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INFECCIONES PARASITARIAS EN EPISODIOS INFECCIONES PARASITARIAS EN EPISODIOS

DIARREICOSDIARREICOS

DIAGNOSTICO DE DIARREASDIAGNOSTICO DE DIARREAS

Bioq. Florencia Mongi- 2015 florenciamongi@hotmail.com

Laboratorio de Parasitología- HNC

Pte sintomático + clínica + epidemiología: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO

Laboratorio + muestra adecuada + método apropiado: DIAGNOSTICO CERTERO

¿Cuando sospechar de infecciones parasitarias en episodios diarreicos?¿Cuando sospechar de infecciones parasitarias en episodios diarreicos?

Etapas del diagnósticoEtapas del diagnóstico

Etapa pre-analítica Etapa analítica Etapa post-analítica

• Datos del paciente • Indicaciones: Recolectar

materia fecal en recipiente limpio y seco, NO del inodoro, NO contaminar con orina

• Muestra rotulada

• Identificación de trofozoítos, quistes, larvas, huevos y adultos

• Análisis macro y microscópico, método de concentración y cultivo

• Validación e informe de los resultados

• Observaciones y sugerencias

Toma de muestraToma de muestra

Numero de muestras y frecuencia de recolección

-Muestra fresca: 1 muestra remitida antes de las 2 horas de recolección

CONCENTRAR!!!!CONCENTRAR!!!!

-Muestra conservada: 4 muestras, 1/día, días consecutivos en líquido conservante

IDEAL: 1 muestra fresca/ día Mínimo 4 muestras

Kit comercial Solución conservante

preparada

Ventaja Mayor volumen de muestra a analizar Relación conservante: muestra 3:1

Por qué muestra conservada? Comodidad para el paciente Comodidad para el analista

ConservantesConservantes

Ventajas Desventajas

• Preserva morfología de trofozoítos, quistes, huevos y larvas

• Apropiado para algunos métodos de concentración

•Interfiere en la extracción de ADN: técnicas de biología molecular (PCR) •No permite el cultivo ni desarrollo de estadios in vitro

SAF (acetato de sodio-ácido acético- formaldheído)

Solución salina o acuosa formolada (5 o 10 %)

PVA (alcohol polivinílico)- Schaudinn

Solución de dicromato de potasio (2,5%)

Merthiolate-yodo-formaldehído (MIF)

Procesamiento de la muestraProcesamiento de la muestra

Flotación Faust Willis Sheather

Sedimentación Espontánea

Centrifugación Ritchie

Cultivo de larvas Baermann

Método directo Métodos de concentración

Macroscópico

Microscópico

Coloraciones húmedas

Coloraciones permanentes

Solución fisiológica (SF) movilidad MUESTRA FRESCA!!

Coloraciones: HúmedasColoraciones: Húmedas

* Lugol * Tionina * Azul de metileno

Coloraciones: PermanentesColoraciones: Permanentes

Coccidios Protozoos Microsporidios

Kinyoun +++ - -

Ziehl-Neelsen (ZN) + - -

Safranina + - -

Tricrómica de Wheatley (TCR)

+/- +++ +

Hematoxilina Férrica (HF) - +++ -

Weber - +/- +++

Gram Cromotropo (GC) - +/- +++

Coloraciones: PermanentesColoraciones: Permanentes

Coccidios Protozoos Microsporidios

Kinyoun +++ - -

Ziehl-Neelsen (ZN) + - -

Safranina + - -

Tricrómica de Wheatley (TCR)

+/- +++ +

Hematoxilina Férrica (HF) - +++ -

Weber - +/- +++

Gram Cromotropo (GC) - +/- +++

Si Si no se cuenta con no se cuenta con alguna de alguna de estas estas coloraciones y/o persisten dudas en el resultado coloraciones y/o persisten dudas en el resultado

DERIVAR A CENTROS DE REFERENCIADERIVAR A CENTROS DE REFERENCIA

Métodos Métodos de concentraciónde concentración

Centrifugación- Flotación

Flotación

Centrifugación

Sedimentación espontánea (SE)

Cultivo de larvas: Baermann

Métodos de concentraciónMétodos de concentración

Método de Telemann modificado/ Ritchie/ FAE

Objetivo: Recuperar quistes, huevos

y larvas

Coloraciones:

* Húmedas: Lugol

* Permanentes: TCR, Kinyoun,

Safranina, GC

Solventes

SAF

Sedimento

Métodos de concentraciónMétodos de concentración

Objetivo: Recuperar trofozoítos, quistes y huevos

Coloraciones:

*Húmedas: Lugol

*Permanentes: TCR, Kinyoun, Safranina, GC

EVALUACIÓN DE UNA TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN ESPONTÁNEA Y DEL EXÁMEN

DIRECTO COMO MÉTODOS PARASITOLÓGICOS APLICABLES EN LABORATORIOS NO

ESPECIALIZADOS

Laconte L, Mongi F, Casero R.

Departamento de Parasitología. Hospital Nacional de Clínicas, UNC

Conclusiones:

La técnica de sedimentación espontánea (SE) demostró valores aceptables de Sensibilidad y Especificidad como método de identificación tanto para helmintos como protozoos.

Nuestros resultados indican que la técnica de SE es un método válido, sencillo y económico para concentración e identificación de parásitos si no se contara con otras técnicas para diagnóstico parasitológico

Método sencillo Buena sensibilidad y especificidad

Otros métodos de concentraciónOtros métodos de concentración

Sheather (sacarosa) Willis/Faust (Na Cl/ ZnSO4)

Objetivo: concentración de ooquistes de coccidios

concentración de huevos de bajo peso específico/ no operculados

Observación: En fresco

Otros métodos de concentraciónOtros métodos de concentración

Objetivo: recuperación de larvas

rhabditiformes

de Strongyloides sp

Cultivo de larvas

Cultivo Cultivo y aislamiento de y aislamiento de larvas:larvas:

Rabhditoides

Método Harada- Mori

Filariformes (F1) (Strongyloides stercoralis)

Objetivo: transformación de larvas

Objetivo: evidenciar larvas viables de S stercoralis y Uncinarias

Cultivo en Placa de agar (CPA)

RecomendacionesRecomendaciones

Métodos sencillos y de bajo costoMétodos sencillos y de bajo costo

Técnica de FAE (Formol-acetato de etilo)

Sedimentación espontánea

Técnica de Willis

Técnica de Sheather

Métodos específicos Métodos específicos

Cultivo de Baermann

Harada Mori

Cultivo en Placa de Agar

DERIVAR Muestra fresca!!!

Fresco con Lugol

Blastocystis sp

Coloración Tricromica de Wheatley

Fresco con Lugol Fresco con Lugol Fresco con Tionina

Entamoeba histolytica/ dispar/ moshkovskii/ dysenteriae

Coloración Tricromica de Wheatley

Entamoeba histolytica/ dispar/ moshkovskii/ dysenteriae

Fresco con AM

Dientamoeba fragilis

Fresco con SF Fresco con Lugol

Col Tricromica de Wheatley

Giardia lamblia

Fresco con Lugol

Balantidium coli

Fresco con Lugol Fresco con SF

ARTEFACTO

Fresco con SF

Cryptosporidium parvum

Coloración Kinyoun

Fresco sin Lugol

Fresco con Lugol

Cystoisospora belli

Coloración Kinyoun

Coloración: Kinyoun

Cyclospora cayetanensis

Microporidios

Coloración Gram Cromotropo

Strongyloides stercoralis

Fresco con SF

Fresco con SF

Fresco con Lugol