aislamiento de campylobacter upc alvaro

8/18/2019 Aislamiento de Campylobacter Upc Alvaro

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%&'%&E*T+ E &,E*T&-&C%C&+* ,E Campylobacter jejuni ,E % P+B%C&*

C%*&*% /E H%B&T% E* % *&VE'&,%, P+P% ,E CE'% 'E,E

'%B%*% HT%,+

&*TE%*TE'4

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P%T&C&% HEE%

*&VE'&,%, P+P% ,E CE'%

-%CT%, ,E '%,

&C+B&++%

2015


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&*T+,CC&+*

Campylobacter spp es la principal causa de infecciones intestinales usualmente de

origen zoonótico. El cuadro clínico se manifiesta por una diarrea aguda, que puede o

no ir acompañada de vómitos, dolor abdominal, dolor de cabeza y malestar general. El

período de incubación es de 1 a 10 días, el cuadro clínico es muy autolimitado y dura

entre 2 a días.

!ay estudios que indicarían que Campylobácter es la primera causa de diarrea en

países desarrollados, por delante de otros patógenos

como Salmonella, Shigella y Escherichia coli . "cita reqeri!a#

$esde los años noventa y a pesar del aumento en las e%igencias sanitarias a la

industria de alimentos de Europa &ccidental, Estados 'nidos, (ustralia y )ueva

*elanda los casos de infecciones producidas por Campylobacter le+os de disminuir

an aumentado, sin e%istir una e%plicación para esto. -e destaca el caso

de $inamarca, en el que entre 10 y 2000 casos se triplicaron

El diagnostico de Campylobacter indica que alrededor del / de las infecciones por

campylobater son causadas por la especie "e"ni +unto con la especie coli

http#$$%%%&"a'eriana&e!&co$biblos$tesis$ciencias$tesis()*&p!+

El gnero campylobater se compone de bacilos rampositivos, pleomorfos, curvados

en espiral. -on móviles gracias a un flagelo polar, son microaerofiloss ya que toleran

pequeñas cantidades de o%igeno de 3 a 1/ de &2 4, son anaerobios y positivos a

o%idasa. )o fermentan carboidratos.

5ampylobacter +e+uni abita en vías intestinales de animales domsticos y silvestres,

los perros y gatos e%cretan con frecuencia el microorganismo y se afirma que puede

https://es.wikipedia.org/wiki/Zoonosishttps://es.wikipedia.org/wiki/Diarreahttps://es.wikipedia.org/wiki/V%C3%B3mitohttps://es.wikipedia.org/wiki/Salmonellahttps://es.wikipedia.org/wiki/Shigellahttps://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_colihttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Verificabilidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Verificabilidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Verificabilidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Europa_Occidentalhttps://es.wikipedia.org/wiki/Estados_Unidoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Australiahttps://es.wikipedia.org/wiki/Nueva_Zelandahttps://es.wikipedia.org/wiki/Nueva_Zelandahttps://es.wikipedia.org/wiki/Campylobacterhttps://es.wikipedia.org/wiki/Dinamarcahttp://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis106.pdfhttps://es.wikipedia.org/wiki/Diarreahttps://es.wikipedia.org/wiki/V%C3%B3mitohttps://es.wikipedia.org/wiki/Salmonellahttps://es.wikipedia.org/wiki/Shigellahttps://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_colihttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Verificabilidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Europa_Occidentalhttps://es.wikipedia.org/wiki/Estados_Unidoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Australiahttps://es.wikipedia.org/wiki/Nueva_Zelandahttps://es.wikipedia.org/wiki/Nueva_Zelandahttps://es.wikipedia.org/wiki/Campylobacterhttps://es.wikipedia.org/wiki/Dinamarcahttp://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis106.pdfhttps://es.wikipedia.org/wiki/Zoonosis


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causar una enteritis febril en estos animales. 6ambin produce abortos en perras yvaquillas y es causa importante de enteritis en el ombre.

+BET&V+'

+"eti8o 9eneral

(islar e identificar la especie Campylobacter "e"ni de la población canina que

abita en la 'niversidad 7opular del 5esar en las sedes -abanas y !urtado

+"eti8o epe$í:i$o

8dentificación de la especie Campylobacter "e"ni mediante aislamiento

bacteriológico y pruebas serológicas

%C+ TE+&C+

Las primeras observaciones de bacterias semejantes a campylobacter

fueron realizadas por Escherich, en 1886, a partir de materia fecal de niñosy gatos con diarrea. un!ue no pudo realizar los aislamientos Escherich,

denomino Vibrio felinus, a las bacterias observadas solo

microsc"picamente.

Los primeros aislamientos del genero campylobacter fueron realizados en el

#rea de microbiolog$a veterinaria en 1%&% y 1%1'. (ac )adyean y *to+mam


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y posteriormente *mit, en 1%18, establecieron la participaci"n de unabacteria microaerofila, en el aborto de ganado bovino y ovino de morfolog$a

similar a las especies de genero Vibrio, por lo !ue se le denomino Vibrio

fetus.

