aislamiento de hongos ambientales

8/19/2019 Aislamiento de Hongos Ambientales

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LABORATORIO DE AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES

PRESENTADO POR:

PACHECO JANETH

ARAGON SOFIA

GIL ANA MARCELA

CASTRO GLORISMARTH

SUAREZ LUZ STEFANY

LEAL AROCA CINDY

PROFESORA:

ADRIANA SANDON

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA

MICOLOGIA

VALLEDUPAR

2014


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INTRODUCCION

Los hongos son organismos cosmopolitas que pueden desarrollarse en lossustratos más variados, en todos los climas de la tierra e incluso encondiciones extremas. Su ámbito es tan amplio, que sus esporas incluso

sobrepasan la atmósfera (Aira et al., 2!". #l desarrollo f$ngico estásupeditado a ciertas condiciones ambientales tales como la humedad relativa,temperatura, precipitación, inversiones t%rmicas, contaminación, disponibilidadde sustrato & actividades humanas, las que influ&en de manera determinanteen la proliferación & propagación de las part'culas f$ngicas hacia los espaciosinteriores (uerrero et al., 2!".

La ma&or'a de los hongos viven libres en el suelo o en el agua & obtienen suenerg'a por respiración o fermentación de materiales orgánicos solublespresentes en estos ambientes. #l aire no es un medio en el que puedendesarrollarse los microorganismos pero es el portador de aerosoles biológicoscomo polvo, gotitas de agua & otros, que pueden estar cargados de losdiversos grupos de microorganismos. )e las capas de aire se han encontradoesporas de hongos que proceden principalmente del suelo, de la vegetación &del mar. Algunos de los g%neros más com$nmente aislados del aire son*enicillium, Aspergillus, +hiopus, -ucor & ladosporium, entre otros. /odoslos hongos se reproducen por esporulación. Las esporas f$ngicas soncomponentes normales de ambientes externos & pueden ser la fuentecontaminante de los ambientes internos & muchos de estos pueden servir comositios de amplificación para el crecimiento de los hongos (0ueno et al., 2!".

La inhalación sist%mica de esporas & fragmentos de micelio de hongos puedeinducir una afección al%rgica respiratoria, tanto en las v'as a%reas superiorescomo en las inferiores. Los componentes alerg%nicos de hongos contienenmol%culas, como glucoprote'nas, prote'nas & polisacáridos, que puedendesencadenar reacciones de hipersensibilidad tipo 1 (+ui et al., 2".

A continuación en esta práctica daremos a conocer los hongos ambientales quese encuentran en los laboratorios de microbiolog'a de la universidad popular del cesar.

3454S A-01#5/AL#S #5 65A 010L14/#A7 65A A84 )#

#S/6)14

)ante 9. bueno. 9ulio4. Silva uillermo 4live:2!


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OBJETIVOS

)emostrar la presencia & distribución de los hongos que se encuentran

en el medio ambiente.

analiar la morfolog'a delos hongos que se han obtenido de diversas fuentes

)iferenciar las estructuras f$ngicas de cada uno de los hongosencontrados en las muestra a analiar usando t%cnicas de cultivo &coloraciones sencillas. 4bservar las caracter'sticas macroscópicas &microscópicas de cada morfotipo.

onocer los importantes roles que cumplen los microorganismos en elmedio ambiente.


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MARCO TEORICO

HONGOS AMBIENTALES

www.f!"#$%"#&0'.f$"(!.$)*+&",*%+$,)-#-).!+/*1*11*201*':10 +!!:**www.,$-#)!&"#$%"#&)."+*3/#"&"#%$)*EE/EZ(/A(N(f5fUV.

Los hongos se encuentra tanto al aire libre como en interiores. 5adie sabecuántas especies de hongos existen, pero se calcula que puede haber desdedecenas de miles hasta quiá trescientas mil o más. #stos crecen me;or encondiciones cálidas, mo;adas o h$medas, & se propaga & reproduce medianteesporas que pueden sobrevivir en condiciones ambientales, como laresequedad, que no favorecen el crecimiento normal del hongo.

