orientación para la identificación bacteriana y el procesamiento de muestras clínicas
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CRITERIOS de CLASIFICACIÓN
• La identificación de bacterias puede basarse en muchos caracteres:
• Morfología celular • Presencia o ausencia de estructuras especiales:
flagelos, endosporas. • Reacción frente a colorantes (Tinción) • Fisiología: Condiciones necesaria para su
desarrollo / crecimiento (T°; Atm: O2, CO2, etc.) • Bioquímica: metabolismo (fermentación de
carbohidratos; fuente de carbono, etc.) • Morfología de las colonias
Morfología
Reacción de Gram
Metabolismo
Requerimiento de O2
Aerobias /anaerobias facultativas
GRAM (+)
Cocos
Catalasa (+)
Staphylococcus spp
Catalasa (-)
Enterococcus spp
Bacilos
GRAM (-)
Cocos Bacilos
Fermentadores de Glucosa
Enterobacteriaceae
No fermentadores de
Glucosa
Anaerobias
Esporuladas/No esporuladas
Cocos Gram (+) más frecuentes en infecciones humanas
GENERO ESPECIE
Catalasa (+) S. aureus
Staphylococcus S. epidermidis
S. saprophyticus
Otras especies
Micrococcus spp y otros gérmenes relacionados
Rothia (Stomatococcus) mucilaginosa
Cocos Gram (+) más frecuentes en infecciones humanas
GENERO ESPECIE
Catalasa (-) S. pyogenes
S. agalactiae
Estreptococos Grupo C-G
Streptococcus S. pneumoniae
E. Grupo viridans
Grupo S. bovis
S. Salivarius y S. uberis
Enterococcus E. faecalis
E. faecium
E. raffinosus
-74-
Catalasa (+)
• Micrococcus
• Kocuria*
• Nesterenkonia*
• Kytococcus*
• Dermatococcus*
• Arthrobacter*(>BGP)
• Alloiococcus (Cat.débil)
• Rothia mucilaginosa (Cat.∆)
Catalasa (-)
• Lactococcus
• Vagococcus
• Dolosicoccus
• Abiotrophia**
• Grabulicatella**
• Globicatella
• Leuconstoc
• Gemella
• Pediococcus
• etc
*Relacionados con Micrococcus
Cocos Gram (+): Otros géneros
** EVN
CPCatalasa +: Algoritmo
Bacitracina 0.04 UI
Resistente
Staphylococcus
Macrococcus*
Sensible
ClNa 6,5%
Rothia mucilaginosa
(Se adhiere al agar)
Micrococcus spp y géneros relacionados
*Aún no se aislaron en humanos // R: ausencia de halo de inhibición
Género Staphylococcus
Producción de Coaguasa
Sensibilidad a Novobiocina
Uso del medio Chapman
Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus
Staphylococcus spp
COAGULASA
(+)
S. aureus
(-)
NOVOBIOCINA (5µg)
R
S. saprophyticus
S (>16mm)
ECN
Diferenciación presuntiva del Gro. Staphylococcus
+ Frecuentes S. aureus
S. epidermidis
S. Saprophyticus
S. haemolyticus
S. hominis
S. lugdunensis
S. warneri
S. capitis
- Frecuentes S. simulans
S. auricularis
S. xylosus
S. schleiferi
S. cohnii
S. saccharolyticus
otros
Otras Pruebas Bioquímicas
Fosfatasa OH-
Ornitina Decarboxilasa
Hidrólisis de Urea
Producción de Acetoína
PYR
Acido de:
*D-Trehalosa
*D-Manitol
*D-Manosa
CPCatalasa -: …Algoritmo
• Frecuencia de los Géneros
Géneros más frecuentes Streptococcus
Enterococcus
Géneros menos frecuentes Lactococcus
Aerococcus
Gemella
Pediococcus
Leuconostoc
EVNutricionales
CPCatalasa -: Algoritmo
Hemólisis (A sangre carnero)
ß
Tabla A
No-ß (α – γ)
Morfología en m. líquidos
Cadenas Vancomicina (30 µg)
R (Tabla B)
S (Tabla C)
Grupos Vancomicina (30 µg)
R Pediococcus
S Otros géneros
Si es α
Optoquina «S»
S. pneumoniae
*Aún no se aislaron en humanos // R: ausencia de halo de inhibición
Tabla A: Estreptococos ß-H
Especie/Grupo
Reacción Bioquímica
BE ClNa Ba Hip PYR Grupo CAMP VP
S. pyogenes - - + - + A - -
S. agalactiae - V -* + - B + -
S. Grupo C - - -* - - C - -
S. Grupo G - - -* - - G - -
Enterococcus faecalis + + - V + D - -
Grupo S. anginosus V - -* - - ** - +
* Puede haber excepciones ; ** A,C,G,F, o no agrupable
-80-
Tabla C: no-ßH-Vanco-S
Especie/Grupo REACCIÓN BIOQUÍMICA
OPT SB BE ClNa Hip PYR HEM Grupo serológico
S. pneumoniae + + - - - -/+ α ------------
Grupo «S. bovis»1 - - + - - - γ/α D
S. agalactiae - - - V + - γ/α B
Grupo «S. viridans»2 - - -* - - - γ/α diversos
Enterococcus spp - - + + V + γ/α D
1-2 : Diferenciación: Tabla D
EGV: Grupos: S. anginosus S. mitis S. sanguinis S. mutans S. salivarius
Tabla D Diferenciación entre los Grupos S. bovis y G. viridans
PYR (-); BE (+); ClNa (-); ADH (-); VP (+)
Manitol
(+) /Sorbitol
(+) / S. mutans (-) /S. bovis I (Almidón +)
(-) / Polisacárido extracelular
(+) / S. slivarius
(Ureasa V)
(-) /S bovis II
Tabla B
CGP/ en cadenas / Catalasa (-) / Vanco-R
PYR
(+)
Enterococcus spp
(-)
Cadenas
Leuconostoc spp
Bacilos
Probable Lactobacillus spp
Género Enterococcus
BE (+); ClNa (+); PYR (+); LAP (+)
Especie REACCIÓN BIOQUÍMICA
Hemólisis Pir Arg Man Sorbi Sor Ara Raf
E. faecalis γ(ß/α) + + + + - - -
E. faecium γ/α - + + - - + -
E. raffinosus γ/α + - + + + + +
Identificación de Estreptococos del Grupo Viridans
Enterobacterias
Diferenciación entre Escherichia coli y Citrobacter feundii
Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol
E. Coli Colonias con brillo metálico
Ácido/gas - V +
C. freundii Ác./fondo negro/gas + - -
Diferenciación entre Escherichia coli lactosa (+) lenta y Morganella morganii
Bacteria Levine TSI IMViC LDC U F. Alc. ONPG
E. coli Sin cambio Alcalino ácido/gas
++-- V - - +
M. morganii ++-- - + + -
Enterobacterias
Diferenciación entre las distintas especies de los géneros Klebsiella, Enterobacter y Serratia
Bacteria TSI IMViC LDC ODC Motil. DNasa Polimixina
K. pneumoniae Ac/gas
--++ + - - - S
E. cloacae --++ - + + - S
E. aerógenes --++ + + + - S
S. marcescens Ac/Ac. con o sin gas
--++ + + + + R
Enterobacterias
Diferenciación bioquímica entre P. mirabilis, P. vulgris y P. penneri
Bacteria Invasión en Agar
Levine TSI IMViC LDC ODC
P. mirabilis +/-
S/C
OH fondo negro - + - V Desaminada
+
P. vulgris H fondo negro + + - V -
P. penneri Ac/con o sin gas
- + - - -
P. mirabilis, P. vulgris y P. penneri: Ureasa + / Fenil Alanina + / Polimixina R
Bacteria Invasion en Agar
Levine TSI IMViC LDC U F. A. ODC
M. morganii No S/C OH/H gas
++-- - + + +
Providencia spp
No S/C OH/H Sin gas
++-+ Desaminada V + -
Diferenciación entre Morganella morganii y Providencia spp.
