LABORATORIO DE AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES

PRESENTADO POR:

KAREN MOLINA VALEST

SAIRA PIMIENTA

STEFANY SUAREZ

PRESENTADO A

ADRIANA SANDON

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA

MICOLOGIA

VALLEDUPAR

2014

INTRODUCCION

El reino fungi, cumple un papel importante en ecología microbiana, debido a que sus miembros, los hongos, se encargan de cumplir variados ciclos biológicos y de nutrientes, ya que son los degradadores principales de la materia orgánica muerta, por esto se les conoce como saprofitos, este es un factor altamente influyente para que su dispersión en la naturaleza sea casi total, puesto que podemos encontrarlos en variados hábitats, principalmente a la intemperie, en la atmosfera.

Los hongos ambientales se encuentran creciendo habitualmente en el suelo, aire y a expensas de la vegetación, algunos factores ambientales como la humedad, la temperatura, la precipitación, contaminación, influyen de manera determinante en la proliferación y propagación de las partículas fúngicas hacia los espacios interiores (Calizaya et al, 2010).

Como ya sabemos los propágulos fúngicos, pueden permanecer en estado vegetativo y de latencia por tiempo prolongado y resistir condiciones adversas como temperaturas elevadas, desecación, e incluso algunos altas concentraciones de salinidad, esperando nuevamente encontrar las condiciones apropiadas para volver a germinar y poblar el espacio donde se encuentren.

Se han conseguido identificar más de 100.000 especies de hongos ambientales, sin embargo se cree que existen géneros y especies aun no identificadas, entre los géneros ya conocidos cerca de 200 especies producen patologías de variada índole en humanos (Bueno et al, 2003).

El método más común para el aislamiento de hongos ambientales es la obtención de esporas, mediante un medio de cultivo especial para hongos, esto se hace pasando la caja de Petri previamente abierta por las zonas donde deseamos aislar hongos, en la práctica a realizar tomaremos una placa con medio de cultivo sabouraud, y aislaremos hongos ambientales de nuestro sitio de trabajo el laboratorio de microbiología de la universidad popular del Cesar.

OBJETIVOS

Objetivo general:

Aislar hongos ambientales en diferentes sitios del área de los laboratorios de microbiología de la universidad popular del cesar.

Objetivos específicos:

Observar las características macroscópicas y microscópicas de cada morfotipo.

Identificar las implicaciones y roles que tienen los hongos ambientales en las áreas de laboratorio

Diferenciar las características macroscópicas y microscópicas de los hongos encontrados.

MARCO TEORICO

Los hongos, principalmente los filamentosos se caracterizan por ser organismos cosmopolitas, que pueden desarrollarse en variados sustratos, climas, e incluso en condiciones extremas (Calizaya et al, 2010).

La mayoría de los hongos son organismos de vida libre, es decir, los podemos encontrar en un sin número de ambientes ya sean terrestres o acuáticos, su ámbito es tan amplio, que sus esporas incluso sobrepasan la atmósfera (Aira et al, 2003), las esporas encontradas en la atmosfera corresponden a hongos del suelo, de la vegetación y del mar. Algunos de los géneros comúnmente aislados del aire son Penicillium, Aspergillus, Rhizopus, Mucor y Cladosporium, entre otros (López et al, 2006)

Por lo tanto, las esporas y otras estructuras fúngicas son componentes normales de ambientes externos y pueden ser la fuente contaminante de los ambientes internos y muchos de estos, pueden servir como sitios de amplificación para el crecimiento de los hongos (Bueno et al, 2003).

Los hongos ambientales han sido aislados en todos los lugares en que se han colocado medios de cultivo, identificándose más de 100000 especies, inclusive se han aislado esporas en alturas superiores a 3000 metros sobre el nivel del mar, encontrándose altas concentraciones en las nubes, el aire y bajo la mayoría de las condiciones climatológicas, predominando hongos pertenecientes al phyllum Basidiomycota y Ascomycota. Pueden encontrarse tanto dentro como fuera de los domicilios, dependiendo de las condiciones higiénicas del hogar y climatológicas del exterior. Las esporas de estos son muy resistentes y suelen ser de tamaño pequeño, entre 3 y 10 micras (Calizaya et al, 2010).

Cuando estos hongos se proliferan en ambientes internos como nuestros hogares, algunos tienden a convertirse en alérgenos, causantes de cuadros alérgicos respiratorios, dichos hongos se han denominado como hongos anemófilos.

