3.coloraciones especiales

PRESENTADO POR:• RAMIREZ LEDESMA

MARIA JANETH

COLORACIONES ESPECIALES

PASOS PREVIOS

F-Dsh-A

“ESPECIALES” ?

agente bacteriano y problemas patológicos

Coloraciones histológicas especiales

Estructuras específicas en los tejidos, (tipo de agentes infecciosos), la forma de agrupación y

forma.

PAS Griedley

Glenn

Verde metilo pironina

Brown Brenn

Zielh Nielsen

Mucicarmin Giemsa

plata metenamina

Waysson Warthin Starry

Perls o azul de Berlín…

COLORANTES ?

PLATA METENAMINA: hongos , otros usos

para el dx histológico de la membrana basal en

biopsia renal.

Rutina en algunos laboratorios :

sospecha etiología infecciosa

VERDE METILO

PIRONINA

BROWN BRENN

PLATA METENAMINA

GRAM : detecta gérmenes y/o bacterias gram+ y gram- :

diferenciarEl uso y difusión de esta técnica

ha sido recomendada como método rápido y fácil en la

detección de bacteriemia en pacientes críticos.

Las bacterias Gram positivas, (Lactobacillus acidophilus) retienen el tinte y se colorean de azul.

Giemsa : gram+

PAS: CHO, (glucógenos), mucopolisacáridos neutros, mucoproteínas, los hongos,

entre otros.

ZIELH NIELSEN: BK

Perls o azul de Berlín:

Fe

TINCIÓN GIEMSA 

Hematopatología: elementos hematolinfoides, incluyendo células cebadas.

Se puede usar para evidenciar HP en el moco superficial de la mucosa gástrica.

VERDE METILO PIRONINA FENICADA: gram -, color rojo vivo

y los núcleos verde azuloso.

LEVADITIS(espiroquetas): en sus componentes el nitrato de plata que identifica bacterias color oscuro.

GRIDLEY: hongos y Endoameba histolítica.

MUCICARMIN DE MAYER: mucoproteínas y

Criptococcus y se usa en centros especializados y en

infecciones.

WARTHIN STARRY Y WAYSSON : biopsias gástricas (HP)

Carnoy's, inmunohistoquímica, las que se comparan con las muestras histológicas fijadas en formol al 10 % y coloreadas con H/E(…mayor sensibilidad ).

Cohen utilizó una nueva técnica , +rápida, -costosa, fácil de realizar e interpretar y con una sensibilidad a

métodos de coloración convencional:

PAS azul de metileno

Hematoxilina

tiñe microorganismos de azul brillante, completa en pocos

minutos.

Técnicas histológicas según grupo de agentes infecciosos y forma de identificación

TÉCNICA HISTOLÓGICA

AGENTE INFECCIOSO

TINCIÓN DE IDENTIFICACIÓN

PAS Hongos, Parásitos

Rosado

Brown Brenn

Bacterias grampositivasBacterias gramnegativas

AzulRojo

Verde metilo Bacterias gramnegativas Rojo

Glenn Gramnegativas Rojo

Zielh Nielsen Bacilos Rojo

Relación de órganos muestreados según técnicas

empleadas

ÓRGANOS TÉCNICAS

EMPLEADAS

Pulmón PAS, H/E, BK

Cerebro Plata

HígadoPlata, Perls,

H/E,PAS

Riñón H/E, PAS y tricrómica

Piel H/E,PAS, rojo congo

SEGÚN LOS USOS EN ESSALUD

Zielh Nielsen

BK

Otros autores utilizan para los bacilos ácidos resistente, el PCR, lo que

demuestra una alta sensibilidad en el diagnóstico de micobacteria.

Ac. Clorhídrico 20%:

HCl = 20 mlH2O destilada = 80 ml

SOLUCIONESSol. de ferrocianuro de K

10%Ferrocianuro de K = 10 gH2O destilada = 100 ml

PROCEDIMIENTO

-Desparafinar e hidratar.- Sol. Diaria de HCl – ferrocianuro de K (30min)- Enjuagar las laminas con H2O d.-Solución de rojo núcleo durante 5 min-Lavar en H2O c. (2min)-Deshidratar, aclarar y montar.