L) %6) $% $/ &+3#$%!$*!!:**www."5".6-*+/5*$)*5f)*f&7).5f*1*11*201*08:20+

Los hongos que pueden causar alergia no son los hongos comestibles. Laalergia a la humedad corresponde a una hipersensibilidad a los llamadosmohos u hongos ambientales, fundamentalmente a sus esporas. A diferenciade los pólenes, las esporas f$ngicas no aparecen en determinadas %pocas,sino en función de las condiciones de temperatura & humedad ambiental. #n

un medio ambiente idóneo las esporas aparecen con extraordinaria facilidad &rapide.

#n viviendas h$medas, oscuras, poco soleadas &


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importantes de mohos en industrias que utilian la fermentación (lácteos,cerveas, medicamentos, etc", silos & almacenes de frutas@verduras.

Se han identificado en todos los lugares en que se han puesto los medios decultivo para detectarlos, reconociendo mas de especies. Se han

recogido esporas en alturas superiores a ! metros, encontrándose altasconcentraciones en las nubes, el aire & ba;o la ma&or'a de las condicionesclimatológicas. *ueden encontrarse tanto dentro como fuera de los domicilios,dependiendo de las condiciones higi%nicas del hogar & climatológicas delexterior. La ma&or'a de las alergias son producidas por los hongosanteriormente llamados imperfectos, los cuales necesitan para su crecimientoun alto grado de humedad relativa, & la ma&or parte de las especies, unatemperatura superior a B . Sobreviven en condiciones adversas,produciendo un gran n$mero de esporas, que en ocasiones exceden al n$merode granos de polen que ha& en el aire. Las esporas de estos son mu&resistentes & suelen ser de tamaCo pequeCo, entre ! & micras.

3a& un cierto nivel de los hongos ambientales que puede ser consideradocomo seguro. #sto depende de la concentración f$ngica en los ambientesexternos & de los tipos de esporas presentes en el ambiente interno. adaoficina, cada edificio o cada casa deben ser considerados como un casoseparado & $nico. eneralmente, la concentración f$ngica de los ambientesinternos es menor que la presente en los externos

#stableció que la concentración de hongos en ambientes internos por encimade 2. 6?


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Cladosporium sp. Penicillium sp. Mucor sp Aspergillus sp.

MATERIALES

Asa micológica

Asa redonda Aul de lactofenol Laminas Laminillas a;a de *etri con agar og& -icroscopio


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PROCEDIMIENTO

1. /omamos cinco (E" ca;as de petri con agar 4F, & las colocamos E

minutos expuestas al ambiente de7

• Laboratorio microbiolog'a 7 "&& 1 • uarto del laboratorio7 "&& 2• Laboratorio microbiolog'a cl'nica 7 "&& • Grea de lavado "&& 4

Luego las incubamos a temperatura ambiente por H d'as.

2. A los H d'as de incubados, observamos caracter'sticas macroscópicas &

microscópicas de cada uno de los diferentes morfotipos presentados enlas distintas ca;as.

. #stos resultados fueron comparados con los diferentes grupos delaboratorio


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BIBLIOGRAFIA

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H%6) &+3#$%!&/$) $% %& 3#3/#!$"&: % &; 5$ $)!5#

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http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp12.pdfhttp://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp12.pdf


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CUESTIONARIO

TECNICAS DE CUANTIFICACION DE MICROORGANISMOS

AMBIENTALES.

M!5 5$ $)#"#?% 5$ /&"&)

Se toma una ca;a de petri previamente hidratada & Agar nutritivo.

Se expone en un ambiente cerrado, durante quince minutos.

Se lleva a incubación durante cinco d'as a temperatura ambiente la ca;a

de petri. La ca;a de Agar nutritivo se incuba durante IH horas a !J grados

cent'grados.

Se hace un recuento reportando en 6?

Se identifican caracter'sticas macroscópicas de las colonias formadas

Sobre una lámina desengrasada & limpia se coloca una gota de aul de

Lactofenol.

on una asa previamente esteriliada al mechero se toma 6na pequeCa

porción del hongo.

Se pone la muestra en contacto con el aul de lactofenol.

Sobre el portaob;etos se coloco un cubre ob;etos & se observa al

microscopio.

Se observo con & IK en el microscopio

M!5 SAS "+&"!

