SUBSECRETARIA DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR COORDINACIN DE ENLACE OPERATIVO DE AGUASCALIENTES C.B.T.i.s. No. 39

DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN TECNOLGICA INDUSTRIAL

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 39 Bachillerato Tecnolgico en Laboratorista Qumico Componente de Formacin Profesional Mdulo 1 Fundamentos en el rea Qumico Industrial Submdulo

SEMINARIO DE INVESTIGACINCONTAMINACIN MICROBIOLGICA EN EL AGUA DE LA ESCUELA SECUNDARIA N18 Proyecto de Investigacin que presenta: _____ NOEMI GONZALEZ ROVELO ______ Asesor de rea: ______L.A.Q.B._Rebeca Martnez Arriaga ______ Direccin metodolgica Dra. Martha Cristina Gmez Paredes Aguascalientes Ags., 2 de Junio de 2008 INVESTIGADOR: NOEMI GONZLEZ ROVELO

2 CONTAMINACIN MICROBIOLGICA EN EL AGUA DE LA ESCUELA SECUNDARIA N18

I.- RESUMEN..............................................................................................................................4 II. INTRODUCCIN..................................................................................................................5 III.- JUSTIFICACIN.................................................................................................................6 IV.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.............................................................................7 V.- OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN..............................................................................8 VI.- MARCO TERICO.............................................................................................................9 VII.- HIPTESIS......................................................................................................................36 VIII.- METODOLOGA............................................................................................................37 VIII. I.-TIPO DE ESTUDIO Y DISEO GENERAL.............................................................38 VIII. II.- DEFINICIN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES...........................................39 VIII. III.- UNIVERSO DE ESTUDIO, SELECCIN Y TAMAO DE LA MUESTRA, UNIDAD DE ANLISIS Y OBSERVACIN..........................................................................40 VIII. IV.- PROCEDIMIENTOS PARA LA RECOLECCIN DE INFORMACIN, INSTRUMENTOS A UTILIZAR Y MTODOS PARA EL CONTROL Y CALIDAD DE LOS DATOS...................................................................................................................................42 IX.- PLAN DE ANLISIS DE LOS RESULTADOS...............................................................43 IX. I.- MTODO Y MODELOS DE ANLISIS DE LOS DATOS SEGN EL TIPO DE VARIABLES...........................................................................................................................43 IX. II.- PROGRAMAS A UTILIZAR PARA EL ANLISIS DE LOS DATOS..........................49 IX. III.- FOTOGRAFAS........................................................................................................50 IX. IV.- ANLISIS DE LOS RESULTADOS...........................................................................51 IX. V.- MANEJO DE LA INFORMACIN.............................................................................51 X.- CONCLUSIONES...............................................................................................................52 XI.- BIBLIOGRAFA................................................................................................................53

I.- RESUMEN

3 En esta investigacin se le da respuesta a la pregunta central: Que microorganismos estn presentes en el agua de la institucin?, entendiendo por institucin Escuela Secundaria General N18,dado que para poder establecer una solucin al problema de contaminacin del agua a nivel microbiolgico, es necesario saber de que tipo de microorganismos estamos hablando, ya que es evidente que el consumo de agua en mal estado, es decir contaminada, puede llegar a tener grandes efectos, Se piensa que La contaminacin del agua en los aljibes y depsitosde la escuela secundaria N18 es propiciada, por la falta de mantenimiento en

ellos., siendo esta la hiptesis central de la investigacin; por lo tanto el objetivo central de la investigacin es: Analizar la poblacin microbiana presente en el agua que se emplea en la escuela secundaria N18, para llevar a cabo este anlisis se utilizaron tcnicas y normas establecidas, que dieron como resultado la presencia de coliformes en la muestra de agua tomada del tinaco de la institucin.

II. INTRODUCCIN

4 Los efectos que tiene el consumo de agua contaminada a nivel microbiolgico, son muy serios ya que pueden ir desde infecciones poco importantes en el estomago, hasta las producidas por la presencia de Escherichia Coli, comnmente llamada e coli o coliforme. Por lo que es importante conocer la procedencia y el estado de sanidad del agua que consumimos. A lo largo de este documento el lector podr conocer temas relacionados con el agua, la microbiologa, procedimientos para el tratamiento del agua, etc. Y conocer el procedimiento y resultados de una investigacin de campo, realizada con muestras de agua tomadas de instalaciones pluviales de la Escuela secundaria General N18. Con los anlisis mencionados en esta investigacin, se podr conocer que tipo de microorganismos estn presentes en el agua de la institucin, y de esta manera dar solucin al problema.

III.- JUSTIFICACIN

5 Esta investigacin se realiza con el fin de, examinar la poblacin microbiana presente en el agua de la institucin, que lleva por nombre Escuela Secundaria General N18 Congreso de Chilpancingo, ya que el consumo de agua contaminada por microorganismos dainos, como la e Coli en bebederos o el uso de esta para riego, baos, etc., puede producir intoxicacin, enfermedades intestinales simples o complejas, etc.

Con esto, se quiere prevenir al alumnado y maestros de la institucin sobre el consumo del agua, as como concientizar sobre el saneamiento de los depsitos y almacenamiento de las aguas para consumo. A si mismo se pretende disear una solucin, para beneficio de la comunidad escolar.

IV.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

6 Esta investigacin, tiene como objetivo principal Analizar la poblacin microbiana presente en el agua que se emplea en la escuela secundaria N18, ya que el consumo de agua contaminada en bebederos y llaves, o el uso de esta en riego, baos, lavabos, etc., puede ocasionar graves consecuencias, en el alumnado y maestros de la institucin, que van desde infecciones intestinales simples a las ocasionadas por la ya mencionada Escherichia Coli.

Cabe mencionar que para poder atacar el problema, es necesario saber a que tipo de microorganismos nos estamos enfrentando, por lo que la investigacin pretende responder a una pregunta central: Que microorganismos estn presentes en el agua de la institucin?, al responder esta pregunta se pretende plantear una solucin.

Para responder a esta pregunta se cuenta con tcnicas de laboratorio establecidas y normativizadas, de igual manera se cuenta con tcnicas de muestreo.

Se sospecha que la consecuencia de La contaminacin del agua en los aljibes y depsitos de la escuela secundaria N18 es propiciada, por la falta de mantenimiento en ellos, y esto trae como consecuencia la formacin de un habitad adecuado para el crecimiento microbiano.

V.- OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN

7 Objetivo General:

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Analizar la poblacin microbiana presente en el agua que se emplea en la escuela secundaria N18.

Objetivos Especficos:

* Verificar la cantidad de microorganismos presentes en el agua deesta institucin. * Establecer que consecuencias trae el consumo de agua contaminada. * Definir que tipos de microorganismos estn presentes en el agua de la institucin.

VI.- MARCO TERICOPROGRAMA I: 1.-El agua, propiedades y caractersticas. 1.2.- Tipos de agua. 1.3.- Tcnicas de Muestreo. 1.4.- Anlisis del agua. PROGRAMA II: 1.- Definicin de drenaje. 1.2.- Tipos de drenaje. 1.2.1.- Drenaje Sanitario. 1.2.2.- Drenaje Pluvial.

8 1.3.- Funcionamiento. 1.4.- Peligros. 1.5.- Especificaciones para la construccin de sistemas de drenaje.

2.- Concepto de Microbiologa. 2.1.- Caractersticas de los microorganismos. 2.2.- Taxonoma de bacterias. 2.2.1.- Morfologa y fisiologa de bacterias. 3.- Manejo de Residuos Biolgicos. 3.1.- Medidas de seguridad e higiene. 3.2.- Equipo de seguridad para el trabajo en el laboratorio. 3.3.- Manejo de residuos biolgicos infecciosos. 3.4.- Materiales Microbiolgicos y su esterilizacin. 3.5.- Anlisis Microbiolgico del agua. 4.- Mtodos de identificacin. 4.1.- Microscopia. 4.2.- Mtodos de tincin. 4.3.- Tcnicas de cultivo e identificacin de Microorganismos. 5.- El agua como transmisor de enfermedades. 5.1- Bacterias del agua. 5.1.2- Coliformes. 5.1.3.- Bacterias tiles en el agua. 5.2.- Enfermedades causadas por el agua. 6.- Purificacin de las aguas potables. 6.1.- Pozas de coagulacin y sedimentacin. 6.2.- Filtros de arena lentos. 6.2.1.- Filtros de arena rpidos. 6.3.- Filtros que trabajan con presin. 6.4.- Desinfeccin. PROGRAMA I:

2.- Definicin de Alcantarillado. 2.1.- Componentes de una red de alcantarillado sanitario. 2.3.- Componentes de una red de alcantarillado pluvial.

3.- Saneamiento y abastecimiento del agua. 3.1.- Control de calidad del agua. 3.2.- Fuente de abastecimiento.

1.-EL AGUA, PROPIEDADES Y CARACTERSTICASTal como menciona el autor Juan Sent, en su obra La contaminacin (sent, 1979), Se denomina Agua, al estado lquido del compuesto de hidrgeno y oxgeno H2O.

9 El agua pura es un lquido inodoro e inspido, que existe en los tres estados de la materia, liquido, slido y gaseoso. Tiene un matiz azul, que slo puede detectarse en capas de gran profundidad. A la presin atmosfrica (760 mm de mercurio), el punto de congelacin del agua es de 0 C y su punto de ebullicin de 100 C, a nivel del mar. El agua alcanza su densidad mxima a una temperatura de 4 C y se expande al congelarse. Como muchos otros lquidos, el agua puede existir en estado sobre enfriado, es decir, que puede permanecer en estado lquido aunque su temperatura est por debajo de su punto de congelacin; se puede enfriar fcilmente a unos -25 C sin que se congele. El agua sobre enfriada se puede congelar agitndola, descendiendo ms su temperatura o aadindole un cristal u otra partcula de hielo. Sus propiedades fsicas se utilizan como patrones para definir, por ejemplo, escalas de temperatura, de Ph, etc. El agua es uno de los agentes ionizantes ms conocidos. Puesto que todas las sustancias son de alguna manera solubles en agua, se le conoce frecuentemente como el disolvente universal. El agua combina con ciertas sales para formar hidratos, reacciona con los xidos de los metales formando cidos y acta como catalizador en muchas reacciones qumicas importantes. Todas estas propiedades se deben al enlace Puente de Hidrogeno, que existe entre las molculas del agua.

