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UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
“Compatibilidad de Pochonia chlamydosporia con los pesticidas oxamilo
“Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”,
azufre más sulfato de cobre pentahidratado “Sulfocalcio R” en
condiciones de laboratorio y de campo”
TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO DE
BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO
AUTOR: Br. JESSICA ELIZABETH BACILIO HERNÁNDEZ
TRUJILLO – PERÚ
2013
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITUO PTOFESIONAL DE
BIOLÓGO – MICROBIÓLOGO
Dr. Orlando Velásquez Benites
RECTOR
Dra. Vilma Julia Méndez Gil
VICE-RECTORA ACADÉMICA
Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori
VICE-RECTORA ADMINISTRATIVA
Dr. Santiago Uceda Duclós
SECRETARIO GENERAL
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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE
BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO
Dr. Hermes Mario Escalante Añorga
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Dr. César Agusto Jara Campos
SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Ms.C. Pedro Alvarado Salinas
DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
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PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:
En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias de la escuela
académico profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias
Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y
claro discernimiento el informe de tesis titulado: “Compatibilidad de Pochonia
chlamydosporia con los pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”,
clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre pentahidratado
“Sulfocalcio R” en condiciones de laboratorio y de campo”, realizado en el
laboratorio de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología en la
Universidad Nacional de Trujillo (Av. Juan Pablo II s/n) – Trujillo – La Libertad y
en la empresa agroindustrial Camposol de la provincia de Virú – La Libertad.
De este modo cumplo con presentar, uno de los requisitos exigidos para optar el
título de Biólogo- Microbiólogo.
Trujillo, Mayo del 2013
Br. Jessica Elizabeth Bacilio Hernández
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DEL ASESOR
El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente
tesis titulada: “Compatibilidad de Pochonia chlamydosporia con los pesticidas
oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”,
azufre más sulfato de cobre pentahidratado “Sulfocalcio R” en condiciones de
laboratorio y de campo”.
CERTIFICA:
Que esta investigación ha sido ejecutada de conformidad con su
correspondiente proyecto y con las debidas orientaciones brindadas a la tesista.
Respecto al informe, éste ha sido revisado y acoge las observaciones y
sugerencias pertinentes, por lo que autorizo a la Bachiller JESSICA
ELIZABETH BACILIO HERNÁNDEZ, continuar con los procedimientos según
sus fines.
Ms. C. Mlgo. Juan Héctor Wilson Krugg
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MIEMBROS DEL JURADO
____________________________
Ms. C. Gerardo Alayo Espinoza
PRESIDENTE
____________________________
Ms. C. Eduardo José Muñoz Ganoza
SECRETARIO
______________________________
Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg
VOCAL
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APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran
que el presente informe de tesis, ha cumplido con los requisitos formales y
fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.
____________________________
Ms. C. Gerardo Alayo Espinoza
PRESIDENTE
____________________________
Dr. Eduardo José Muñoz Ganoza
SECRETARIO
______________________________
Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg
VOCAL
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DEDICATORIA
A Dios por guiarme, y permitirme concluir un objetivo más en mi vida.
A mis padres, Julia y Miguel, por haberme ayudado a crecer como persona,
apoyándome con su cariño y paciencia, enseñándome que con perseverancia y
esfuerzo se pueden alcanzar las metas trazadas. Con mucho amor y cariño les dedico
todo mi dedicación y esfuerzo puesto en la realización de esta tesis.
A mi hermano, que ha sabido comprenderme en los momentos más difíciles y
siempre ha tenido una palabra de aliento para seguir adelante y solucionar mis
problemas.
A mi familia en general y a todas aquellas personas que con sus consejos han logrado
que tenga una mejor actitud ante las dificultades que se me han presentado.
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AGRADECIMIENTOS
Mi profundo agradecimiento a mi asesor Mlgo. Juan Héctor Wilson Krugg por
el tiempo brindado en la elaboración y ejecución de este trabajo,
permitiéndome crecer y desarrollarme como profesional durante el trabajo de
investigación. Por su amistad y consejos que me permitieron superar
dificultades.