Enterobacterias
F.A.= Fenil Alanina
Bacteria Levine TSI IMViC U
Ad
on
itol
Man
itol
Ino
sitol
Arab
itol
Treh
alosa
P. rettgeri S/C OH/H Sin gas
++-+
+ + + + + -
P. stuartii U+ S/C OH/H Sin gas
++-+ + - - + - +
P. suartii U- S/C OH/H Sin gas
++-+
- - - + - +
P. alcalifaciens S/C OH/H Sin gas
++-+
- + - - - -
Diferenciación entre las especies del género Providencia (LDC: desaminada; FA: +)
Enterobacterias
Las especies del género No invaden al agar
Bacteria Levine TSI LDC IMViC U
Salmonella entérica serovar Typhi *
S/C OH/H Anillo negro Sin gas
+ -+--
-
Salmonella entérica *(no Typhi)
S/C OH/fondo negro/ gas
+ -+-+ -
Shigella spp**
S/C OH/H Sin gas
- V+--
-
Diferenciación entre Salmonella entérica serovar Typhi , Salmonella entérica (no Typhi) y Shigella spp
Enterobacterias
Las especies del género No invaden al agar
*Se confirma empleando antisueros correspondientes. S. Typhi presenta el Ag Vi, **Requiere confirmación serológica
Bacteria Levine TSI IMViC LDC ODC U Acetato
E. Coli (inactivo)
Sin cambio
Alcalino ácido/sin gas
++-- V V - V
Shigella spp
V+-- - -* - -
Diferenciación entre Escherichia coli lactosa (+) lenta y Shigella spp
Enterobacterias
*S. sonnei es ODC +
Bacteria TSI LDC U IMViC
Proteus spp* OH/H Fondo negro con gas
Desaminada + V+-V
Salmonella entérica (no Typhi)
OH/fondo negro con gas
+ /SH2+
- -+-+
Citrobacter freundii OH/fondo negro con gas
- /SH2+
V
-+-+
Edwardsiella tarda* OH/fondo negro con o sin gas
+ /SH2+
- ++--
Diferenciación bioquímica de los géneros de Enterobacteriaceae fuerte productoras de SH2
Enterobacterias
* E. tarda y Proteus spp son R a Polomixinas / Colistín
Enterobacterias Diferenciación bioquímica entre las familias Vibrionaceae, Aeromonadaceae y Enterobacteriaceae
FAMILIA Pruebas Bioquímicas
Fermentación de la Glucosa (TSI)
Oxidasa
Vibrionaceae, Aeromonadaceae + +
Enterobacteriaceae
+ -
BGN-Fermentadores Oxidasa (+) GÉNEROS Especies más frecuentes
A. hydrophila
Aeromonas (Aeromonadaceae ) A. sobria
A. caviae
V. cholerae Serogrupo O1
No O1
V. parahemolyticus
Vibrio (Vibrionaceae) V. fluvialis
V. vulnificus
V. algynoliticus
Plesiomonas (Enterobacteriaceae) P. shigelloides
Diferenciación bioquímica entre los géneros de la familia Vibrionaceae, Aeromonadaceae y del género Plesimonas .