1.2.- TIPOS DE AGUA Existen diversos tipos de agua, dependiendo de su uso y de su composicin, a continuacin se enlistan distintos tipos de agua: * * * Agua potable: Puede ser consumida por personas y animales sin riesgo de contraer enfermedades. Agua salada: Su concentracin de sales es relativamente alta (ms de 10 000 mg/l). Agua salobre: Contiene sal en una proporcin significativamente menor que el agua marina. La concentracin del total de sales disueltas est generalmente comprendida entre 1000 - 10 000 mg/l. Este tipo de agua no est contenida entre las categoras de agua salada y agua dulce. Agua dulce: Natural con una baja concentracin de sales, o generalmente considerada adecuada, previo tratamiento, para producir agua potable. Agua dura: Contiene un gran nmero de iones positivos. La dureza est determinada por el nmero de tomos de calcio y magnesio presentes. Agua blanda: Sin dureza significativa. Aguas negras: Pueden ser una combinacin de residuos, lquidos o en suspensin, de tipo domstico, municipal e industrial, junto con las aguas subterrneas, superficiales y de lluvia que puedan estar presentes. Aguas grises: Compuestas por agua de lavar procedente de la cocina, cuarto de bao, aguas de los fregaderos, y lavaderos.

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10 * * * * * * * * Aguas residuales: Fluidos residuales en un sistema de alcantarillado. El gasto o agua usada por diversas instituciones, que contiene materia orgnica disuelta o suspendida. Agua bruta: Agua que no ha recibido tratamiento de ningn tipo. Aguas muertas: Aguas en estado de escasa o nula circulacin, con dficit de oxgeno. Agua alcalina: Agua cuyo pH es superior a 7. Agua capilar: Se mantienen en el suelo por encima del nivel fretico debido a la capilaridad. Agua de adhesin: Retenida en el suelo por atraccin molecular, formando una pelcula en las paredes de la roca o en las partculas del suelo. Agua de gravedad: Agua en la zona no saturada que se mueve bajo la influencia de la fuerza de gravedad. Agua de suelo: Agua que se encuentra en la zona superior del suelo o en la zona de aireacin cerca de la superficie del terreno, de forma que puede ser cedida a la atmsfera por evapo-transpiracin. Agua disfrica: Agua pobre en nutrientes y que contiene altas concentraciones de cido hmico. Agua primitiva: Proveniente del interior de la tierra, que no ha existido antes en forma de agua atmosfrica o superficial. Agua subterrnea: Agua que puede ser encontrada en la zona saturada del suelo, zona que consiste principalmente en agua. Se mueve lentamente desde lugares con alta elevacin y presin hacia lugares de baja elevacin y presin, como los ros y lagos.

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Un Agua dura contiene: carbonatos, bicarbonatos, fosfatos, sulfatos y nitratos de Ca y Mg,, por lo tanto se puede definir como dureza a la cantidad de estos elementos presentes en el agua. La dureza del agua produce incrustaciones (sarro) en tuberas, de acuerdo a la cantidad de dureza presente en el agua, esta se puede clasificar como: * Agua blanda: Contiene 50 ppm. de dureza. * Agua moderada: Contiene de 50 a 150 ppm. de dureza. * Agua dura: Contiene de 150 a 300 ppm. de dureza * Agua muy dura: Contiene mas de 300 ppm. de dureza. (Diccionario Enciclopedico, 1970)

1.3.- TCNICAS DE MUESTREO Se debe de tomar en cuenta que los resultados de los anlisis dependen en gran manera de la buena toma de muestras, esta puede ser manual, es decir tomada por una persona o automtica, tomada por una maquina programada. Las tcnicas de muestreo varan dependiendo del lugar de donde se va a extraer la muestra:

11 * Cuando se toma una muestra de un aljibe o tinaco se debe de enjuagar el embase con el agua del tinaco o aljibe 3 veces y se debe de dejar una espacio entre la muestra y la tapa del embase. En pozos, se prende la bomba se deja trabajar, se apaga y se toma la muestra. En ros, se toma la muestra de la parte media de estos, lo mismo se realiza en el caso de lagos y lagunas. De la llave, (de tuberas) se deja caer el agua unos segundos y se toma la muestra. De igual manera existen diversos TIPOS DE MUESTRAS, estas son: 1. De Sondeo: Se toman en un lugar, y en un tiempo determinado. 2. Combinadas: Son varias muestras de un mismo punto en diferentes momentos. 3. Integrada. Son varias muestras de diferentes lugares en un mismo tiempo. Los embases donde se va a colocar la muestra, pueden ser de vidrio, plstico (de Tetra flor etileno) y algunas veces de metal, estos deben de cumplir con ciertos requisitos: Para anlisis microbiolgico.- Deben ser Frascos de vidrio con tapn esmerilado, frascos estriles desechables o bolsas estriles con cierre hermtico y capacidad de 125 o 250 mL. Para anlisis de metales.- Deben ser Envases y tapas de plstico, adicionados de 1 mL de cido ntrico concentrado por cada 100 mL de muestra. Para anlisis de plaguicidas.- El Envase debe ser de vidrio color mbar o transparente cubierto de papel aluminio. Para la identificacin de las muestras deben etiquetarse los frascos y envases con la siguiente informacin: Nmero de control para identificar la muestra, independientemente del nmero de registro del laboratorio. Fecha y hora de muestreo. Para el control de la muestra debe llevarse un registro en formato establecido previamente con los datos anotados en la etiqueta del frasco o envase, as como la siguiente informacin: Identificacin del punto o sitio de muestreo. Temperatura del agua. pH. Cloro residual libre. Tipo de anlisis a efectuar. En su caso, reactivo empleado para la preservacin. Nombre de la persona que realiz el muestreo. Los sellos de los embases deben de ser de plstico o adheribles. El muestrador debe de contar con una bitcora, que contenga los datos de las etiquetas. Cuando se reciben las muestras en el laboratorio, estas deben de ser registradas, indicando el tipo de anlisis que se va a llevar a cabo, y se designa el lugar de almacenamiento, ya sea en un refrigerador a 4C o en un almacn.

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(NOM-230-SSAI-2002, 2002)

1.4.- ANLISIS DEL AGUA Durante un anlisis se debe de tener en cuenta la calidad de los datos, esta se obtiene mediante indicadores que miden el sesgo o grado de error y la precisin que tenga la tcnica de anlisis por si sola. El sesgo es el valor real promedio del resultado del anlisis, la precisin es medida mediante el grado de concordancia entre los anlisis mltiples, esta se regula por un porcentaje de varios resultados en anlisis de ensayos o muestras. En forma resumida se puede decir que : La exactitud es igual al Sesgo mas la Precisin, para poder contar con mas precisin durante un anlisis se puede realizar una prueba de colaboracin, esta consiste en realizar la misma prueba en tres laboratorios distintos, con dos operadores por laboratorio, cada uno con una muestra e igual instrumental. Los resultados de los anlisis se expresan en mg/lt (miligramos por litro), ppm (partes por milln), gr/lt (microgramos por litro) y UFC (unidades formadoras de colonias).

2.- CONCEPTO DE MICROBIOLOGALa Microbiologa, es la ciencia que estudia los organismos de tamao microscpico, entre los que se incluyen las bacterias, los protozoos y los virus, as como ciertos hongos (levaduras) y algas unicelulares de pequeo tamao. Comprende un conjunto de disciplinas relacionadas, entre las que destacan la bacteriologa, la virologa y la parasitologa. Estudia, no slo la morfologa de los microorganismos, sino tambin su modo de vida, su metabolismo, su estructura molecular, sus propiedades patognicas y sus caractersticas antignicas (aquellas que pueden provocar una respuesta del sistema inmunolgico). (Diccionario Enciclopedico, 1970)

2.1.- CARACTERSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS. Se le llama Microorganismo, a todo ser vivo que slo se puede observar utilizando microscopios pticos o electrnicos. Los microorganismos se clasifican en tres de los cinco reinos: * Las bacterias y cianobacterias (o algas verde azuladas) pertenecen al reino Mneras. Son organismos con clulas procariticas y presentan una gran variedad de formas de vida. Hay bacterias fotosintticas, quimiosintticas y hetertrofas. stas pueden ser saprofitas, descomponedoras o patgenas, como las que producen la tuberculosis o la sfilis.

13 * * En el reino Protistas se incluyen a organismos eucariotas. Son microorganismos protistas: los protozoos unicelulares, las algas unicelulares y algunas pluricelulares. Ciertos hongos, incluidas las levaduras, son microorganismos que pertenecen al reino Hongos. Estos seres tienen una gran importancia econmica por el uso industrial en la fabricacin de antibiticos y productos alimenticios como el pan o el vino, o por las prdidas que producen al descomponer alimentos.

Los virus son un tipo de microorganismo peculiar. No tienen metabolismo y son parsitos intracelulares que causan un gran nmero de enfermedades en las personas, los animales y las plantas. (Diccionario Enciclopedico, 1970).

2.2.- TAXONOMA DE BACTERIAS La taxonoma es la ciencia que se estudia de la clasificacin de los seres vivos, las bacterias pertenecen al reino mnera, y al Phyllum Schizophyta y Cianophyta, al primer phyllum pertenecen las bacterias, y al segundo las algas verdes. Las bacterias se suelen clasificar siguiendo varios criterios: por su forma, segn la estructura de la pared celular; por el comportamiento que presentan frente a la tincin de Gram.; en funcin de que necesiten oxgeno para vivir o no (aerobias o anaerobias, respectivamente); segn sus capacidades metablicas o fermentadoras; por su posibilidad de formar esporas resistentes cuando las condiciones son adversas, y en funcin de la identificacin serolgica de los componentes de su superficie y de sus cidos nucleicos. La clasificacin taxonmica ms utilizada divide a las bacterias en cuatro grandes grupos segn las caractersticas de la pared celular. La divisin Gracilicutes incluye a las bacterias con pared celular delgada del tipo Gram. negativas; las bacterias de la divisin Firmicutes tienen paredes celulares gruesas del tipo Gram. positivas; las de la Tenericutes carecen de pared celular y las de la cuarta divisin Mendosicutes tienen paredes celulares poco comunes, formadas por materiales distintos a los tpicos peptidoglucanos bacterianos. (tomado de: "Bacteria." Microsoft Student 2007 [DVD]. Microsoft Corporation, 2006)

2.2.1.- MORFOLOGA Y FISIOLOGA DE BACTERIAS Las bacterias suelen ser unicelulares procariotas, es decir que: no tienen membrana nuclear, poseen el ADN en el citoplasma, carecen de la mayora de los organelos celulares, algunas poseen vacuolas, algunas son fotosintticas y no producen oxigeno, algunas presentan flagelos y tienen un tamao promedio de 5 a 10 micras. (Anexo I). Una bacteria simplificada est formada por tres capas externas que envuelven las estructuras internas; la capa pegajosa protege la pared celular rgida, que a su vez cubre la membrana celular semipermeable. El flagelo es un medio de locomocin y los pelos que se extienden por fuera de la cpsula ayudan a la bacteria a sujetarse a las superficies. Segn la

14 cantidad de flagelos que posean, se denominan: Monotrica, Lofotrica y peritrica. (Ver Anexo2). Presentan diferentes formas, las cuales pueden ser, esfricas (cocos), curvas (coma, espirales) y bastones (bacilos).