En 1%'1, jones y Little aislaron a partir de bovinos con disturbios

intestinales un vibri"n- microaerofilo al !ue denominaron Vibrio jejuni .

En 1%% /oyle descubri" un vibri"n aislado del intestino de cerdos con

diarrea y lo denomino Vibrio coli .La primera asociaci"n entre estas bacterias curvas y diarrea en el hombre

fue sugerida por Levi, en 1%6. En 1%0 E. 2ing estudiando las

caracter$sticas de estos vibrios estableci" !ue no todos corresponden a

Vibrio fetus, determinando 3 grupos con caracter$sticas serol"gicas y

bio!u$micas diferentes. (ientras algunos eran capaces de crecer a 30 y '

grados cent$grados, otros lo hac$an a 3.

En 1%6', *ebald y veron, proponen la creaci"n del geenero campylobacterpara incluir esta bacteria en la d4cada de los &, 5utzler y *+irro, 5olton y

7obertson, 5laser y col, desarrollaron medios selectivos !ue permitieron

aislar estos microorganismos y establecer su participaci"n en diferentes

cuadros infecciosos en el hombre y animales.

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis106.pdf

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'T&-&C%C&+*

9a campilobacteriosis es una enfermedad causada por Campylobacter una bacteria

que causa enfermedad en animales y umanos, la mayoría de casos se relacionan

con mane+o e ingesta de alimentos contaminados con dica bacteria, predominando

aquellos alimentos proveniente de carne de corral cruda o sin cocción adecuada, esta

bacteria termotolerante, reconocen como reservorios naturales una gran variedad de

especies de animales domsticos y silvestres :laser, 1;3< =ogasundram y col.,

1;< iacoboni y col., 134.

9os perros y gatos son portadores y, por su estreca relación con el ser umano al ser

utilizados como mascotas, se describen como una fuente probable de infección, por

contacto directo con mascotas infectadas, es importante resaltar que las especies

varían de acuerdo al ospedador susceptible a la enfermedad por lo cual esindispensable el conocimiento de las especies prevalentes, así como la

individualización e identificación de las cepas aisladas ya que estas proveen

información epidemiológica y permite relacionar las fuentes de contagio y el modo de

transmisión. 9os mtodos de tipificación convencionales, basados en las pruebas

bioquímicas, resistencia a varios agentes y tolerancia a diferentes temperaturas, son

pruebas fenotípicas que se utilizan para caracterizar las cepas aisladas.

En la 'niversidad 7opular del 5esar, sedes -abanas y !urtado, e%iste una población

canina bastante densa, de animales +óvenes y adultos, que presentan adem>s

infecciones respiratorias, digestivas, etc y que podrían ser importantes focos de

diseminación para Campylobacter, ya que estos animales se encuentran en contacto


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directo con otros animales susceptibles y con la población estudiantil, docentes ycuerpo administrativo del claustro acadmico.

H&P+TE'&'


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%TE&%E' ET+,+'

!isopos

?edios -electivos, diferenciales y de enriquecimiento :!8, $urfty y 5lar@, y

(gar -angre4

Ait Enzimoinmunoensayo E98-(

6irillas de &%idasa

Barra de (naerobiosis

6irillas de &%idasa

,&%*+'T&C+ ,E %B+%T+&+

7uede realizarse el diagnóstico por la demostración del microorganismo en e%amen

directo o a travs del cultivo. El uso de los mtodos serológicos para el diagnóstico

tiene valor para la investigación, ya que en países en vías de desarrollo los títulos en

la población suelen ser altos. El e%amen de las muestras fecales diarreicas utilizando

microscopio de campo oscuro o contraste de fase, dentro de las 2 oras de

evacuación, puede permitir un diagnóstico presuntivo r>pido si se observa la r>pida

motilidad de las especies de Campylobacter en su mayoría acompañadas por

eritrocitos y neutrófilos. 7ara cultivo y aislamiento a partir de materia fecal se requiere

de una atmósfera microaerófila, medios de cultivo selectivos para inibir la flora


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acompañante, temperatura óptima de desarrollo C2DC354, aunque puedendesarrollar a 3F5, p! óptimo de crecimiento G,DG,

E'T%'

9as muestras de deposiciones pueden ser tomadas con isopo rectal o bien por

evacuación espont>nea, pudiendo mantenerse a temperatura ambiente, por algunas

oras, evitando su desecación. 9a refrigeración de las muestras prolonga por varios

días la sobrevida del microorganismo. -i es necesario usar un medio de transporte,

debe utilizarse el medio 5ary :lair modificado por la reducción de la concentración de

agar en un 0,12/

EX%E* &C+'C+P&C+ ,&ECT+

9as muestras de materia fecal pueden ser e%aminadas a travs de una tinción simple

como ram utilizando carbolfucsina como colorante de contraste, o azul de metileno

para identificar leucocitos y formas bacilares curvas. 9a observación en microscopioóptico o de campo oscuro de bacilos curvos yHo espirilados con gran motilidad en

forma circular o de sacacorcos nos permite un diagnóstico presuntivo r>pido.