A la empresa Camposol de Virú – La Libertad, por el tiempo y apoyo
brindado para la ejecución del presente trabajo de investigación.
A mis profesores, por los conocimientos adquiridos y el apoyo brindado a lo largo de
los años de estudios, los mismos que pondré en práctica en el desempeño de las
labores que tenga que realizar en mi vida profesional.
A mis amigos, con los que he compartido agradables momentos durante mi estancia
en la universidad.
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RESUMEN
Se determinó la compatibilidad entre Pochonia chlamydosporia con oxamilo al 0.5%
y 2.25%, propineb al 0.2% y 0.25%, clorpiriphos al 0.1% y 0.25%, y sulfato de cobre
pentahidratado al 0.5% y 1.5%, en condiciones de laboratorio y de campo. A nivel de
laboratorio se evaluó el porcentaje de germinación y el crecimiento de P. chlamydosporia
frente a cada concentración de pesticida; para la germinación se inoculó 600 conidias/ml en
frascos de penicilina conteniendo cada uno las concentraciones respectivas de pesticidas,
incubándose a 25 °C durante 18 horas, al término del cual se hizo recuento al microscopio de
las conidias germinadas; para determinar el efecto sobre el crecimiento se sembró al hongo
por puntura en la parte central de placas de Petri que contenían Agar Papa Sacarosa más cada
concentración de los químicos a evaluar, midiéndose diariamente el radio de crecimiento
micelial durante doce días. A nivel de campo, se sembraron plantas Gomphocarpus fruticosus
en macetas, teniendo 15 ejemplares para cada tratamiento, cuando la planta alcanzó una
altura aproximada de 6 a 7 cm, se realizaron inoculaciones de los pesticidas y del hongo, en
forma alternada y se evaluó haciendo un recuento inicial de la población de P.
chlamydosporia y dos evaluaciones más cada 15 días. Finamente se realizó una evaluación
cuantitativa del número de nódulos de cada una de las plantas de los tratamientos,
encontrándose que a nivel de campo la población de P. chlamydosporia disminuye por la
presencia de los pesticidas. Se concluye que en condiciones de laboratorio no existe
compatibilidad de los pesticidas con el hongo biocontrolador, sin embargo, en condiciones de
campo, se obtuvo incompatibilidad con oxamilo y azufre más sulfato de cobre pentahidratado
y compatibilidad con propineb y clorpiriphos.
Palabras clave: Pochonia chlamydosporia, compatibilidad, oxamilo, propineb, clorpiriphos,
azufre más sulfato de cobre pentahidratado, control biológico
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ÍNDICE
Pág.
Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo………………….. ii
Presentación………………………………………………………….. iv
Del Asesor …………………………………………………………... v
Miembros Del Jurado ……………………………………………….. vi
Aprobación …………………………………………………………... vii
Dedicatoria …………………………………………………………… viii
Agradecimiento ……………………………………………………… ix
Resumen ……………………………………………………………... x
Índice…………………………………………………………………. xi
I. INTRODUCCCIÓN………………………………………………… 1
II. MATERIAL Y MÉTODOS ……………………………………….. 9
1. Material de estudio…………………………………………….. 9
2. Procedimiento………………………………………………….. 9
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2.1. Evaluación de la compatibilidad de P. chlamydosporia
con Oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más
sulfato de cobre pentahidratado en condiciones de
laboratorio……………………………………………… 9
2.1.1. Reactivación del cultivo de P. chlamydosporia….. 9
2.1.2. Evaluación del efecto de oxamilo, propineb,
clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado sobre la germinación de P.
chlamydosporia…………………………………….… 10
2.1.2.1. Estandarización del inóculo…………………. 10
2.1.2.2. Preparación de las soluciones con pesticidas.. 10
2.1.2.3. Enfrentamiento de las conidias de P.
chlamydosporia con las diferentes
concentraciones de cada pesticida …………… 11
2.1.2.2. Lectura………………………………………….. 11
2.1.3. Evaluación del efecto de oxamilo, propineb,
clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado sobre el crecimiento de P.