3.- MANEJO DE RESIDUOS BIOLGICOSEl manejo de los residuos biolgicos en Mxico no es tan adecuado como es manejado a nivel internacional o en pases de primer mundo, se han creado normas para poder controlarlos ya que a partir de 1971 se tubo una conciencia de fortalecer el marco legal hacia los residuos biolgicos generados en Mxico tanto por las empresas como los hospitales y dems establecimientos, ya que estos residuos pueden ser peligrosos. Se debe de tener un control hacia los residuos peligrosos biolgicos infecciosos, ya que si algn residuo peligroso, llega atener contacto con alguna persona o animal, y si este residuo es infeccioso, puede contagiarlo y producir un problema mayor como una epidemia. Las normas oficiales mexicanas: NOM-052-ECOL-1993 y la NOM-087-ECOL-1995 indican un listado de los residuos peligrosos, definiendo los residuos que se producen identificndolos y clasificndolos por especialidades practicas o en servicio, estableciendo un procedimiento para su manejo adecuado a la normatividad vigente.

3.1.- MEDIDAS DE SEGURIDAD E HIGIENE Con el fin de tener un buen funcionamiento en el laboratorio, se deben de establecer ciertas normas o medidas de seguridad he higiene, para prevenir accidentes en el laboratorio. Las reglas bsicas aqu enumeradas son un resumen de las normas de seguridad he higiene de algunos laboratorios. 1. Conocer la ubicacin de los elementos de seguridad en el lugar de trabajo, tales como extinguidores, salidas de emergencia y botiqun. 2. No comer, beber, fumar o maquillarse dentro del laboratorio. 3. No guardar alimentos en ningn mbito del laboratorio. 4. Mantener el orden y la limpieza en la zona asignada y en todos los lugares comunes. 5. No bloquear las rutas de escape o pasillos con elementos que entorpezcan la correcta circulacin. 6. No instalar conexiones elctricas precarias o provisorias. 7. En caso de existir filtraciones o goteras que puedan afectar las instalaciones y equipos, o que puedan provocar incendios por cortocircuitos, se deber informar inmediatamente al personal de mantenimiento para su pronta atencin y se deber clausurar la zona afectada para su pronta reparacin. 8. En caso de derrames incidentales (que no revisten riesgo inmediato), se deber informar inmediatamente ala persona a cargo del laboratorio y se proceder a la limpieza o a la adopcin de las medidas correspondientes. 9. Es necesario vestir con bata de algodn para evitar posibles salpicaduras de productos

15 qumicos, as como contar con un calzado cerrado. Es necesario recalcar que no existe una normatividad estndar para el uso de los laboratorios.

3.2.- EQUIPO DE SEGURIDAD PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO As como se deben de contar con normas de seguridad e higiene en un laboratorio, de igual manera se debe de contar con un equipo de seguridad para el trabajo, a continuacin se enlistan algunos artculos indispensables para la seguridad en el laboratorio: 1. Bata larga (a la rodilla o pantorrilla) de algodn 100% y manga larga, con botones o broches de presin. Se recomienda que sea blanca. 2. Mono gogles incoloros sin ventilacin o con trampas. 3. Anteojos neutros de seguridad de poli carbonato o vidrio endurecido con proteccin lateral. 4. Protector facial transparente de 20 cm. de largo. 5. Guantes de ltex para manejar cidos dbiles y cetonas. 6. Guantes de PVC para manejar cidos y bases dbiles. 7. Guantes de neopreno para manejar cidos y solventes alifticos. 8. Guantes de nitrilo para manejar solventes y derivados orgnicos. 9. Guantes trmicos de algodn grueso (para materiales calientes y fros). 10. Respirador con filtros para: a) Vapores orgnicos y gases cidos (cdigo amarillo). b) Vapores orgnicos (cdigo negro). c) Amoniaco y alcalinos (cdigo verde oscuro). d) Humos (cdigo violeta). 11. Calzado antiderrapante y cerrado.

3.3.- MANEJO DE RESIDUOS BIOLGICOS INFECCIOSOS Los residuos peligrosos biolgicos infecciosos, son producidos en los hospitales, veterinarias, centros de investigaciones, laboratorios clnicos, etc., de todos estos lugares son recogidos y confinados, por empresas especializadas, las cuales deben estar registradas y reglamentadas por la SEMARNAT. En la cmara de diputados se han reformado las normas vigentes que tiene la SEMARNAT para poder adecuarse da con da a las necesidades que se tienen de a cuerdo a los residuos generados en distintos centros, para cada uno se tiene las normas de confinamiento, de recoleccin de residuos peligrosos, as como para el diseo y construccin de los confinamientos. Existen indicadores para cada tipo de residuos, por ejemplo: para los residuos punzo cortantes se tienen botes rojos con la leyenda de residuos peligrosos biolgicos infecciosos,

16 al llegar estos botes a su capacidad mxima, son mandados a otro depsito ms grande de donde son recogidos todos los residuos por la empresa designada. Las normas que se deben de seguir para la recoleccin de los residuos son: *NOM-052-ECOL-93: establece la caracterstica de los residuos peligrosos, el listado de los mismos y los lmites que hacen aun residuo peligroso por su toxicidad al ambiente. *NOM-054-ECOL-93: es el procedimiento para determinar la incompatibilidad entre dos o ms residuos considerados peligrosos por la NOM-055. *NOM-055-ECOL-93: establece los requisitos que debe reunir los sitios destinados al confinamiento controlado de residuos, excepto los radioactivos. *NOM-056-ECOL-93: establece los requisitos para el diseo y construccin de las obras complementarias de un confinamiento controlado para residuos peligrosos. *NOM-057-ECOL-93: requisitos que deben observarse en el diseo, construccin y operacin de celdas de un confinamiento controlado para residuos peligrosos. *NOM-058-ECOL-93: los requisitos para la operacin de un confinamiento controlado de residuos peligrosos. *NOM-087-ECOL-95: los requisitos para la separacin, envase, almacenamiento, recoleccin, transporte, tratamiento y disposicin de residuos mdicos peligrosos. Para poder recolectar los RPBI es necesario clasificarlos, tomando en cuenta su procedencia, en: * Residuo de sangre humana * Residuo de cultivos y cepas de agentes infecciosos. * Residuos patolgicos (rgano) * Residuos no anatmicos de unidades de pacientes (jeringas, etc.) * Residuos infecciosos miscelneos, como material de curacin. La unidad responsable designar al personal que manejar estos residuos quienes recibirn capacitacin del manejo de residuos peligrosos biolgicos infecciosos. El jefe del rea generadora supervisar que el manejo de los residuos peligrosos se apegue al reglamento oficial en primera instancia. Si el residuo no se encuentra en listado, antes mencionado, el generador determinar su peligrosidad en un laboratorio acreditado por la secretaria de proteccin ambiental. Se le llama residuos biolgicos infecciosos a: * La sangre y sus componentes: slo en su forma lquida, as como sus derivados no comerciales, incluyendo las clulas progenitoras, hematopoyecticas y las fracciones celulares de la sangre resultante (hemoderivados). * Los cultivos y cepas de agentes biolgicos-infecciosos: los cultivos generados en los procedimientos de diagnostico e investigacin, as como los generados en la produccin y control de agentes biolgicos-infecciosos. * Utensilios desechables: usados para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes biolgicos-infecciosos * Los patolgicos * Los tejidos rganos y partes: que se extirpan y remueven durante una necropsia, ciruga o algn otro tipo de intervencin quirrgica, que no se encuentre en formol

17 * Las muestras biolgicas: para anlisis qumicos, microbiolgicos, citolgicos e histolgicos incluyendo orina y excremento. * Los residuos no anatmicos * Los recipientes desechables que contengan sangre lquida. * Los materiales de curacin: empapados, saturados o goteados de sangre o de los siguientes lquidos: lquido pleural, lquido cfalo-raqudeo o lquido peritoneal. * Cualquier material desechable: que cualquier secrecin que sea considerada como infecciosa segn la secretaria de salubridad. * Los objetos punzo cortantes: que estn en contacto con humanos o animales y que hayan estado en contacto con sus muestras biolgicas. El personal que recolecta los residuos peligrosos debe de usar guantes, mascarilla lentes de proteccin y uniforme completo. El carro recolector deber ser con tapa y permanecer cerrado todo el tiempo, no debern rebasar su capacidad mxima. Para la recoleccin de los residuos se deber tener marcado el camino que deben de tener estos. El envasado y el etiquetado de los residuos peligrosos deber de ser como se menciona a continuacin: 1.- de acuerdo a su estado fsico, se asignaran recipientes de distintas dimensiones, para su manejo y estos siempre debern de permanecer cerrados. 2.-el envase deber de tener los rtulos de identificacin con los siguientes datos: - Nombre de la empresa generadora - Nombre de los residuos - Caractersticas de los residuos: estado fsico, peligrosidad (corrosivo, explosivo), fecha de generacin, lugar degeneracin, peso del residuo. 3.-si el generador deber de envasar dos o mas residuos peligrosos en el mismo envase deber de consultar la NOM-054-ECOL-93 que establece el procedimiento para determinar la incompatibilidad dedos o ms residuos. 4.- el personal asignado al manejo de residuos peligrosos, registra en la bitcora de generacin mensual la cantidad de residuos generada. La bitcora de generacin mensual de be de contener los siguientes datos: fecha de generacin, lugar donde se genero el residuo, nombre del residuo que se gener, clasificacin del residuo y el peso del residuo que se gener. Se debe de llevar una bitcora de movimiento, de entrada y salida de almacn temporal de residuos peligrosos, la cual se utiliza con la finalidad de conocer los volmenes semestrales y anuales de residuos, as como los tipos de residuos que son almacenados, esta debe de tener la siguiente informacin: nombre del residuos y lugar de generacin, entrada al almacn temporal de residuos, razn social de la empresa transportista, registro ante la secretaria de comunicaciones y transporte, placas del transporte, nombre de la empresa destinataria, , permiso de la SEMARNAT, tipo de tratamiento que recibe el residuo, transporte y recepcin de residuo peligroso.