CT&V+ E* E,&+' 'EECT&V+'

9as placas se siembran en forma directa con isopo o con 2D3 gotas de deposiciones

acuosas, se disemina por estría. -e incuban con una atmósfera microaerófila que

tenga D 10/ de o%ígeno y 3 a 10/ de dió%ido de carbono. $ado que en una diarrea

el nImero de Campylobacter es alto, no es necesario realizar enriquecimiento. -e

recomienda solo en caso de esperar un ba+o nImero de microorganismos

manipuladores, convalecientes4.


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ET+,+ ,E -&T%C&+* P%% % ,ETECC&+* ,E C%P+B%CTE E*HECE'

El mtodo se basa en la separación de Campylobacter del resto de la flora microbiana

presente en las eces, como por e+emplo los coliformes, que quedan retenidos en la

superficie de una membrana de celulosa de 0,C o 0,GG Jm< los bacilos que logran

penetrar o transponer la membrana van a depositarse sobre un medio rico con sangre

que actuar> como sustrato para el crecimiento del microorganismo. $e esta manera

se obtiene un cultivo selectivo, situación que reemplaza a la adición de antibióticos,

para eliminar la flora acompañante.

6E?7EK(6'K( $E 8)5':(58L)

9as especies termófilas de Campylobacter crecen me+or a C2DC35 que a 3F5.

EX%E* ,E %' P%C%'

El tiempo de incubación ideal es de C; oras, aunque si el caso lo requiere, se

pueden e%aminar a las 1;D2C oras. 9as colonias sospecosas pueden observarse

planas, no emolíticas de aspecto acuoso, gris>ceas, con bordes irregulares y con

tendencia a diseminarse. ?ucas veces se pueden ver incoloras. -e les debe realizar

una identificación presuntiva para su posterior confirmación y tipificación.

&,E*T&-&C%C&+* PE'*T&V%

6inción de ramM debido a que este microorganismo no se tiñe bien con safranina, se

recomienda el uso de carbolfucsina al 0,;/ como coloración de contraste. 6eniendo

en cuenta la morfología característica, es posible realizar solo la coloración simple con

este colorante. 5atalasaM se debe colocar sobre un portaob+etos limpio una colonia de


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un cultivo fresco, agregar una gota de peró%ido de idrógeno al 3 /. 'na reacciónpositiva se evidencia por la 13 formación de burbu+as producto de la liberación de

o%ígeno a partir de la reducción del peró%ido de idrógeno. &%idasaM se debe utilizar

un buen inóculo que se coloca en un tubo de emólisis conteniendo 0,2 ml de agua

destilada a la que se le introduce un disco impregnado en la solución de o%alato de pD

aminodimetilamina. 9a enzima, citrocromo o%idasa es convertida a su forma activa por

la transferencia de electrones al o%igeno molecular. En presencia de o%igeno

molecular un gran nImero de electrones pueden ser transferidos por el sistema

citocromo o%idasa a una cantidad de compuestos org>nicos, entre ellos a la

paminodimetilamina.'na reacción positiva se evidencia por el desarrollo de color ro+o.

?otilidadM se realiza por microscopía óptica, de contraste de fase o campo oscuro

donde se observa microorganismos espiralados o con forma de -.

ttpMHHNNN.cdc.govHncidodHdbmdHgssHpublicationsHdocumentsH(rgentinaD

9evel8H?anual7rocedimientosO5ampylobacter.pdf

PEB%' 'E+&C%'

9os mamíferos colonizados, así como los umanos infectados, desarrollan respuestas

con anticuerpos circulantes a C&"e"ni& )o e%isten pruebas serológicas validadas para

la detección de infecciones por Campylobacter, sino que se pueden utilizar en

enzimoinmunoensayo preparaciones simples de antígenos comple+os incluyendo

proteínas superficiales e%traíbles por >cido.

C+*-&%C&*


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-e necesita un cultivo puro para pruebas confirmativas, pero se puede obtener unaconfirmación preliminar mediante e%amen microscópico directo del material con

colonias sospecosas.

9as pruebas confirmativas de la presencia de Campylobacter termófilos y su

interpretación se proporcionan en el 5uadro siguiente. 9os resultados de las pruebas

de confirmación se confirman utilizando controles positivos y negativos.

E;a!en !i$ro$s vie+os

muestras formas cocoides menos móviles.

,ete$$i


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-er!enta$i?$are = produ$$i


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