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Colorantes y coloraciones

Altagracia Jiménez Díaz

QUE SON LOS COLORANTES ?

SON SUSTANCIAS CAPACES DE TRANSMITIR SU COLOR A

OTRAS.

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3 Los colorantes

Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo.

Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánico, el lugol.

El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá reaccionar con el colorante.

Colorantes y coloraciones

Clasificación Segun Estructura Quimica

Colorantes Básicos

Azul de metileno, azul de quinoleína

Verde malaquita Safranina Cristal violeta

Colorantes Ácidos

Eosina Fucsina ácida Rosa de Bengala

Coloraciones

SON INTERCAMBIOS

IONICOS ENTRE EL COLORANTE Y LA BACTERIA

Coloración

Coloración positiva: se tiñe lo que queremos observar Coloración negativa es cuando no se tiñe lo que

queremos observar Coloración simple ; se adiciona un solo colorante Coloración compuesta si utiliza mas de un colorante Propiedad tintorial; es el comportamiento diferente de

las bacterias frente a una misma técnica de coloración Coloración diferencial: se agrega mas de un colorante

en diferentes etapas y las estructuras teñidas son diferenciadas por el color y por la forma

Pasos previos a toda coloración Hacer Frotis dejar Secar y Fijar

Frotis

Secar

Fijar

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11 Coloración de Gram Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un médico danés con estudios en bacteriología y farmacología.

La coloración de Gram. tiene interés taxonómico ya que divide las bacterias en dos grandes grupos, bacterias Gram positivas que se tiñen de morado y bacterias gram negativas que se tiñen de rojo

La coloración de Gram es positiva compuesta y diferencial.

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12 Tinción Bacteriológica de Gram.

El equipo para realizar la tinción de Gram. consta de:         Colorantes

Cristal Violeta, Safranina. Mordiente : Yodo-Lugol

         Decolorante: Alcohol-Cetona.         Bandeja de tinción.         Asa bacteriológica o hisopo.         Frasco lavador.         Muestra bacteriana sólida (agar), líquida (caldo) o espécimen clínico.

La coloración de Gram se fundamenta en la diferencias físico química de la pared Celular

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14Pared celular de las bacterias Gram positivas:

El peptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared.

Atraviesan el peptidoglicano polisacáridos ácidos, denominados ácidos teicoicos.

Los ácidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato.

Las funciones primarias de estos polímeros son la estabilización del peptidoglicano y la captura de Mg++.

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15 Pared celular en bacterias Gram negativas

El LPS es una molécula que contiene tres regiones diferentes: el lípido A, el core y el antígeno O.

El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere.

Es un potente estimulador de los macrófagos, lo que causa la activa liberación de citoquinas, responsables de las manifestaciones clínicas de las infecciones por bacterias Gram negativas y que varían desde una fiebre hasta el shock séptico.

En esta membrana externa se encuentran las porinas.

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Entre la membrana externa y la membrana celular se crea un compartimiento virtual, llamado espacio periplásmico.

El espacio periplásmico es una matriz que incluye al peptidoglicano, enzimas, proteínas captadoras de nutrientes y sustancias de secreción.

La membrana externa contiene numerosas proteínas, siendo las porinas las más abundantes.

Se denominan así, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplásmico.

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17 Pared celular en bacterias Gram negativas

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18 Pared celular en bacterias Gram negativas

Su pared celular es más delgada, pero más compleja que la de los Gram positivas.

El peptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa.

La membrana externa es una membrana asimétrica, porque si bien la monocapa interna está formada por fosfolípidos, la monocapa exterior está formada por un tipo especial de lípido, denominado lipopolisacárido (LPS).

Coloración de Gram Es positiva compuesta y diferencial

Paso 1- Cubrir la preparación con cristal violeta por 1 minuto y lavar con agua.

Paso 2- Cubrir la preparación con Yodo-Lugol por 1 minuto y lavar con agua.

Paso 3- Cubrir la preparación con Alcohol-cetona durante algunos 15 seg y lavar con agua.

Paso 4- Cubrir la preparación con Safranina por 1 minuto y la lavar con agua.