Los hongos anemófilos generalmente se desarrollan sobre materia orgánica en descomposición, sin embargo al crecer en el interior de casas, lo pueden hacer sobre cualquier sustrato y contaminar alimentos, textiles, pisos, etc. Durante su ciclo biológico, estos hongos producen conidios, que son inhaladas por los humanos, por lo tanto la importancia de estos alérgenos radica no solo en su capacidad de estar en diferentes ambientes, sino de invadir las mucosas respiratorias de huéspedes susceptibles, donde la población que tiende a presentar mayor susceptibilidad son los niños y adolescentes (Guerrero et al, 2003).

Los componentes alergénicos de hongos contienen moléculas, como glucoproteínas, proteínas y polisacáridos, que pueden desencadenar reacciones de hipersensibilidad tipo I (Ruiz et al., 2006),

Hay un cierto nivel de los hongos ambientales que puede ser considerado como seguro. Esto depende de la concentración fúngica en los ambientes externos y de los tipos de esporas presentes en el ambiente interno (Bueno et al, 2003).

MATERIALES

4 Cajas de Petri con medio de cultivo PDA:

Caja1: Laboratorio de microbiología Caja2: Coordinación de laboratoriosCaja3: CeparioCaja4: Laboratorio clínico

Azul de lactofenol Asas micológicas Laminas y laminillas

PROCEDIMIENTO

Se tomaron cuatro cajas de Petri que contenían medio de cultivo PDA

Una vez abiertas, estas se expusieron al ambiente de los laboratorios de microbiología de la Universidad Popular del Cesar de la siguiente manera:

Caja 1 -------------------------------------- Lab de microbiologíaCaja 2 -------------------------------------- Coordinación de laboratoriosCaja 3 -------------------------------------- CeparioCaja 4 -------------------------------------- Lab Clínico

Las cajas se incubaron a temperatura ambiente aproximadamente por dos semanas

Se realizó el respectivo recuento de colonias

Se escogieron colonias que pudieran presentar un morfotipo y se hicieron montajes con azul de lactofenol para observar morfología microscópica

Se hicieron las respectivas identificaciones y descripciones de los morfotipos observados

RESULTADOS

Caja 1: Laboratorio de microbiología

Colonia 1Medio de Cultivo: PDATextura algodonosaLevantamiento de tapa, es decir, presenta micelio aéreoAnverso blancoReverso blancoMargen irregularNo presenta surcosColonia que al inicio tiende a ser plana de textura algodonosa, luego se torna algodonosa puntiforme con levantamiento

Colonia2Textura pulverulentaDematiácea Anverso grisReverso negroMargen irregularNo presenta surcosColonia inicialmente negra pulverulenta, se torna gris con textura pulverulenta y puntiforme

Colonia 1: Fragmoconidias o macroconidias fragmentadas de Fusarium sp, con una hifa septada atravesada en medio de las fragmoconidias y pertenece al phyllum Ascomycot

Colonia 2Curvularia sp con hifas dematiáceas gruesas, septadas con presentación de macroconidias ovaladas con uno de los lados abultados y dos o tres septos. Todo de color café

Caja 2: Coordinación de laboratorios

Medio de Cultivo: PDATextura: PulverulentaDematiáceaAnverso: grisReverso: negroMargen: irregularNo presenta surcos Colonias al inicio de color negro algodonosoPosteriormente se torna pulverulenta de color gris claro

Cladosporium sp

Hifas dematiáceasHifas septadasHifas sinuosas, es decir, presentan curvas y ondulaciones Conidios con cicatrices en extremos de diferentes formas.

Caja 3: Cepario

Medio de Cultivo: PDATextura: PulverulentaAnverso: Rosa o naranja claroReverso: Blanco amarillentoMargen: IndefinidoNo presenta surcosAl inicio se torna plana, luego se torna con un levantamiento leve, más o menos pulvinada.

Fragmoconidias o macroconidias fragmentadas de Fusarium sp, no hubo observación de hifas.

Caja 4: Laboratorio Clínico

Colonia 1Textura algodonosaAl inicio café y blanca algodonosa posteriormente se torna café pulverulenta de color café claroAnverso café y blancoReverso blanco aparentemente concéntricoMargen definido

Colonia 2Medio de cultivo PDATextura algodonosaAl inicio blanca, amarilla posteriormente se torna amarillo oscuro con apariencia pulverulenta Anverso: amarilloReverso blanco en los márgenes. Hialino en el centroMargen definidoNo presenta surcos.