chlamydosporia………………………………………….. 12
2.1.3.1. Preparación del medio envenenado con las
diferentes concentraciones de los pesticidas… 12
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2.1.3.2. Siembra e incubación de Pochonia
chlamydosporia…………….…………………… 12
2.1.3.3. Lectura……………………………………….. 13
2.2. Evaluación de la compatibilidad de P. chlamydosporia
con Oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más
sulfato de cobre pentahidratado en condiciones de
campo (vivero experimental)………………………….. 13
2.2.2. Propagación en masa de P. chlamydosporia. en
sustrato de arroz ……………………………… 13
2.2.2.1. Preparación e inoculación del sustrato de
arroz con el medio líquido………………… 14
2.2.3. Preparación de macetas en el vivero experimental.. 14
2.2.4. Primera aplicación de pesticidas químicos………. 16
2.2.5. Primera aplicación de P. chlamydosporia y
evaluación inicial……………………………….. 16
2.2.6. Segunda aplicación de pesticidas químicos ……. 17
2.2.7. Evaluación y segunda aplicación de Pochonia
chlamydosporia …………………………… 17
2.2.8. Evaluación final………………………….…….. 17
2.2.9. Lectura y análisis de datos …………………….. 18
2.2.10. Métodos estadísticos utilizados……………….. 18
III. RESULTADOS………………………………………………….. 19
IV. DISCUSIÓN……………………………………………………….. 28
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V. CONCLUSIÓNES…………………………………………....……… 36
VI. RECOMENDACIÓN…………………………………...…………… 37
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………… 38
ANEXOS……………………………………………………..………… 44
Anexo 1. Pochonia chlamydosporia a) Cultivo puro y b) Observación
microscópica (40X)…………………………………………… 45
Anexo 02. Programa de aplicaciones de los pesticidas químicos y de Pochonia
chlamydosporia en la evaluación de la compatibilidad en
campo………………………………………………………….. 46
Anexo 2. Tratamientos en campo ensayados con los pesticidas oxamilo,
propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado y con Pochonia chlamydosporia………………. 47
Anexo 3.Tamaño promedio de la raíz de Gomphocarpus fruticosus
“planta globo” parasitado con nematodos frente a P.
chlamydosporia y a las diferentes concentraciones (%) de los
pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato
de cobre pentahidratado a los 30 días de evaluación en campo. 48
Anexo 4. Raíces de Gomphocarpus fruticosus parasitado con nematodos
frente a P. chlamydosporia y a las diferentes concentraciones
(%) de los pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre
más sulfato de cobre pentahidratado a los 30 días de
evaluación en campo………………………………………… 49
Anexo 5. Peso promedio de la raíz de Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” parasitado con nematodos frente a P. chlamydosporia y
a las diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo,
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propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado a los 30 días de evaluación en campo………. 50
Anexo 6. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y
número de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” en el ensayo realizado con oxamilo al 0.5% y al 2.25% 51
Anexo 7. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y
número de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” en el ensayo realizado con propineb al 0.2% y al 0.25% 52
Anexo 8. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y
número de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” en el ensayo realizado con clorpiriphos al 0.1% y al
0.25%......................................................................... 53
Anexo 9. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y
número de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” en el ensayo realizado con azufre más sulfato de cobre
pentahidratado al 0.5% y al 1.5%........................................ 54
Anexo 10.Tratamientos de la evaluación de la compatibilidad de
Pochonia chlamydosporia frente s las diferentes
concentraciones de los pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb
“Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más
sulfato de cobre peentahidratado “Sulfocalcio R” en
condiciones de campo………………………………………… 55
Anexo 11. Estadística del número de nódulos de nematodos en plantas de
Gomphocarpus fruticosus con aplicaciones de Pochonia
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chlamydosporia frente s las diferentes concentraciones de los
pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”,
clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado “Sulfocalcio R” en condiciones de campo….. 56
Anexo 12.Estadística del tamaño de la raíz (cm) en plantas de
Gomphocarpus fruticosus con aplicaciones de Pochonia
chlamydosporia frente s las diferentes concentraciones de los
pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”,
clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado “Sulfocalcio R” en condiciones de campo….. 57
Anexo 13.Estadística del peso de la raíz (g) de plantas de Gomphocarpus
fruticosus con aplicaciones de Pochonia chlamydosporia frente
s las diferentes concentraciones de los pesticidas oxamilo
“Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos
48 CE”, azufre más sulfato de cobre pentahidratado
“Sulfocalcio R” en condiciones de campo….. 58
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I. INTRODUCCIÓN
En el Perú, la agricultura es una de las actividades más productivas y
tiene un gran valor social y económico que se viene incrementando a través de
los años. Sin embargo, diferentes plagas se encargan de disminuir la
producción, devastando los cultivos, por lo que el hombre ha venido
desarrollando paulatinamente estrategias de control. Los métodos
tradicionales usados para proteger los cultivos de enfermedades se han
basado mayormente en el control químico, que es la represión de sus
poblaciones o la prevención de su desarrollo mediante el uso de substancias
químicas, recibiendo estos compuestos el nombre genérico de pesticidas o
plaguicidas. [1]
El uso y abuso de pesticidas ha originado profundas modificaciones
biológicas. Esto se ha adjudicado a la toxicidad y/o amplio espectro de estos
productos lo que ha contribuido a una disminución de la biodiversidad y por
tanto a una pobre regulación de las poblaciones macro y microbianas.
Además, el interés creciente sobre la salud humana, ha conllevado a fuertes
restricciones sobre su uso[2]
. Los pesticidas y sus metabolitos pueden ser
encontrados en cualquier lugar: en agua fresca, suelo, agua subterránea y
llegar a los océanos; y, en muchos casos las concentraciones que se aplican
exceden los límites establecidos, acrecentando los efectos que producen. Se ha
encontrado que algunos alteran el sistema endocrino y otros son
carcinogénicos. Muchos de los residuos de los pesticidas se han encontrado
acumulados en humanos y en cadenas alimenticias biológicas. [3]
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Los plaguicidas comúnmente usados por los agricultores pertenecen al
grupo de los organofosforados, sin embargo existen remanentes de plaguicidas
que se comercializan bajo denominaciones que corresponden a los
contaminantes orgánicos persistentes (COP), plaguicidas del grupo de los
organoclorados, prohibidos desde el año 1991 para uso agrícola, que se
caracterizan por su alta persistencia ambiental y graves efectos a la salud. [3]
Actualmente, el control químico de nemátodos en los nódulos de las
raíces está basado principalmente en el uso de fumigantes del suelo, como
nematicidas organofosforados y carbamatos, reportándose como ingredientes
activos de los insecticidas carbámicos al aldicarb, carbarilo, carbofurán,
metomilo, oxamilo, pirimicarb, propoxur y tiodicarb. El oxamilo
(comercialmente llamado Vydate), se presenta como un concentrado líquido
soluble (24% de ingrediente activo). Este compuesto carbámico es insecticida,
acaricida y nematicida que se aplica antes, durante y después de la cosecha
sobre una gran diversidad de cultivos [2]
. Es un derivado carabámico, actúa por
contacto e ingestión atravesando la cutícula del insecto penetrando al interior
del cuerpo hasta alcanzar el sistema nervioso. Sobre los nematodos, la
actividad biológica se manifiesta por acción sistémica y de contacto. Afecta a
insectos como Bucculatrix thurberiella “gusano perforador de la hoja”,
Dysdercus peruvianus “arrebiatado”, Euchistus sp. “chinche escudo”,
Liriomyza huidobrensis “mosquita del brote” y nematodos como Meloidogyne
sp., Globodera sp., Heterodera pallida, Naccobus sp., Ditylenchus dipsaci y
Tylenchulus semipenetrans. [4]
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Los ditiocarbamatos (DTCs), son ampliamente usados como
