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Instituto politcnico nacionalESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICASLABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERALAISLAMIENTO DE BACTERIAS A PARTIR DE PRODUCTOS BIOLGICOSEQUIPO 2:DE JESS QUIROZ CARLOSGARCA LVAREZ VICTOR FERNANDOOBJETIVOSConocer algunas tcnicas y medios de cultivo para el aislamiento y cultivo de microorganismos a partir de productos biolgicos.

Reconocer que tipo de medios son los que se utilizaron en esta prctica y que componentes de su formulacin les confieren las caractersticas presentadas.

INTRODUCCINLa microbiota normal, flora microbiana normal, o microbioma humano es el conjunto de microorganismos que se localizan de manera normal en distintos sitios del cuerpo humano. Puede ser definida como los microorganismos que son frecuentemente encontrados en varias partes del cuerpo, en individuos sanos. Esta microbiota normal est en relacin simbitica comensal con el hospedador, ya que tambin se obtienen ventajas de ellos tanto como ellos la obtienen del individuo; estos ayudan en la digestin del alimento, producen vitaminas y protegen contra la colonizacin de otros microorganismos que pueden ser patgenos, lo cual es llamado antagonismo microbianoENTRE EL 60 Y 80% DE LOS MICROORGANISMOS DE NUESTRA MICROBIOTA NO ES CULTIVABLE

FRECUENCIA RELATIVA DE ESPECIES BACTERIANAS EN LA FLORA FECALRangoPorcentajeMicroorganismo(s)112.0Bacteroides vulgatus27.0Fusobacterium prausnitzi36.5Bacteroides adolescentia46.0Ebacterium aerofaciens64.5Bacteroides thetaiotaomicron73.6Eubacterium eligens93.2Eubacteriumbioforme112.3Bacteroides distasonis280.7Bacteroides ovatus290.6Bacteroides fragilis59 - 750.13Enterococus faecalis76 - 1130.06Escherichia coli, Klebsiella pneumoniaey otras 37 especies bacterianasCONCEPTOS IMPORTANTESAISLAMIENTOMEDIO DE CULTIVOMEDIO DE CULTIVO SIMPLEMEDIO DE CULTIVO RICOMEDIO DE CULTIVO MINIMOMEDIO DE CULTIVO SELECTIVOMEDIO DE CULTIVO DIFERENCIALMEDIO DE CULTIVO DE TRANSPORTEMEDIO DE CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO

PROCESO EXPERIMENTALAISLAMIENTO DE BACTERIAS DE MATERIA FECAL

MATERIA FECALEMBMaCSSINCUBAR A 37C 24-48 HAISLAMIENTO DE BACTERIAS DE ORINA

MUESTRA DE ORINAEMBMaCBHIASMINCUBAR A 37C 24-48 H2 ASADASAISLAMIENTO DE BACTERIAS DE EXUDADO FARINGEO Y NASOFARINGEO

EXUDADO FARINGEO

AGAR SANGREBHIASMINCUBAR A 37C 24-48 HEXUDADO NASOFARINGEO

AGAR SANGREBHIASMINCUBAR A 37C 24-48 H

MICROORGANISMOS DEL TRACTO RESPIRATORIOMicroorganismoUbicacinEnfermedadEnterobacteriaceaeBoca, faringeNeumona, absceso pulmonarMoraxella spp.Nasofringe ConjuntivitisPeptostreptococcus spp.Boca, amgdalasGangrena pulmonar, faringe absceso pulmonarStreptococcus pneumoniaeBoca, amgdalas, narizNeumona, conjuntivitis, meningitis, otitisTorulopsis glabrataBocaInfecciones tracto urinarioRESULTADOSE.M.B (EOSINA-AZUL DE METILENO)TIPO DE MEDIO DE CULTIVOSELECTIVOFUNDAMENTOEste medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:Indicadores de Eosina y Azul de metileno.FUENTE DE CARBONOSacarosaCARBOHIDRATO FERMENTABLELactosaFACTOR DE CRECIMIENTOPEPTONA

Eosina Y Azul de MetilenoMicroorganismosTipo de ColoniaEscherichia coliVerdosas con brillo metlico y centro negro azuladoKlebsiella pneumoniaeMucosas, rosa prpura, confluentesProteus mirabilisIncolorasEnterococcus faecalisIncoloras, pequeas, puntiformesShigella flexneriIncolorasSalmonella typhimuriumIncolorasRpida fermentacin de la lactosa

CARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3COLONIA 4TAMAOCIRCULARCIRCULARCIRCULARCIRCULARFORMA2 mm2 mm10 mm1mmCOLORROJAS CO HALO VERDE METALICOTRANSPARENTE HALO METALICOVIOLETA INTENSOVIOLETABORDEENTEROENTEROENTEROENTEROSUPERFICIELISALISALISAGRANULOSALUZ TRANSMITIDAOPACAOPACAOPACAOPACALUZ REFLEJADABRILLANTEBRILLANTEBRILLANTEBRILLANTEELEVACIONPLANAPLANAPLANAPLANAASPECTOHMEDASECASECASECACONSISTENCIAMUCOIDEMUCOIDESUAVEDURAEFECTO SOBRE EL MEDIOCOLOR VERDE ALREDEDOR DE LA COLONIACOLOR VERDE ALREDEDOR DE LA COLONIANOFERMENTACIN DE LACTOSATIPO DE PRUEBAFECALFECALFECALFECALEQUIPO2LAB 43LAB 45LAB 45LAB 3MORFOLOGIA MICROSCOPICACOLONIA 1COLONIA 2 COLONIA 3COLONIA 4GramNegativa---FormaBacilos---AgrupacinAisladas---EsporasNo---

MaC (Agar Mac Conkey)TIPO DE MEDIO DE CULTIVOSELECTIVO Y DIFERENCIALFUNDAMENTOEste medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos.

COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:Diferencial: LactosaSelectivo: mezcla de sales biliares y el cristal violetaCOMPONENTE QUE PROMUEVE EL DESARROLLO BACTERIANOPEPTONAINDICADOR DE pHROJO NEUTRO6.8 ROJO8.0 AMARILLOSi la lactosa es fermentada las colonias se observarn de color rosadoMicroorganismosColoniasEscherichia coliRojas con halo turbioKlebsiella pneumoniaeRosadas mucosasSalmonella typhimuriumIncoloras, transparentesShigella flexneriIncoloras, transparentesProteus mirabilisIncoloras, transparentesEnterococcus faecalisDiminutas, incoloras, opacas

CARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3COLONIA 4TAMAO3 mm5 mm 8mm8 mmFORMACIRCULARCIRCULARAMIBOIDEIRREGULARCOLORROSAROSAMORADONARANJABORDEENTEROENTEROENTEROONDULADOSUPERFICIEFILAMENTOSALISAGRANULARGRANULARLUZ TRANSMITIDATRASLUCIDATRASLUCIDATRASLUCIDAOPACALUZ REFLEJADABRILLANTEBRILLANTEBRILLANTEMATEELEVACIONPLANAPLANAC. PALPILADAPLANAASPECTOHMEDOHMEDOHMEDOSECACONSISTENCIASUAVEMUCOIDEMUCOIDEDURAEFECTO SOBRE EL MEDIOCOLOR ROSA ALREDEDOR DE LA COLONIACOLOR ROSA ALREDEDOR DE LA COLONIAACIDIFICACINSINTIPO DE PRUEBAORINAORINAFECALORINAEQUIPO4LAB 42LAB 43LAB 35 LAB 4MORFOLOGIA MICROSCOPICACOLONIA 1COLONIA 2 COLONIA 3COLONIA 4GramNegativaNegativa--FormaCocosBacilos--AgrupacinRacimosAisladas--EsporasnoNo--

Agar Salmonella-Shigella(SS)TIPO DE MEDIO DE CULTIVOSELECTIVO Y DIFERENCIALFUNDAMENTOMedio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. Aparte de la fermentacin se puede ver formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:Diferencial: LactosaSelectivo:sales biliares y el verde brillanteINDICADOR DE pHROJO NEUTRO6.8 ROJO8.0 AMARILLO

