utilizacion de carbohidratos y acidos organicos
TRANSCRIPT
Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Microbiología
Utilización de carbohidratos y ácidos orgánicos.
Equipo 4
Metabolismo
Anabolismo Catabolismo
Rutas de obtención de energía
• Fosforilación a nivel sustrato
FERMENTACIÓN
• Fosforilación oxidativa
RESPIRACIÓN
• Fotofosforilación FOTOSÍNTESIS
Rutas Metabólicas de Carbohidratos.
Ruta de las pentosas fosfato
FERMENTACIÓN
producción de ácidos,
gases, alcohol.
Proceso anaerobio
Los compuestos orgánicos
actúan como aceptores o
donadores de electrones
Existen diferentes tipos
de fermentaciones
Tipos de Fermentación
Car
bo
hid
rato
s Moléculas compuestas por carbono y múltiples grupos OH unidos mediante enlaces
glucosidicos
1. Monosacárido 2.Disacarido
3. Oligosacárido 4. Polisacárido
Enzima dependiendo el carbohidrato a
catabolizar
OBJETIVO
Realizar pruebas
bioquímicas
• 1.Prueba de Durham
• 2. Prueba de Rojo de Metilo
• 3. Prueba de Voges-Proskauer
• 4. Prueba de Kligler
Evidenciar actividades metabólicas
• Klebsiella pneumoniae -Escherichia coli -Bacillus subtilis -Salmonella typhi -Shigella flexneri -Staphylococcus aureus -Pseudomonas aeruginosa -Proteus vulgaris
MICROORGANISMOS
•Klebsiella pneumoniae.
•anaerobio
• facultativo
•Escherichia coli.
•Anaerobio facultavo
• Bacillus subtilis
• Aerobio estricto
• Salmonella typhi
•Anaerobio facultativo
• Shigella flexneri
• Anaerobio facultativo
• Staphylococcus aureus
• Anaerobios facultativos
• Pseudomonas aeruginosa
• Aerobio estricto
• Proteus vulgaris
• Anaerobio facultativo
Pruebas Bioquímicas.
Determinan la actividad metabólica de los microorganismos
Son empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos.
TUBOS DURHAM
CALDO BASE
• Sacarosa
• Glucosa
• manitol
• Fundamento
Rojo de fenol Campana de Durham pH final: 7. 4
Peptona de caseína Cloruro de sodio
Los compuestos de carbohidratos requieren ser degradados en monómeros y transportarlos a la célula para posteriormente en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía fermentativa. La fermentación de un compuesto orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formación de gas capturado en la campana de fermentación.
Reacciones
• Fermentación de la glucosa
• Fermentación de la sacarosa
• Rojo de Fenol
LECTURA POSITIVA / NEGATIVA Las bacterias anaerobias estrictas o anaeróbias facultativas a menudo fermentan carbohidratos a ácidos orgánicos y gas (H2 o CO2). Se usa para para diferenciar especies sobre todo bacterias entéricas.
testigo
RESULTADOS Acido Orgánico (+) Producción de gas (+) Manitol gas (-) Salmonella typhi
Acido Orgánico (-) Producción de gas (-) Pseudomonas aeruginosa
RESULTADOS TEÓRICOS
PRUEBA Durham
Klebsiella pneumo-niae
Esche-richia coli
Bacillus subtilis
Salmo-nella typhi
Shigella flexneri
Staphylo-
coccus aureus
Pseudo-monas aerugi-nosa
Proteus vulgaris
Gluco-sa
Ácido: (+) Gas: (+)
(+) (+)
(+) (-)
(+) (+)
(+) (-)
(+) (-)
(-) (-)
(+) (+)
Saca-rosa
Ácido: (+) Gas: (+)
(+) (+)
(+) (-)
(+) (+)
(+) (-)
(+) (-)
(-) (-)
(+) (-)
Mani-tol
Ácido: (+) Gas: (+)
(+) (+)
(+) (-)
(+) (-)
(+) (-)
(+) (-)
(-) (-)
(+) (-)
Anaerobio facultativo
Anae-robio facul-tativo
Aerobio estricto
Anaero-bio facultat-ivo
Anaero-bio faculta-tivo
Anaero-bio facultativo
Aerobio estricto
Anae-robio faculta-tivo
RESULTADOS OBTENIDOS
Fermentación de Carbohidratos en medio (KIA) Kligler
INDICADOR: ROJO DE FENOL
FUNDAMENTO - El medio contiene dos fuentes de carbono
1) Lactosa 1.0% 2) Glucosa 0.1%
• Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol el cual vira al color amarillo en medio ácido.
