04. diagnostico por citometria de flujo de hpn.pptx
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INMUNOFENOTIPO HPNValoracin de protenas que utilizan GPI para su
anclaje a la membrana citoplasmatica
Dr. Elas Prez BecerraCitometria de Flujo
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Definicin
La HPN, tambin conocida como !"# De
$arc%iafa&$ic%eli, es una enfermedad
adquirida ' clonal de la clula tronco%ematopo'tica con la consi(uiente
produccin de clulas san(uneas
defectuosas#
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)pidemiolo(a
La HPN es una enfermedad pocofrecuente, su tasa anual de incidencia no
esta bien establecida# !e estima que sea* a + -eces menor que la anemiaaplasica#
.fecta a pacientes de ambos se"os 'puede aparecer a cualquier edad, pero sedescribe ma'or frecuencia en el se"ofemenino#
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/uadro clnico
)l comienzo de la HPN suele ser
insidioso ' la e-olucin tiende a ser
prolon(ada ' -ariable#Generalmente cursa con episodios de
%emlisis intra-ascular ' %emo(lobinuria#
.sociados a infecciones, menstruacin,medicamentos, trasfusiones, ejercicio,
entre otras#
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/uadro clnico
Hemlisis intra-ascular crnica sin patron
nocturno definido#
Puede cursar con pancitopenia, carenciade %ierro, trombosis -enosa e infecciones
de repeticin#
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Defecto molecular
)l clon anomalo de precursores
%ematopo'eticos, es %ipersensi-o a la
lisis por el complemento, sur(e comoconsecuencia de una mutacion somatica
del Gen PIG&. 01asfatidil Inositos (lic2n
del (rupo .3#
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Defecto molecular
)l Gen PIG&. es el responsable de la
sintesis de una estructura quimicallamada Glucofosfatidilinositol 0GPI3 por
medio del cual se unen un (rupo de
protenas a la membrana celular#
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)"presin de protenas que utilizan el anclaje
por GPI
Antgeno Funcin Distribucin celular
CD14 Receptor LPS Monocitos
CD16 FcRIII Neutrofilos (Polimorfismo GPI)
CD24 Clul!s " # $r!nulocitos%
CD&& (D'F) Re$ul!cin el comp% *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&2 (C'MP'*+) Linfocitos # monocitos%
CD&, '-esin *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&. (MIRL) In-i/ior C'M *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
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)"presin de protenas que utilizan el anclaje
por GPI
Antgeno Funcin Distribucin celular
CD14 Receptor LPS Monocitos
CD16 FcRIII Neutrofilos (Polimorfismo GPI)
CD24 Clul!s " # $r!nulocitos%
CD&& (D'F) Re$ul!cin el comp% *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&2 (C'MP'*+) Linfocitos # monocitos%
CD&, '-esin *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&. (MIRL) In-i/ior C'M *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
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)"presin de protenas que utilizan el anclaje
por GPI
Antgeno Funcin Distribucin celular
CD14 Receptor LPS Monocitos
CD16 FcRIII Neutrofilos (Polimorfismo GPI)
CD24 Clul!s " # $r!nulocitos%
CD&& (D'F) Re$ul!cin el comp% *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&2 (C'MP'*+) Linfocitos # monocitos%
CD&, '-esin *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
CD&. (MIRL) In-i/ior C'M *o!s l!s cel% +em!topo#etic!s%
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CELULAS TRONCO CD34
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1isiopatolo(a
Lisis intra-ascular
)l mecanismo de %emlisis parece ser la
acti-acin incontrolada del complemento
en la superficie de los eritrocitosanormales por la marcada reduccin o
ausencia de protenas de membrana
re(uladoras de la acti-idad delcomplemento 0/D*4 ' /D**3#
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1isiopatolo(a
Infecciones
Las infecciones son frecuentes ' se
atribu'en a defectos cuantitati-os '
cualitati-os en los leucocitos 0p#ejem# Ladisminucion de /D+5 trae como resultado
una acti-idad quimiotactica ' fa(ocitica
pobre3#
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1isiopatolo(a
trombosis
)l tromboembolismo -enoso es una de las complicaciones m2s temidas en la
HPN ' junto a los episodios %emorr2(icos son responsables de un *6 de la
mortalidad por esta enfermedad# !e presenta entre el +7 ' el 86 de los casos#
9epresenta el ma'or factor pronstico ne(ati-o: la ma'ora de las trombosis
intraabdominales principalmente de las -enas %ep2tica ' mesentric# La
localizacin m2s frecuente ' (ra-e es la trombosis de la -ena %ep2tica o sndrome
de ;
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Dia(nostico HPN
/uadro clnico# General de orina#
;iometria %em2tica#DHL
Hapto(lobinas Hemosiderina en
orina#
$edula sea Hb# Libre en plasma
1osfatasa alcalina en los neutrofilos#
.cetilcolinesterasa eritrocitaria#
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Dia!ostico HPN
Para un dia(nostico de certeza de HPN ' la
identificacin del dficit de e"presin de GPI, es
necesaria la demostracin del defecto de
e"presin en al menos dos lneas
%ematopo'ticas distintas de al menos dos
marcadores 0dos protenas asociadas a GPI o
una protena asociada a GPI ' 1L.)93
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CE"U"#$ HPN
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INDIC#CIONE$
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.spectos metodol(icos
.c$o#
1lourocromo#
Preparacin de la muestra#
)-entos analizados#)quipo#
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.n2lisis en neutrofilos
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@amaAo de la clona HPN
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@amaAo de la clona HPN
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Panel recomendado para HPN
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Dia(nostico HPNDemostrar dos tipos celulares con el defecto
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Dia(nostico HPNDemostrar dos tipos celulares con el defecto
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9equerimientos
metodol(icos
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@ratamiento
)l .c$o eculizumab es un anticuerpo %umanizado I(G Bappa# )ste .c$o se
une especficamente ' con (ran afinidad al componente /* del
complemento# )sta union pre-iene la (eneracin del subfra(mento /*a ' del
complejo de ataque a la membrana 0$./3 /*b&4# /uando se administra por
-a intra-enosa, la semi-ida de eliminacin de eculizumab es de 7C7 E7%
0F++ das3, permaneciendo fundamentalmente en el espacio -ascular# )l
estado de equilibrio de las concentraciones plasm2ticas de eculizumab se
lo(ra F+* das despus de la primera administracin# La farmacodinamia de
eculizumab se correlaciona directamente con la concentracin plasm2tica del
medicamento, ' el mantenimiento de concentraciones plasm2ticas superiores
a =* (mL conlle-a en la practica al bloqueo completo de la acti-idad
%emoltica dependiente de la acti-acin de /*
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eculizumab
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$onitoreo
$onitorizacin de la eficacia? )l descenso rapido de la
cifra de la LDH serica %asta un -alor pr"imo al normal
tiene una (ran utilidad para comprobar que eculizumab
esta bloqueando la acti-idad %emoltica del
complemento# Para -er la capacidad de respuesta de lamedula osea es mu' util monitorizar el recuento de
reticulocitos# Los casos tratados con eculizumab que
muestran una escasa ele-acion de la cifra de Hb '
tienen un recuento de reticulocitos bajo pueden traducirun componente medular %ipore(enerati-o#
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$onitoreo terapia con
aculizumab
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%CI#$