UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CELULAR Y TEJIDOS I

ALUMN@S: CASTRO CORTES LINDA PENELOPE

HERNANDEZ GONZALEZ EVELYN JAQUELIN

LOPEZ CASTAÑEDA DANIEL

RODRIGUEZ NAVA DIANA BERENICE

GRUPO: 1402

EQUIPO: 1

Extracción y purificación de DNA de germen de trigoOBJETIVOS

Analizara el fundamento de la obtención y purificación del ácido desoxirribonucléico.

Obtendrá ADN a partir de germen de trigo. Purificará ADN a partir de germen de trigo. Evaluará el grado de pureza del ADN obtenido.

RESULTADOS

La muestra de ADN del germen de trigo se le realizo las siguientes pruebas:

a) PRUEBA DE DIFENILAMIDAPresentaron los siguientes resultados

TUBO COLOR

blanco incoloro

Muestra problema Azul celeste

b) Prueba de purezaLa muestra se coloco en un espectrofotómetro UV, el cual nos proporciono los siguientes datos:30.8 microgramos / mililitros Cocientes260/280 1.77260/230 1.53Las absorciones fueron las siguientes0.402 A en 230 nm0.616 A en 260 nm0.348 A en 280 nm

c) Efecto hipercromico

La muestra después de ser desnaturalizada presento la siguiente absorvancia:

1.077 A en 260 nm

DISCUSIÓN Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

La doble hélice del ADN es desnaturalizada al ser calentada desdoblándose en sus dos hebras y en presencia del TCA se produce la hidrólisis acida que genera dos desoxipentosas, las cuales se convierten en β-hidroxilevulinoaldehido altamente reactivo, estas reaccionan con la difenilamina formando un complejo de color azul. Nuestra muestra de ADN se trato con los dos reactivos descritos pero al ser mezclados formaron una solución de color blanco, lo cual pudo ser debido a que los reactivos fueron mal preparados, pero al ponerlos en un baño María la mezcla se volvió incolora y después de 15 minutos el tubo de ensayo que contenía nuestra muestra adquirió un ligero color azul en comparación con su blancocon esto se comprueba que logramos obtener ADN.

Posteriormente se empleo el espectrofotómetro UV para la cuantificación del ADN ya que una disolución de este puede cuantificarse directamente en soluciones acuosas, en forma diluida o sin diluir, midiendo la absorbancia A de luz ultravioleta. Si la muestra es pura, es decir, no contiene cantidades significativas de contaminantes como proteínas, fenol o agarosa, la medición espectrofotométrica de la irradiación ultravioleta absorbida por las bases es sencillo y exacto. La concentración de ácidos nucleicos suele determinarse midiendo a 260 nm y comparando con un blanco. La interferencia de contaminantes puede determinarse calculando un «cociente». Dado que las proteínas absorben a 280 nm, se emplea el cociente A260/A280 para calcular la pureza de los ácidos nucleicos. Los cocientes respectivos del ADN y el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y 2,0. Una absorción a 230 nm significa que la muestra está contaminada con hidratos de carbono, péptidos, fenoles, compuestos aromáticos u otras sustancias. El cociente A260/A230 de las muestras puras es de 2,2 aproximadamente(1).

El efecto hipercrómico es el incremento de absorbancia en un material. Las bases nitrogenadas tienen una absorbancia máxima a 260 nm. Si las bases están libres la absorbancia es máxima; pero, si se juntan en una hebra de ADN, las moléculas de ribosa y fosfato se interponen al paso de la luz y las bases absorben menos, disminuyendo la medida de absorbancia, pero si además tales hebras se enrollan entre ella la absorbancia es mucho menor. Al medir la absorbancia de ADN que teníamos en nuestra muestra se observo que su absorbancia era menor que la absorbancia de la muestra después de ser desnaturalizada con esto se pudo observar el efecto hipercromico en la muestra ya que la doble hélice se desdobla, esta técnica generalmente se utiliza para seguir la desnaturalización de la molecula de ADN.

CONCLUSIONES

Se pudo obtener el acido desoxiribonucleico a partir de germen de trigo el cual se trato para poder liberar el ADN, este se pudo purificar y se obserbo el efecto hipercromico

BIBLIOGRAFÍA

- Zimmermann, A., Lüthy, J. y Pauli, U. (1998). Quantitative and qualitative evaluationof nine different extraction methods for nucleic acids on soya bean food samples. Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und -Forschung A 207, 81–90.

- Cesar A. Migoni. Por curiosidad fundamentos de bioquimica descriptiva. Universidad Autonoma de Baja California. México. Pag. 513