F%5&+$%! 5$/ +!5

#l m%todo se basa en el muestreo del aire problema mediante el aparato SAS(Surface Aire S&stem" compact. )e los muestreadores descritos en la, seescogió %ste por ser de fácil mane;o, portátil & que permite elegir el medio de

cultivo adecuado a cada requerimiento.#l aire muestreado se hace incidir sobreun medio de cultivo determinado, seg$n se pretendan valorar bacterias u


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hongos. *osteriormente se procede a la incubación a una temperaturaadecuada & finalmente se efect$a el conta;e de colonias expresando elresultado en ufc


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http7


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RESULTADOS

CAJA 1: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA1 COLONIA

MORFOTIPOCARACTERISTICAS MACROSCOPICAS

MEDIO DE CULTIVO: Agar 4F

TO DE INCUBACION Ambiente

TIEMP DE INCUBACIONH d'as

DIAMETRO DE LA COLONIA5o se puede medir por que sepresento invasión de coloniasblancas.

COLOR DE ANVERSOolonia blancas

COLOR DEL REVERSOolonias blancas

PRESENTA PLEGAMIENTOSO SURCOS:

5o presento

TETURAalgodonosa

MARGENdefinido

CRECIMIENTO: no conc%ntrico, invadia un poco por una colonia blanca

CARACTERISTICAS MICROSCOPICAS


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TIPO DE HONGO DESCRIPCION MICROSCOPICA

3ifas aseptada gruesas,conidioforo grueso, en las puntasse observa conidias de color cafe.

Se considera que es Mucor sp.

CAJA 2: CUARTO DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

@ COLONIAS

MORFOTIPO 1CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS


TO DE INCUBACIONambiente


DIAMETRO DE LA COLONIA5o se puede medir

COLOR DE ANVERSOolonias negras conborde blanco

COLOR DEL REVERSOolonias negras

PRESENTA PLEGAMIENTOSO SURCOS:5o presento

TETURAalgodonosa

MARGENirregular

CRECIMIENTO: no conc%ntrico, se disperso por toda la ca;a



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TIPO DE HONGO DESCRIPCION MICROSCOPICA

3ifas septadas gruesas, conidióforogrueso, fialides & en las puntas seobserva conidias de color negro. Se

considera que es Aspergillus niger.

CAJA : LABORATORIO CLINICO 11 COLONIAS

MORFOTIPO 1

CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS




DIAMETRO DE LA COLONIA5o se puede medir por que sepresento invasión de colonias

COLOR DE ANVERSOolonia mostasa

COLOR DEL REVERSOolonia mostasa


TETURAalgodonosa

MARGEN1rregular, invadiendo lascolonias grises.

CRECIMIENTO: no conc%ntrico.



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TIPO DE HONGO

5o se identifico

DESCRIPCION MICROSCOPICA

no hubo una identificación de unaespecie exacta.

CAJA 4: AREA DE LAVADO8 COLONIAS

MORFOTIPO 1

CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS




DIAMETRO DE LA COLONIA5o se puede medir por que sepresento invasión de colonias

COLOR DE ANVERSOolonia blanco

COLOR DEL REVERSOolonia blanco


TETURAalgodonosa

MARGEN1rregular.

CRECIMIENTO: no conc%ntrico.



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TIPO DE HONGO

)ematiaceos5o se identifico

DESCRIPCION MICROSCOPICA

no hubo una identificación de unaespecie exacta.

ANALISIS DE RESULTADO

)urante el laboratorio de hongos ambientales logramos identificar con respectoa la información de todos los grupos que7

Denatiaceos, Fusarium sp y Penicillium sp son las especies dominantes en elambiente de los laboratorios, esto es debido a que contienen esporas que son


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on relacion a otros laboratorios espec'ficamente cl'nicos encontramos que elHU de las especies que habitan en estos lugares pertenecen a %l genero Aspergillus sp. omo alternativas de solución para el control de la diseminaciónde las esporas encontramos algo mu& novedoso como el A5/A45 V* estees un mecanismo del efecto inhibidor lo cumple mediante la emisión desustancias o componentes volátiles como el dióxido de carbono, etanol,acetaldeh'do, acetona, propanol, isobutanol e isopentanol, sustancias queimpiden el crecimiento de otros hongos, efecto conocido con fungistasis, queconsiste en un menor crecimiento micelial del patógeno e interferencia en la

bios'ntesis de melanina, sustancia esencial para el crecimiento de los hongos.