Género Hemólisis ClNa 6,5% ODC S a O129 DNAsa
Aeromonas ß - -* - +
Vibrio ß, α, γ
V V + / - +
Plesiomonas γ
- + + -
* Excepto Aeromonas veronii biotipo veronii
BGN-NO Fermentadores de Glucosa
Géneros más frecuentes
Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas Burkholderia, Achromobacter, Crhyseobacterium
TSI
Sin Cambio (Pico OH-/fondo neutro)
Oxidasa
-
Acinetobacter Stenotrophomonas
Burkholderia
+
Pseudomonas, Crhyseobacterium
Burkholderia, Achromobacter
Pseudomonas del grupo fluorescentes
Especie P. fenacínico1 P. fluorescente ADH Glu (Ox.) Gelatinasa 42°C
P. aeruginosa +* + + + + / - +
P. putida - + + + - -
P. fluorescens - + + + + -
1: Piocianina (verde); Piorrubina (rojo); Piomelanina (marrón) *Algunas cepas no producen pigmentos fenacínicos = P. aeruginosa apiociánicas
Microorganismo
42°C Gela-tina
ADH LCD U Glu Lac Manit Xil
Complejo BC V V + V V + V + V P. aeruginosa + V + - V + - V + P. flurescens - + + - V + V V + P. putida - - + - V + V V + P. stutzeri V - - - V + - + + R. picketti V V - - + + V - + Brevundimonas spp V V - - - V - - V
Bacilos GNNF Oxidasa (+) / MacConkey (+)
Lac=Lactosa, Manit=Manitol, Xil=Xilosa
Diferenciación BQM de BGNNF Ox. (-) más frecuentes
Especie
Mo
rfolo
gía
Oxid
asa
Mo
tilidad
LDC
Esculin
a
DNAsa
Man
itol
ONPG
S. maltophilia bacilo -/+ + + + + - V
Acinetobacter spp coco - - - - - ND ND
Complejo B. cepacia bacilo +/- + + +/- - + +
ND: no determinado ONPG: ortofenil ß galactopiranósido +/-: mayoría de las cepas con reacción (+) -/+: mayoría de las cepas con reacción (-)
Microorganismo Movilidad LCD U Glu Maltosa Hidrólisis
de la Esculina
Complejo BC + V V + + V S. maltophilia + + - + + V
Acinetobacter spp sacarolítico
- - V + - V
Acinetobacter spp asacarolítico
- - V - V -
Burkholderia gladioli + - V + - - P. oryzihabitans + - V + + - P. luteola + - V + + +
Bacilos GNNF Oxidasa (-) / MacConkey (+)
Género Stenotrophomonas
Especie de importancia clínica: S. maltophilia
Características culturales y bioquímicas
Hemólisis: ß en zonas de desarrollo confluente Olor amoniacal Oxidasa (-) / algunas cepas pueden ser (+) Hidrólisis de la Esculina (+) Hidrólisis de DNA (+) LDC (+) Oxidación (+) de Maltosa y Manitol
Género Neisseria y relacionados Microorganismo
Mo
rfolo
gía (G
ram)
Oxid
asa
Catalasa
Sup
ero
xol
TM AN
Pigm
en
to
TSI D
Nasa GMLSF
(CTA)
N. gonorrhoeae Dc- + + +↑↑ + - - SD ND + - - - -
N. meningitidis Dc- + + +↓/- + V - SC/SD ND + + - - -
Neisseria spp Dc-* + + - -** + V H/OH - VVVVV1
Moraxella catarrhalis
Dc- + + - - + - SC + - - - - -
Acinetobacter spp
Dc-/b- - + - ND + - SC - VVVVV
Kingella spp B- + - - V + - H/SD - + V - - -
*Sólo N. enlongata tiene forma bacilar **Algunas especies pueden desarrollar 1N. lactamica utiliza L-S-F
Diferenciación de las especies del género Haemophilus
Especie Requerimiento de factores Hemólisis
X (protoprfirina) V (NAD o NADP)
Haemophilus influenzae1 + + -
Haemophilus parainfluenzae2 - + -
Haemophilus haemolyticus + + +
Haemophilus parahaemolyticus - + +
Haemophilus aegyptius + + -
Haemophilus ducreyi + - + débil
Aggregatibacter aphrophilus - V -
Aggregatibacter segnis - + -
1-2 Especies más frecuentes en patología humana -187-
BGP aerobios más frecuentes en muestras clínicas
Especie* Catalasa Hemólisis Pig. rosado Kinyoun Motilidad
Corynebacterium spp y especies relacionadas
+/- γ, ß - - V1
Listeria + ß - - +
Erysipelothrix - α - - -
Lactobacillus - α, γ - - -
Nocardia2 + γ - + -
Rodhococcus + γ + + -
Mycobacterium spp 3,4 + γ
- + -
*No producen esporas/ Bacillus spp: formas esporas internas 1:Las especies móviles, en general tienen pig. Amarillo-2: BGP ramificados 3,4: M. complejo fortuitum-chelonae (cto. Rápido), BGP no ramificado
BGPositivos: diferenciación: Listeria, Enterococcus y S. agalactiae
Especie Catalasa Hemólisis ClNa 6,5%
BE Movilidad CAMP PYR
Listeria monocytogenes
+ ß + + + + -
Enterococcus faecalis -
ß
+ + - - +
S. agalactiae - ß
V - - + -
Procesa-miento de la Muestra
Algoritmo de Trabajo
Muestra
Observación
Macroscópica: Consistencia, moco,
pus, sangre
Microscópica Fresco
/coloraciones
Siembra
M. sólidos: EMB - SS
AS –MKS* -(TCBS*)
