CARACTERIZACION MACROSCOPICA Y MICROSCOPICA DE CULTIVOS BACTERIANOS

OBJETIVO GENERAL

Reconocer las diferentes morfologas macro y microscpicas de los bacterios, mediante la descripcin de los diferentes atributos (tamao, forma, color, olor, consistencia, etc.) macroscpicos y sensoriales, y de las diferencias de forma y tincin al nivel microscpico.

OBJETIVOS PARTICULARES

Apropiarse de la destreza requerida en la manipulacin de cultivos microbianos realizados en medios slidos y lquidos dispuestos en cajas de petri y tubos de ensayo.

Reconocer los diferentes cultivos microbianos en medio slido mediante la descripcin de sus atributos macroscpicos

Reconocer las formas microscpicas de los diferentes cultivos bacterianos aplicando tcnicas de preparacin de muestras fijas y coloraciones compuestas diferenciales

MATERIALES

Cada grupo debe tener:

Agar Nutritivo 1 caja

Caldo Nutritivo 1 caja

Isopo de Algodn 1 unidad

Asa bacteriolgica Redonda 1 unidad

Set de coloracin de Gram

Set coloracin de Esporas

Tinta China

REACTIVO BIOLOGICO

Una cultivo de cada uno de los siguientes microorganismos en agar nutritivo o agar soya tripticasa (casoy) de 24 a 72 horas de incubacin.

Micrococcus luteus Streptoccocus faecalis Staphylococcus aureus Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Klebsiella pneumoniae Acinetobacter baumanii Proteus vulgaris

Una cultivo de cada uno de los siguientes microorganismos en agar soya tripticasa (casoy) suplementado con sulfato de manganeso (3 g/l) al menos 72 horas de incubacin.

Bacillus subtilis Bacillus cereus Bacillus thuringiensis Bacillus stearotermophilus

Una cultivo de cada uno de los siguientes microorganismos en agar MRS de 24 a 72 horas de incubacin.

Lactobacillus plantarum Lactococucs plantarum

NOTA: todos los cultivos deben ser sembrados por agotamiento con el fin de poder observar colonias aisladas de cada uno de los modelos.

PROCEDIMIENTO

Descripcin Macroscpica De Los Cultivos Microbianos Modelo

Tome uno de cultivos en agar y agar una descripcin macroscpica de todos sus atributos (tamao, forma de la colonia, borde, elevacin, brillo, color, olor, textura, consistencia, etc.)

Descripcin Microscpica De Los Cultivos Microbianos

Reaccin a la coloracin de Gram, forma y agrupacin

Tome una lmina portaobjetos limpia y coloque una gota pequea de solucin salina isotnica (NaCl al 0,9% P/V).

Con ayuda del asa bacteriolgica y mediante la aplicacin apropiada de la tcnica asptica tome una muy pequea muestra de alguna de las colonias que crece sobre el agar

Disperse suavemente la muestra en la gota se solucin salina y esparza la suspensin formada sobre la lamina porta objetos

Encienda el mechero y pase la lmina con la muestra sobre la llama varias veces, evitando un calentamiento excesivo, hasta que la muestra que completamente seca y luego de eso contine calentando por un minuto ms.

Coloque la lmina en el puente de coloracin y realice la coloracin de Gram. Haga la observacin respectiva en 1000X determine forma, agrupacin y si es Gram

Positivo o Gram Negativo

Presencia de Esporas

Tome una lmina portaobjetos limpia y coloque una gota pequea de solucin salina isotnica (NaCl al 0,9% P/V).

Con ayuda del asa bacteriolgica y mediante la aplicacin apropiada de la tcnica asptica tome una muy pequea muestra de alguna de las colonias de los cultivos de B. subtilis, B. cereus, B. thuringiensis, E. coli y Lactobacillus delbrueki.

Disperse suavemente la muestra en la gota se solucin salina y esparza la suspensin formada sobre la lamina porta objetos

Encienda el mechero y pase la lmina con la muestra sobre la llama varias veces, evitando un calentamiento excesivo, hasta que la muestra que completamente seca y luego de eso contine calentando por un minuto ms.

Coloque la lmina en el puente de coloracin y realice la coloracin de esporas (Coloracin de Scheafer - Fulton)

Coloque un pequeo cuadrito de papel absorbente sobre la muestra fijada Agregue unas gotas de solucin de Verde de Malaquita (5% p/V ) Con ayuda de un mechero de alcohol encendido caliente la preparacin por la parte

inferior hasta que comience a emitir vapores

Mantenga el calentamiento y la adicin de colorante para evitar que se seque la preparacin durante 10 minutos.

Retire con una pinza el papel absorbente y un frasco lavador enjuague suavemente la preparacin para retirar el exceso de colorante.

Adicione unas gotas de Fucsina de Gram y djela en contacto con la muestra por un minuto

Enjuague suavemente la muestra y squela Haga la observacin respectiva en 1000X. Las esporas deben tomar un color verde y el cuerpo vegetativo o celular debe tomar

un color fucsia.

Presencia de cpsula

Tome una lmina portaobjetos limpia y coloque una gota pequea de solucin salina isotnica (NaCl al 0,9% P/V).

Coloque gota de Tinta China en un extremo de una lamina porta objetos Con ayuda del asa bacteriolgica y mediante la aplicacin apropiada de la tcnica

asptica tome una muy pequea muestra de alguna de las colonias de los cultivos de K. pneumoniae, A. baumanii, E. Lactis, E. coli y P. vulgaris, y mzclela suavemente con gota de Tinta China

Tome otra lmina porta objetos y usndola como esptula extienda la suspensin de microorganismos tinta china sobre la lamina portaobjetos.

Deje secar la muestra al ambiente. Haga la observacin respectiva en 1000X. La presencia de cpsula se evidencia por la formacin de una aureola translucida

alrededor del cuerpo celular del microorganismo bajo observacin.

Presencia De Los Microorganismos En El Medio Ambiente

Tome el hisopo de algodn y aplicando la tcnica asptica mjelo con el nutritivo caldo Con el hisopo humectado recoja una muestra de la superficie de su agrado Extienda suavemente la muestra recogida sobre la superficie del agar haciendo uso

apropiado de la tcnica asptica.

Luego introduzca el hisopo en el tubo con caldo nutritivo Alternativamente, la caja de agar nutritivo puede ser expuesta al medio ambiente. Incube el agar y el caldo a 37C por 48 horas. Haga una descripcin macroscpica de las diferentes colonias que crecieron sobre la

caja de agar nutritivo

Haga una descripcin macroscpica del caldo nutritivo

Descripcin Microscpica De Los Cultivos Microbianos

Colonia de agar nutritivo

Tome una lmina portaobjetos limpia y coloque una gota pequea de solucin salina isotnica (NaCl al 0,9% P/V).

Con ayuda del asa bacteriolgica y mediante la aplicacin apropiada de la tcnica asptica tome una muy pequea muestra de alguna de las colonias que crece sobre el agar

Disperse suavemente la muestra en la gota se solucin salina y esparza la suspensin formada sobre la lamina porta objetos

Encienda el mechero y pase la lmina con la muestra sobre la llama varias veces, evitando un calentamiento excesivo, hasta que la muestra que completamente seca y luego de eso contine calentando por un minuto ms.

Coloque la lmina en el puente de coloracin y realice la coloracin de Gram. Haga la observacin respectiva en 1000X.

Caldo nutritivo

Con el asa bacteriolgica redonda tome una muestra del caldo nutritivo y esprzala una lmina portaobjetos limpia.

Fije la muestra al calor con el mechero y realice coloracin de Gram Haga las observaciones respectivas