CUESTIONARIO

1. M!5) 7$ )$ !#/#"$% &,& $/ ,&)!,$ 5$ /) %6) &+3#$%!&/$).

*ara la captación del polen & esporas presentes en el aire existendiferentes procedimientos agrupables en procedimientos pasivos &activos o volum%tricos.

CAPTACION POR IMPACTO ACTIVO SAS COMPACT K


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#l m%todo se basa en el muestreo del aire problema mediante el aparato SAS(Surface Aire S&stem" compact. )e los muestreadores descritos en la 5/*@2!,se escogió %ste por ser de fácil mane;o, portátil & que permite elegir el medio decultivo adecuado a cada requerimiento.

#l aire muestreado se hace incidir sobre un medio de cultivo determinado,seg$n se pretendan valorar bacterias u hongos. *osteriormente se procede a laincubación a una temperatura adecuada & finalmente se efect$a el conta;e decolonias expresando el resultado en ufc


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A6&, 5$ )&3,&5 "% "/,&%f$%#"/#s un medio de cultivo sólido, espec'fico para hongos, compuesto por7*eptona de case'na............ E, g


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cultivo" & el muestreador se recomienda hacerlo con guantes est%rilesdesechables. )espu%s de cada bloque de toma de muestras, limpiar la cubiertadel muestreador con una solución desinfectante, teniendo la precaución de quese ha&a secado totalmente antes de tomar una nueva muestra.#l aparato dispone de un conector de control de tiempo, dividido en unidades

que van de a E, representando cada una de ellas un tiempo de 2segundos. #l volumen de aire muestreado en cada unidad es equivalente a !litros, lo que implica que se pueden realiar muestreos de una duración de 2segundos hasta E minutos & con unos vol$menes de ! a IE litros de aire.#l tiempo & el volumen de muestreo dependen de la contaminación ambientalque se sospeche. uanto ma&or sea %sta, menor es el tiempo de muestreo quese debe aplicar & viceversa.

M$5#) 5$ "/!#-

T,#!#)(&6&,

Se utilia este medio de cultivo para efectuar el conta;e de bacterias. 6na vetomada la muestra, se trasladan las cápsulas de *etri al laboratorio, de;ándolasen la estufa de cultivo a !JB durante IH horas.A6&,S&3,&5 "% "/,&%f$%#"/Se utilia este medio de cultivo para efectuar el conta;e de hongos. 6na vetomada la muestra, se trasladan las cápsulas de *etri al laboratorio de;ándolasen la estufa de cultivo a 2HB durante E d'as.R$"$%! 5$ "/%#&)*asado el tiempo de incubación, se observa el crecimiento de las colonias & seprocede al recuento de las mismas mediante un contador de colonias queproporciona el n$mero de colonias formadas por placa.C/"/)6na ve determinado el n$mero de colonias, & sabiendo el flu;o de aire & eltiempo de muestreo que se ha aplicado, se puede calcular el n$mero deunidades formadoras de colonias por metro c$bico de aire, aplicando la fórmulasiguiente7siendo757 n$mero de colonias por placa567 n$mero de unidades de tiempo empleadas en el muestreoLas cápsulas de *etri una ve llevado a cabo el recuento se retiran dellaboratorio empleando un contenedor de residuos biológicos.

C&+ 5$ &/#"&"#?%#n lugares que, por el tipo de traba;o que se realia en ellos, no precisan ser est%riles, se recomienda llevar a cabo el recuento de hongos & bacterias en airecuando exista una sintomatolog'a en la población expuesta que sugiera unaposible contaminación biológica causada por estos microorganismos.

uando el nB de ufc


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#ste m%todo se basa en el impacto de una masa de aire sobre una superficiecaptadora, que se desplaa con lentitud. La corriente de aire, en este caso, esactiva gracias a una bomba de aire colocada deba;o del colector. #l aire entrapor un orificio anterior e impacta sobre una superficie dispuesta verticalmente,constituida por una cinta transparente, impregnada por sustancias adhesivas.

