1

Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos y de amida (6.5 - 9 ppm), y de protones de carbono alfa y metínicos (< 5.8 ppm). Int. J. Biol Macromol (2001) 29; 99-105

Desnaturalización de proteína

2

1H RMN de insulina. Región de los protones de residuos aromáticos con diferentes concentraciones de ion cinc agregado. Los números indican las veces en exceso que se encuentra el Zn2+.

Unión de ligando a proteína

3

Zhuang, Z, et al (2002) Biochemistry, 41, 11152-11160

NMR de 4-Hidroxibenzoil-CoA tioesterasa

Unión de ligando a proteína

4

1H RMN de la proteína nucleocápside HIV-1 (Bombarda, E. et al (2001) J Mol Biol 310, 659). Los diferentes puntos representan los protones del C de la Cys36 (▲), Cys39 (● y ♦) y Cys49 (■)

Propiedades de aminoácidos en proteínas

5

H2PO4- HPO4

2- + H+

pKa = 6.8

Determinación de pH intracelular

6

buffer

Metabolismo de glucosa en E. coli

FDP = fructosa 1,6-bisfosfatoL = lactatoA = acetatoE = etanolS = succinatoB = buffer

Glucosa 13C-1 50 mM a t = 0

7

Cinética enzimática en mitocondrias intactas

fosfato inorgánico (1), fosfocreatina (2), fosfatos , y (3-5) del ATP y fosfatos y del ADP (6-7).

Creatina + ATP creatina fosfocinasa fosfocreatina + ADP Creatina + ADP creatina fosfocinasa fosfocreatina + AMP

8PNAS, 92: 4748

Calbindina

9

Obtención de estructuras de proteínas por RMN

Requisitos

[Proteína] ~ 1 mM0.5 mLestable por al menos 24 h a temperatura ambientemonoméricac < 10 ns

secuencia de aminoácidosMasa molecular... a confirmar

10

Distribución de pesos moleculares de

proteínas resueltas hasta 1997

11

20 40 1400

200

400

600

800

1000

1200

1400N

úm

. de

est

ruct

ura

s

Masa molecular (kDa)

152 kDa a abril de 2010PDB ID: 2P80

Distribución de pesos moleculares de proteínas resueltas hasta 2010

12

Ribonucleasa

a 40 mHz

JACS (1957) 79:3289

El inicio de la historia

13

Ribonucleasa

a 56.4 mHz

JBC (1962) 237:1807

14

Ribonucleasa

a 60 mHz

Science (1967) 157:257

15

Espectros de 1H RMN de:

nucleasa de estafilococo (156 aminoácidos)

Inhibidor pancreático básico de tripsina (58 aminoácidos)

Magainina 2 (23 aminoácidos)

16

Lisozima

17

18

Asignación de resonancias para grupos laterales

19

Magainina 2 con asignación de señales para una valina

20

Acoplamiento entre protones de amida y protones de C

21

Ec. de Karplus J() = Acos2() - Bcos() + C

3JH,HN() = 6.4cos2(-60º) - 1.4cos(-60º) + 1.9

C

C

N

C

C

N

C

R H

O

O

H

HR

HR

H

hélice ( = -57º), 3JH,HN = 3.9 Hz hélice 310 ( = -60º), 3JH,HN = 4.2 Hz hoja antiparalela ( = -139º), 3JH,HN = 8.9 Hz hoja paralela ( = -119º), 3JH,HN = 9.7 Hz

i i + 1

φ

Medida de acoplamientos y estructura secundaria

22

Los núcleos intercambian constantemente su magnetización a velocidades que dependen de la sexta potencia de su distancia. Si se miden las velocidades del intercambio de magnetización se obtiene un conjunto de distancias internucleares. Este intercambio de magnetización se conoce como efecto nuclear Overhauser (NOE).

Efecto nuclear Overhauser

23

Correlación a través del espacio

24

Correlación a través del espacio

25

NOESYregión NN

Hélice entre los residuos

89 y 101

26

Contactos lejanos y estructura terciaria

sin asignación de secuencia

con asignación de secuencia

27

El resultado…

Lisozima (1E8L)

28

Los resultados…

Lisozima (1E8L)

29

Bibliografía