verificaciÓn de metodos
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VERIFICACION DE METODOS D.C. EDUARDO BRAMBILA COLOMBRES Facultad de Ciencias Químicas Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
TAREAS DEL PROFESIONAL DEL LABORATORIO CLINICO
Introducir nuevos métodos al trabajo del laboratorio
Elegir el método mas apropiado Evaluar el método bajo las condiciones del
laboratorio Establecer un control de calidad permanente Determinar los limites de referencia en el
laboratorio Transferir el método al trabajo de rutina
Paciente
Orden
Recolección
Transporte Análisis
???
??
Interpretación
Diagnóstico Tratamiento
Ejecución de un proceso analítico en el laboratorio
clínico
La calidad es obtenida por un proceso de trabajo
Planeado cuidadosamente Operado adecuadamente Optimamente controlado Medido apropiadamente Mejorado continuamente
ADMINISTRACIÓN ADECUADA DE LA CALIDAD
Estándares De
Calidad
Estándares de Calidad
En términos analíticos Solución estándar. Empleada para calibración o evaluar
un proceso, y representa pureza, veracidad.
En términos administrativos Provee una forma consistente de hacer las cosas
Proceso estándar de pruebas Proceso estándar de validación de métodos Estándar de calidad. Criterio que describe el nivel
aceptable de alguna característica Tiempo de reporte de resultados Que tan cercanos están los resultados del valor
“verdadero”
Proceso Estándar para el Manejo Total de la Calidad
Cen el laboratorio Procesos
C Control de
C Evaluación de la
C Mejoramiento de la
C Planeación De la
C Estándares
Procesos de Calidad en el Laboratorio
Determinan el trabajo en el laboratorio Políticas Procedimientos Estándares del
personal Recursos físicos
Manuales de Laboratorio Describen los procesos
de operación
Control de Calidad
Procedimientos para monitorear el proceso de análisis Detección y corrección
de problemas antes de liberar el producto (resultado)
Control de Calidad Estadístico
Evaluación de la Calidad
Monitoreo de la totalidad de las características del proceso que permitan satisfacer las necesidades del usuario, p.e.
Tiempo de entrega del resultado
Preparación del paciente Obtención del especimen Etc.
Mejoramiento de la Calidad
Determina las causas o problemas identificados por el CC o EC Problemas identificados
Analistas Individuales Equípo de Analistas Herramientas (Cartas de
flujo, Diagramas de Pareto, Diagramas causa-efecto, etc)
Planeación de la Calidad
Establecimiento y validación de los procesos encaminadas a las necesidades de los usuarios Selección y evaluación
de nuevos métodos e instrumentos
Selección y diseño de los procedimientos de control de calidad
Objetivos de la Calidad
Requerimientos que deben ser logrados para satisfacer las necesidades de los usuarios
Calidad Analítica Producir resultados que sean correctos
dentro de ciertos limites establecidos
Selección de la Prueba diagnóstica
Selección del método
Validación del método
Implementación Del método
Especímenes Ejecución de las pruebas
Monitoreo CC estadístico Resultados
Proceso para establecer un método de rutina
Mejoras al método
Mantenimiento del método Prevencion de problemas
Proceso de análisis en el laboratorio de rutina
VALIDACION
VERIFICACION ?
DEFINICIONES DE ACUERDO A LA NORMATIVA ISO 15189
VERIFICACION. Confirmación a través de la obtención de evidencia objetiva que los requerimientos especificados han sido completamente satisfechos
VALIDACION. Confirmación a través de la obtención de evidencia objetiva, que los requerimientos para un uso pretendido o aplicación han sido completamente satisfechos
¿Cuáles son los criterios para introducir un método al trabajo de rutina en un laboratorio?