MicroorganismosColoniasSalmonella typhimuriumTransparentes, centro negroShigella flexneriIncolorasShigella sonneiIncolorasProteus mirabilisTransparentes, centro negroEscherichia coliRosadas a rojasKlebsiella pneumoniaeRosadas cremosas y mucosasEnterococcus faecalisIncoloras, de muy escaso crecimientoCARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3TAMAO5 mm1 mm3mmFORMAFILAMENTOSAIRREGULARCIRCULARCOLORNEGROROSAROSABORDEFIMBRIADOLOBULADOENTEROSUPERFICIEARBORESCENTELISALISALUZ TRANSMITIDAOPACATRASLUCIDAOPACALUZ REFLEJADABRILLANTEBRILLANTEMATEELEVACIONUMBONADACONVEXAPLANAASPECTOHMEDOHMEDOHMEDOCONSISTENCIADURAMUCOIDESUAVEEFECTO SOBRE EL MEDIOVIRE ROJO ALREDEDORNONOEQUIPO5LAB 34LAB 43LAB 4

BHI (BRAIN HEART INFUSION)TIPO DE MEDIO DE CULTIVORICOUSOEs un medio slido muy apropiado para el cultivo de bacterias y hongos, incluyendo los de difcil desarrollo , ya que es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano.

COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:Composicin en siFUENTE DE CARBONOPEPTONAAZUCAR FERMENTABLEGLUCOSAStreptococcus pneumoniae ( Crecimiento de bueno a excelente)Trichophyton mentagrophytes (Crecimiento de bueno a excelente)Candida albicans (Crecimiento de bueno a excelente)Listeria monocytogenes (Crecimiento de bueno a excelente)Shigella flexneri (Crecimiento de bueno a excelente)CARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3COLONIA 4TAMAO3mm4mm2mm8mm FORMAFUSIFORMECIRCULARCIRCULARIRREGULARCOLORBLANCOBLANCOAMARILLOBLACO AMARILLENTOBORDEENTERO ENTEROENTEROENTEROSUPERFICIELISALISALISALIGERAMENTE GRANULARLUZ TRANSMITIDATRASLUCIDATRASLUCIDAOPACAOPACALUZ REFLEJADABRILLANTEMATEMATEMATEELEVACIONCRATERIFORMECONVEXA PLANAPLANAPLANAASPECTOHMEDOHMEDOHMEDOHMEDOCONSISTENCIAMUCOIDEMUCOIDESUAVEBUTIROSAEFECTO SOBRE EL MEDIONONONONOTIPO DE PRUEBAORINAEXUDADO NASOFARINGEOORINAEXUDADO FARINGEOEQUIPO2LAB 43LAB 41LAB 45LAB 4MORFOLOGIA MICROSCOPICACOLONIA 1COLONIA 2 COLONIA 3COLONIA 4GramNegativaNegativa--FormaCocosBacilos--AgrupacinRacimosAisladas--EsporasnoNo--

AGAR MANITOL SALADOTIPO DE MEDIO DE CULTIVOSELECTIVO Y DIFERENCIALUSOUtilizado para el aislamiento y diferenciacin de Staphylococcus.Es recomendado para el aislamiento de Staphylococcus patognicos.COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:Diferencial: NaCl (altas concentraciones)Selectivo:alta concentracin salinaINDICADOR DE pHRojo FenolpH 6.8(amarillo) Fermentacin de ManitolpH 7.4 (anaranjado)pH 8.4(rojo)MicroorganismosCrecimientoCaractersticas de las coloniasStaphylococcus aureusExcelenteAmarillaStaphylococcus epidermidisBuenoRojaEscherichia coliInhibidoInhibidoKlebsiella pneumoniaeInhibidoInhibido

TIPO DE MICROORGANISMOOBSERVACINFERMENTADORES DE MANITOLHALO AMARILLO ALREDEDOR DE LA COLONIANO FERMENTADORES DE MANITOLHALO ROJIZO ALREDEDOR DE LA COLONIACARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3COLONIA 4TAMAO2 mm3mm1mm2mmFORMACIRCULARCIRCULARCIRCULARCIRCULARCOLORBLANCOROSAAMARRILLOAMARILLOBORDECILIADAENTEROFILAMENTOSOENTEROSUPERFICIELISALISALISALISALUZ TRANSMITIDATRANSLUCIDAOPACOOPACOTRASLUCIDALUZ REFLEJADABRILLANTEMATEBRILLANTEBRILLANTEELEVACIONCONVEXA PLANAPLANAPLANACONVEXAASPECTOHMEDOHMEDOHMEDOHMEDOCONSISTENCIASUAVESUAVEMUCOIDEMUCOIDEEFECTO SOBRE EL MEDIOCAMBIO A AMARILLONINGUNONINGUNOACIDIFICACINTIPO DE PRUEBAEXUDADO NASOFARINGEOFECAL--EQUIPO2LAB 43LAB 41LAB 33LAB 3MORFOLOGIA MICROSCOPICACOLONIA 1COLONIA 2 COLONIA 3COLONIA 4GramPositiva---FormaCocos---AgrupacinCadenas---Esporasno---