M. enriquecidos Caldo selenito
Agua P. alcalina
EMB: búsqueda de EPEC-Salmomella spp y Shigella spp
EMB
Colonias Fermentadoras de LACTOSA: Brillo metálico
4 colonias al azar
TSI – CITRATO► 1
Colonias No fermentadoras de LACTOSA: Transparentes
4 colonias al azar
TSI – CITRATO-LIA-UREA-SIM ► 2
ESQUEMA ► 1
Bacteria Levine TSI Citrato LDC Indol
E. Coli Colonias con brillo metálico
H+/gas - V +
C. freundii H+/fondo negro/gas + - -
E. coli: Realizar serología de ECEP en pacientes menores de 2 años, gerontes e inmunosuprimidos.
ESQUEMA ► 2
Bacteria Levine TSI Citrato LDC SIM Urea
E. coli
CT
OH-/ H+/gas - V - + + -
Shigella spp OH-/ H+/gas (-) - - - - - -
Salmonella spp OH-/ H+/SH2/gas
+ + / SH2 + - + -
Edwarsiella tarda OH-/ H+/SH2/gas
- + + + V -
Proteus spp OH-/ SH2/gas +/- DesNH2 + V + +
Tablas de Identificación
Agar SS: Salmonella spp – Shigella spp
Agar SS (24-48h)
Colonias Centro negro/SH2 (+)
LIA
+ /SH2 (+) ► 4
Colonias Transparentes /SH2 (-)
TSI – CITRATO-LIA-UREA-SIM
Búsqueda de Salmonella spp. S. Parathyphi A y
Shigella spp ► 3
ESQUEMA ►3
Bacteria SS TSI LDC IMViC U
Salmonella entérica serovar Typhi *
CT OH/H Anillo negro
Sin gas +
- + - -
-
Salmonella entérica *(no Typhi)
CT OH/fondo negro/ gas
+ - + - + -
Salmonella paratyphi A CT OH/H/ gas
-/anillo negro
- + - + -
Shigella spp**
CT OH/H Sin gas -
V + - -
-
*Se confirma empleando antisueros correspondientes. S. Typhi presenta el Ag Vi, **Requiere confirmación serológica
Bacteria TSI LDC U IMViC
Proteus spp* OH/H Fondo negro con gas
Desaminada + V+-V
Salmonella entérica (no Typhi)
OH/fondo negro con gas
+ /SH2+
- -+-+
Citrobacter freundii OH/fondo negro con gas
- /SH2+
V
-+-+
Edwardsiella tarda* OH/fondo negro con o sin gas
+ /SH2+
- ++--
Diferenciación bioquímica de los géneros de Enterobacteriaceae fuerte productoras de SH2
ESQUEMA ►4
*E. tarda y Proteus spp son R a Polomixinas / Colistín
3- F-AISLAMIENTO DE E. coli PRODUCTOR DE VEROCITOTOXINA Asociado a Diarrea Hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico
Suspensión de M. Fecal
AGAR EMB LEVINE AGAR MACCONKEY-SORBITOL
INCUBAR 24 HS 37ºC
10 colonias Ferment. de Lactosa 10 colonias No Ferm. De Sorbitol
TSI, CITRATO SEROLOGIA O157
SEROLOGIA POSITIVA
E. coli O26, O111
Confirmación Bioquímica
De E. coli y Sorbitol en tubo(-)
Y Beta Glucuronidasa (-)
INFORME PRESUNTIVO DE
E. coli O157
ENVIAR A LABORATORIO DE REFERENCIA PARA CONFIRMAR
PRODUCCIÓN DE VEROCITOTOXINA EN CULTIVO DE TEJIDO
Búsqueda de E. coli enterohemorrágica (ECEH)
Agar Mc Conkey con Sorbitol
10 colonias NO fermentadoras de Sorbitol
Confirmación BQM de E. coli
ß- glucuronidasa (-) // Serología O157 (+)
E. Coli O157 ► Posible productor de shiga toxina
Detección de Toxina (LNR) O157 Toxigénico o no Toxigénico.
-155-
Búsqueda de Vibrio cholerae AGUA PEPTONADA ALCALINA
INCUBAR 6-8 HS A 37 ºC
REPIQUE A AGAR TCBS
INCUBAR 18-24 HS A 37ºC
COLONIAS AMARILLAS (Ferm. de Lactosa)
TSI AS
INCUBAR 18-24 HS INCUBAR 18-24 HS
ALC/AC SIN GAS REAC. DE OXIDASA
AC/AC SIN GAS POSITIVA
SEROLOGIA PARA V. chloreae O1
POSITIVA
PRESUNTO AISLA MIENTO DE Vibrio cholerae O1
ENVIAR A CENTRO DE REFERENCIA PARA SU CONFIRMACION
Oxidasa (-)
No Vc
Búsqueda de Vibrio cholerae: BQM
Características BQM Resultado
Hemólisis ß o γ
TSI H+ / H+ / sin gas
Citrato de Simmons +
LDC +
ODC +
Motilidad +
Indol +
Voges-Proskauer V
ClNa 0% +
S a O129 (150 µg) + (Halo de inhibición)
Diferenciación de Vc
Diferenciación serológica
Especie Aglutinación Con antisuero O1
Clínica
Vibrio cholerae O1 + Causa el «cólera»
Vibrio cholerae NO O1
- No causa epidemias
Diferenciación BQM de Vibrio cholerae O1 en sus biotipos
Prueba BQM V. cholerae O1 Biotipo clásico
V cholerae O1 Biotipo El Tor
Hemólisis γ ß o γ
VP - +
Sensibilidad a Polimixina (50 µg)
S R
Búsqueda de Aeromonas spp Medio de siembra: Agar Sangre(AS) o AS con Ampicilina 30 Ug/ ml.
AS
Colonias Beta hemolíticas (o eventualmente No hemolíticas)
Reacción de oxidasa (3 ó más colonias al azar)
POSITIVA NEGATIVA: No Aeromonas spp
TSI
Fermentador No Fermentador (Alc./Ac. ó Ac./Ac.) (sin cambio)
Presunt. Aeromonas spp Evaluar según Huésped
(Ver Tablas de Identificación)
DIFERENCIACIÓN DE LOS GENEROS DE LA FAMILIA VIBRIONACEAE
VIBRIO AEROMONAS PLESIOMONAS
Hemólisis ,, ,
Dnasa + + -
ODC D -* +
ClNa 6% D - -
Sensibilidad al
O129(150g)
+ - +
* Aeromonas veronii biogrupo veronii es ODC +
DIFERENCIACIÓN DEL GENERO VIBRIO DE AEROMONAS
VIBRIO
HALOFILICOS
VIBRIO NO
HALOFILICOS
AEROMONAS
ODC D + -*
ClNa 6% + D -
ClNa 0% - + +
Sensibilidad al
O129(150g)
