3° unidad iii clase 31 03 15

Unidad III:

Pericias Químicas de Manchas de Sangre

Parte 328/03/2015 1

Ensayos confirmatorios

1. Ensayo del Luminol

2. Pruebas microscópicas

3. Identificación espectroscópica

4. Identificación espectrofotométrica

5. Identificación cromatográfica

6. Transformación de porfirinas

7. Ensayos microcristalográficos

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1. Ensayo del Luminol

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1. Ensayo del Luminol

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1. Ensayo del Luminol

Esta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea para visualizarhuellas sanguinolentas de zapatosdejadas en la escena del delito.

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1. Ensayo del Luminol

• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)

• sólido verdoso poco soluble

• reacción de quimioluminiscencia con peróxidos en presencia de complejos de Fe como catalizadores.

• usada para la visualización de manchastan diluidas que son invisibles al examenocular directo

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1. Ensayo del Luminol

Este producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.

Laboratorio: presenta la dificultad deser difícil de preparar y estabilizar.

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1. Ensayo del Luminol

Método

Altamente sensible

Específico

Permite tratar rápidamente grandessuperficies y localizar manchasinvisibles al examen ocular directo.

No interfiere en la ejecución deensayos similares.

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1. Ensayo del Luminol

Se aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene su principalventaja: se puede aplicar en extensassuperficies, detectando sangre hasta anivel de trazas.

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es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.Es una prueba muy simple de usar.DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangrehumana.

La hemoglobina humana (hHb), reacciona con unconjugado compuesto de partículas azuladas yanticuerpos monoclonales de hemoglobinahumana.

Hexagon OBTI®

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2. Pruebas microscópicas

• Puede usarse aún en manchas secas

• Método:

a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)

b.Observación al MO.

Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,equino.

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2. Pruebas microscópicas

MO sangre

Pruebas de aglutinación ( grupo y factor: GR intactos).

humana

animal

menstrual

vaso

mamífero

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3.Identificación espectroscópica

• Método: comparación visual con unpatrón

• Coloración de la hemoglobina en medioácido

Hb hematina +HCl

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• Método de Sahli:

Reactivo: HCl = 11,2 mlH2Od csp 1000 ml

reactivomuestra

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4.Identificación espectrofotométrica

• Fundamento:

Hb MetaHb CianmetaHb

NaHCO3= 1gKCN = 0,05 gFeCNK= 0,2 g H2Od csp= 1000ml

reactivo de Drabkin

reactivomuestra

Filtro verde

540 nm

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5. Identificación cromatográfica

• Cromatografía sobre papel.

• Técnica resolutiva, específica,prácticay sensible.

• No interfieren: citocromos,herrumbre,oxidantes directos, sales metálicas

• Peroxidasa vegetales: se destruyenpor tratamiento térmico a 100º - 10 ‘

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5. Identificación cromatográfica

Cromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio

Placas de Silicagel GLíquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1Revelador: mezclar al momento de usar,volúmenes iguales de sol. de bencidina(acética o alcohólica) +H2O2 10 VolTécnica: se recomienda usar placascompradas.

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7.Ensayos microcristalográficos

a. Modificación de Bertrand

MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

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7.Ensayos microcristalográficos

a. Modificación de Bertrand

MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

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5. Identificación cromatografica

Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemático

Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina ácida.

Cromatografía ascendente

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6. Transformación de porfirinas

Luz de Wood: filtro azul

fluorescencia

mancha

semen

H2SO4 c

fluorescencia

sangre28/03/2015 24

7.Ensayos microcristalográficos

Fundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizando tratamientosadecuados con reactivos H+ o HO-

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7.Ensayos microcristalográficos

•Método de Teichmann: al tratar la muestra de sangre con AcAc aparecerán cristales castaños característicos

60 º

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7.Ensayos microcristalográficos

a. Modificación de Bertrand

MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

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7.Ensayos microcristalográficos

b. Modificación de Nippe

KCl= 0,1gKBr= 0,1gKI=0,1gAcAc=100ml

Reactivo

flamear

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7.Ensayos microcristalográficos

c. Modificación de Bruno y Ross

FNa = 0,056g AcAcg = 100mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

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