FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDCARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MEDICAESPECIALIDAD LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA PATOLGICAASIGNATURAHistoqumica BsicaDOCENTELic. T.M. Walter Lpez LpezALUMNASZary Charmely Ziga ArmendrizErika Lorena Quito VelardeSEMESTREIIICUSCO PER2011COLORACIONES ESPECIALESCOLORACIONES ESPECIALESPRESENTACIONEl presente trabajo de investigacin contienelos principales mtodos de ColoracionesEspeciales para fibras reticulares, elsticas ycolgenas. Todos estos componentes tienenestructuras que solo se podrn diferenciar conINTRODUCCIONEl colgenoes unaprotenayeselcomponenteprincipaldeltejido conectivo fibroso (tendones),tambin se encuentra en la piel, cartlago y ligamentos; esinelstico pero tiene gran resistencia ala traccin.Las fibras elsticas sonms delgadas que las colgenas ycarecen de estriaciones. El componenteprincipal de las fibras elsticas es una protena amorfa llamadaelastina, rodeada de microfilamentos de una glicoprotena llamada fibrilina.Lasfibrasreticulares estn constituidas fundamentalmente porCOLORACIONES ESPECIALESColorean los componentes del tejido colectivamente a travs deluso de colorantesy por reaccionesqumicas semiespecficas (hongos, bacterias, bandas musculares,colgeno, detalles intra e intercelulares). Las ms usadas son:W Teido directo: El tejidoes empapadoypenetradopor elcolorante y no cambia la estructura del tejido.W Teidoindirecto: La reaccin es indirecta y depende del usode intermediario de un mordiente, usualmente un metalpesado.W Teidofsico: El colorante se sita fsicamente (solubiliza) enlos elementos de la clula.W Teido qumico: El colorantesecombinaconlasustanciacelular afnyformaunasubstancianuevaylareaccinesgeneralmente irreversible.W Mordientes:Substanciaqueayudaaligarloscolorantesaltejido para asegurar una accin o reaccin especifica.FIBRAS COLAGENASEl colgeno es una molcula proteica que forma fibras,secretadas por las clulas del tejidoconjuntivocomolos fibroblastos, sonflexibles, peroofrecengran resistencia a la traccin.En el tejido seo adulto y en la crnea se disponen en lminasdelgadas y superpuestas, paralelasentre s, mientras las fibras forman ngulo recto con las de lascapas adyacentes. Las clulasinteractan con la matriz extracelular tanto mecnica comoqumicamente, lo que produce notablesefectos sobre la arquitectura tisular.El tipo ms comnse denominacolgenotipoI, estasformanhaces de fibras de 0,5 a 20 m deColoracin Tricrmico de MassonTincinespecial que permite visualizar las fibras de colgenotipo Ique forman fibras gruesas o haces.Fundamento: Se tienlas secciones con untinte cido tal comoescarlata de Biebrich. Todos los elementosdel tejido tales como citoplasma, msculo y colgeno se unirn a lostintes cidos, entonces se tratan concidofosfotngsticoy/ofosfomolbdicopermitenquelaescarlatadeBiebrich difunda del colgeno pero nodel citoplasma. Estos cidos tienen numerosos grupos cidos queprobablemente acten como medio deunin entre el colgeno y el azul de la anilina (probablemente el pH dela solucinfosfotngstico/fosfomolbdicotambinaumente la coloracin yayudeal colgeno en la difusin o el retirode los colorantes).ReactivosSolucin de hematoxilina frrica de Weigert. Solucin de escarlata de Biebrich - fucsinacida: - 90,0 ml de escarlata de Biebrich al 1% en agua destilada. - 9,0 ml de fucsina cida al 1% en solucin acuosa. - 1,0 ml de cido actico glacial. Solucin acuosa de cido fosfomolbdico (utilizar cido fosfotngstico en la misma proporcin, si