+ + -
* Aeromonas veronii biogrupo veronii es ODC +
Esculina Gas de
Glucosa
ODC LDC VP Manitol Sacarosa Indol
Grupo hydrophila* + + - + + + + +
Grupo
caviae*
+ - - - - + + +
A. veronii
bg. sobria
- + - + + + + +
A. veronii bg.
veronii
+ + + + + + + +
A. schubertii
- - - + D - + -
A. handaei
- + - + + + - +
A. trota
- + - + - D D +
* Son Resistentes a Cefalotina
Diferenciación BQM de las especies de Aeromonas spp más frecuentes
Algoritmo de Fauces: A.S.carnero
Colonias ß-Hemolíticas
BCITRACINA - PYR
1:S/ (+) – 2:R / (+) – 3:R / (-)
3-Otros Estreptococos ß H
VP
(+): Flora habitual
(-): Serología C G
1 -2: Streptococcus pyogenes
Esputo: Criterio de aceptación
Células Epiteliales Planas
PMN Criterio
< 10 > 25 Aceptable
10 - 25 > 25 Aceptable
> 25 > 25 No aceptable
> 25 10 - 25 No aceptable
> 25 < 10 No aceptable
Esputo: Procesamiento
Esputo
Ex. macroscópico
Aspecto: salivoso,
mucopurulento, hemoptoico
Ex. microscópico
Celulas en fresco Gram / ZN
(Kinyoun-Giemsa-Grocott)
Cultivo
AS / Ach Medio para
BGN
Aspirado traqueal: Procesamiento
Aspirado traqueal
Ex. macroscópico
Aspecto: salivoso,
mucopurulento, hemoptoico
Ex. microscópico
Celulas en fresco Gram / ZN
(Kinyoun-Giemsa-Grocott)
Cultivo (*)
AS / Ach Medio para
BGN
(*) Diluciones
Aspirado traqueal: Procesamiento
0,5 ml Secreciones + 0,5 ml Sol. Fisiol. = 1 (1/2)
0,1 ml de 1 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 2 (1/20)
0,1 ml de 2 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 3 (1/200)
0,1 ml de 3 + 0,9 ml Sol. Fisiol. = 4 (1/2000)
Sembrar 0,1 ml de 3 y 4
Lavado Bronco Alveolar
BAL
< 1% CEE / Macrófagos alveolares
Homogeneizar en Vortex 1 - 2’
Mx. sin centrifugar
Siembra: 0,5 ml + 4,5 SF (1/10)=1 0,5 ml de 1 + 4,5 ml SF (1/100)= 2
Centrifugar 10 ml ►Sedimento
Fresco Coloraciones
Sembrar 0,1 ml de 1 y 2
Cepillo Protegido
Cepillo Protegido
Homogeneizar en Vortex 1 ’ en 1 ml de BHI
Mx. sin centrifugar
Sembrar 0,1 ml
AS + Ach + Medio para BGN+ ANA
Centrifugar ►Sedimento
Coloraciones (↓S)
Utilidad de las Muestras Mx E At BAL Cepillo Bx. Pulmón
Contaminación orofaríngea
+++ ++ + NO NO
Mx representativa
< 10 CEP // >25 PMN < 1% CEP Siempre
FBCopio NO NO SI SI NO
G. comunes SI SI SI SI SI
Hongos SI SI SI NO (esc.) SI
Micobacterias SI SI SI NO (esc.) SI
ANAE NO NO NO SI SI
Rto. Sign 3° - 4° Estría ≥ 106 ufc/ml ≥ 104 ufc/ml
≥ 103 ufc/ml
≥ 104 ufc/gr.
S ↓ ↑ ↑ (86%) +/- (75%) +/-
E ↓
↓
↑ (82%) ↑↑ (100%) ↑↑
Micobacterias patógenas oportunistas y saprófitas Velocidad de Crecimiento
Pigmentación Pat. oportunistas No o rara vez patógenos
Lento > 7 días
Fotocromógenas M. kansasii M. marinum M. simiae M. asiaticum
Escotodromógenas M. scrofulaceum M. szulgai M. xenopi
M. gordonae M. flavescens
No cromógenas M avium M intracellulare M ulcerans M malmoense M haemophilum
M gastri M terrae M triviale
Rápido < 7 días
No cromógenas
M fortuitum M abscessus M chelonae
M smegmatis
Cromógenas
M vaccae M phlei
Estudio del exudado vaginal (FSP)
FV
pH
(FSMedio) SF
Obs. En Fresco
Levaduras Trichomonas
vaginalis
Test con KOH
Medio de Transporte
Siembra en A-Sangre*
Saburaud (Levaduras)
Coloraciones
GRAM/Giemsa
-129-
Estudio de Endocervix
Endocervix
M. de Transporte
Siembra en A-Sangre*
Thayer Martin
Oxidasa (+)/dc(-)
Coloraciones / GRAM
Dc (-)
-129-
TSI / H2O2 30% / AS sin CO2
ND / + ↑↑ / ND
Probable Neisseria gonorrhoeae Azúcares
Investigación de EBH
Hisopado introito vaginal + hisopado perineal
Caldo Todd-Hewitt (Ac. Nal 15 µg/ml + Colistin (10 µg/ml)
Medio de cultivo sólido «Adecuado»
Colonias «sospechosas»
Pruebas confirmatorias
Diferenciación: Listeria, Enterococcus y S. agalactiae
Especie Catalasa Hemólisis BE CAMP PYR
Listeria monocytogenes
+ ß + + -
Enterococcus faecalis -
ß
+ - +
S. agalactiae* - ß
- + -
Partimos del Agar Sangre Ovina
Partimos de Agar Cromogénico
*Eventual confirmación serológica
Vaginosis Bacteriana: Criterios 1-Amsel y col.: 3 ó más de los siguientes criterios
*Presencia de flujo vaginal abundante, fino y homogéneo *pH > 4,5 *Pruebas de aminas (+) *Presencia de células guía («Clue cells»)
2-Nugent:
Morfotipos en la coloración de GRAM
SCORE
0 1 2 3 4
Lactobacillus spp > 30 5 - 30 1 - 4 < 1 0
GV y Bacteroides spp 0 < 1 1 - 4 5 - 30 > 30
BGN «curvos» 0 1 - 4 5 > 30 - -
VB=puntaje total ≥ 7; 4 – 6: corresponde a un estado intermedio de desbalance; Muestra normal: puntaje total de 0 a 3. 97% S-100% E
Vaginosis bacteriana
Infecciones Vs. Dx. Diferecial Criterio Dx Normal VB Vaginitis x TV Vaginitis por
Candida
pH 3.8 – 4.2 > 4.5 > 4.5 < 4.5
Secreción Transparente ↑homogénea y gris
↑amarilla, verdosa
↑blanco, leche cortada
«Fishy odor» - + +/- -
Síntoma No ↑flujo, mal olor, ardor
↑flujo, mal olor, ardor,
picazón, disuria
↑flujo, ardor, picazón
Microscopía (fresco 400X)
Flora lactobacilar,
cel epiteliales
Clue cells leucocitos
(< 10/cpo.)
TV, leucocitos (>10/cpo.)
Levaduras con pseudoh.
GRAM (1000x) B+ rectos Cb (-) y/ fl. ANAE.
- Levaduras con pseudoh.
