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INMUNOHISTOQUIMICA
INTRODUCCION GENERAL
Dr. José Luis Molina Osorio
INMUNOHISTOQUIMICA
LOCALIZACION DE ANTIGENOS EN LOS
TEJIDOS USANDO LOS ANTICUERPOS
COMO REACTIVOS ESPECIFICOS
[ VISUALIZACION DE LA REACCION ANTIGENO – ANTICUERPO]
LA VISUALIZACION Y LOCALIZACION
DE UNA REACCION POSITIVA
IMPLICA EL MARCAJE (SEŇALIZACION)
DEL ANTICUERPO REACTIVO
CON UNA SEŇAL DETECTABLE
Como la Inmunocitoquímica implica una reacción Ag – Ac, con posibilidades de identificar y discriminar entre muchos
antígenos, tiene gran ventaja sobre las técnicas tradicionales de tinción con
base química - enzimática.Cubre un espectro mucho mayor de
elementos celulares y tisulares que pueden ser evidenciados a nivel
celular y tisular.
El arte de la inmunohistoquimica
comenzó en la década 40 - 50
cuando Coons y col. marcaron
anticuerpos específicos con
Fluoresceína para detectar
antígenos en los tejidos
MODALIDADES
EN LAS
REACCIONES
INMUNOCITOQUIMICAS
SEGUN EL TRAZADOR UTILIZADO:
Sustancias FluorescentesREACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA
Enzima –> Sustrato:
REACCIONES INMUNOENZIMATICAS
Partículas Electrondensas:
REACCIONES DE
INMUNOMICROSCOPIAELECTRONICA
Isotópos RadiactivosREACCIONES RADIOINMUNOQUIMICAS
REACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA
MARCADOR UTILIZADO
Sustancias Fluorescentes --- Fluorocromos
EQUIPO DE VISUALIZACION
Microscopio para Fluorescencia
Patologia Renal
Glomerulo conDeposito de IgA
PancreasAc. Anti Celulas beta
REACCIONES INMUNOHISTOQUIMICASREACCIONES INMUNOENZIMATICAS
MARCADOR UTILIZADO
Enzima Sustrato Precipitado coloreado
EQUIPO DE VISUALIZACION
Microscopio Optico
Linf. Citotoxicos ( T CD8 )En tejido cardiaco con reaccion de rechazo
Enzima: PeroxidasaSustrato: Diaminobencidina
LOCALIZACION DEL ANTIGENO
REACCIONES DE INMUNOMICROSCOPIA ELECTRONICA
MARCADOR UTILIZADO
Sustancias Electrondensas
EQUIPO DE VISUALIZACION
Microscopio Electrónico
SEGUN PASOS DE REACCION
DIRECTOS
INTERACCION DEL ANTICUERPO “PRIMARIO MARCADO
CON EL SUSTRATO ANTIGENICO
INDIRECTOS
ANTICUERPOS “SECUNDARIOS” MARCADOS SON
AGREGADOS DESPUES DE LA REACCION INICIAL
DEL ANTICUERPO PRIMARIO NO MARCADO
DOS PASOS TRES PASOS
A ESTOS DOS TIPOS DE REACCIONES BASICAS
SE AGREGA UN NUMERO CRECIENTE DE
MODALIDADES TECNOLOGICAS EN LAS CUALES
SE UTILIZAN OTRAS SUSTANCIAS ADEMAS DE LOS
ANTICUERPOS QUE PERMITEN CON AYUDA DE LA
SEÑAL MARCADORA IDENTIFICAR LA REACCION
ESPECIFICA DEL ANTICUERPO PRIMARIO CON EL Ag.
COMPLEJOS SOLUBLES ENZIMA-ANTIENZIMA
EL ELEMENTO ENZIMATICO DE LA REACCION ESTA
COMO UN COMPLEJO MOLECULAR [ Enz. (Ag.) ~ Ac ]
AŇADIDO DESPUES DEL Ac. SECUNDARIO
CON BASE EN LA REACCION AG – AC
EL PROPOSITO FUNDAMENTAL DE LA METODOLOGIA INMUNOHISTOQUIMICA
1. Crear condiciones optimas para la union Especifica
2. Detectar certeramente la unión de los reactivos y su localización
UN OBJETIVO BASICO A CUMPLIR CONLAS DIFERENTES TECNICAS USADASES LOGRAR LA MAYOR SENSIBILIDADPOSIBLE DEL ANTICUERPO ELEGIDO
SIN DISMINUIR SU ESPECIFICIDAD
• SELECCION Y PREPARACION ADECUADA DEL ANTICUERPO
• PREPARACION Y TRATAMIENTO DEL SUSTRATO TISULAR Ó CITOLÓGICO
Especificidad ANTICUERPO
de la Reacción
Especificidad del Método: Ausencia de señal, por otro mecanismo que no
sea la reacción Ag. -- Ac. Investigada
Especificidad de Anticuerpo:
El Ac. específico (primario) sólo debe tener
reactividad con el Ag. a ser localizado
Factores del Sustrato Antigénico
LA METODOLOGÍA DEBE GARANTIZAR
* inmunoreactividad = antigenicidad
* morfología (localización) relevante
Factores: > Selección del Tejido
> Proceso de Fijación
> Inclusión / Corte
> Bloqueo de Autoseñal
LOS DIFERENTES PASOS TÉCNICOS PUEDEN
LLEVAR AL “ ENMASCARAMIENTO “ Y / Ó
DISMINUCIÓN DE LA ANTIGENICIDAD
RECUPERACION ANTIGÉNICA
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