se va a teir con verde luz): - 5,0g de cido fosfomolbdico. - 200,0 mlde agua destilada. Solucin de azul de anilina: - 2,5 g de azul de anilina. - 2,0 ml de cido actico glacial. - 98,0 ml de agua destilada. Solucin de verde luz al 2% (alternativa al azul): - 2,0 g de verde luz SF amarillento. - 99,0 ml de agua destilada. - 1,0 ml de cido actico glacial. Solucin diferenciadora: solucin acuosa de cido actico glacial al 1%. Procedimiento Desparafinar e hidratar. En material fijado en soluciones de formaldehdo o alcohlicasse recomienda hacer un mordentaje previo con lquido de Bouindurante 1 hora a 56-60 Co toda la noche a temperaturaambiente. Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el coloramarillo. Teir con hematoxilina frrica por 10 minutos. Lavar en aguacorriente por 10 minutos. Lavar en agua destilada. Teir con la solucin de escarlata-fucsina cida por 2-5 minutos. Lavar en agua destilada. Tratarconlasolucindecidofosfomolbdico-fosfotngsticopor 10-15 minutos si se va a colorear con la solucin de azul deanilina, o en la solucin acuosa de cido fosfotngstico al 5%por 15 minutos si se desea teir con verde luz. Teir con solucin de azul de anilina 15 minutos o con solucinde verde luz por 5 minutos.Lavar en agua destilada.Anlisis de resultadosW Fibras de colgenoAzul.W Estructuras oxidadas +citoplasma Rojo.Seteirnderojolaqueratina,los glbulos rojos y el tejidomuscular.W Ncleo celular Negro, marrn.Tricrmico de Gomori en un pasoMtodo idneo para teir fibrina, tejido muscular ycitoplasmas. Sin embargo, por supHcido (2.5 y 2.7) se presenta como una tincinincompleta y difusa delcomponentefibrilar ms fino(membranabasal yfinasfibras reticulares).Fundamento: Esta tcnica combina un coloranteplasmtico y un colorante de fibrasconectivas (verde luz/azul de anilina) en una solucin decido fosfotngstico y cidoactico glacial. El tratamiento previo de las secciones consolucin de Bouin calienteintensifica la tincin.El cidofosfotngsticofavorece la coloracinroja demsculo y citoplasmas, lasReactivosSolucin de Bouin:tras la fijacin, se debe lavar la muestra en abundante alcohol de 70 hasta la decoloracin de la misma para asegurar la total eliminacin del cido pcrico. Solucin tricrmica: - 0,6 g de cromotropo 2R. - 0,3 g de verde luz - 1,0 ml de cido actico glacial. - 100,0 ml de agua destilada. - 0,8 g de cido fosfotngstico. Solucin verde luz (el verde luz puede ser sustituido por el azul de anilina): - 5,0 g de verde luz. actico al 0,5%. Solucin diaria de hematoxilina frrica de Weigert: Solucin matriz A: - 1,0 g de hematoxilina de Weigert en - -100 ,0 ml de etanol al 95%. Solucin matriz B:- 4,0 g de cloruro frrico al 29%. - 95 ml de agua destilada. - 1,0ml de cido clorhdricoconcentrado. Se deben utilizar a partes iguales cada una de las soluciones matrices. La solucin diaria de la hematoxilina de Weigert puede reutilizarseProcedimiento Desparafinar e hidratar. Realizar mordentaje en lquido de Bouin durante 1 hora a 56 C o24 horas a T ambiente. Lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. Teir con hematoxilina de Weigert por 10-13 minutos. Realizar un lavado prolongado con agua corriente. Teir con la solucin tricrmica por 15 minutos. Diferenciar en la solucin de cido actico al 0,5%por 15segundos (se puede utilizar tambin cido actico al 1%) Si las secciones son muy rojas, se diferenciar con una solucinde cido actico al 1%, a la cual se le agregarn 0,7 gr de cidofosfotngstico. Lavar en agua destilada. Teir con la solucin de verde luz por 20 o 30 segundos.Deshidratar