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3.4.- MATERIALES MICROBIOLGICOS Y SU ESTERILIZACIN Se define como esterilizacin al proceso que se lleva a cabo para la eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente, para llevar a cabo esta accin existen distintos procesos o mtodos; a continuacin se mencionaran algunos. Calor: provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. Calor hmedo: produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas, elimina todas las bacterias combinando adecuadamente factores como la temperatura a la que se someten y el tiempo de exposicin. Se puede esterilizar por calor hmedo en autoclaves a 120 C durante 20 minutos y a presin superior a la atmosfrica. Calor seco: produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Se puede esterilizar por calor seco en estufas a ms de 160 C durante media hora. (www.microbiologia.com.ar, 2008)

3.5.- ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA Un hecho muy lamentable es que la mayora de los seres humanos tengan que beber agua que ha sido contaminada con aguas negras, por lo tanto, es muy importante probar la pureza del agua que se utiliza para el consumo humano. No existe una prueba que sea enteramente satisfactoria, pero existen varias de gran importancia, dichas pruebas se denominan pruebas Bacteriolgicas, con estas se determina la pureza del agua, examinando el tipo de bacterias que contenga. En la practica, esto ha sido muy problemtico porque es difcil detectar la presencia de salmonella Typhi y otros organismos causales de las enfermedades entricas. Existen varias razones que hacen pesada esta tarea: 1. Los mejores mtodos conocidos a la fecha son demasiado lentos, tediosos y antieconmicos para realizarse en anlisis rutinarios del agua. 2. Siempre existen mucho ms individuos inoculos que patgenos, lo cual infiere en los resultados. 3. Por medio de los mejores mtodos disponibles en la actualidad, los patgenos se minimizan, necesitaran abundar en cantidad para lograr ser destacados, esto tambin se debe a que las muestras de agua examinadas son muy pequeas. De acuerdo con estas razones, el examen directo para detectar patgenos no se utiliza en el anlisis rutinario de aguas, pero si, algunas veces, en la investigacin. A continuacin se citaran algunos de los tipos de anlisis o pruebas bacteriolgicas:

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Prueba para el grupo de coliformes: El grupo de bacterias coliformes incluye a las aerbicas y a las anaerbicas facultativas, bacilos Gram negativos no esporulados que fermentan la lactosa con formacin de gas despus de 48hr de incubacin a 35C. La presencia de este grupo coniforme en el agua potable es ndice de contaminacin. La Escherichia coli, un miembro de este grupo, es un habitante normal del tracto intestinal de todos los seres vivos, sanos y enfermos. La E.Coli proveniente de las personas podra ser considerada como ms peligrosa en el agua que si el mismo microorganismo proviniese de algn animal, dado que estos no son considerados como portadores de ninguna enfermedad entrica que ataque a los humanos. La enterobacter aerogenes, otro miembro del grupo coliforme se encuentra generalmente en las plantas y granos pero tambin puede alojarse en el intestino del hombre y de algunos animales. Estos dos microorganismos son muy similares, y ambos pueden ser asociados con materiales fecales, el mejor mtodo disponible para discernir el origen intestinal de los coliformes es mediante el tubo mltiple o el procedimiento del filtro de membrana con incubacin a 44.5C 0.2C. Con esta tcnica, se selecciona a los coliformes fecales. Esta tcnica consiste en tres pruebas que son, Presuntiva, confirmativa y complementaria. * Prueba Presuntiva: Se realiza inoculando una serie de caldo lactosa o caldo de lauriltriptosa en tubos de fermentacin con cantidades diversas de agua, dependiendo del lugar donde haya sido obtenida la muestra. En el examen rutinario de las aguas potables, se emplean muestras de 5 a 10 ml. Cualquier gas que aparezca dentro del matraz despus de 48hr de incubacin a 35C indica una Prueba Presuntiva Positiva y la ausencia de produccin de gas hacia el final de este periodo constituye una Prueba Negativa y por lo tanto se considera el agua como potable. Se debe realizar una *Prueba Confirmativa, plantendose dos alternativas. Varios tubos de fermentacin con caldo verde brillante lactosa bilis pueden ser inoculados a partir del inoculo primario en donde se observo produccin de gas. La nueva aparicin de gas dentro de las 48hr siguientes constituye una prueba Confirmativa positiva, ya que los ingredientes del medio inhiben el desarrollo de los organismos grampositivos, permitiendo el crecimiento del grupo coliforme. Tambin se puede inocular por estra varias cajas de Petri conteniendo medio de Endo o agar eosina azul de metileno con lactosa o caldo de lauriltriptosa como agentes de la produccin de gas. La aparicin de colonias nucleadas tpicas, que a menudo presentan un brillo metlico dentro de las 24hr siguientes, tambin indica una Prueba confirmativa positiva. En algunos casos se realiza una *Prueba Complementaria, las colonias discretas aparecidas sobre las placas de agar confirmativas, se aslan en caldo lactosa y se inoculan por estra en tubos con agar. La formacin de gas y la presencia de bacilos gramnegativos no esporulados, se interpretan como evidencia de que las bacterias coliformes estaban en la muestra original. * Mtodos de filtros de membrana: Esta tcnica ofrece varias ventajas sobre la prueba para coliformes recin discutida. Proporciona una cuenta mas rpida y mas precisa de los organismos coliformes provenientes de un volumen mayor de agua, en comparacin con el viejo y rutinario procedimiento. El aparato filtrador se construye de vidrio, plstico o de un embudo de acero inoxidable y un matraz de succin. El filtro de membrana es un disco

20 delgado, fabricado de un derivado de la celulosa. Tiene poros extremadamente pequeos que detienen el paso de las bacterias. Los filtradores se esterilizan por medio de la autoclave o por exposicin al oxido de etileno, despus de esterilizado el aparato porta filtros, se arma y se hace pasar una muestra representativa de 50 a 200 ml, dependiendo de la masa bacteriana en el agua. El tamao de la muestra no debe ser de un volumen que produzca ms de 300 colonias por disco. Todas las bacterias contenidas en la muestra son retenidas en el filtro de membrana. El embudo se desarma y la membrana se transfiere, por medio de unas pinzas estriles a una caja de petri estril que contiene una compresa saturada con 2ml de medio de Endo. Este medio se difunde a travs de los poros de la membrana llevando nutrientes hacia la superficie con el fin de mantener el crecimiento de las bacterias retenidas en el filtrado. Las cajas se incuban a 35C durante 15 a 20 hr. Las colonias de los organismos coliformes muestran un tpico brillo dorado metlico y pueden contarse fcilmente. * Prueba para detectar estreptococos fecales: Los organismos de este grupo son: Streeptococcus faecalis, S. faecalis varliquefaciens, S. faecalis var. Zymogenes, S. faecium, S. durans, S. Boris y S. equinus. Estos microorganismos se encuentran generalmente en el tracto intestinal del hombre y de los animales, de ah que se consideren como indicadores de la contaminacin. La prueba para determinar los estreptococos fecales es muy similar a la de los coliformes, excepto que se emplean diferentes medios selectivos, ya que los estreptococos son Gram positivos. Por lo cual, se realizan pruebas mltiples en donde se emplea caldo de glucosa con azida a la que despus de adicionarle volmenes variables de agua e inocularlos, pueden desarrollar crecimiento en el fondo del tubo, indicando muy probablemente una prueba positiva. La inoculacin posterior y el crecimiento en tubos conteniendo caldo de azida etilvioleta proporciona la evidencia confirmativa de los estreptococos fecales. Las tinciones de Gram de los residuos del sedimento deben mostrar estreptococos grampositivos. Si se empleara la prueba del filtro de membrana, el filtro deber colocarse sobre la superficie de agar K F para estreptococos, en donde los nutrientes se difunden hasta el fondo del filtro, de tal manera que el organismo atajado en la superficie logra desarrollarse en colonias, las cuales pueden contarse. * Cuenta Estndar en placa: Se efectan cuentas de colonias despus de haber sembrado en placa cantidades alcuotas (proporcionales) de la muestra. La cuenta estndar en placa no se recomienda para el caso del agua porque la que contiene pocas bacterias patgenas, obviamente es mas peligrosa que la que contiene muchas saprfitas. Sin embargo, lo usual es que el agua de buena calidad tenga cuentas bajas, menos de 100 colonias por mililitro. Las cuentas en placas son tiles para determinar la eficiencia de las operaciones para eliminar microorganismos, como la sedimentacin, filtracin y cloracin. Las cuentas se deben hacer antes y despus del tratamiento especifico. Los resultados indicaran la medida en que ha sido reducida la poblacin microbiana. (Temple, 1980)

4.- MTODOS DE IDENTIFICACINMuchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de

21 bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.

4.1.- MICROSCOPIA Se conoce como Microscopio, a cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos. Existen diferentes tipos de microscopios, por lo que solo se citaran algunos, que se consideran los mas usados; El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general, se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las distancias focales de los dos sistemas de lentes. Hay diversos microscopios pticos para funciones especiales. Uno de ellos es el microscopio estereoscpico, que no es sino un par de microscopios de baja potencia colocados de forma que convergen en el espcimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta.

22 El microscopio petrogrfico o de polarizacin se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz, pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 angstroms (1 ngstrom equivale a 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 angstroms.