Sol diaria

Solución de rojo núcleo

WARTHIN STARRY

H.P.

Fondo = amarillo parduzco

MARRON

SOLUCIONES

Solución tampón:-Acetato sodico 1.64g- ac, acetico 2.5 ml- H2O destilada 200 ml

Solución de nitrato de Ag:-Nitrato de Ag 0.5 g-Sol. Tampón 50 ml

Solución 1: - hidroquinona 0.3 g- Sol .tampón 10 ml

Solución de trabajo: sol 1 + sol 2

Solución 2:Sol. Acuosa de nitrato de plata 2 % a 60ºC. = 3 ml

PROCEDIMIENTO-Desparafinar e hidratar.- Sol. Tampón- nitrato de Ag 1 % x 30 – 60 min -Lavar en sol. Tampón.-Sol de trabajo 3 min.-Enjuagar en agua c. - Lavar en sol. Tampón-Deshidratar, aclarar y montar.

H.P.

Fondo = amarillo parduzco

OSCUROSRESULTADOS

ROJO CONGO ROJO

CONGO

SOLUCION DE PERMANGANATO ACIDO DE POTASIO:-sol acuosa de permanganato de K 0.5 % 47.5 ml- sol. Acuosa de ac. Sulfúrico 3 % 2.5 ml

SOLUCION ACUOSA DE ACIDO OXALICO 1 %:

PROCEDIMIENTO:-Desparafinar e hidratar.-Tratar con permanganato acido de potasio x 30 seg.- lavar en H2O destilada.-Ac oxálico 1 % hasta blanquear, lavar en H2O destilada.-Rojo congo 30 min-Sol. De carbonato de litio x 15 seg.-H2O c. x 15 min.- H. x 2min, lavar H2O c. X 1 min.-Deshidratar , aclarar y montar.

SOLUCIONES:SOLUCION DE ROJO CONGO:-Sol. De rojo Congo 1 g- H2O destilada 100 ml

polarizada (verde manzana)

COLORACIÓN PAS

Colorea los hidratos de carbonos, (glucógenos), mucopolisacáridos

neutros, mucoproteínas, los hongos, entre otros.

SOLUCIONES

Solución de HCl 1 N:-HCl concentrado 8.35 ml- H2O destilada 100 ml

Reactivo de Schiff: 1. Fucsina básica 0.5 g2.Solución de HCl 1 N 10 ml3.Disulfito de Na 0.5 g4.H2O destilada 100 ml5.Carbón activado 0.25 g

Disolver 1 en 2 en 4 caliente hasta ebullición. Enfriar, + 3, agitarlo x 20 min. Dejarlo hasta sgte. Día en frasco hermético y oscuro… adquirió color amarillento, + 5 , agitarlo…

Solución acuosa de ac. Periyódico 0.5 %-Cristales de ac, peryódico 0.5 g-H2O destilada 100 ml

PROCEDIMIENTO:-Desparafinar e hidratar las secciones.-Ac. Peryódico 10min -Lavar H2O destilada-Reactivo de Schiff 5-7min-Lavar c/ H2O destilada 3-5min-H x 2 min-Lavar en H2O c.-Deshidratar- Aclarar y montar

RESULTADO:Las sustancias PAS positivas color rojo, núcleo azul.

RIIÑON = GLUCOGENO

Se utiliza también para demostración de producción de mucina por las células tumorales de una neoplasia epitelial.

El borde en cepillo de los túbulos proximales tiene afinidad por los reactivos usados en la coloración de PAS (flechas). (PAS,

X200).

GLOMERULO NEFRITIS

tiñe de forma específica las membranas basales glomerulares, tubulares y de la cápsula de Bowman.

Dentro de las sustancias positivas tenemos:

- glucógeno- membrana basal- glándulas mucosas

COLORACIÓN

TRICÓMICA DE

MASSON

TRICRÓMICA DE MASSON:Fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseñados para dar resistencia; también evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean colorantes para diferenciar los núcleos, citoplasma y las fibras de colágeno.