GIEMSA ↑↑ - - TV -
Investigación de CT en nuestras clínicas
Muestra Clínica
Detección por (Ag) Serología (Ac)
Cultivo celular
PCR Elisa IFD
Hisopado Endocervical SI SI SI SI
H. uretral SI SI SI SI
Semen NO SI* NO SI
1°chorro miccional NO SI SI* NO**
H. conjuntival SI SI SI SI
L. Peritoneal (Mujer) SI SI NO NO
Aspirado de bubones (LGV) SI SI SI SI +/- Suero
H. anal SI NO NO NO
H. / ANF SI NO NO NO + (IgM MIF)
*No es la Mx ideal por su ↓↓ S// ** si en varones CT: Chlamydia trachomatis
Micoplasmas
Especies Cuadro clínico Diagnóstico
M. pneumoniae NMN atípica Cultivo Elisa Sondas de DNA PCR IFD / Ac
M. hominis Ureaplasma urealyticum
Cervicitis-Uretritis-Prostatitis-Esterilidad-Aborto-EIP-Fiebre post parto-PLNfritis
Cultivo PCR
M. genitallium Uretritis-Cervicitis-Salpingitis-EPI PCR
Procesamiento de las Mx.
Especie Ferment. de GLU H. de ADH H. De UREA
M. hominis
- + -
U. urealyticum
- - +
M. hominis
+ - -
T. De Muestra -Abstinencia sexual por 72 h. -Obtención de material ↑↑ celular
o Endocérvix - H. uretral o Orina – Esperma o Sangre - Tejidos – Esputo o Otros fluidos corporales
Características de LCR en MNG Etiología Citología Química Aspecto
Células mm3
L (%) PNM (%) Glu (mg%)
∏ (mg%)
Cl (mEq/l)
V.N. 1 - 5 90 - 100 0 - 3 50 - 70 15 - 40 120-130 Cr de Roca
MNG vi A A* N** N o A A N
SIFILIS A A N N A N
TBC y Cn A A N o A D A D
Absceso cerebral
A N A N A N
MNG B. A N A D A D TURBIO
MNG Leucémicas
A A. blastos
N D A N TURBIO
Hem. SAc A A A N o A A N o A Hemorr.
LCR: Etiología según la edad Huésped Agente Neonatos (0 – 2 meses) ENTB (Escherichia coli)
Streptococcus agalactiae Listeria monocytognes
Lactante 2 m – 6 a Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis
Adultos y > 6 a Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis
Adultos / Ancianos Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis ENT / Listeria monocytognes (↓↓)
Asociados a shunt Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus BGN
LCR: Etiología en Inmunosuprimidos
Alteración en la Inmunidad Celular
Cryptococcus neoformans Mycobacterium tuberculosis Listeria monocytogenes
Pacientes VIH (+)
Cryptococcus neoformans Mycobacterium avium-intracelllare Mycobacterium tuberculosis Listeria monocytogenes Candida spp Virus Parásitos
Líquido de derrame pleural
Características
Trasudado
Exudado Empiema
Derrame PN no complicado
Derrame PN complicado
Aspecto Claro/límpido Variable (V.) Variable (V.) Purulento
Leucocitos/mm3 < 1000 V. (>1000) V. (>1000) > 15000
Rto. diferencial Variable PMN PMN PMN
∏ (g/dl) < 3,0 > 3,0 > 3,0 > 3,0
Glu (mg/dl) ≈ suero > 60 40 - 60 < 40
pH ≈ suero > 7,2 7,0 – 7,2 < 7,2
LDH < 200 < 1000 > 1000 > 1000
Bacterias No No No Presentes
Tipos de medios Medio Características
Basal Permiten crecer casi todas las bacterias.
Selectivos Favorecen el crecimiento de algún tipo de bacteria e inhiben el de otras.
Enriquecido Líquidos o sólido: se obtiene a partir de un medio basal suplementado con nutrientes.
Diferenciales Sirven para evaluar las propiedades bioquímicas de las bacterias y así identificar una población bacteriana.
De transporte Permiten conservar las bacterias evitando la pérdida de viabilidad.
Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación Agar sangre Agar tripticasa –soja, agar brucella o
infusión de carne y corazón con 5% de sangre ovina
Nutritivo, detección de la capacidad hemolítica
Agar chocolate
Base de peptona enriquecida con una solución de hemoglobina al 2%
Desarrollo de Haemophilus y Neisserias.
Agar eosina azul de Metileno (EMB)
Base de peptona con lactosa y sacarosa. La eosina y el az. De metileno actúan como indicador
Crecimiento y diferenciación de BGN entéricos ferm. y no ferm. de lactosa
Agar manitol salado
Base de peptona, manitol y rojo de fenol como indicador. La CC. De sal de 7,5% inhibe a la > de las bacterias
Aislamiento y diferenciación selectiva de estafilococos.
Agar Salmomella-Shigella
Base de peptona con lactosa, citato férrico y citrato de Na. Contiene rojo neutro como indicador. Sales biliares y verde brillante para inhibir coliformes
Selectivo para el rescate de Salmonella spp y Shigella spp
Medio (S) Componentes Utilidad/Aplicación Agar de Skirrow
Agar base de peptona y proteína de soja, con lisado de sangre de caballo Vancomicina para inhibir G(+), Polimixina B y TMS para inhibir G(-)
Selectivo para el crecimiento de Campylobacter spp.
Agar Thayer-Martin
Base agar sangre enriquecido con hemoglobina y enriquecedor; Colistín, nistatina, vancomicina y TMS.
Selectivo para Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis
Agar de Bordett-Gengou
Medio con base de papa y glicerol más 15-20% de sangre ovina desfibrinada y 2,5 µg/ml del meticilina.
Aislamiento de Bordetella pertussis
Agar MacConkey con sorbitol
Base peptona con lactosa, cristal violeta y sales biliares (inh. G+), rojo neutro como indicador. Puede reemplazarse lactosa por sorbitol.
Aislamiento y diferenciación de BGN fermentadores y no ferm. de lactosa. E. coli O157
Medio (L) Componentes Utilidad/Aplicación Caldo Selenito
Caldo base de peptona con sales biliares y citrato férrico.
Medio selectivo para Salmonella y Shigella.
Caldo Tioglicolato
Digerido pancreático de caseína, caldo de soja y glucosa.
Favorece el crecimiemto de aerobios, anaerobios y microorganismos con requerimientos especiales.
Caldo Todd-Hewitt
Es un caldo de enriquecimiento de estreptococos, se suplementa con Ac. Nalidíxico y colistín
Selectivo y de enriquecimiento para estreptoccos.
