5. proce-laboratorio-aislamientos-hongos (1)

PROCEDIMIENTO LABORATORIAL PARA

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE HONGOS

M. Sc. Roberto Ventura FloresBiólogo – Microbiólogo

[email protected]

mailto:[email protected]

DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO Examen directo por microscopía, pruebas inmunológicas o

técnicas genéticas. Aislamiento del agente de diversos sitios anatómicos o fluidos

corporales. Respuesta de anticuerpos específicos contra el patógeno.

MUESTRAS MICOLOGICASMICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton

Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia 1 Piedras: Trichosporom ovoides,

T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii. 1

MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, 1,3,4,5,7,8,11

*Criptococosis: C. neoformans. 4,5,6,7,8,10

*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,

Mucur circinelloides*Aspergillus: A. fumigatus, A. niger, A. flavus, a terreus, etc.

MICOSIS SISTEMICAS O PROFUNDAS Coccidioidomicosis: Coccidioides

immitis y C. posadasii Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis

MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, 4, 10

Esporotricosis: S. schenckii. 1, 4, 10 Cromoblastomicosis: Fonsecaea

pedrosoi y Cladophialophora carrionii

1. Piel (escamas)2. Pelo3. Uña4. Exudado5. Esputo6. Lavado bronquiales7. LCR8. Orina9. Medula ósea10. Frag. de biopsia11.Sangre12. Heces

1, 2, 3

2

1*

1. 4, 5, 6

4, 5, 7, 10

4,5,6,7,9,10

4,5,6,7,8,10

4,5,6,10

5,6

4,5,6, 12

DIAGÓSTICO DIRECTO DE RASPADO DE PIEL

ARTROCONIDIASKOH

Se observa BLASTOCONIDIASCompatibles con Malassezia

Azul de Lactofenol

http://3.bp.blogspot.com/-BmDLqNj1j2M/T0lggZvWztI/AAAAAAAAG_s/H9q6XUBUYTU/s1600/03-+Trichphyton+rubrum+Infected+Nail+(KOH)+1.jpg


CULTIVO DE RASPADO DE PIEL

Sabouraud

Diagnostico:Dermatofito

30°CT°Ambiente

CULTIVO DE MUESTRAS DE PELO

Diagnostico:Dermatofito TrichosporumPiedraia ¿?

30°CT°Ambiente

Sabouraud

DIAGNOSTICO DIRECTO DE ONICOMICOSIS

ARTROCONIDIAS

KOH



CULTIVO DE MUESTRAS DE UÑA

Diagnostico: Dermatofito candidiasis

30°CT°Ambiente

Sabouraud

EXUDADO

MICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton

Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia Piedras: Trichosporom ovoides,

T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii

MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, etc.*Criptococosis: C. neoformans*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,




MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc. Esporotricosis: S.schenckii Cromoblastomicosis: Fonsecaea


CULTIVO DE EXUDADOS

30°CT°Ambiente

Sabouraud

EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO DE ORINA

30°CT°Ambiente

Sabouraud

CENTRIFUGADO

30°CT°Ambiente

Sabouraud

CULTIVO DE LCR

Detección de antígenos capsulares: Técnica: aglutinación de partículas de látex sensibilidad con anticuerpos monoclonales Específicos anti C. neoformans. Sensibilidad en LCR: > 95%

Sensibilidad cercana al 100%

OTROS: Histoplasmosis: H. capsulatum Paracoccidioidomicosis: P. brasiliensis Blastomicosis: Blastomysis dermatitidis

CULTIVO DE BIOPSIAS

30°CT°Ambiente

Sabouraud

TECNICA DE MICROCULTIVO

30°/ Tiempo variable

Cultivo positivo:DERMATOFITO

Cultivo positivo:Sporothix sp.

Cultivo positivo:Aspergillus sp.

MICROCULTIVO: IDENTIFICACION DERMATOFITOS

Microsporum

Diferenciar microconidios de macroconidios

Trichophyton

Epidermophyton

MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Sporotrix schennkii

simpoduloconidios

MICROCULTIVO: IDENTIFICACION Aspergillus

Aspergillus flavus Aspergillus fumigatus

vesicula

Aspergillus niger Aspergillus terreus

fiálides

conidióforo

Microconidios

SEROLOGIA

MICOSIS SUPERFICIALES: Dermatofitos: Trichophyton

Microsporum y Epidermophyton Pitiriasis versicolor: Malassezia Piedras: Trichosporom ovoides,

T. inkin y T. cutaneum. Piedraia hortae. Tiña negra: Hortaea werneckii

MICOSIS OPORTUNISTAS:*Candidiasis: C. albicans, etc.*Criptococosis: C. neoformans*Neumosistosis: P. jirovecii*Zigomicosis: Rhizopus oryzae,




MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Micetoma: Nocardia, Streptomyces, etc. Esporotricosis: S.schenckii Cromoblastomicosis: Fonsecaea


(β -1,3 D-GLUCANOS

DETERMINACION DE β -1,3 D-GLUCANOS

PRODUCTOS LIBERADOS EN ALGUNAS INFECCIONES FUNGICAS:

CANDIDIASIS

NEUMOCISTOSIS

ASPERGILOSIS

SE REALIZA EN SUERO SANGUINEO POR METODO DE ELISA Y SU

POSITIVIDAD SÓLO ES SUGESTIVO DE INFECIÓN FUNGICA.

PRINCIPIO Y APLICACION

AGAR CROMOGENICO CANDIDA es un medio selectivo y de

diferenciación para el aislamiento de hongos. Con la inclusión de sustratos

cromógenos en el medio, las colonias de C. albicans, C. tropicalis y C. krusei

producen colores diferentes, lo que permite la detección directa de estas

especies de levaduras en la placa de aislamiento.

En el medio la glucosa es el carbohidrato fermentable aporta carbono y

energía. La Peptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos

esenciales para el crecimiento. El Cloranfenicol es un antibiótico que ayuda

en el aislamiento de hongos patógenos de muestras clínicas altamente

contaminadas. La Mezcla de cromogenicos permite la identificación y la

diferenciación de las 3 especies de candidas.

Cultivo en medios cromogénicos

La región genómica más frecuentemente utilizada para detectar ADN

fúngico e identificar especies, es la que incluye el complejo ribosomal

(genes 18S, 5.8S y 28S). Estos genes contienen secuencias conservadas

comunes a todos los hongos y también, dominios variables y regiones

espaciadoras internas (ITS), altamente variables.

BIOLOGIA MOLECULAR:

PCR

PCR: Es una síntesis in

vitro, exponencialmente

progresiva, de una

secuencia (target) de ADN

Componentes: Oligonucleótidos (cebadores) Tampón (buffer) ADN polimerasa termoestable Desoxinucleótidos (dNTPs) Cloruro de Magnesio (Mgcl2) ADN molde

Segunda especialidad en Microbiología Clínica

GRACIAS

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