Objetivo de la VALIDACION DE METODOS
El proceso de evaluación de métodos tiene como objetivo
EVALUAR LA MAGNITUD DEL ERROR DEL MÉTODO
Determinar si la magnitud del error del método afecta la interpretación de los resultados y el diagnóstico dado a los pacientes
Errores analíticos de los métodos
Errores al azar Son errores que afectan los
resultados tanto positiva- como negativamente. La dirección y la magnitud del error no puede ser predicha
Los errores al azar se agrupan como una distribución “normal” que resulta cuando se realiza una serie de determinaciones en un mismo especimen
Los determinación de los errores al azar son una medida de IMPRECISIÓN
Errores analíticos de los métodos
Imprecisión Es usualmente
cuantificada mediante la desviación estándar (s)
La “s” incrementa con la concentración, por lo que es útil calcular el coeficiente de variación (CV)
El tamaño del error al azar es expresado como 2s o 3s, lo que ayuda a conocer la magnitud del error presente
Valor medio
Error al azar
Errores analíticos de los métodos
Error sistemático Son errores que que
afectan los resultados en una dirección, ya sea positiva- o negativamente, por lo que causan que los resultados sean elevados o bajos
Los errores sitemáticos son una medida de INEXACTITUD
Valor correcto o verdadero
Valor medio
Error sistemático
Errores analíticos de los métodos
Error Total Es el efecto neto o
combinado del error al azar y el error sistemático
Debido a que los laboratorios realizan una sola medida por analíto, el resultado puede estar en la región del error comprendido entre la:
media+/-2 ó 3s
Valor correcto o verdadero
Valor medio
E. Sistemático E. al azar Error Total
EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VALIDACION DE
METODOS LINEALIDAD. Determina el intervalo reportable REPLICACION. Estima la imprecisión o errores al azar COMPARACION DE METODOS. Estima la inexactitud
o error sistemático INTERFERENCIA Y RECOBRO. Determinan los errores
constantes y proporcionales (especificidad analítica) LIMITE DE DETECCION. Caracteriza la sensibilidad
analítica SI EL DESEMPEÑO DEL METODO SE JUZGA
ACEPTABLE: Se verifican los LIMITES DE REFERENCIA
REGLAS FINALES CLIA Enero 24 de 2003
Todos los métodos de moderada a alta complejidad deben ser validados antes de ser introducidos al trabajo de rutina.
Métodos No Modificados Validación en sus características de
ejecución:
Exactitud Precisión Intervalo Reportable (Linealidad) Verificación de los limites de referencia
Métodos No Modificados Validación en sus características de
ejecución:
Exactitud Precisión Intervalo Reportable (Linealidad) Verificación de los limites de referencia
Métodos Modificados o Desarrollados en el Laboratorio
Validación en sus características de ejecución: Exactitud Precisión Sensibilidad Analítica Especificidad Analítica Intervalo Reportable (Linealidad) Intervalos de Referencia Cualquier otra característica de desempeño del
método. Validación en sus características de ejecución
¿Que estándares de calidad debemos emplear para determinar si la magnitud del error del método es lo suficientemente grande para afectar la interpretación de los resultados?
?
Requerimientos médicos
La decisión de aceptar o rechazar un método candidato para su introducción a rutina depende de los requerimientos del usuario final
El error del método es excesivo si tiene efecto en los resultados finales y puede producir un diagnóstico incorrecto
???
DIAGNÓSTICO
Concentraciones de nivel de decisión médica
Son los niveles de concentración a los cuales existe la mayor probabilidad de cometer un error diagnóstico.
12 g/dL 16 g/dL
Límites de Referencia para Hemoglobina
Estándares de ejecución Para cada concentración a un nivel de
decisión médica (Xc) se han formulado estándares de ejecución:
Error permitido (Ep)
La validación de los métodos determina el error de los métodos a un nivel de decisión médica y los resultados se comparan con el error permitido para cada método en particular
ERRORES PERMITIDOS RECOMENDADOS
ANALITO NIVEL DE DECISIÓN BARNET TONKS
ALBÚMINA 35 g/L 5 -
BICARBONATO 20 mmol/L 30 mmol/L
2 2
- -
BILIRRUBINA 10 mg/L 200 mg/L
4 30
2 60
CALCIO 85 mg/L 100 mg/L
6 5
4 5.5
CLORUROS 90 mmol/L 100 mmol/L
4 4
1.8 2.2
COLESTEROL 2500 mg/L 400 250
CREATININA 20 mg/L 3 2
GLOBULINAS 35 mg/L 5 5
GLUCOSA 500 mg/L 1200 mg/L
100 100
120 200
pH 7.35 7.45
0.008 0.012
- -
PCO2 35 mm Hg 50 mm/Hg
6 6
- -
PO2 80 mm/Hg 10 -
FÓSFORO 45 mg/L 4 4.5
POTASIO 3 mmol/L 6 mmol/L
0.5 0.5
0.26 0.59
PROTEÍNAS TOT. 70 g/L 6 4.9
SODIO 130 mmol/L 150 mmol/L
4 4
2.3 2.7
TRIGLICÉRIDOS 1600 mg/L 300 -
BUN 270 mg/L 40 27
ÁCIDO ÚRICO 60 mg/L 10 6
ENZIMAS NIVEL DE DECISIÓN
FOSFATASA ÁCIDA 20%
FOSFATASA ALCALINA 20%
AMILASA 20%
LACTATO DESHIDROGENASA 20%
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA 10%
ERRORES PERMITIDOS RECOMENDADOS
Hematología Clia `88
Prueba o Analito Error Permitido Identificación celular 90% o más de la identificación Cuenta Diferencial Valor Blanco ± 3SD basado el porcentaje de Leucocitos Cuenta de Eritrocitos Valor Blanco ± 6% Hematocrito Valor Blanco ± 6% Hemoglobina Valor Blanco ± 7% Cuenta de Leucocitos Valor Blanco ± 15% Cuenta de Plaquetas Valor Blanco ± 25% Fibrinógeno Valor Blanco ± 20% Tiempo Parcial de Tromboplastina Valor Blanco ± 15% Tiempo de Protrombina Valor Blanco ± 15%
ESPECIFICACIONES DE CALIDAD
En Abril de 1999 la IUPAC, la IFCC y la WHO, convocaron a la discución de las estrategias para determinar las especificaciones de calidad en los laboratorios clínicos.