4.2.- MTODOS DE TINCIN La Tincinde Gram, es un mtodo de identificacin de bacterias mediante una tincin especfica. Desarrollado por el mdico dans Hans Christian Joachim Gram, es un procedimiento utilizado universalmente. En un primer momento las bacterias se tien con violeta de genciana (derivado metilado anilnico) y despus se tratan con la solucin de Gram (1 parte de yodo, 2 partes de yoduro potsico y 300 partes de agua); por ltimo se lavan con alcohol etlico, y unas bacterias retienen el fuerte color azul de la violeta de genciana y otras se decoloran por completo. A veces se aade una contra tincin con fucsina o eosina para teir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas ms visibles. Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tincin azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan capacidad variable de tincin de Gram y se llaman Gram variables. Bacterias Gram positivas tpicas son los estafilococos que producen fornculos; Gram negativas representativas son la Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina; Gram variables son los bacilos de Koch de la tuberculosis.

4.3.- TCNICAS DE CULTIVO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. Las tcnicas de cultivo varan segn el tipo de anlisis; se conoce como inoculo a una porcin de muestra, que se lleva o acarrea al medio de cultivo, este crece y se desarrolla formando una colonia, que es producida por una sola bacteria; La tcnica de estra es utilizada

23 en cultivos clnicos y alimentos, se utiliza en cajas de petri o tubos, en un medio slido, la finalidad de esta tcnica es separar colonias, la siembra se realiza con un asa bacteriolgica circular, y entre cada estra se esteriliza el asa bacteriolgica. La tcnica de picadura, se realiza con un asa de aguja, en un tubo de ensaye con un medio solid o semislido, consiste en introducir el aguja para picar el agar, mas o menos 2cm antes del fondo. La tcnica de gota, se realiza en una caja de petri con un medio slido, consiste en tomar con una pipeta estril una muestra, de entre .25 a .5ml, esta se coloca en el centro de la caja de petri y se esparce con una varilla de vidrio previamente doblada en escuadra, sobre el agar.

5.- EL AGUA COMO TRANSMISOR DE ENFERMEDADESComo menciona el autor Bourgeois en su obra Microbiologa Alimentara Vol.1 existen muchas bacterias y hongos asociados con plantas y animales acuticos. Algunos de los cuales son patgenos para los peces y anfibios. Por ejemplo, Mycobacterium marinum es un patgeno de peces, pero ocasionalmente, causa lesiones en la piel de los nadadores. Con el agua dulce, las enfermedades llegan de manera diferente, ya se a por contacto con un contaminante o desecho orgnico. Por ejemplo, las bacterias se multiplican en el tracto intestinal y son descargadas en los sistemas de aguas negras, siendo estas las que tienen mayor posibilidad de infectar a otra persona por medio del agua dulce. Para que esto se realice, las bacterias deben de ser capaces de sobrevivir en el agua por lo menos durante un mnimo de tiempo. Es por esto que se dice que el agua acta como transmisor de enfermedades, ya que interviene como medio de transporte de las mismas, esto ocurre principalmente en comunidades de escasos recursos, en las que no se cuenta con sistema de drenaje y alcantarillado. (Mescle & C.M, 1980)

5.1- BACTERIAS DEL AGUA Todas las aguas dulces, naturales o saladas, tienen una poblacin especifica de bacterias adaptadas al medio ambiente, viviendo y reproducindose. Las bacterias del agua incluyen a muchos gneros, varios de ellos muy interesantes tanto morfolgica como fisiolgicamente. La cantidad de bacterias que vive suspendida en el agua es mucho menor que la que habita en los lodos sedimentarios, arena o piedras, partculas de limo suspendidas, y en las superficies sumergidas de las plantas acuticas. En general, el nmero de bacterias del agua es suficientemente pequeo para ser inconspicuo y ms aun, la mayora de ellas no crecer en los medios utilizados para examinar la calidad sanitaria del agua. El nmero de bacterias oscila desde unas cuantas por mililitro hasta un orden de elevada magnitud. Las cuentas altas son el resultado de la presencia de otro tipo de materia orgnica, como los florecimientos masivos de algas sobre un lago, granos de polen esparcidos por el viento, la descarga de aguas negras, etc.

24 La accin de varios tipos de bacterias del agua, se puede manifestar en la corrosin de atarjeas de concreto, tuberas y conexiones de las lneas de conduccin, en el metal de los barcos y en los tanques de deposito. Aunque de cualquier manera, las bacterias del agua son importantes en la desaparicin o en la reduccin de la materia orgnica. (Mescle & C.M, 1980)

5.1.2 COLIFORMES Como ya se menciono anteriormente, los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. El grupo de bacterias coliformes incluye a las aerbicas y a las anaerbicas facultativas, bacilos Gram negativos no esporulados que fermentan la lactosa con formacin de gas despus de 48hr de incubacin a 35C. La presencia de bacterias coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Los coliformes fecales, que se encuentran en los intestinos de los humanos y otros animales de sangre caliente, son un tipo de bacterias coliformes. La presencia de coliformes fecales en un suministro de agua es un buen indicador de que las aguas negras han contaminado el agua. Se pueden hacer pruebas especficamente para coliformes fecales o para el total de bacterias coliformes que incluye todos los tipos de bacterias coliformes y que puede indicar contaminacin fecal. Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son: Agua Potable: menos de 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua Natacin: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra de agua (Diaz, 1977)

5.1.3.- BACTERIAS TILES EN EL AGUA Las bacterias del agua forman una parte esencial del ecosistema total de la Tierra, as como en los ciclos ms pequeos que se verifican en las pozas o los arroyos. Debemos tener en cuenta que la mayor parte de la superficie terrestre esta cubierta por agua; la mayora de los animales, con excepcin de los insectos, viven en el agua; una gran parte de los vegetales viven en el agua; y la mayor proporcin de la actividad fotosinttica se realiza en el agua. De estos hechos, es claro y obvio que el grueso de los procesos degradativos que involucran a los ciclos de los principales elementos, tambin se llevan a cabo en los ambientes acuticos. Un ejemplo de la accin de las bacterias tiles en el agua, es el siguiente: El petrleo, que se escapa de los pozos defectuosos situados cerca de las playas o de los barcos hundidos, se oxidar a dixido de carbono y agua por accin de las bacterias. Es por

25 esto por lo que se debe de tener en cuenta que no todas las bacterias que se encuentran en el agua son dainas. (Mescle & Bourgeois, 1980)

5.2 ENFERMEDADES CAUSADAS POR EL AGUA.

En la actualidad existen pocas enfermedades que se transmiten a travs del agua. Las principales son: * La Fiebre Tifoidea: Causada por la Salmonella thyphi. ebres Paratifoideas: Que pueden resultar de infecciones producidas por S.schottmuelleri, u otras especies de este genero, estos atacan principalmente al tracto intestinal, pero tambin pueden invadir la corriente sangunea y esparcirse hacia otras partes de l cuerpo. senteras Bacilares: Producido por la Shigella dysenteriae, que provoca una inflamacin intestinal. senteras Amibianas: Producidas por la Entamoeba histolytica, un protozoario patgeno, que se encuentra rara vez en este pas. * Clera Asitico: Causado por el Vibrio cholerae, la enfermedad es el resultado de una falta de sanidad y ocasiona una diarrea muy fuerte as como un dao en la mucosa intestinal. * Tularemia: Causada por Francisella tularensis, es transmitido al hombre por la picadura de algunas moscas, mosquitos o garrapatas, o al manejar animales infectados como conejos o ardillas. Sin embargo, este microorganismo ha sido aislado de corrientes de agua que contenan cadveres de castores o de ratones almizcleros. * Hepatitis: Es la inflamacin aguda del hgado, y puede ser producida por una infeccin, habitualmente viral. (Mescle & Bourgeois, 1980)

6.- PURIFICACIN DE LAS AGUAS POTABLESEn la actualidad se han desarrollado varios mtodos para purificar el agua; los de eleccin dependern de la clase de fuente de abastecimiento que se trate. En algunas localidades, el agua puede tener tan buena calidad que tan solo la desinfeccin es suficiente, mientras que en otras comunidades, el agua debe de pasar por varios procesos antes de que su apariencia y su sabor sean agradables y se le considere como potable. A continuacin se describirn solo algunos de los mtodos. (Yokun, 1979)

6.1.- POZAS DE COAGULACIN Y SEDIMENTACIN Este proceso es obligatorio, en especial, en donde el aprovisionamiento de agua proviene de ros muy largos que atraviesan reas muy contaminadas. Los detalles del proceso son variables, de acuerdo con las condiciones locales.

26 El agua fluye hacia un gran estanque o poza en donde se localizan los retenes colocados en sitios estratgicos, es decir, en la entrada, con el fin de disminuir la velocidad del flujo y en otros puntos clave para prevenir una anomala. Al llegar el agua a la poza, se agrega un agente coagulante con el fin de quitar el material fino que se encuentra suspendido, con el objeto de aclarar el agua. El coagulante y el agua se agitan violentamente y entonces se agrega el floculante para sedimentar. Los coagulantes inorgnicos que se utilizan son el alumbre, aluminato de sodio, silicato coloidal y bentonita. En reas donde el agua tiene un color y sabor desagradable, se puede utilizar el carbn activado con el fin de adsorber dichas propiedades.

6.2.- FILTROS DE ARENA LENTOS Des de el punto de vista histrico, dichos filtros han servido para propsitos tiles, pero en la actualidad muy pocos se encuentran operando, fundamentalmente porque se requieren grandes reas y el promedio de varios millones de galones por acre por da es muy lenta en relacin con la demanda de muchas comunidades.

6.2.1.- FILTROS DE ARENA RPIDOS Depende de la gravedad y se construye sobre un piso de concreto, consiste en tuberas cubiertas con capas de grava gruesa, grava ms fina, arena gruesa y despus una capa de arena fina. Durante la operacin, el agua a la cual se le ha agregado un coagulante, se bombea hasta el filtro, formndose rpidamente una delgada pelcula gelatinosa de este material floclate sobre la superficie y en las 2 o 3 pulgadas exteriores en la capa de arena. Las bacterias y otras partculas pequeas quedan atrapadas en esta capa. El filtro termina por taparse con la acumulacin del material y por lo tanto pierde eficiencia. Esto se arregla invirtiendo el flujo de del agua, de tal manera que esta sobresalga a travs del filtro y se lave el material acumulado. A continuacin de este proceso de limpieza, el filtro esta listo para volver a usarse.