Secar y observar

Colorantes de Gram: Cristal violeta y safranina

Reactivos: Yodo-Lugol

Solvente: Alcohol- cetona

ResultadosGram+ : color Morado

Gram- : color rojo

Coloración de Gram

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22 Coloración de Gram. Paso 1.-

Paso 1.- Cubrir la preparación con Cristal Violeta por 60 seg.

y lavar suavemente con agua.

01/05/23Altagracia Jimenez Diaz MA

23 Coloración de Gram.

Paso 2.- Cubrir la preparación con Yodo-Lugol por 60 seg y lavar suavemente con agua.

01/05/23Altagracia Jimenez Diaz MA

24 Coloración de Gram.

Paso 3.- Cubrir la preparación con Alcohol-Cetona durante algunos segundos (5-10) y lavar suavemente con agua.

01/05/23Altagracia Jimenez Diaz MA

25 Coloración de Gram.

Paso 4.- Cubrir la preparación con Safranina por 60 seg y lavar suavemente con agua.

Secar y Observar con lente de 100x (inmersión).

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Resultados de la coloración de Gram.Bacterias teñidas de morado: Gram positivas Teñidas de rojo: Gram negativasPodemos observarle la forma, la disposición y la propiedad tintorial.

Al observar al microscopio la coloración de Gram Reportamos La forma La disposición La capacidad

tintorial

Se requiere de un microscopio

Usamos lente de 100 X con aceite de inmersión

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28 Coloración de Ziehl Neelsen

La coloración de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es positiva, compuesta y diferencial.

Colorantes y Reactivos: fucsina básica fenicada - solución de alcohol-ácido (3% de HCl en etanol de 95°) - azul de metileno

Esta tinción permite diferenciar a los microorganismos que son ácido alcohol resistentes, de color rojocolor rojo, de los que no lo son, de color azulde color azul. Se utiliza en la identificación de mycobacterias.

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Es una coloración específica para colorear bacterias cuyas paredes celulares contienen largas cadenas de ácidos grasos.

Por su alto contenido de acido micolico (cera no saponificable) tienen la capacidad de unir el colorante fucsina a su pared de manera que hacen a la célula resistente a la decoloración con alcohol ácido.

Son bacilos ácido-alcohol resistente (BAAR), las mycobacterias, y las nocardias.

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Coloración de Ziehl Neelsen REALIZACIÓN

Preparar un frotis bacteriano. Se deja secar al aire y se fija al calor. Cubrir la preparación con carbofucsina. Calentar la preparación con una lámpara de alcohol durante 5 min. No debe hervir. Si se evapora, se añade más carbofucsina para que no se seque en ningún momento. Lavar con agua el resto de colorante. Decolorar con la mezcla alcohol-ácido por tres minutos Lavar con agua . Teñir con azul de metileno 1 min. Lavar con agua el resto de colorante. Secar la preparación. Examinar al microscopio.

Resultados de la coloración de Ziehl Neelsen

01/05/23Altagracia Jimenez Diaz MA

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Tinción de ziehl neelsenQue es la tinción de Ziehl Neelsen?

Técnica de tinción utilizada para identificar microorganismos patógenos. Del genero Mycobacteriun especies tuberculosis y leparae.

Las cuales poseen abundantes ácidos micolicos y cera no saponificableSe fundamenta en la propiedad que poseen algunas células bacterianas de resistir a la decoloración con un alcohol- básico.

procedimiento

Tinción de ZIEHL NEELSEN

. BAANR

Fuscina fenicada

Decoloración con alcohol acido

Azul de metileno

BAAR

Tinción de la capsula bacteriana. Funciones de la capsula bacteriana.

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37 Coloración de Cápsula

La tinta china o la nigrosina dan un fondo oscuro

sobre el cual la cápsula de terminados microorganismos como el Cryptococcus neoformans se observará como un halo claro alrededor del microorganismo.

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38 Coloración de Cápsula

Método con tinta china (Método de Gin) Técnica Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo. Tomar una pequeña cantidad del material bacteriológico del cultivo y

mezclar con las gotas de dextrosa. Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y añadir una gota

de la mezclar anterior y con el extremo de un portaobjetos , hacer un frotis delgado y secar al aire, fijar con alcohol metílico por un minuto.

Teñir por 2 minutos con Cristal violeta o safranina Lavar con abundante agua, secar y observar al microscopio.

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39 Coloración de CápsulaResultado

las capsulas se observan transparentes sobre fondo negro

Gracias por su atención