS

Anlisis estructural

Se muestran las estructura de los estomas, correspondientes a la clasificacin tipo II, anisoctico o crucfera, a 10X A) Se

observa la forma estructural de un estoma: ostiolos, clulas oclusivas y clulas adyacente. B) Imagen con contraste que

muestra el estoma rodeada de clulas adyacente irregulares.

TRICOMAS

Anlisis estructural

Clulas oclusivas Estoma

A B

B

B

Clulas adyacentes

Ostiolo

A

Se muestran imgenes a 10X de los tricomas que presenta la muestra. Estos tricomas son de tipo unicelulares A) Se

perciben los tricomas en forma de espinas o garras. En la parte superior hay mayor cantidad. B) Se muestra un

campo con contraste donde resalta ms la forma de espina que presentan los tricomas de esta especie.


28

C)

FRACCIONES

Fraccin A

FLAVONOIDES

Prueba para determinacin de

flavonoides. La reaccin es positiva.

Imagen que correspondiente

despus de adicionar alcohol amlico.

LEUCOANTOCIANINAS

Prueba para determinacin de

LE. La reaccin es negativa al no

presentar el color indicada.

HIDRATOS DE CARBONO

Prueba para determinacin de hidratos

de carbono. El color rojo de la parte

inferior del tubo indica reaccin

positiva a hidratos de carbono

TANINOS Y COMPUESTOS

FENLICOS

Mediante la reaccin de FeCl3 la

coloracin fue verde grisceo (OH adyacentes.)

REACCIN CON

GELATINA

Positivo por presencia de

turbidez

POSITIVO (mancha marrn)

LPIDOS


29

Fraccin B

Fraccin C

ESTEROIDE ANTRAQUINONAS (tambin dan positivo las naftoquinonas).

Por la reaccin de Borntrger, el resultado fue negativo.

Presencia de grupo de esteroide por la

coloracin verde- Azulada.

Al agregar reactivo de Dragendorff no se observ ningn precipitado que dio una prueba negativa.

ALCALOIDES ESTEROIDES

La prueba resulto negativo pues solo tomo un color amarillo y no verde azulada.

CARDENLIDOS

Reaccin negativa, no se present un color purpura.


30

Fraccin D

LEUCOANTOCIANINAS (D1) FLAVONOIDES (D)

ALCALOIDES (D3)

Al realizar la reaccin de

Rosenheim no se observ una

coloracin carmes, si no de color

amarillo claro.

Al realizar la reaccin de Shindoa

no se logr observar una coloracin

prpura, si no transparente

Al agregar el reactivo de

Dragendorff no se observ la

formacin de un precipitado pardo

anaranjado.


31

Fraccin E

ALCALOIDES TANINOS

FLAVONOIDES

Al agregar el reactivo de

Dragendorff no se observ la

formacin de un precipitado

anaranjado. Por ello el resultado

fue negativo.

Al realizar la reaccin de gelatina

no se observ la aparicin de

turbidez hasta un precipitado. El

resultado fue negativo.

Al efectuar la reaccin de Shinoda

se logr observar una ligera

coloracin rosa, por lo que el

resultado fue ligeramente positivo.


32

C)

SAPONINAS

PROTEINAS Y AMINOGRUPOS

CUMARINAS

Al lleva a cabo la identificacin de

saponinas, no se observ una

presencia de burbujas al momento de

la agitacin vigorosa. El resultado fue

negativo.

Al agregar una gota de solucin

etanlica de ninhidrina al 0.2% se

observ una coloracin violeta, por

lo que el resultado fue positivo.

Al agregar unas gotas de NaOH en

papel filtro y calentar hasta

ebullicin el tubo tapado con dicho

papel y posteriormente al

observarlo bajo la luz UV se obtuvo

una coloracin amarilla

fluorescente. Resultado fue

positivo.


33

D)


34


35


36

9. REFERENCIAS

Fisiologa Vegetal. Lincoln Taiz y Eduardo Zeiger. TOMO 1.Universitat Jaume I. Espaa 2006.

Pag. 558.

Qumica Orgnica. L.O. Smith, Jr. y S.J. Cristol. 2 Edicin. Ed. Revert S.A. Espaa. 1982, Pag.

742

Qumica Orgnica. L.O. Smith, Jr. y S.J. Cristol. 2 Edicin. Ed. Revert S.A. Espaa. 1982. Pag.

754

Fisiologa Vegetal. Lincoln Taiz y Eduardo Zeiger. TOMO 1.Universitat Jaume I. Espaa 2006.

Pag. 551.

Fitoqumica orgnica. Deanna Mercano y Masahisa Hasagawa. 2 Edicin. Consejo de

desarrollo Cientifico y Humanstico de Venezuela. Venezuela. 2002. Pg. 212

Farmacologa Mdica. Defillo, B. A. Instituto Tecnolgico de Santo Domingo. 1990. Pg. 61

Manual de fitoterapia. Martnez, I. S. Editorial ELSEVIER. Barcelona, Espaa. 2007. Pg. 33

Diccionario de qumica fsica. Costa, J.M. DIAZ DE SANTOS EDICIONES. Espaa. 2005. Pg. 111

Estudio estructural y dinmico de sistemas organizados mediante sondas fluorescentes.

Otero, R. Universidad de Santiago de Compostela. Pg. 40

Tcnicas Aplicadas Al Estudio de la Anatoma Vegetal. Sandoval, E. 1 Edicin. Instituto de

Biologa, UNAM. Diciembre 2005. Pg. 155

Farmacologa Bsica y Clnica. Velzquez, B. 18 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.

Madrid, Espaa. 2008. Pg. 7

Biologa: la vida en la tierra. Audesirk, T. Editorial Pearson. Pg. 45

Introduccin a la biologa celular. Bray, D. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos

Aires, Argentina. 2006. Pag. 701

Qumica orgnica bsica y aplicada: de la molcula a la industria. Primo Yfera. E. Volumen 2.

Editorial Revert. Barcelona, Espaa. 2007. Pag. 915

Biotecnologa alimentaria. Garca, M. Editorial LIMUSA. Mxico. 2004. Pag. 291

Bioqumica: texto y atlas. Koolman, J. 3 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Madrid,

Espaa. 2004. Pag. 46

Conceptos Introductorios a la Fitopatologa. Rivera, G. C. 1 Edicin. Editorial Universidad

Estatal a Distancia, San Jos, Costa Rica. 2007. Pag. 228

Qumica de la Flora Mexicana. Romo de Vivar, A. 1 Edicin. Investigaciones en el Instituto de

Qumica de la UNAM. 2006. Pag. 143

Introduccin a la biologa celular. Bray, D. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos

Aires, Argentina. 2006. Pag. 701


37

bouvardia ternifolia

Documents