6.3.- FILTROS QUE TRABAJAN CON PRESIN Son similares a los filtros rpidos que accionan por medio de la gravedad, en su estructura general, solo que trabajan en donde el abastecimiento de agua se realiza a presin. Un filtro de presin es un cilindro de acero sellado que contiene material granuloso. El agua por filtrar penetra en la parte superior del tanque, se difunde hacia abajo a travs de una capa de filtro y drena en la porcin baja. Ocasionalmente se invierte el flujo para lavar el filtro y quitar los residuos acumulados en el. En algunas condiciones se debe mezclar el agua con un coagulante antes de filtrarla. Este tipo de filtro se utiliza para tratar el agua de las piscinas, as como para separar impurezas como tierra, turbidez, hierro, aceite y colorantes.

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6.4.- DESINFECCIN Despus que las aguas negras han sido tratadas qumicamente y filtradas, se almacenan en tanques o reservorios y se desinfectan antes que se destinen al consumidor. Este paso es necesario para ser de uso aceptable o para acarrearse a travs de los estados. Las soluciones a base de calcio o hipoclorito de sodio han mostrado ser efectivas para el tratamiento de las aguas en los pueblos pequeos, en cisternas de abastecimiento y en piscinas. En la actualidad, el cloro y las cloraminas son las que mas se usan, este debe de manejarse con cuidado, ya que es extremadamente txico en grandes dosis, debe de ser mezclado rpidamente con el agua, y debe de estar en contacto con esta por lo menos durante 20 minutos. La dosis adecuada de cloro aplicable al agua varia de acuerdo con la naturaleza de la misma, el pH y la temperatura, un mnimo deseable de cloro libre residual de 0.05 a 0.10 mg/lt, debe encontrarse en los puntos distantes del sistema de distribucin; se recomienda que exista una concentracin de 1.0 a 2.0 mg/lt de cloramina residual en las aguas tratadas. El hervir el agua puede ser un tratamiento muy efectivo si solo se requiere de un pequeo volumen.

PROGRAMA II:

1.- DEFINICIN DE DRENAJESe define como drenaje, cloacas o red de saneamiento, en ingeniera y urbanismo, al sistema de tuberas, sumideros o trampas, con sus conexiones, que permiten el desalojo de lquidos, generalmente pluviales, de una poblacin. (Wikipedia la enciclopedia libre, 2007)

1.2.- TIPOS DE DRENAJE Para la elaboracin de un drenaje se debe de tener en cuenta que, existen dos tipos diferentes de drenaje, los cuales, cumplen con distintas necesidades y servicios. A continuacin se hablara de estos dos tipos de drenajes de manera breve.

1.2.1.- DRENAJE SANITARIO

28 Se llama drenaje sanitario al que transporta los desechos lquidos de casas, comercios y fbricas no contaminantes. En algunas ciudades son dirigidos a plantas depuradoras para su potabilizacin y reutilizacin.

1.2.2.- DRENAJE PLUVIAL Se conoce como drenaje pluvial al que conduce el agua de lluvia a lugares donde se organiza su aprovechamiento. En muchas localidades no se realiza la diferenciacin entre drenaje sanitario y pluvial y todo el material recolectado es concentrado al mismo destino.

1.3.- FUNCIONAMIENTO El drenaje funciona gracias a la gravedad. Las tuberas se conectan en ngulo descendente, desde el interior de los predios a la red municipal, desde el centro de la comunidad hacia el exterior de la misma. Cada cierta distancia se perforan pozos de registro verticales para permitir el acceso a la red con fines de mantenimiento. En el caso del drenaje pluvial, en el pavimento de las calles se establecen alcantarillas, conectadas directamente a la tubera principal, para captar el agua de lluvia. 1.4.- PELIGROS Puesto que los sistemas de drenaje permiten el desalojo de desechos domsticos y comerciales sin control, es posible que se contaminen con materiales peligrosos y hasta txicos. Normalmente en pequeas cantidades, no representan un peligro a corto plazo.

1.5.- ESPECIFICACIONES PARA LA CONSTRUCCIN DESISTEMAS DE DRENAJE Para que se lleve a cabo la construccin de un sistema de drenaje, este debe de cumplir con ciertas especificaciones, las cuales se describirn a continuacin, de manera breve: * Perodo de Planeamiento: El Reglamento de agua potable y saneamiento bsico, recomienda periodos de diseo de acuerdo con el Nivel de Complejidad de la zona donde se planea construir el sistema de drenaje, es decir si el nivel de complejidad es Bajo y medio se llevara 15 aos su planeamiento, si el nivel de complejidad es medio alto se llevara 20 aos y si el nivel es alto se llevara 25 aos su planeamiento. * Dimetros de las tuberas:

29 En cuanto a los dimetros mnimos de tuberas, el lmite mnimo debe ser de 200mm. (8), aunque en sistemas de complejidad bajos se pueden utilizar hasta 150mm. (6). * Velocidades mnimas: Deben ser superiores a los 0.45 m/s para evitar la acumulacin de sedimentos en las tuberas, aunque puede llegar a ser 0.4m/s en sistemas simplificados. * Esfuerzos mximos en tuberas: No deben ser superiores a 1.5Pa y 1Pa en sistemas simplificados. * Generacin de sulfuros: Al descomponerse, la materia orgnica produce entre otros, acido sulfhdrico (H2S) y acido sulfrico (H2SO4). La accin corrosiva de ambos compuestos, deteriora las paredes de las tuberas, causando infiltraciones y fugas. Z = 3(DBO5)(1.07)(T' 20)S( 0.5)Q( 1 / 3)(P / H) Donde DBO5 es la demanda biolgica de oxigeno a los 5 das, es decir, la cantidad de oxigeno que se necesita para descomponer la materia orgnica. (Yokun, 1979)

2.- DEFINICIN DE ALCANTARILLADOSe denomina alcantarillado o red de alcantarillado al sistema de estructuras y tuberas usados para el transporte de aguas servidas (alcantarillado sanitario), o aguas de lluvia, (alcantarillado pluvial) desde el lugar en que se generan hasta el sitio en que se disponen o tratan. Todava existen en funcionamiento redes de alcantarillado mixto, es decir, que juntan las aguas negras y las aguas de lluvia (sistemas unitarios). Este tipo de alcantarillado es necesario en zonas secas y con pocas de escasa pluviosidad, puesto que los sistemas de pluviales no usados, pueden convertirse en un foco de infecciones. Cierto que existe la posibilidad de poner en las cabeceras de los arcas de descarga, que, cada cierto tiempo, descargan una cierta cantidad de agua para limpiar los conductos, pero es un gasto que muchas zonas no se pueden permitir precisamente por falta de agua y por ser ms necesario en las estaciones secas. Las redes de alcantarillado son estructuras hidrulicas que funcionan a presin atmosfrica. Slo muy raramente, y por tramos breves, estn constituidos por tuberas que trabajan bajo presin. Normalmente son canales de seccin circular, oval, o compuesta, enterrados la mayora de las veces bajo las vas pblicas. La red de alcantarillado es considerada un servicio bsico, sin embargo la cobertura de estas redes en las ciudades de pases en desarrollo es nfima en relacin con la cobertura de las redes de agua potable. Esto genera importantes problemas sanitarios. Durante mucho tiempo, la preocupacin de las autoridades municipales o departamentales estaba ms ocupada en construir redes de agua potable, dejando para un

30 futuro indefinido la construccin de las redes de alcantarillado. Actualmente las redes de alcantarillado son un requisito para aprobar la construccin de nuevas urbanizaciones. (Wikipedia la enciclopedia libre, 2008)

2.1.- COMPONENTES DE UNA RED DE ALCANTARILLADO SANITARIO Los componentes de una red de alcantarillado sanitario son: * Colectores terciarios: Son tuberas de pequeo dimetro (150 a 250 mm de dimetro interno, que pueden estar colocados debajo de las veredas, a los cuales se conectan las acometidas domiciliares. * Colectores secundarios: Son las tuberas que recogen las aguas de los terciarios y los conducen a los colectores principales. Se sitan enterradas, en las vas pblicas. * Colectores principales: Son tuberas de gran dimetro, situadas generalmente en las partes ms bajas de las ciudades, y transportan las aguas servidas hasta su destino final. * Pozos de inspeccin: Son cmaras verticales que permiten el acceso a los colectores, para facilitar su mantenimiento. * Conexiones domiciliares: Son pequeas cmaras, de hormign, ladrillo o plstico que conectan el alcantarillado privado, interior a la propiedad, con el pblico, en las vas. * Estaciones de bombeo: Como la red de alcantarillado trabaja por gravedad, para funcionar correctamente las tuberas deben tener una cierta pendiente, calculada para garantizar al agua una velocidad mnima que no permita la sedimentacin de los materiales slidos transportados. En ciudades con topografa plana, los colectores pueden llegar a tener profundidades superiores a 4 - 6 m, lo que hace difcil y costosa su construccin y complicado su mantenimiento. En estos casos puede ser conveniente intercalar en la red estaciones de bombeo, que permiten elevar el agua servida a una cota prxima a la cota de la va. * Lneas de impulsin: Tubera en presin que se inicia en una estacin de bombeo y se concluye en otro colector o en la estacin de tratamiento. * Estacin de tratamiento de las aguas usadas o Estacin Depuradora de Aguas Residuales (EDAR): Existen varios tipos de estaciones de tratamiento, que por la calidad del agua a la salida de la misma se clasifican en: estaciones de tratamiento primario, secundario o terciario. * Vertido final de las aguas tratadas: el vertido final del agua tratada puede ser: Llevada a un ro o arroyo; Vertida al mar en proximidad de la costa; Vertida al mar mediante un emisario submarino, llevndola a varias centenas de metros de la costa; Reutilizada para riego y otros menesteres apropiados.