AGAR SANGRETIPO DE MEDIO DE CULTIVOENRIQUECIDO Y DIFERENCIALUSOMedio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos. Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualizacin de reacciones de hemlisis. COMPONENTE DETERMINANTE DEL TIPO DE MEDIO:sangre ovina desfibrinada TIPO DE HEMLISISOBSEVACIONESALFA O HEMLISIS PARCIALSe observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio.BETA O HEMLISIS TOTALSe observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudioGAMA O SIN HEMLISISEl medio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.

ALFAGAMABETA

CARACTERISTICACOLONIA 1COLONIA 2COLONIA 3COLONIA 4TAMAO2,5 mm2 mm1mm6mmFORMACIRCULAR CIRCULARCIRCULARCIRCULAR COLORBLANCOGRISBLANCOGRISBORDEENTEROENTERAENTEROENTEROSUPERFICIELISALISALISOLISOLUZ TRANSMITIDAOPACATRASLUCIDAOPACATRASLUCIDALUZ REFLEJADABRILLANTEMATEMATEBRILLANTEELEVACIONPLANACONVEXA PLANACONVEXACONVEXA PLANAASPECTOHMEDOHMEDOHMEDOHMEDOCONSISTENCIAMUCOIDEMUCOIDESUAVESUAVEEFECTO SOBRE EL MEDIONONOHALO AMARILLONOTIPO DE HEMLISISGAMAGAMMABETAGAMMAEQUIPO1LAB 33LAB 45LAB 34LAB 4MORFOLOGIA MICROSCOPICACOLONIA 1COLONIA 2 COLONIA 3COLONIA 4GramNegativo-NegativoPositivoFormaCocos-CocosCocosAgrupacinRacimos-RacimosRacimosEsporasno-nono

CuestionarioTienen alguna importancia para su carrera o desarrollo profesional estas tcnicas?Las enterobacterias son un buen indicador de contaminacin en alimentos procesados que han sufrido un tratamiento que elimine la flora microbiana vegetativa.Escherichia coli Esta enterobacteria es un buen indicador de contaminacin fecal y de presencia de microorganismos patgenos.Salmonela Esta enterobacteria es un buen indicador de contaminacin fecal del canal bovino, porcino y aves de corral, y del control de la bioseguridad en las granjas.Qu carctersticas en comn tienen los medios de cultivo usados para cada muestra?Porque cree que se seleccionaron en particular cada muestra?Identificacin de microorganismos de la microbiota normal, componente en comn peptona y entre algunos se puede notar la fermentacin de la Lactosa.Por la cantidad de microorganismos que contienen y la facilidad en su obtencin.ConclusionesMediante los medios EMB y MacConkey se lograron obtener microorganismos capaces de fermentar Lactosa, as entre estos identificar la bacteria E. coli.En el medio de Gelosa Sangre se diferenci los tipos de hemlisis beta y gamma.Se comprendi el fundamento de cada medio, saber para que microorganismos se pueden ocupar y obtener un diagnstico sobre las bacterias que se generan en el cuerpo humano.http://www.juntadeandalucia.es/averroes/iesvicen/depart/biolog/pdf/p21.pdfFundamentos de fisiologa gastrointestinalEscrito por Thomas J. Sernka, Eugene D. Jacobsonhttp://facultad.bayamon.inter.edu/yserrano/factoresfisicosqui.htmhttp://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/12.IndicadoresdepH_9152.pdfBritaniaLabMurray PR, EJ, MA, Tenover FC. Yonken RH (editores). Manual of Clinical Microbiology, 6a edicin. American Society for Microbiology, Washington, DC 1995.Shaechter M, Medoff G, Eisenstein BI (editores). Mechanisms of MicrobiaDisease. 2a edicin. Williams & Wilkins, Baltimore, 1993.

BIBLIOGRAFIASUERTE EN SU EXAMEN