3° unidad iii clase 31 03 15
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Unidad III:
Pericias Químicas de Manchas de Sangre
Parte 328/03/2015 1
Ensayos confirmatorios
1. Ensayo del Luminol
2. Pruebas microscópicas
3. Identificación espectroscópica
4. Identificación espectrofotométrica
5. Identificación cromatográfica
6. Transformación de porfirinas
7. Ensayos microcristalográficos
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1. Ensayo del Luminol
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1. Ensayo del Luminol
Esta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea para visualizarhuellas sanguinolentas de zapatosdejadas en la escena del delito.
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1. Ensayo del Luminol
• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)
• sólido verdoso poco soluble
• reacción de quimioluminiscencia con peróxidos en presencia de complejos de Fe como catalizadores.
• usada para la visualización de manchastan diluidas que son invisibles al examenocular directo
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1. Ensayo del Luminol
Este producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.
Laboratorio: presenta la dificultad deser difícil de preparar y estabilizar.
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1. Ensayo del Luminol
Método
Altamente sensible
Específico
Permite tratar rápidamente grandessuperficies y localizar manchasinvisibles al examen ocular directo.
No interfiere en la ejecución deensayos similares.
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1. Ensayo del Luminol
Se aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene su principalventaja: se puede aplicar en extensassuperficies, detectando sangre hasta anivel de trazas.
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es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.Es una prueba muy simple de usar.DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangrehumana.
La hemoglobina humana (hHb), reacciona con unconjugado compuesto de partículas azuladas yanticuerpos monoclonales de hemoglobinahumana.
Hexagon OBTI®
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2. Pruebas microscópicas
• Puede usarse aún en manchas secas
• Método:
a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)
b.Observación al MO.
Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,equino.
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2. Pruebas microscópicas
MO sangre
Pruebas de aglutinación ( grupo y factor: GR intactos).
humana
animal
menstrual
vaso
mamífero
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3.Identificación espectroscópica
• Método: comparación visual con unpatrón
• Coloración de la hemoglobina en medioácido
Hb hematina +HCl
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• Método de Sahli:
Reactivo: HCl = 11,2 mlH2Od csp 1000 ml
reactivomuestra
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4.Identificación espectrofotométrica
• Fundamento:
Hb MetaHb CianmetaHb
NaHCO3= 1gKCN = 0,05 gFeCNK= 0,2 g H2Od csp= 1000ml
reactivo de Drabkin
reactivomuestra
Filtro verde
540 nm
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5. Identificación cromatográfica
• Cromatografía sobre papel.
• Técnica resolutiva, específica,prácticay sensible.
• No interfieren: citocromos,herrumbre,oxidantes directos, sales metálicas
• Peroxidasa vegetales: se destruyenpor tratamiento térmico a 100º - 10 ‘
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5. Identificación cromatográfica
Cromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio
Placas de Silicagel GLíquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1Revelador: mezclar al momento de usar,volúmenes iguales de sol. de bencidina(acética o alcohólica) +H2O2 10 VolTécnica: se recomienda usar placascompradas.
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7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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5. Identificación cromatografica
Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemático
Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina ácida.
Cromatografía ascendente
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6. Transformación de porfirinas
Luz de Wood: filtro azul
fluorescencia
mancha
semen
H2SO4 c
fluorescencia
sangre28/03/2015 24
7.Ensayos microcristalográficos
Fundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizando tratamientosadecuados con reactivos H+ o HO-
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7.Ensayos microcristalográficos
•Método de Teichmann: al tratar la muestra de sangre con AcAc aparecerán cristales castaños característicos
60 º
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7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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7.Ensayos microcristalográficos
b. Modificación de Nippe
KCl= 0,1gKBr= 0,1gKI=0,1gAcAc=100ml
Reactivo
flamear
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7.Ensayos microcristalográficos
c. Modificación de Bruno y Ross
FNa = 0,056g AcAcg = 100mlH2O d= 1ml
Reactivo
flamear
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