Caldo tripticasa-soja
La tripteína y la peptona de soya aportan péptidos, aa, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya contiene alta CC’ de HdC. El ClNa mantiene el balance osmótico. El fosfato diK otorga capacidad buffer y la glucosa es la fuente de energía
Permite en general el desarrollo de gérmenes Gram (+) y (-).
Catalasa Determina la capacidad de producir la enzima catalasa.
Staphylococcus spp catalasa (+) Streptococcus spp y Enterococcus spp(-) Se adiciona H2O2 sobre una gota o ansada de cultivo sobre un porta objeto. Un burbujeo indica la presencia de la enzima.
2H2O2 Catalasa
2H2O+ O2
Burbujas de O2
OXIDASA Identifica bacterias que contengan la enzima citocromo oxidasa (respiración). Enterobacteriacae (-) Pseudomonadaceae, Neisseria spp(+)
La enzima citocromo oxidasa cataliza el transporte de electrones de un dador (phenylenediamine) hacia el aceptor final de la respiración (O2) Si la enzima esta presente se observara una coloración purpura.
Discos comerciales – Papel de filtro - Tubo
Coagulasa Determina la capacidad de coagular el plasma por la acción de la enzima coagulasa. Permite diferenciar S. aureus (coagulasa positivo) de otras especies de Staphylococcus. La prueba en tubo se puede leer tras incubación de 2h, si es (-) debe incubarse hasta 24h.
Hidrólisis del DNA
Detecta la enzima termoestable «DNAsa», capaz de romper los enlaces Fosfodiéster de la molécula del DNA. Luego se revela con ClH.
Si el DNA se degradó el complejo ADN-ClH no se forma, dando un halo claro alrededor del desarrollo bacteriano.
Pos
Neg
Pos Neg
Ensayo de ureasa Para diferenciar organismos capaces de hidrolizar urea con la ureasa (Tribu Proteae). El medio contiene U y el indicador de pH rojo fenol (rosa oscuro a pH > 8.4)por el amonio liberado.
Neg Pos. Neg Pos.
Prueba de PYR
Detecta la actividad de la enz. l-pirrolidonilarilamidasa (PYRasa), que hidroliza el sustrato pirrolidonil-ß-naftil amida, (en los discos) y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo cinamaldehído dando un compuesto de color rosado-rojizo. Se la utiliza para la identificación de cocos Gram (+) catalasa negativa.
Pos. nEG. Positivo
Prueba de LAP Determina la presencia de la enzima leucino aminopeptidasa (LAP). Los discos contienen el sustrato: leucina-ß-naftilamida, que hidroliza la enzima, con liberación de ß-naftilamina, que reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído, dando un compuesto rojo-rosado.
Positivo PYR (+) LAP (+)
Fenilalanina deaminasa Detecta la acción de la enzima fenilalanina deaminasa. Diferencia Morganella, Providencia, y Proteus (+) de otras Enterobacteriaceae. El medio contiene el aa fenilalanina. La enzima remueve el grupo (NH2) y libera ácido fenil-pirúvico, que puede ser detectado por la adición de un Cl3Fe 10% (oxidante) con un cambio de color al verde.
Negativo Positivo
Sensibilidad a Bacitracina Se usa en la confirmación presuntiva de Streptococcus pyogenes, ya que, a diferencia de la mayoría de los estreptococos, suelen ser sensibles a bajas concentraciones de bacitracina (0.04 U). La pueba NO tiene punto de corte.
Sensibilidad a Novobiocina
Esta prueba puede utilizarse para la identificación diferencial de Staphylococcus saprophyticus (Resistente) del resto de los Estafilococos. Sensible > 16 mm
Se usan discos con 5 µg de ATM
Sensibilidad a Optoquina
Esta prueba puede utilizarse para la identificación diferencial de Streptococcus pneumoniae dentro de los Estreptococos alfa hemolíticos. Sensible > 14 mm
Discos con 5 μg de clorhidrato de etil-hidrocupreína
Factor CAMP
Permite detectar una proteína extracelular difusible, «Factor CAMP» Que actúa en forma sinérgica con la betalisina de Staphylococcus aureus, potenciando la lisis de los eritrocitos.
CAMP (+) en S. agalactiae
Hidrólisis de la Bilis Esculina (BE) Medio de cultivo contiene extracto de carne, peptona de carne (nutrientes), bilis de buey (selectivo para coco+), esculina (glucósido) e iones hierro (indicador).
La bacterias degradan la esculina a esculetina, que se combina con el Fe, dando un compuesto férrico de color pardo oscuro.
Neg Pos.
Tree Sugar Iron Agar (TSI)
Diferencia bacterias por su capacidad para fermentar glucosa, lactosa y/o sucrosa, y para producir SH2.
Fermentación (medio ácido) + Tiosulfato de Sodio SH2 (gas) SH2 + iones férricos Sulfuro ferroso (↓↓ negro insoluble)
Peptonas Amoniaco (NH3) pH (Rojo)
Azúcar Productos ácidos pH (Amarillo)
El medio contiene peptona, Glu, Sac, Lac, tiosulfato y una sal férrica. El indicador es rojo fenol (amarillo a pH< 6,8 / rojo pH > 6,8) Se siembra en profundidad con aguja y luego se estría el pico de flauta.
Fermentación Medio acidificado
Fermentación (-) Medio OH- x uso de las peptonas
Fermenta Glu: pico OH- /Fondo H+
Fermenta Glu + SH2
Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación
Rojo/Amarillo K/A Solo fermenta la Glucosa, y luego utiliza las peptonas
Amarillo/Amarillo A/A Fermenta la glucosa y la lactosa y o la Sacarosa
Rojo/Rojo K/K No hay fermentación, Solo se utilizan las Peptonas
Rojo/sin cambio K/NC No hay fermentación, Solo se utilizan las Peptonas aeróbicamente
Amarillo/Amarillo con disrupción del agar
A/A,G Fermenta la glucosa y la lactosa y o la Sacarosa con producción de gas
Resultados (Tubo/Base) Símbolo Interpretación
Rojo/Amarillo con disrupción del agar
K/A,G Solo fermenta la Glucosa, con producción de gas
Rojo/Amarillo con disrupción del agar y PP negro
K/A,G, H2S Solo fermenta la glucosa con producción de gas y H2S
Rojo/Amarillo y PP negro K/A, H2S Solo fermenta la glucosa y produce H2S
Amarillo/Amarillo y PP negro
A/A, H2S Fermentación de glucosa, lactosa y / o Sacarosa con producción de H2S
Sin cambio/ Sin cambio NC/NC No hay crecimiento
Prueba de I.M.V.iC 1-Indol 2-Rojo de Metilo 3-Voges Proskauer 4-Citrato
Producción de Indol (1) Identificar bacterias por su capacidad de producir indol usando la enzima triptofanasa, la cual convierte el aa triptofano en Indol, ácido pirúvico y amonio.