con alcoholes, aclarar con xileno y montar.Anlisis de resultadosW Fibras musculares, fibrina y citoplasma Rojo. W Colgeno, cartlago, mucinas y membranas basales Verde.W Ncleos Azul negruzco. FIBRAS RETICULARESEstn constituidas fundamentalmente porcolgeno de tipo III. Sonms delgadas 0,1 a 1,5 m, ms glicosiladas.No se colorean en los cortes de H-E. Se tien alMO con tcnicasargnticasendondeaparecenencolornegro,mientras que las colgenasse tien de marrn.Son sintetizada por las clulas del msculo liso,fibroblastos, gla y sufuncin es la de sostn de los rganosexpandibles. Forman el armaznMtodo de Manuel Solucin de nitrato de uranio al 1%.- 1,0 g de nitrato de uranilo.- 100 ml de agua destilada. Solucin de plata amoniacal.- 100,0 g de nitrato de plata.- 1000,0 ml de agua destilada.Separar 70 ml de la solucin de nitrato de plata y a los 930 ml agregar 60,0 ml de hidrxido de amonio al 28%; luego agregar lentamente los 70 ml restantes hasta que la solucin aparezca ligeramente turbia (puede ser conservada en refrigerador por varios meses).40%.- 99 ml de agua destilada. Solucin de tiohiposulfato de sodio al 5%.- 5,0 g de tiohiposulfato de sodio.- 100,0 ml de agua destilada. Solucin de rojo ncleo resistente (Kernechtrot).- 0,1 g de rojo ncleo resistente.- 100,0 ml de solucin de sulfato de aluminioal 5%.Llevar a hervor lento, enfriar, Procedimiento Desparafinar e hidratar. Sensibilizar con la solucin de nitrato de uranio por 2 minutos. Sumergir rpidamente en agua corriente. Impregnar con la solucin de plata amoniacal por 1 minuto. Lavar conaguacorriente, sumergir 23vecesrpidamentehasta que el precipitado blanco desaparezca del agua. Revelar con la solucin de formalina por 1 minuto. Lavar con agua corriente. Matizar con la solucin de cloruro de oro por 1 minuto. Lavar con agua corriente. Reducir en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1 minuto.Lavar con agua corriente. Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 5minutos. Enjuagar con agua destilada (3 veces). Deshidratar yaclarar condealcohol etlicoal 95%, alcoholetlicoabsolutoyxileno(2cambioscadaunopor2minutoscada uno).Anlisis de resultadosWFibras reticularesNegro.WNcleos y fondoRojo.Mtodo de SnookSolucin de permanganato de potasio al 0.25%. - 0,25 g de permanganato de potasio.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de acido oxlico al 5%.- 5,0 g de acido oxlico.-100,0 ml de agua destilada.Solucin de nitrato de uranio al 1%.- 1,0 g de nitrato de uranilo.- 100 ml de agua destilada.Solucin de nitrato de plata al 5%.- 5,0 g de nitrato de plata.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de hidrxido de sodio al 10%.- 10,0 g de hidrxido de sodio.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de plata amoniacal de Snook.amonio concentrado, gota a gota hasta que la solucin se aclare y se vean unos pocos grnulos en el fondo, filtrar y usar inmediatamente.Solucin de formalina al 1%.- 1,0 ml de formaldehido al 40%.- 99 ml de agua destilada.Solucin de cloruro de oro al 1% (solucin matriz).- 1 ampolla de 1,0 ml de cloruro de oro.- 99,0 ml de agua destilada.Solucin de tiohiposulfato de sodio al 5%.- 5,0 g de tiohiposulfato de sodio.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de rojo ncleo resistente (Kernechtrot).