SOLUCIONESSolución de Bouin:

-Sol. Acuosa saturada de ac, pícrico (75ml)-formaldehido comercial 25ml-Ac. Acético glacial 5ml

Solución A de HEMATOX. FERRICA:

-H (1g)-alcohol absoluto 100 ml

Solución B de HEMATOX. FERRICA:-cloruro férrico 29% (4ml)-agua destilada 95 ml-HCl concentrado 1 ml

Solución TRABAJO de HEMATOX.-SOL. A + SOL. B = 1/1 VOL

Solución FUCSINA ACIDA:-sol. acuosa de escarlata Biebrich 1% 90 ml-sol. acuosa de fucsina ac. 1% 10 ml-Ac. Acetico glacial 1 ml

Solución acido Fosfotúngtico 5 %-Ac. Fosfotúngtico 5g-H2O destilada 100mlSolución de azul de

anilina:-Azul anilina 2.5g-Ac. Acetico 2 ml-H2O destilada 100ml

Solución de acido acético 1%:-Ac. Acético glacial-H2O destilada 100ml

PROCEDIMIENTO:- Desparafinar e hidratar hasta agua c.- Fijador de Bouin x 1h- Lavar hasta desaparecer color amarillo.- H. Fe x 10 min y lavar agua c. 10min.- Sol. de fucsina ac. X 15 min- H2O destilada enjuague- Solución acido Fosfotúngtico 5 %- Sol. De anilina 5 a 10 min. y H2O destilada- H2O acética 1% 3-5 min- OH 95% y absoluto 2cambios, xilol 2 cambios - bálsamo

RESULTADOS-NUCLEOS= OSCUROS

- CITOPLASMA, QUERATINA, FIBRAS MUSCULARES= ROJO- FIBRAS COLAGENAS Y MOCO= AZUL (ANILINA)

Señalan trombos hialinos intracapilares.Estos "trombos" son positivos para inmunoglobulinas (IgG e

IgM). (Tricrómico de Masson, X600).

Las técnicas de tricrómico también definen nítidamente las zonas de glomeruloesclerosis, el depósito de colágeno

periglomerular y, por ende, la esclerosis intersticial con mayor resalte de la atrofia tubular.

Glomerulonefritis membranoproliferativa

destacar la cantidad y distribución de la fibrosis y demostración de nódulos en la cirrosis

PERLS(AZUL DE PRUSIA)

SOLUCIONESSolución acuosa de ferrocianuro de K 2%:- ferrocianuro de k 2 g- H2O destilada 100 ml

Solución acuosa de HCl 2%:- HCl 2 ml- H2O destilada 100 mlSolución de

H/E:

PROCEDIMIENTO-Desparafinar e hidratar.- 1 vol. Ferricianuro de K x 1min- + 1 vol. De HCl x 15-20 min hasta tomar colorac. Azul- lavar c/ H2O c. x 2 min-H x 2 min-Lavar en H2O c. x 1 min - E X 15 seg-Lavar en H2O C. x 20 seg.-Deshidratar, aclarar y montar.

OBJETIVO: - Demostración de hierro trivalente, El Fe

demostrable por este método se hala bajo forma de hemosiderina.

RESULTADOS:Los depósitos de Fe se observan de color azul turquesa, núcleos de color morado y citoplasma rosado.

Hemosiderina, sales de Fe = azul

Núcleos, citoplasma = rosa a rojo

Para hemosiderina: (Perls) especialmente útil en patología

hepática para la demostración de cúmulos de Fe en los hepatocitos en

distintas situaciones o en casos extremos de hemosiderosis (ejemplo

en la enfermedad genética  hemocromatosis).

La hemosiderina es una forma parcialmente desnaturalizada de ferritina que se aglomera con facilidad y reconoce en el examen microscópico como unos gránulos azulinos en el citoplasma = debido a la reacción de Perls, (presencia de Fe trivalente).

Normalmente se halla en bazo, medula

ósea y células de Kupffer del hígado.

MONTAJE

ALMACENAMIENTO

GRACIAS POR SU

ATENCION