herramientas de la biología molecular material gráfico secc.genética fac. de ciencias

Herramientas de la Biología Molecular

Material gráficoSecc.Genética

Fac. de Ciencias

Técnicas de manipulación genéticaTécnicas de manipulación genética

Aislamiento AmplificaciónSecuenciaciónExpresión

DE GENES

Los primeros avances

• 1965 - Arber y col. Enzimas de restricción

• 1969 - Berg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!)

• 1973 - Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio)

• 1975 - Moratoria. Conferencia de Asilomar

BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMAS

•REPLICARSE•CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO•DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN

ENZIMAS DE RESTRICCION

1965 - Arber y col.1978 - Smith y Nathan . Premio Nobel

Enzima de tipo II.Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13)Reconocimiento y corte:

GAATTC CTTAAG

----G ---AATTC-------CTTAA G---

Los vectores

• Llevan un ADN foráneo

• son capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella

Plásmidos* ADN circular extracromosómico* Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria* No.copias/bacteria: 1 a 3000* Tamaño pequeño (3 kb)* Inmóviles

Como vectores

* Marcadores* sitio de policlonaje* segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa* Capacidad 15 kb

Obtención de ADN en cantidad

Tipos de ADN a clonar

• ADN complementario

• ADN sintético

• ADN genómico

GENOTECA: clonado de un juego completo del genoma de una especie

SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada

Biblioteca genómica

Otros vectores en procariotasOtros vectores en procariotas

* Bacteriófagos. Fago lambdaADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos quele permiten circularizarsepermiten insertos más grandes

* Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagosinsertos de 40-45 kb

Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa

2n = 46 (XX/XY)

Cromosomas de tipo metacéntricossubmetacéntricos y acrocéntricos.

CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS

Podemos conocer la secuencia

Electroforesis

Cómo se observa tras la electroforesis

Ensayo de Southern blot

PCR

• Reacción en cadena de la polimerasa

• Emplea cebadores específicos

• Utiliza una polimerasa resistente al calor (Taq)

• Amplifica exponencialmente una secuencia determinada

Los glóbulos rojos

ANEMIA FALCIFORME

El fenotipo a nivel molecularResultado de la electroforesis

AS

La molécula de hemoglobina

La base molecular de la anemia falciforme

CROMOSOMA 11

El gen ocupa un lugar (LOCUS)(LOCUS) en el cromosoma.

GGTCTCCTC

G G T C T C CC C A G A G G CAC

GTG