- 0,1 g de rojo ncleo ProcedimientoDesparafinar e hidratar.Oxidar con la solucin de permanganato de potasio por 5 minutos.Lavar con agua corriente.Colocar en la solucin de acido oxlico hasta que las secciones se aclaren.Lavar con agua corriente y luego colocar en agua destilada.Colocar en la solucin mordiente de nitrato de uranio por 5 minutos.Lavar con agua corriente.Colocar en la solucin de plata amoniacal por 1 minuto.Sumergir en agua corriente.Colocar en la solucin de formalina al 1% por 1 minuto.Lavar con agua corriente.Colocar en la solucin con cloruro de oro por 1minuto, hasta que lassecciones aparezcan de un color negro grisceo.Lavar con agua corriente.Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 30 segundos a 1 minuto.Lavar con agua corriente.Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 54 minutos.Enjuagar con agua destilada.Deshidratar y aclarar con alcohol etlico al 95%, alcohol etlico absoluto yxileno (2 cambios cada uno por 2 minutos cada uno).Anlisis de resultadosWFibras reticularesGris a negro.WFondo Rosado.Mtodo de WilderSolucin de acido fosfomolibdico al 10%.Solucin de nitrato de uranio al 1%.- 1,0 g de nitrato de uranilo.- 100 ml de agua destilada.Solucin de nitrato de plata al 10.2%.- 10.2 g de nitrato de plata.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de hidrxido de sodio al 3.1%.- 3.1 g de hidrxido de sodio.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de plata amoniacal.- 5,0 ml de solucin de nitrato de plata.Solucin reductora.- 50,0 ml de agua destilada.- 0,5 ml de formalina neutra al 40%.- 1,5 ml de nitrato de uranio al 1%.Solucin de cloruro de oro al 2%.- 20,0 ml de solucin matriz decloruro de oro al 1%.- 80,0 ml de agua destilada. Solucin de tiohiposulfato de sodio al 5%.- 5,0 g de tiohiposulfato de sodio.- 100,0 ml de agua destilada.Solucin de rojo ncleo resistente (Kernechtrot).- 0,1 g de rojo ncleo resistente.- 100,0 ml de solucin de sulfato de aluminio al 5%.ProcedimientoDesparafinar e hidratar.Oxidar con la solucin de acido fosfomolibdico por 1 minuto.Enjuagar con agua corriente hasta que todos los trazos de la solucin amarilla desaparezca completamente.Colocar en la solucin de nitrato de uranio por 1 minuto.Enjuagar con agua destilada de 10 a 20 minutos.Colocar en la solucin de plata amoniacal por 1 minuto.Sumergir rpidamente en alcohol al 95%.Colocar en la solucin reductora por 1 minuto.Lavar con agua destilada.Matizar con la solucin de cloruro de oro por 1 minuto.Lavar con agua destilada.Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1 minuto.Lavar con agua corriente.Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 5 minutos.Enjuagar bien con agua destilada.Deshidratar y aclarar conalcohol etlico al 95%, alcohol etlico absoluto y xileno (2 cambios cada uno por 2 minutos cada uno).Montar con un medio resinoso.Anlisis de resultadosWFibras reticularesNegro.WColgeno Rosa.WOtros elementosRojo.FIBRAS ELSTICASLas fibras elsticas se estiran fcilmente y recuperan su longitudoriginal cuando la fuerzadeformante ha desaparecido.El principal componente de las fibras elsticas es la elastina,material proteico muy insoluble, lasmicrofibrillas tienen como principal componente unaglicoprotena llamada fibrilina, rica enaminocidoshidroflicosyquecontieneresiduosdecistinaloscuales pueden formar puenteDisulfuro (estabilizando la estructura de las microfibrillas). En lasfibras elsticas juegan un rolestructural, formando una especie de vaina alrededor de laelastina, permitiendo as la formacin deestructuras fibrilares elsticas.Coloracin de Verhoeff Solucin de hematoxilinaalcohlica al 10%.- 10,0 g de hematoxilina.- 100,0 ml de alcoholabsoluto. Solucin de cloruro frrico al10%.- 10,0 g de cloruro frrico.- 100,0 ml de agua destilada. Solucin de yodo de Verhoeff.