#ste m%todo es $til porque la cinta puede permanecer durante una semanaexpuesta al aire. racias a los dispositivos mecánicos del aparato, elmovimiento lento de la misma permite separar las capturas diarias &, tambi%n,hacer una aproximación horaria de las mismas. *or contra, debe tenerseespecial cuidado en el monta;e de la cinta para la observación microscópica,evitando la formación de burbu;as & preparando monta;es no demasiadogruesos.NTP 8: C&/#5&5 5$ ,$ #%!$,#,: $-&/&"#?% 5$ /& ,$)$%"#& 5$ /$% ( $),&f%6#"&)!!:**www.+",/.%$!*NTP)*QD&!)*%!98.!+*1*11*201*:1@ +

CAPTACIN POR FILTRACIN ACTIVA. CAPTADOR MCV

#l aire a examinar es aspirado, a trav%s de un filtro de acetato de celulosa(-illipore". #ste tipo de filtro permite la identificación inmediata de las part'culas&a que se transparenta con aceite de inmersión. onsta de una cámarafiltradora con dispositivo de veleta, una bomba electromagn%tica de membranapara la aspiración de aire a ba;o volumen, un contador & un temporiador horario. #ste m%todo fue diseCado por Suáre@ervera Q Seoane@amba enXH!.

SAS ISO SUPER: SU COMPAERO EN LA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL


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#l mu& conocido SAS amarillo (Surface Air S&stem" se considera el estándar internacionalpara los muestreadores de aire portátiles microbiológicos. -ás de 2E aCos de experiencia se haadquirido en los cinco continentes a&udando a los microbiólogos en el sector hospitalario,industria farmac%utica & alimentaria, & los campos de calidad del aire en interiores. La

experiencia tambi%n ha sido adquirida en la exploración del espacio como el SAS (Surface Air S&stem" se utilia a bordo de la #stación #spacial 1nternacional. #ste conocimiento haresultado en el desarrollo de la nueva SAS@1S4 & SAS@1S4 H.

L& #5$& 3)#"&Y *ara utiliar una simple placa para el aire & la superficie de muestreoY *ara tener la ma&or flexibilidad de elección, &a sea placas de contacto o placas de *etriY *ara aplicar cL* & c-* a las operaciones de muestreo de aireY *ara establecer datos sobre el nivel microbiano en ambientes seleccionadosY 4rganiar el muestreo secuencial para obtener una muestra más representativa del aire encondiciones reales de funcionamiento del

#l SAS @ 1S4 tiene las siguientes caracter'sticas nuevas7Y +endimiento en el cumplimiento de la norma 1S4 IXH@Y *antalla L) iluminada grande con pantalla táctilY /odos los comandos de operador a trav%s de teclado táctil para facilitar la limpieaY -ás de J. litros de aire < H horas de autonom'aY /ransferencia por infrarro;os de toma de muestras de datos a * o impresoraY 3asta ! ciclos de muestreo memoriadaY cap'tulo 6S* Z[ & 2 ?+ umplimientoY ?recuencia de muestreo con precisión gestionada por el sensor de velocidad incorrecta anulala aspiración de cicloY diseCo evita la turbulencia en el flu;o de aire unidireccional & re@aspiración de aire probado deacuerdo con las especificaciones de la norma 1S4

!!:**www.#%!$,%&!#%&/3#.#!*5")*M#%#)#!#*SAS*V$,).I%6/$)$*)&)",.!+/*111201*:48PM

EL DECHADO DE AIRE DE SASPCR


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recoger los microorganismos patógenos dispersos en el bioaerosoles para casi en tiempo realde detección de pruebas de biolog'a molecular o las pruebas tradicionales de cultivomicrobiológico.

Las caracter'sticas SAS *+7 A%reo & que el flu;o de fluidos est%riles entre s' a trav%s de una boquilla & se vierte en unrecipiente con una bobina. #l l'quido se distribu&e continuamente para prolongar el tiempo decontacto entre bioaerosoles & la recolección de l'quido.

!!:**www.#%!$,%&!#%&/3#.#!*5")*M#%#)#!#*SAS*V$,).I%6/$)$*)&)",.!+/*1*11*201*:48+

A*/A)4+ )# AL/4 \4L6-#5 -\ A\@A


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CONCLUSION

Los autores de este laboratorio finaliamos subra&ando algo mu& importante &que debe quedar claroD los m%todos de impacto activo nos permiten lacaptación de microorganismos en el aire mediante una relación volum%trica

permitiendo expresar cuantitativamente las unidades formadoras de coloniasbacterianas o fungicidas, llegando en ciertos m%todos separar capturas de aireinclusive la identificación inmediata de las part'culas siendo importantes en elcontrol & estudio de la contaminación ambiental.

aislamiento de hongos ambientales

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