Ambas colonias presentaron la misma Morfología que corresponde a hongos del phyllum zygomycotaEsporangios vacíos, ya hubo germinación de esporasEn 10X no se observaron hifas septadas.No se pudo hacer observación en 40XSe logra observar hifas dematiáceas café verdosas y otras hifas de color azul propias de zygomycotas

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Los hongos son organismos cosmopolitas que pueden desarrollarse en los sustratos más variados, en todos los climas de la tierra e incluso en condiciones extremas. Su ámbito es tan amplio, que sus esporas incluso sobrepasan la atmósfera (Aira et al., 2003). 

Las esporas fúngicas son componentes normales de ambientes externos y pueden ser la fuente contaminante de los ambientes internos y muchos de estos pueden servir como sitios de amplificación para el crecimiento de los hongos (Bueno et al., 2003). La inhalación sistémica de esporas y fragmentos de micelio de hongos puede inducir una afección alérgica respiratoria, tanto en las vías aéreas superiores como en las inferiores. Los componentes alergénicos de hongos contienen moléculas, como glucoproteínas, proteínas y polisacáridos, que pueden desencadenar reacciones de hipersensibilidad tipo I (Ruiz et al., 2006).

Las muestras que se procesaron en el laboratorio de microbiología fueron obtenidas de manera natural a través de la exposición de las cajas de Petri en las instalaciones (cuatro laboratorios: lab. Clínico, lab. de Microbiología, Cepario y lab. de Coordinación) de la Universidad Popular del Cesar bloque F. En esta práctica se observaron hongos filamentosos de diferentes características tanto macroscópicas como microscópicas, se caracterizaron dos géneros de los cuales el que más prevaleció fue Fusarium sp y Curvularia sp. El género Fusarium sp., fue encontrado en las cuatro cajas expuestas. Este estudio puede ser útil para comprobar la incidencia de los hongos ambientales y se podría inferir que la presencia de estos organismos es de gran importancia, ya que serviría para futuros controles para contrarrestar las posibles contaminaciones así como problemas de salud.

En comparación con el artículo “hongos ambientales en una biblioteca: un año de estudio” se pudo apreciar hongos ambientales en una biblioteca de investigación donde se trabaja con microorganismos en Argentina. En el cual se identificaron hongos y entre los más frecuentes fueron Cladosporium sp, Fusarium sp, Alternaría sp, Acremonium sp y Aspergillus sp. Se pueden mencionar algunas diferencias en estos estudios en la tabla. Aunque hay similaridad entre algunos géneros encontrados, puede ser debido a muchos factores como el clima, temperaturas óptimas de dichos hongos, entre otros. Como ya se había mencionado estos estudios son de importancia ya que así se podrían examinar q posibles riesgos y consecuencias se pueden tener conviviendo con estos organismos a diario.

Factores Hongos ambientales universidad popular

Hongos ambientales en una biblioteca

del cesar

T° de crecimiento Temperatura ambiente 25° - 28°C

Medio de cultivo Agar PDA Agar papa glucosada con cloranfenicol

Hongos aislados Fusarium sp, Curvularia sp

Cladosporium sp, Fusarium sp, Alternaría sp, Acremonium sp y Aspergillus sp.

BIBLIOGRAFIA

Manual de Micología Aplicada. Laboratorio No. 10 Aislamiento e identificación de algunos hongos del ambiente. Pág. 54.

Evaluación de hongos ambientales en mercados de abastos de la ciudad de Tacna – PerúCarla Calizaya LimacoGian Salazar TorresJosé Silva AburtoRevista mexicana de Micología 2010http://revistamexicanademicologia.org/wp-content/uploads/2010/07/8.-TR-188-65-67.pdf

Aislamiento e identificación de moho en el aire Leonor López TevezCarola Torreshttp://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp12.pdf

Hongos ambientales en una biblioteca: un año de estudio Dante J. Bueno Julio Silva

Cátedra de Micología, Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. http://eprints.rclis.org/12003/1/ad0602.pdf

Los mohos en el medio ambiente http://www.cdc.gov/mold/es/pdfs/faqs.pdf

Aislamiento de hongos en las instalaciones deportivas de la UNAM http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2003/un033d.pdf