El consenso fue publicado en : “Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation”
CATEGORIA ESTRATEGIA SUBCLASES
1 Valoracion del Efecto del Desempeño
Analitico sobre una Decision Clinica Especifica
Especificaciones de calidad en situaciones clinicas especificas
2 Valoracion del efecto del Desempeño
Analitico sobre una Decision Clinica General
A. Especificaciones Generales de Calidad basados en Variabilidad Biológica
B. Especificaciones Generales de Calidad basadas en opiniones medicas
3 Recomendaciones profesionales
A. Guias de Grupos de Expertos Nacionales o Internacionales
B. Guias de expertos individuales o Grupos Institucionales
4 Especificaciones de calidad
determinadas por Regulaciones o por Organizadores de EQAS
A. Especificaciones de calidad determinadas por Regulaciones
B. Especificaciones de calidad determinadas por organizadores de EQAS
5 Datos Publicados sobre el estado del arte
A. Datos Publicados de PT o EQAS
B. Datos de Metodologias Individuales Publicadas
Secuencia para la selección de un método
Revisión de la literatura
Definición de los Requerimientos -Aplicación -Metodológicas -Ejecución
Selección del Método
Validación de métodos Formulando un plan
Defina los requerimientos de calidad (Error permitido)
Seleccione los experimentos apropiados para revelar los tipos de error analítico
Recolecte los datos experimentales necesarios
Compare los errores experimentales con los errores permitidos
Juzque la aceptabilidad o rechazo
Tipos de errores Todas las
mediciones presentan un error Imprecisión Inexactitud
E. Sistemático constante
E. Sistemático proporcional
E.C.
E.A.
E.P.
Experimentos para estimar errores analíticos
VERIFICACION DE METODOS Debido a que los laboratorios buscan la
manera de asegurar la calidad al menor costo, ha surgido la pregunta de cuales son los estudios minimos necesarios para satisfacer los requerimientos regulatorios para verificar el desempeño establecido por los productores de reactivos y equipos de laboratorio.
VERIFICACION DE METODOS
CLINICAL LABORATORY STANDARDS INSTITUTE. EP15 STANDARD.
Es una guia que permite a los usuarios demostrar que pueden obtener el mismo desempeño en los métodos analíticos como ha sido establecido por los productores
OBJETIVOS DE LA VERIFICACION DE METODOS Desarrollar un protocolo que sea
bastante simple para ser aplicado a laboratorios con un amplio intervalo de sofisticación y recursos
Desarrollar un protocolo lo suficientemente riguroso para obtener conclusiones estadísticas válidas para los estudios de verificación
La guía EP15 puede ser usada cuando un método es inicialmente introducido al trabajo del laboratorio
También puede servir de base para verificar el desempeño de un método después de una acción correctiva en el método
CLSI EP15 Describe tres protocolos específicos
para: Verificación de la precisión Verificación de la veracidad (bias) usando
muestras de pacientes Verificación de la veracidad (bias) usando
materiales de referencia con valores asignados
EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VERIFICACION DE
METODOS REPETIBILIDAD. Precisión de medidas suscesivas del
mismo mesurando obtenida bajo las mismas condiciones de medida (anteriormente llamada precisión dentro de la corrida)
CONDICIONES DE REPETIBILIDAD. Condiciones en donde los resultados son obtenidos con el mismo método, el mismo material de prueba, en el mismo laboratorio y con el mismo operador en un intervalo de tiempo corto
EXPERIMENTOS EMPLEADOS EN LOS PROTOCOLOS DE VERIFICACION DE
METODOS PRECISION DENTRO DEL LABORATORIO. Precisión
en un tiempo definido, los operadores calibradores y los reactivos pueden variar dentro de las mismas instalaciones y usando el mismo equipo (anteriormente llamada precisión total)
VERACIDAD DE LAS MEDICIONES. Proximidad entre el promedio obtenido de un número infinito de valores repetidos y un valor de referencia aceptado. La medida de la veracidad es usualmente expresado en términos de bias.
