bioquimica soluciones
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I. DETALLES EXPERIMENTALES
1. Materiales de laboratorio- Vasos de precipitado
- Probetas
- Embudo
- Cocinilla
- Pisceta
2. Reactivos- Cloruro de Sodio al 10%
- Solucin saturada de Sulfato de monio
!. Material "u#mico- $uevos frescos de allina- Carne molida desrasada
-&ec'e fresca de establo
- $arina de trio(. Procedimiento E)perimental
a. voalbminaSe separ la clara de la *ema de 'uevo fresco de allina. &a
solucin no se dilu*.b. Solucin diluida de albmina de huevo
+espu,s de separar la clara- se bati ener,ticamente * se
mecl en un matra con un volumen de aua destilada 10
veces ma*or. &a solucin se filtr a trav,s de una asa doblepreviamente remo/ada en aua.
c. Protenas de la carneSe colocaron de carne molida
desrasada se aadieron m&
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de cloruro de sodio al 10% * se de/ reposar la mecla por 1 a
20 minutos aitando frecuentemente. &e filtr el l#"uido ro/o a
trav,s de una asa doble.
d. Protenas de la leche la lec'e de establo- se
aadi un volumen iual de solucin saturada de sulfato de
amonio. &a solucin saturada consisti en apro)imadamente 13
de sulfato de amonio en 2 m& de aua. Se form un
precipitado blanco "ue lueo se filtr utiliando una doble asa.
e. Albmina vegetalSe meclaron 2 de 'arina de trio en con 100 m& de aua
destilada. Se ait la mecla ener,ticamente durante !0
minutos. Se filtr lueo la solucin con a*uda de una asa doble.
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cuestionario
1. 4Qu efecto tienen las sales concentradas y las salesdiluidas en la solubilidad de las protenas
Cuando se aade una sal a una solucin de prote#na ocurre un
incremento en la solubilidad * esto se conoce con el nombre de
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solubilizacin por salado 5saltin in6. Este incremento inicial en la
solubilidad se debe a la estabiliacin de la prote#na efectuada
por un descenso en el coeficiente de actividad de los rupos
iono,nicos. medida "ue se aumenta la fuera inica- se
obtiene un m7)imo en la solubilidad seuido por un descenso enla misma "ue se conoce como insolubilizacin por salado
5Saltin out6. +urante la insolubiliacin por salado- ocurre
probablemente una competencia entre la prote#na * la solucin
salina por las mol,culas de aua disponibles para su
solvatacin- * entonces las interacciones prote#na8prote#na se
'acen m7s importantes.&a relacin entre la solubilidad 5S6 * la fuera inica 596 en la
rein de la insolubiliacin por salado es:log S=KsI
dondees el loaritmo de la solubilidad 'ipot,tica cuando I; 0
* Kses el coeficiente de insolubiliacin.
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En la pr7ctica- no ocurre la separacin completa de las prote#nas
puesto "ue 'a* siempre aluna superposicin de las curvas de
solubilidad de las prote#nas en una mecla. Sin embaro- la
precipitacin por sal constitu*e un m,todo mu* valioso cuando
se usa con/untamente con otros m,todos.
!. "Qu entiende por precipitacin reversible e irreversible delas proteinas
El proceso de precipitacin est7 relacionado con la
desnaturaliacin- siendo la fuera inica el aente
desnaturaliante "u#mico. Entonces- una precipitacin reversible
es a"uella precipitacin en la cual el precipitado de prote#na
formado inicialmente vuelve a su estado inicial mediante
cambios en:- &a polaridad del disolvente.
-&a fuera inica.
- El p$.
- &a temperatura.
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Reacciones de precipitacin de protenas
9nstrumental * reactivos :
Papel de filtro - solucin de prote#nas: pectona- elatina -
albumina - case#na embudo de vidrio tubos de vidrio
sulfato de amonio -acido ac,tico 51%-10%6- cloruro de
sodio -'idr)ido de sodio 510%6- acido n#trico - acido
sulf=rico * ac,tico 5cc6- acido tricloroacetico85%6 acido
sulfisalicilico 520%6 - sulfato de cobre - acetato de plomo
%-nitrato de plata 5%6-cloruro mercurioso52%6- cloruro
f,rrico - acido piccrico- acido clor'#drico %- etanol - acido
sulf=rico50.>>?6.
Sedimentacin de protenas con sulfato de
amonio
Curso de determinacin: en un tubo de ensa*o colocamos
1.ml de solucin proteica - areamos un volumen iual
de solucin saturada de sulfato de amonio * suavemente
aitamos la mecla .apareci un sedimento de la
precipitacin de las lobulinas - filtrar el li"uido atrave de
un filtro seco - a una parte del filtrado trasparente
calentamos 'asta ebullicin * observamos la coaulacin
de las albuminas "ue se encuentran en la solucin . a la
otra parte areamos un e)ceso de sulfato de amonio con
aitacin constante 'asta la interruccion de su
disolucin - aparece una turbide o copos de la albumina"ue se precipita 5comparamos con el filtrado inicial 6 - la
precipitacin de prote#nas con sales es un proceso
reversible * con la adicin de auas las prote#nas
nuevamente se disuelven . en solucin acuosa las
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part#culas proteicas est7n caradas e 'idratadas lo "ue
determina la estabilidad de sus soluciones . pero a alta
concentracin de sales - los iones "ue tambi,n est7n
'idratados producen la destruccin de la capa acuosa de
las mol,culas proteicas *a "ue con los iones de la sal - se
"ita la cara de la prote#na "ue se absorbio de en ella .
como resultados de estos dos procesos las soluciones
proteicas pierden su estabilidad - las particulas de la
prote#na se pean unas con otras - se arandan * - al final-
caen en forma de precipitado .
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