Triptofano Indol + ácido piruvico + amonio
triptofanasa
Indol + p-dimetletilenamino-benzaldehido Rosindol (Rojo) HCl
Alcohol isoamilico
Reactivo de Kovacs
Para detectar el metabolito Indol se utiliza el reactivo de
Kovac, que contiene ácido clorhídrico,
dimetilaminobenzaldehido y alcohol amílico. Una coloración
roja indica resultado positivo.
Triptofano Indol + ácido piruvico + amonio
triptofanasa
Indol + p-dimetletilenamino-benzaldehido Rosindol (Rojo) HCl
Alcohol isoamilico
Reactivo de Kovacs
Para detectar el Indol producido, se utiliza el rvo de Kovac, que
contiene ácido clorhídrico, dimetilamino-benzaldehido y
alcohol amílico. Una coloración roja indica resultado positivo.
El triptofano se adiciona al medio en una concentración 1%. Esta presente en peptonas obtenidas por digestión enzimática. Se adicionan 1 a 2 gotas del reactivo de KOVACS.
Positive positive negative control.
Glucosa Piruvato Lactato
Acetil-CoA
Formiato
Etanol
CO2
Acetato
H2
Succinato
+
CO2
Fermentación acido-mixta
Voges-Proskauer (VP - 3)
Algunos microorganismos no producen suficientes ácidos estables que bajen el pH. El producto final de la fermentación de la glucosa es acetoina y 2,3-butanediol. Después de 48 hs de incubación.
Barritt's A (alpha-napthol) y Barritt's B (potassium hydroxide) se adicionan al cultivo y se agita ligeramente. Rojo positivo
Prueba (-) - Prueba (+)
Prueba (-) - Prueba (+)
Glucosa Piruvato Lactato
Acetil-CoA
Formiato
Etanol
CO2
Acetato
H2
Succinato
+
CO2
Glucosa Piruvato
2.3 Butanodiol + CO2
Etanol Lactato Succinato Acetato CO2 + H2
Fermentación acido-mixta
Fermentación butanediolica
Determinar si un microorganismo es capaz de utilizar Citrato como
única fuente de carbono.
Citrato (4)
Citrato de Sodio Acido piruvico + Acido oxalacetico + CO2 Citrato premeasa
Citrasa
Exceso de Sodio + CO2 + H2O Na2CO3
(liberado luego de usar el citrato) (Alcalino --> pH)
Agar Citrato (de Simmons): Es un medio definido que contiene Citrato de Sodio como única fuente de C y amonio como fuente de nitrógeno. Si el citrato se utiliza se producen compuestos que alcalinizan el medio. El indicador de pH, azul de bromofenol, cambia de verde a pH neutro (6.9) a azul a pH mayores que 7.6.
Citrato (4)
Reducción de nitrato
Muestra la capacidad de Reducir NO3 a nitrito NO2 / o
N2 por acción de la enzima Nitrato Reductasa.
Nitrato (NO3) puede ser Reducido a diferentes compuestos por respiración anaerobia o por denitrificación. El medio de cultivo contiene nitrato de potasio como sustrato. Si el organismo Reduce el nitrato a nitrito este reaccionara con ácido sulfanilico y a-naftilamina (presentes en el reactivo o en el medio para Nitrato) para producir un color rojo. Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2)
NO3 + 2 H + 2e- NO2 + H2O Nitrato reductasa
Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2)
Test (-): El Zn0 reduce el nitrato a nitrito, dando color. Si al agregar Zn se produce el complejo coloreado, la bacteria NO usó el NO3
Si no hay color: 1-el nitrato no se Redujo 2-se redujo a otros compuestos. (N2)
Test (+): El Zn0 reduce el nitrato a nitrito, dando color. Si al agregar Zn no se produce color la bacteria usó el NO3 y también el NO2
Ensayo de decarboxilasas Muestra la capacidad para decarboxilar un aminoácido. En esta reacción se remueve el grupo carboxylo (COOH) del aa produciendo amina y CO2. Como indicador de pH se usa púrpura de bromocresol. Se emplea aceite mineral que crean un ambiente de anaerobiosis para promover la fermentación. pH alcalino el indicador cambia a purpura (+)
ADH(-) ODC(+) LDC(+) Control
LIA (Lysine Iron Agar)
Pone en evidencia: *la decarboxilación de Lisina (aa), en diamina cadaverina *la desaminación de la Lisina en un alfa cetoácido. Ambas reacciones se evidencian por el cambio de color del púrpura de bromo cresol.
La produción de SH2 se evidencia por la conversión de Tiosulfato sódico a Sulfato férrico
S/inocular
LIA (Lysine Iron Agar)
S/inocular
Desaminación Decarboxilación (+) (-)
Descarboxilación SH2 (+)
LIA (Lysine Iron Agar)
S/inocular
Proteus spp Escherichia coli Shigella spp
Salmonella Proteus spp
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio.
Pos. nEG.
POS: turbidez difusa en todo el medio NEG: crecimiento en el punto de siembra
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio.
Pos. nEG.
POS: Formación de SFe que ennegrece la zona de crecimiento NEG: el medio no cambia de color.
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio.
Pos. nEG.
POS: Formación de un anillo rojo luego de agregar el reactivo Kovacs NEG: sin color
SIM (Sulfídrico – Indol – Motilidad) Tiene peptona como sustrato principal, adicionado de tiosulfato sódico, Fe y amonio.
1 2
Combinación de los resultados: 1-Móvil, SH2 (+) e indológena 2-Inmóvil, SH2 e indol (-)
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