PROTOCOLO DE PRECISION
Periodo de Familiarización Se recomienda emplear un protocolo de Control de
Calidad Los materiales de control deben tener valores
cercanos a los niveles de decisión médica y cercanos a los niveles especificados por el productor en donde realiza sus especificaciones de precisión
Si es posible, emplear los mismos materiales que el productor, o muy similares (matriz)
PROTOCOLO DE PRECISION Analizar una corrida por día con 3 muestras
replicadas a cada una de dos concentraciones por 5 días
Si existe algun problema y se tiene que rechazar una corrida (CC), descarte los datos y realice una corrida adicional
Incluya las muestras de control empleadas diariamente
Las muestras para los experimentos de veracidad pueden ser analizadas en las mismas corridas
Calibre el sistema de acuerdo a las especificaciones del productor (calibración única o multiples)
Ecuaciones para el cálculo de Precisión
€
sr =
(xdi − xd )2
i=1
n
∑d=1
D
∑D(n −1)
Desviación Estándar dentro de la corrida
€
sb2 =
(d=1
D
∑ xd − x)2
D−1
Varianza entre corridas
€
sI =n −1n
∗ sr2 + sb
2 Desviación Estándar dentro del laboratorio
Ecuaciones para el cálculo de Precisión
€
T =((n −1)∗ sr
2 + (n ∗ sb2))2
(n −1D)∗ sr
4 + (n2 ∗ (sb
2)2
D−1)
D = Numero total de días n = Numero de replicados por día
= Resultado del replicado i para el día d
= Promedio de todos los resultados para el día d
= Promedio de todos los resultados €
xdi
€
xd
€
x
VERIFICACION DEL DESEMPEÑO DE LA PRECISION
La guia EP15 recomienda que sea calculado un valor de verificación para proveer un limite superior para la precisión establecida por el productor. Este valor depende del numero de replicados (n), el numero de días (D), la varianza dentro de la corrida (sr
2) y la varianza entre las corridas (sb
2). El procedimiento calcula el parámetro T, el cual son los grados de libertad efectivos.
VALOR DE VERIFICACION
€
Valordeverificación = sestablecida ∗C1/2
T1/ 2
C es determinado a partir de una tabla De puntos de porcentaje seleccionados De una distribución chi-cuadrada al 5% de falsos rechazos
PROTOCOLO PARA DETERMINACION DE VERACIDAD
(con muestras de pacientes)
Muestras
Las diferencias se atribuyen al método reemplazado Esto es verdadero si el nuevo método es de mejor calidad que el método a se reemplazado
Nuevo Método
Método a ser reemplazado
PROTOCOLO RECOMENDADO Ensayar 20 muestras con concentraciones
que cubran el intervalo reportable del método Ensayar las muestras bajo las condiciones de
rutina del laboratorio Mida de 5 a 7 muestras al día en un periodo
de 3 a 4 días con los dos sistemas de medición, de preferencia de manera simultánea (4 h de diferencia máximo)
PROTOCOLO RECOMENDADO Evalúe las muestras en conjunto con un
sistema de CC para asegurar la operación estable de los sistemas de medición
Inspeccione los resultados e identifique resultados discrepantes
Calcule la diferencia entre los pares de resultados y grafique la diferencia contra el valor de comparación
PROTOCOLO RECOMENDADO Realizar un análisis estadístico
mediante una prueba t de “student” para datos pareados y determine la diferencia promedio entre los métodos
Calcule los limites de confidencia o verificación para comparar el bias observado con las especificaciones del productor.
PROTOCOLO PARA DETERMINACION DE VERACIDAD
(con materiales de referencia)
EP15 provee un segundo protocolo para verificar la veracidad de un método con el empleo de materiales de referencia con valores asignados
Los materiales deben ser cuidadosamente seleccionados
Materiales recomendados Materiales de referencia certificados. Disponibles en el
Instituto Nacioanal de Estándares y Tecnología US (NIST) Materiales de referencia con valores asignados por
programas de competencia de pruebas Materiales del productor con valores asignados Materiales de programas de evaluación externa de la
calidad Materiales de tercera opinión con valores asignados por
analisis en diferentes laboratorios
Estándares que preparados con concentraciones conocidas
RECOMENDACION La guia EP15 que sean seleccionados al
menos 2 materiales que representen concentraciones de niveles de decisión altos y bajos en el intervalo reportable del método
Los materiales deben prepararse de acuerdo a las direcciones del productor, analizando 2 replicados por corrida en 3 a 5 corridas
COMPARACION ENTRE VALIDACION Y VERIFICACION METODO VALIDACION VERIFICACION
LINEALIDAD si no
IMPRECISION
Dentro de la corrida si si
Entre corridas si si
INEXACTITUD (VERACIDAD)
Interferencia si no
Recobro si no
Sensibilidad si no
Comparación de métodos si si
Comparación con un material de referencia
no si
USO PRETENDIDO VALIDACION. Permite juzgar y aceptar
o no, un método con base a estándares de calidad definidos basados en requerimientos médicos
VERIFICACION. Permite juzgar y aceptar o no un método con base en las especificaciones de los productores de equipos y reactivos
GRACIAS