UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE MEXICO

LICENCIATURA QUIMICO

MTODOS DE SEPARACIN

RESUMEN DE ARTCULO DE PRECIPITACIN Precipitacin de la acetona de agentes tembladera resultados en la recuperacin de la PrPSc, pero disminuyeron Infectividad.

AMADOR ZENTENO EUGENIA YOLANDA

PROFESORA: MARIA MAGDALENA GARCIA FABILA

GRUPO: 61

MARZO 2015

Precipitacin de la acetona de agentes tembladera resultados en la recuperacin de la PrPSc, pero disminuyeron Infectividad.Los priones, los agentes causantes de la espongiforme encefalopata transmitible (TSE), son protenas infecciosas que consisten en una isoforma anormal plegada, parcialmente resistente a la proteasa de la protena prinica (denominada PrPSc) 0,1 priones han demostrado ser notoriamente difcil de inactivar con mtodos eficaces contra convencional microorganismos, tales como la irradiacin ultravioleta, formalina exposicin y calentamiento moderado efectivo, descontaminacin de priones.Adems, los mtodos de inactivacin del prin son valiosos para la industria crnica para la manipulacin y eliminacin de la caja fuerteLos tejidos con el potencial de albergar los priones, y para el seguro produccin de material prestado utilizado para la alimentacin animal.Recomendaciones de descontaminacin por el Organizacin Mundial de la Salud incluyen tratamiento en autoclave a 134 C, durante al menos 18 min o hasta 1 h, o prolongado (al menos 1 h) la exposicin a 1 N hidrxido de sodio o 20,000 ppm de sodio en Hipoclorito.Por lo tanto, es deseable tener un procedimiento capaz de separar la fraccin de protena infecciosa de inactivador perjudicial en una muestra tratada con mnima o ninguna prdida de infectividad.Los mtodos estndar de deteccin de PrPSc residual despus de la exposicin al candidato agentes de inactivacin incluyen la evaluacin de tratados material mediante ensayos in vitro bioqumicos o inmunolgicos, incluyendo Western blot (WB) y inmunoenzimtico ensayo y / o por inoculacin del material en una husped animal para el bioensayo in vivo. Las tcnicas moleculares, tales como WB son tiles, pero solo son insuficientes para evaluar residual infectividad en la inactivacin estudios8 Bioensayo para residual infectividad en un modelo animal es el estndar de oro. Vario mtodos han sido utilizados para enriquecer PrPSc de muestras de tejidos, sobre todo para mejorar la sensibilidad WB, incluyendo la precipitacin por cido fosfotngstico de sodio, 9-11 metanol, etanol, o acido tricloroactico as como la concentracin por ultracentrifugacin.El uso de las muestras resultantes de estas tcnicas en bioensayos como medio de investigacin de su valor en la precipitacin de PrPSc a partir de muestras que contienen biolgicamente sustancias incompatibles utilizados en estudios de inactivacin del prin tiene no se ha informado. Precipitacin con acetona es relativamente procedimiento de enriquecimiento de protena comn, pero su utilidad como una mtodo de precipitar PrPSc de muestras de tejidos infectados tiene no se han investigado. En el estudio actual, se presenta la aplicacin de un protocolo de precipitacin de protenas usando acetona para precipitar PrPSc de ratn cerebro homogeneizado de los ratones infectados con la cepa RML ( Rocky Mountain Laboratory) .Western blot se utiliz para evaluar la eficacia de recuperacin de PrPSc , y bioensayo en ratones se utiliz para identificar los impactos potenciales del procedimiento sobre la infectividad.Precipitacin de la acetona de homogeneizados.

RESULTADOSUsando una tcnica de precipitacin de protenas estndar parainvestigar la capacidad para precipitar PrPSc a partir de cerebro crudo homogeneizado usando acetona y recuperacin PrPSc por WB .En comparacin con las muestras no precipitadas RML de cerebro homogeneizado que contiene cantidades equivalentes de tejido cerebral, PrPSc inmunoreactividad fue igualmente detectable que precipit muestras que contienen hasta 0.025 mg de equivalentes de tejido cerebro.Cuando se cargaron 0,1 mg de equivalentes o menos , no fue menos intensa inmunorreactividad observada que precipit frente a muestras no precipitadas . La resuspensin del sedimento Ac-RML con Ac-RML sobrenadante o el sobrenadante a partir del precipitado acetona con la alcuota del cerebro no infectada resultado en un tiempo promedio de supervivencia de 79 4,3 das y 77 3,6 das, respectivamente. Ambos corresponden a una reduccin de 1-log10 aproximada en la infectividad, similar a la original de pellet Ac-RML suspendido en PBS. Uno de siete ratones en el grupo inoculado con la combinacin de protena de acetona-precipitado de no infectada cerebro de ratn y Ac-RML sobrenadante se sacrificaron a los 108 das despus de la inoculacin (PI) y la tembladera confirmado positivo en WB . Del mismo modo, uno de los diez ratones en el grupo inoculado con PBS combinado con Ac-RML sobrenadante se sacrificados en 133 das PI y la tembladera positivo confirmado.

ConclusionesPor lo ledo anteriormente se deduce que es un mtodo eficaz de concentrar PrPSc y separndolo de productos qumicos agresivos o txicos utilizados en estudios de inactivacin de priones mientras que conserva la mayora, si no todos infectividad deseable para permitir bioensayo adecuado para efectividad del tratamiento. Este estudio evala la eficacia de precipitacin con acetona para recuperar PrPSc de RML-positivo homogeneizado de cerebro y investigado su impacto en la infectividad. La presencia o ausencia de PrPSc en pellet y fracciones de sobrenadante se investig, y la recuperacin fue evaluado mediante la comparacin de diluciones seriadas de las muestras precipitadas a muestras no precipitadas por WB. , Niveles comparables globales de PrPSc se detectaron en precipitado de acetona contra muestras no precipitadas. PrPSc se detect en la fraccin de sedimento y slo fue igualmente detectable a las muestras no precipitadas a 0,5 mg de equivalentes de tejido cerebral. La evidencia de granulacin fue incompleta presente en pellets / grupos de combinacin que sobrenadante combinado en el sedimento de la protena de cerebro de ratn o no infectado PBS con Ac-RML sobrenadante.

BibliografaAcetone Precipitation of the Scrapie Agent Results in Successful Recovery of PrPSc but Decreased Infectivity J. D. Smith, J. J. Greenlee, G. H. Foster, and E. M. Nicholson* Virus and Prion Research Unit, National Animal Disease Center, USDA, Agricultural Research Service, Ames, Iowa