- 2,0 g de yodo.- 4,0 g de yoduro de potasio.- 100,0 ml de agua destilada. Solucin colorante diaria defibraselsticas de Verhoeff.- 25,0 ml de hematoxilina10%.Mezclar bien y luego agregar 25,0ml de solucin deyodo de Verhoeff. Solucin diferenciante decloruro frrico al 2%.-20,0 ml de cloruro frricoal 10%.- 80,0 ml de agua destilada. Solucin de Van Gieson.- 5,0 ml de solucin defucsina acida al 1%.- 95,0 ml de solucinsaturada de cido pcrico. Solucin de tiohiposulfato desodio al 5%.- 5,0gdetiohiposulfatodesodio.Procedimiento Desparafinar e hidratar. Teir con la solucin colorante diaria de fibras elsticas por 15 minutos. Lavar con agua tibia corriente por 20 minutos. Colocar en agua destilada. Diferenciar con la solucin de cloruro frrico al 2%, observar microscpicamente (las fibras elsticas aparecen bien definidas de color negro y el fondo es gris). Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1 minuto. Lavar con agua durante 5 minutos. Colocar en agua destilada. Contrastar con la solucin de Van Gieson por 1 minuto. Deshidratar y aclarar conalcohol etlico al 95%, alcohol etlico absoluto y xileno (2 veces cada uno).Montar con un medio resinoso.Anlisis de resultadosW Fibras elsticasNegro.W Ncleos Negro.W ColgenoRojo.W Otras estructurasAmarillo.PATOLOGIASLa patologa de las fibras elsticas tiene caractersticas nicas en la piel.A veces es parte de un proceso complejo que afecta otras estructuras celulares y extracelulares. W Elastosis solar: Masas amorfas, fibras enruladas, engrosadas, hiperplasia, relacin inversa con el colgeno, fibrocitos activados. La acumulacin de fibras elsticas anormales en la elastosis solar se debe ms a una disminucin en la degradacin que a un Engrosamiento cutneo.Aspecto creo.Arrugas.WMilium coloide:Ppulas traslcidas amarillentas, mltiples.1-3 mm.Manos-cuello-cara.WLiquen Esclero Atrfico:Fundamentalmente raza blanca.Incidencia familiar.Ppulas y placas blanquecinas.Epitelio como papel de celofn, atrofia.Erosiones y prpura.Liquenificacin, hiperqueratosis y escamas.20% lesiones extra genitales (tronco y brazos).Inflamatoria.Ppula o placa blanquecina.Atrofia.Hiperqueratosis folicular.La enfermedad vascular del colgeno ocurre cuando los problemas conel sistema inmunitario afectan el colgeno.W Espondilitis anquilosante: Es una enfermedad crnica que causa inflamacin de las articulaciones entre las vrtebras de la columna y las articulaciones entre la columna y la pelvis. Esta enfermedad finalmente hace que las vrtebras afectadas se fusionen.W Esclerodermia: Es una enfermedad generalizada del tejido conjuntivo que involucra cambios en la piel, los vasos W Dermatomiositis: Es un tipo de miopata inflamatoria, una enfermedad muscular caracterizada por inflamacin y erupcin en la piel.W Escorbuto: Avitaminosis causada por un dficit de vitamina C (cido ascrbico) en la dieta que causa una disminucin en la sntesis de hidroxiprolina y sta proporciona tomos adicionales capaces de formar puentes de hidrgeno que estabilizan la triple hlice de colgeno.CONCLUSIONES En el Laboratorio de AnatomaPatolgicatodoslospasosaseguir sonfundamentalesparaunbuendiagnsticodel espcimen y una parte importante esla coloracin.Debemos tener en cuenta que tipo demuestra tenemos y que coloracin seria lamas adecuada.En el momento de la coloracin debemostener cautela con los tiempos y control deBIBLIOGRAFA Diccionario Medico Teide Segunda Edicin, 1992, Barcelona. Manual de Mtodos Histotecnolgicos, 1992, Estados Unidos. Wikipedia.com Medline Plus.com