-Si utiliza la glucosa generara gas (CO2 o H2) ya que es un producto de la fermentación.
• Además si no utiliza la lactosa utilizara las peptonas liberando aminoácidos con grupo sulfhídrilo (cisteína y metionina) que reaccionaran con el sulfato ferroso del medio para formar un precipitado negro.
INTERPRETACIÓN
Resultados Teóricos
RESULTADOS
• Salmonella typhi
• Glucosa (+)
• Lactosa (-)
• Gas (-)
• H2S (+)
• Anaerobio facultativo
Pseudomo-nas aeruginosa Glucosa (-) Lactosa (-) Gas(-) H2S (-) Aerobio estricto
RESULTADOS DEL LABORATORIO
RESULTADOS
Klebsiella pneumo-niae
Esche-richia coli
Bacillus subtilis
Salmo-nella typhi
Shigella flexneri
Staphylo-
coccus aureus
Pseudo-monas aerugi-nosa
Proteus vulgaris
Glucosa : (+) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+)
Lactosa: (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
Gas: (+) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
H2S : (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (+)
Anaerobio facultativo
Anae-robio facul-tativo
Aerobio estricto
Anaero-bio facultat-ivo
Anaero-bio faculta-tivo
Anaero-bio facultativo
Aerobio estricto
Anae-robio faculta-tivo
CALDO GLUCOSADO RM/VP
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas.
-Según la vía utilizada, se originarán productos finales:
Vía ácido mixta ÁCIDOS (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico)
Rojo de metilo, prueba RM
Vía 2-3 butanodiol NEUTROS (acetoína).
alfa naftol y KOH
PRUEBA RM vía ácido mixta
La producción de ácidos orgánicos baja el pH a menos de 4.3 y el rojo de metilo vira a rojo
PRUEBA POSITIVA PRUEVA NEGATIVA SIN VIRE
Salmonella typhi (+)
Pseudomonas aeruginosa (-)
PRUEBA VP • Detecta la fermentación butanodiólica de la glucosa.
La adición de KOH-creatina y alfa-naftol revela la presencia de acetoína, un precursor en la sintesis de 2,3-butanodiol.
RESULTADOS RM/VP
Klebsiella pneumo-niae
Esche-richia coli
Bacillus subtilis
Salmo-nella typhi
Shigella flexneri
Staphylo-
coccus aureus
Pseudo-monas aerugi-nosa
Proteus vulgaris
RM: (-) (+) (-) (+) (+) (-) (-) (-)
VP : (+) (-) (+) (-) (+) (-) (-) (+)
Resultados teoircos
RM (-) (+) (-) (+) (+) (-) (-) (+)
Anaerobio facultativo
Anae-robio facul-tativo
Anaero-bio faculta-tivo
Anaero-bio facultat-ivo
Anaero-bio faculta-tivo
Anaero-bio facultativo
Aerobio estricto
Anae-robio faculta-tivo
UTILIZACIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS AGAR CITRATO DE SIMMONS
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato
como única fuente de carbono.
usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de
alcalinidad. AZUL DE BROMOTIMOL
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico.
RESULTADOS
Salmonella typhi (+)
Pseudomonas aeruginosa (+)
Proteus vulgaris (+)
Shigella flexneri (-)
AZUL DE BROMOTIMOL
CA
LDO
MA
LON
ATO
Si un microorganismo es capaz de utilizar el malonato de sodio como única fuente de
carbono, al mismo tiempo que utiliza el sulfato de amonio como fuente de nitrógeno
se produce un aumento de la alcalinidad que se debe a la formación de Hidróxido de sodio
(NaOH).
La formación de productos alcalinos que se evidencian por un viraje de verde a azul del indicador del medio, azul de Bromotimol.
RESULTADOS 1)Salmonella typhi (-)
2)Pseudomonas aeruginosa (+)
3) Testigo
RESULTADOS: Klebsiella pneumo-niae
Esche-richia coli
Bacillus subtilis
Salmo-nella typhi
Shigella flexneri
Staphylo-
coccus aureus
Pseudo-monas aerugi-nosa
Proteus vulgaris
citrato: (+) (-) (-) (+) (-) (-) (+) (+)
malonato : (+)
(-) (-) (-) (-) (-) (+) (-)
Bibliografía