2.3.- COMPONENTES DE UNA RED DE ALCANTARILLADO PLUVIAL Los componentes de una red de alcantarillado pluvial son:

31 * * Cunetas: Las cunetas recogen y concentran las aguas pluviales de las vas y de los terrenos colindantes. Bocas de tormenta (imbornales o tragantes): Son estructuras verticales que permiten la entrada del agua de lluvia a los colectores, reteniendo parte importante del material slido transportado. Colectores secundarios: Son las tuberas que recogen las aguas de lluvia desde las bocas de tormenta (imbornales o tragantes) y las conducen a los colectores principales. Se sitan enterradas, bajo las vas pblicas. Colectores principales: Son tuberas de gran dimetro, conductos de seccin rectangular o canales abiertos, situados generalmente en las partes ms bajas de las ciudades, y transportan las aguas servidas hasta su destino final. Pozos de inspeccin (de registro, Cmaras de inspeccin): Son cmaras verticales que permiten el acceso a los colectores, para facilitar su mantenimiento. reas de expansin: Estas estructuras se utilizan raramente, en casos crticos, donde es necesario laminar las ondas de avenidas. Vertido final de las aguas de lluvia: Son estructuras destinadas a evitar la erosin en los puntos en que las aguas de lluvia recogidas se vierten en cauces naturales de ros, arroyos o mares.

*

*

* * *

A veces se utilizan pozos de tormentas. Son grandes depsitos previstos para cuando llueve abundantemente.

3.- SANEAMIENTO Y ABASTECIMIENTO DEL AGUAPara llenar los requerimientos modernos de calidad, los abastecimientos deben ser saludables y de buen sabor, atributos que van entrelazados. Si el agua no atrae los a los sentidos de la vista, gusto y olfato, la gente evitar y beber cantidades insuficientes para satisfacer las necesidades fisiolgicas. Para ser saludable, el agua debe de estar libre de organismos causantes de enfermedades, sustancias venenosas y cantidades excesivas de materia mineral y orgnica. Para tener un sabor agradable, debe de carecer en especial de color, turbidez, sabor y olor; poseer una temperatura moderada en verano e invierno y estar bien aireada. (Yokun, 1979)

3.1.- CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA El control de calidad del agua interviene en todas las fases de la administracin tcnica de las obras hidrulicas. Se inicia con la preparacin, supervisin y mantenimiento de las reas de captacin de las fuentes abastecedoras, continua a travs de los ductos, plantas de purificacin y sistemas de distribucin; alcanza hasta los accesorios domsticos y equipos de

32 manufactura a los que se suministra el agua. Cada seccin de las obras tiene sus problemas de control propios; para todas ellas, el precio de la seguridad es una vigilancia permanente.

3.2.- FUENTE DE ABASTECIMIENTO Un agua limpia por naturaleza, proviene exclusivamente de una fuente o cuenca limpia. Por lo que los dirigentes de las obras hidrulicas deben de conocer profundamente el rea de captacin de su abastecimiento, as como si existen corrientes y lagos extensos u obras subterrneas de suministro, con alcance de la cuenca. Las cuencas debern visitarse en todas las estaciones del ao y bajo todas las condiciones de clima. Solo de esta manera se puede tener un control sobre la calidad del agua.

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VII.- HIPTESIS

A continuacin se enuncian las hiptesis, las cuales se examinaran con esta investigacin, as como el tipo de conjetura de la que se habla: H1: La contaminacin del agua en los aljibes y depsitos de aguade la escuela secundaria N18 es propiciada, por la falta de mantenimiento en ellos. * Esta hiptesis es de causalidad, ya que establece relacin de causa y efecto, entre las variables.

H2: A mayor falta de mantenimiento en aljibes y tinacos, mayor poblacin microbiana. * Esta hiptesis es correlacional, ya que especifica las relaciones entre las variables.

H3: Los alumnos de la secundaria N18, que consumen agua de los bebederos de la institucin, tienen mas probabilidad de presentar enfermedades intestinales debido a la presencia de coliformes totales y/o fecales. * Esta hiptesis es de causalidad, ya que establece relacin de causa y efecto, entre las variables.

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VIII.- METODOLOGA

Para lograr razonar mejor esta investigacin es necesario dejar bien definidas e identificas las variables: Identificacin de las variables: Independiente: Los Microorganismos, ya que estos se pueden cuantificar (medir) y los resultados de los anlisis que indican su presencia, influyen en la variable dependiente. Dependiente: El agua, puesto que los resultados de los anlisis que indican la presencia de los microorganismos (que son la variable independiente), influyen en la calidad del agua. Ahora que se han identificado las variables dependiente e independiente, es conveniente definir las variables de manera operacional: * AGUA: Se determinaran sus propiedades mediante anlisis que se realizaran en el laboratorio y se comparan los resultados con los establecidos en la NOM-180SSA1-1998 que habla sobre la Salud ambiental: Agua para uso y consumo humano, Requisitos sanitarios. MICROORGANISMO: Se realizaran anlisis microbiolgicos, para identificar bacterias en el agua, y los resultados se confrontaran con los establecidos en la NOM-127SSA1-1994, que habla sobre la Salud ambiental, agua para uso y consumo humano-Lmites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilizacin.

*

Para poder lograr los objetivos de esta investigacin, se utilizaran tcnicas establecidas en la NOM-230-SSA1-2002, (Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Requisitos sanitarios que se deben cumplir en los sistemas de abastecimiento pblicos y privados durante el manejo del agua. Procedimientos sanitarios para el muestreo) para la toma de muestras, as colmo las tcnicas establecidas en la NOM-112-SSA1-1994 (Bienes y servicios.Determinacion de bacterias coliformes) para la identificacin de coliformes totales y fecales, y la NOM-127SSA1-1994(Salud ambiental, agua para uso y consumo humano-Lmites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilizacin.) la cual contiene los ndices permisibles de contaminantes en agua.

VIII. I.-TIPO DE ESTUDIO Y DISEO GENERAL

35 Se considera que esta investigacin es de naturaleza:

Experimental: Ya que se conto con la manipulacin intencional de una accin para analizar sus posibles resultados, dado que al realizar los Anlisis Microbiolgicos enel laboratorio del CBTis 39, se compararon los resultados obtenidos con los rangos permisibles de contaminantes establecidos en la NOM-127-SSA11994(Salud ambiental, agua para uso y consumo humano-Lmites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilizacin) mencionada anteriormente.

Y ala vez al ser de naturaleza experimental, es de tipo:

Experimental Puro: Porque rene los dos requisitos para lograr el control y la validez interna. (1.- Grupos de comparacin, 2.- Equivalencia de los grupos.) Se considera que esta investigacin es viable, puesto que se dispuso con los recursos necesarios para llevarla a cabo, la realizacin de los anlisis del agua no requiri de mucho tiempo, es factible, porque se conto con un laboratorio, material y reactivos necesarios, los conocimientos para realizar el muestreo y las pruebas en el laboratorio, as mismo se conto con el permiso del subdirector de la institucin, que tiene por nombre: Escuela Secundaria General N18 Congreso de Chilpancingo, antes mencionada, para realizar la toma de muestras. Esta investigacin se consigui realizar, ya que se conto con el conocimiento a fondo de los fundamentos y utensilios de laboratorio, y se verifico que en la institucin antes mencionada no se hayan llevado a cabo investigaciones de esta ndole.

VIII. II.- DEFINICIN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES

Para poder definir de manera operacional las variables antes mencionadas, se considera necesario puntualizarlas de manera conceptual, para poder comprender mejor la operacionalizacion de las variables:

36 * AGUA: A grandes rasgos es una sustancia cuyas molculas estn formadas por la combinacin de un tomo de oxgeno y dos de hidrgeno, lquida, inodora, inspida e incolora. Es el componente ms abundante de la superficie terrestre y, ms o menos puro, forma la lluvia, las fuentes, los ros y los mares; es parte constituyente de todos los organismos vivos y aparece en compuestos naturales. * MICROORGANISMO: ser vivo que slo se puede observar utilizando microscopios pticos o electrnicos. Los microorganismos se clasifican en tres de los cinco reinos. Las bacterias y cianobacterias (o algas verdeazuladas) pertenecen al reino Mneras. Son organismos con clulas procariticas, presentan una gran variedad de formas de vida, hay bacterias fotosintticas, quimiosintticas y hetertrofas. stas pueden ser saprofitas, descomponedoras o patgenas, En el reino Protistas se incluyen a organismos eucariotas. Son microorganismos protistas: los protozoos unicelulares, las algas unicelulares y algunas pluricelulares. Ciertos hongos, incluidas las levaduras, son microorganismos que pertenecen al reino Hongos. Los virus son un tipo de microorganismo peculiar. No tienen metabolismo y son parsitos intracelulares que causan un gran nmero de enfermedades.

Ya que se tiene un concepto claro y conciso de las variables, es til definirlas de manera operacional, para indicar la manera en que se cuantificara cada variable: * AGUA: Se determinaran sus propiedades mediante anlisis que se realizaran en el laboratorio y se comparan los resultados con los establecidos en la NOM-180SSA1-1998 que habla sobre la Salud ambiental: Agua para uso y consumo humano, Requisitos sanitarios. MICROORGANISMO: Se realizaran anlisis microbiolgicos, para identificar bacterias en el agua, y los resultados se confrontaran con los establecidos en la NOM-127SSA1-1994, que habla sobre la Salud ambiental, agua para uso y consumo humano-Lmites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilizacin. VIII. III.- UNIVERSO DE ESTUDIO, SELECCIN Y TAMAO DE LA MUESTRA, UNIDAD DE ANLISIS Y OBSERVACIN

*

Criterios de inclusin y exclusin: La muestra que se utilizo en esta investigacin fue NO PROBABILSTICA O DIRIGIDA, ya que se tomo una muestra de agua de la institucin que lleva por nombre: Escuela Secundaria General N18 Congreso de Chilpancingo, la cual cumpli con las siguientes especificaciones:

37 El agua fue tomada de tinacos, bebederos, grifos y de las llaves de los lavabos. De cada lugar, se tomaron 200ml de agua, y de esta se tomaron 100ml de agua para aplicar la tcnica para la deteccin de coliformes totales y fecales en el laboratorio. El tipo de la muestra, de agua fue de sondeo, es decir fue tomada en un lugar y en un tiempo determinado.

Estos criterios han sido establecidos bajo la decisin y criterios del investigador y se conto con las tcnicas bacteriolgicas de laboratorio establecidas para el anlisis de las muestras de agua de la escuela secundaria N18, las cuales son: Tcnica bacteriolgica para la determinacin de coliformes totales. Tcnica bacteriolgica para la determinacin de coliformes fecales. Para cada tcnica se utilizaran 100ml de la muestra de agua. Al realizar la toma de la muestra de agua, se tomo en cuenta lo siguiente: Al tomar la muestra agua del tinaco se enjuago el embase con el agua del tinaco 3 veces y se dejo una espacio entre la muestra de agua de 200ml, y la tapa del embase. Al tomar la muestra de agua de la llave de los lavabos y de los grifos se dejo caer el agua unos segundos y se tomo la muestra de agua, la cual fue de 200ml. Los embases donde se coloco la muestra de agua, fueron de vidrio con tapn esmerilado, estriles con capacidad de un litro.

Para la identificacin de las muestras de agua, se etiquetaron los frascos con la siguiente informacin: Nmero de control para identificar la muestra de agua, independientemente del nmero de registro del laboratorio.

NUMERO DE CONTROL001 002 003 004

MUESTRATinaco Llave de lavabo Bebedero Grifo

CANTIDAD200ml 200ml 200ml 200ml

38 * Fecha y hora del muestreo en tinacos, llaves de lavabos, grifos y bebederos.

FECHA Y HORA DEL MUESTREO13 de Mayo del 2008 / 11:15am

Para el control de la muestra de agua debe llevarse un registro en formato establecido previamente con los datos anotados en la etiqueta del frasco o envase, as como la siguiente informacin: Identificacin del punto o sitio del muestreo, es decir se deber de especificar si proviene de la llave de los lavabos, grifo, bebedero o tinaco. Temperatura de la muestra de agua. pH de la muestra de agua. Tipo de anlisis o tcnica a efectuar en la muestra de agua, la cual puede ser: tcnica bacteriolgica para la deteccin de coliformes totales en el agua o tcnica bacteriolgica para la deteccin de coliformes fecales. Nombre de la persona que realiz el muestreo. Los sellos de los embases deben de ser de plstico o adheribles. El muestreador deber de contar con una bitcora, que contenga los datos de las etiquetas

N CONTROL MUESTRA CANTIDAD001 002 003 004 Tinaco Llave de lavabo Bebedero Grifo 200ml 200ml 200ml 200ml

C22C 20C 23C 21C

pH7.0 7.2 7.1 7.3

TCNICAColiformes totales y fecales Coliformes totales y fecales Coliformes totales y fecales Coliformes totales y fecales

MUESTREADOR :

Noemi Gonzalez Rovelo.

VIII. IV.- PROCEDIMIENTOS PARA LA RECOLECCIN DE INFORMACIN, INSTRUMENTOS A UTILIZAR Y MTODOS PARA EL CONTROL Y CALIDAD DE LOS DATOS

Para llevar a cabo la recoleccin de datos de esta investigacin, se realizaran tcnicas bacteriolgicas de laboratorio para el anlisis de las poblaciones microbianas presentes en el agua de la escuela secundaria N18.

39 A continuacin se citaran estas tcnicas con el fin de dar a conocer los objetivos, fundamentos y materiales de las tcnicas, indicados en la NOM-112-SSA1-1994. * Tcnica bacteriolgica para la determinacin de coliformes totales y fecales:

OBJETIVO: Determinar si hay presencia coliformes fecales y totales en el agua para el consumo humano. FUNDAMENTO: El mtodo se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 1C durante 24 a 48 horas, resultando una produccin de cidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentacin. MATERIAL: Pipetas bacteriolgicas para distribuir 20ml, con tapn de algodn. Las pipetas pueden ser graduadas en volmenes iguales a una dcima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapn de rosca. Utensilios esterilizables para la obtencin de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, esptulas, etc. Tubos de cultivo 20 x 200 mm y de 16 x 160 mm con tapones metlicos o de rosca. Campanas de fermentacin (tubos de Durham). Pipetas bacteriolgicas graduadas de 10 y 1 ml. Gradillas. Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de dimetro. Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante horno, durante 2 horas a 170 a 175 C o 1 h a 180 C o autoclave, durante 15 minutos como mnimo a 121 1,0 C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio daado por las esterilizaciones repetidas y ste debe ser qumicamente inerte. MEDIOS DE CULTIVO: Caldo lauril-triptosa (medio de enriquecimiento selectivo). Caldo lactosa bilis verde brillante (medio de confirmacin). Medio EC.(determinacin de coliformes fecales).

IX.- PLAN DE ANLISIS DE LOS RESULTADOS

40 IX. I.- MTODO Y MODELOS DE ANLISIS DE LOS DATOS SEGN EL TIPO DE VARIABLES A continuacin se indicaran las tcnicas bacteriolgicas que se utilizaran para la determinacin de coliformes totales y fecales en las muestras de agua tomadas de la Escuela Secundaria General N 18

TCNICA BACTERIOLGICA PARA LA DETECCIN DEL GRUPO COLIFORME EN EL AGUA, FECALES Y TOTALES

INTRODUCCIN: Los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. El grupo de bacterias coliformes incluye a las aerbicas y a las anaerbicas facultativas, bacilos Gram negativos no esporulados que fermentan la lactosa con formacin de gas despus de 48hr de incubacin a 35C. La presencia de bacterias coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Los coliformes fecales, que se encuentran en los intestinos de los humanos y otros animales de sangre caliente, son un tipo de bacterias coliformes. La presencia de coliformes fecales en un suministro de agua es un buen indicador de que las aguas negras han contaminado el agua. Se pueden hacer pruebas especficamente para coliformes fecales o para el total de bacterias coliformes que incluye todos los tipos de bacterias coliformes y que puede indicar contaminacin fecal. Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son: Agua Potable: menos de 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua Natacin: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra de agua La Escherichia coli, un miembro de este grupo, es un habitante normal del tracto intestinal de todos los seres vivos, sanos y enfermos. OBJETIVO: Determinar si hay presencia de microorganismos aerobios o coliformes fecales en el agua para el consumo humano.

41 FUNDAMENTO: El mtodo se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 1C durante 24 a 48 horas, resultando una produccin de cidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de fermentacin. MATERIAL: Pipetas bacteriolgicas para distribuir 10 ml, con tapn de algodn. Las pipetas pueden ser graduadas en volmenes iguales a una dcima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapn de rosca. Utensilios esterilizables para la obtencin de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, esptulas, etc. Tubos de cultivo 20 x 200 mm y de 16 x 160 mm con tapones metlicos o de rosca. Campanas de fermentacin (tubos de Durham). Pipetas bacteriolgicas graduadas de 10 y 1 ml. Gradillas. Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de dimetro.

Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante horno, durante 2 horas a 170 a 175 C o 1 h a 180 C o autoclave, durante 15 minutos como mnimo a 121 1,0 C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio daado por las esterilizaciones repetidas y ste debe ser qumicamente inerte. REACTIVOS: Muestras de agua.

MEDIOS DE CULTIVO: Caldo lauril-triptosa (medio de enriquecimiento selectivo). Caldo lactosa bilis verde brillante (medio de confirmacin). Medio EC. FORMULA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Caldo lauril-triptosa (medio de enriquecimiento selectivo): Base para la deteccin de organismos coliformes totales.

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Formula aproximada para 1lt: Triptosa peptona 20g Fosfato di potsico. 2.75g Lactosa... 5g Fosfato mono potsico 2.75g Cloruro de sodio.. 5g Lauril sulfato de sodio.. 0.1g Instrucciones: Suspenda 35.6gr del polvo en 1lt de agua purificada. Mezcle bien. Caliente un poco para disolver por completo. Dispnselo en tubos que contengan viales de fermentacin invertidos (campanas de fermentacin). Autoclave a 121C durante 15min. Enfri el caldo tan pronto como sea posible. Ajuste el pH final 6 0.2.

Caldo lactosa bilis verde brillante (medio de confirmacin) (BGLB): Determinacin de coliformes totales de importancia sanitaria. Formula aproximada para 1lt: Peptona de gelatina.. 10 g Lactosa. 10 g Bilis de buey deshidratada... 20 g Verde brillante......... 0.0133 g Instrucciones: Disolver 40gr del polvo en 1lt de agua purificada. Distribuir en tubos en porciones de 10ml con campanas de fermentacin cuando la muestra sea de 1ml o menos, si la muestra a probar es de 10ml, disolver 60g de polvo en 1lt de agua purificada y distribuir en porciones de 20ml en ambos casos esterilizar a 121C durante 12min. Ajuste el pH final 7.2 0.2.

Medio EC: Deteccin de Coliformes Fecales. Formula aproximada para 1lt:

43 Digerido pancretico de casena.12 g Lactosa.5 g Peptona de proteosa N3....8 g Sales biliares N3...1.5 g Fosfato Dipotasico1.5 g Fosfato monopotasico...1.5 g Cloruro de sodio5 g

Instrucciones: Suspenda 37g del polvo en 1lt de agua purificada y caliente ligeramente para disolver completamente. Dispnselo en tubos que contengan campanas de fermentacin. Autoclave a 121C durante 15min. Ajuste el pH final 6.9 0.2.

APARATOS E INSTRUMENTOS:

Horno para esterilizar que alcance una temperatura mnima de 170 C. Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de 1,0 C, provista con termmetro calibrado. Termmetro de mximas y mnimas. Autoclave que alcance una temperatura mnima de 121 1,0 C. Potencimetro con una escala mnima de 0,1 unidades de pH a 25 C.

PROCEDIMIENTO:

1. Prueba Presuntiva. Tcnica a seguir: a) Inocular 20ml de la muestra de agua en 5 tubos que contengan campana de fermentacin invertida y 10ml de caldo de lauril- triptosa.

44 b) Incubar por 48hr a 35C 2C. c) Si al transcurrir el tiempo de incubacin se observa la presencia de gas dentro de los tubos, esto indicara una prueba presuntiva Positiva. 2. Prueba Confirmativa. Tcnica a seguir: a) Inocular 5 tubos, a partir del inoculo primario en donde se observo produccin de gas, que contengan 10ml de caldo lactosa bilis verde brillante (BGLB) por asada. d) Incubar por 48hr a 35C 2C. b) La nueva aparicin de gas dentro de las 48hr siguientes constituye una prueba confirmativa positiva en coliformes totales. 3. Prueba Final. Tcnica a seguir: a) Se realiza una resiembra por asada en 5 tubos, con 10ml de Medio EC, del inoculo secundario en donde se observo la presencia de gas. b) Incubar por 48hr a bao mara a 44.5C 2C. c) La reaparicin de gas dentro de las 48hr siguientes indica una prueba final positiva para colif