fungicidas en frutales, hortalizas y plantas ornamentales, debido a que
muestran baja toxicidad a los humanos y cultivos y presentan un amplio
espectro de enfermedades en plantas. Los DTCs también son usados en la
vulcanización de aceleradores y antioxidantes en la industria del cuero[5]
. Los
DTCs se clasifican en los dimetilditiocarbamatos (DMDC) que agrupa al
ziram, thiram y ferbam, los etilenbisditiocarbamatos (EBDC) donde
encontramos al maneb, zineb y mancozeb y, los propilenbisditiocarbamatos
(PBDC) donde se encuentra el propineb [5]
. Entre estos, el maneb, zineb,
ziram, mancozeb y propineb son un grupo de fungicidas ditiocarbamatos
organometálicos., que han sido reportados como carcinogénicos, teratogénicos
y mutagénicos en animales experimentales. [6]
El propineb es un fungicida orgánico de síntesis caracterizado por una
buena actividad inicial y de excelente acción residual en importantes
criptogámicas de los cultivos agrícolas. Es activo contra diversas
enfermedades como Peronospora de la vid, tomate, naranja, papa, zapallo,
melón y otros cultivos hortícolas. Es un fungicida de aspersión contra
Alternaria tenuis, Cercospora capsici, Cercospora fabae, Phytopthora
infestans, Pseudoperonospora cubensis, Alternaria spp., Botrytis cinérea,
Puccinia asparagi, Helminthosporium orizae. [4]
Clorpiriphos es un insecticida organofosforado que actúa por contacto,
ingestión y como fumigante. Posee también acción de profundidad o
translaminar pero no se moviliza por su baja solubilidad, cuya persistencia
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ambiental varía dependiendo del tipo de suelo y de las condiciones
medioambientales. La baja temperatura ambiental y los bajos valores de pH de
los suelos retardan el proceso de transformación y degradación de este
insecticida, favoreciendo su biodisponibilidad. Su vida media, bajo
metabolismo aeróbico en el suelo, está en rango de 11 a 180 días con
promedio de 28.9 días. [7]
Posee una marcada acción de profundidad siendo
activo contra insectos minadores y áfidos, larvas de insectos masticadores,
cochinillas, barrenadores. [4]
[8]
Otro químico utilizado para el control de agentes plaga es el sulfato de
cobre pentahidratado, el cual es un producto químico altamente puro (98%),
de color azul, que cuando es agregado en el suelo escasamente alcanza la ley
mínima requerida en cobre, pero los contaminantes Fe+++
y Cl- son altos, lo
que se agravará conforme se recirculen las soluciones, deteriorando
progresivamente la calidad del producto[7]
. También es muy tóxico para los
organismos acuáticos y puede provocar a largo plazo efectos negativos en el
medio ambiente acuático.
El sulfato de cobre es un fungicida preventivo (no curativo) usado para
controlar las enfermedades fúngicas en frutas, verduras, nueces y cultivos de
campo. Algunas de las enfermedades que son controladas por este fungicida
incluyen el moho, manchas foliares, plagas y la sarna del manzano. Se utiliza
en combinación con cal y agua como un fungicida protector, referido como
mezcla Burdeos, para aplicación foliar y tratamiento de semillas. También se
utiliza como herbicida en el riego y los sistemas municipales de tratamiento de
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aguas, y como molusquicida, un material utilizado para repeler y matar a las
babosas y los caracoles. Sulfato de cobre es una sal inorgánica de origen
natural y el cobre es un elemento traza esencial en la nutrición vegetal y
animal. Está disponible en las siguientes formulaciones: polvos, polvos
humectables, concentrados fluidos. El azufre es un fungicida utilizado en
varias formulaciones, de acción rápida sobre hongos de desarrollo externo.
Actúa frente a Erysiphe malachrae, E. polygoni, E. cichoracearum,
Podosphaera leucotricha, Uncinula necátor. Además tiene acción repelente
contra ciertos insectos como Panonychus citri “arañita roja”. [4]
[9]
Para reducir o eliminar el uso de pesticidas sintéticos en la agricultura,
se han desarrollado nuevas herramientas de control como es el uso de
biocontroladores (BCAs) para el control de una enfermedad o, integrando a
esto biocontroladores con reducidas dosis de químico en el control de
patógenos de vegetales, a fin de lograr un mínimo impacto de los químicos en
el medio ambiente [10] [11]
. Para esto se ha implementado estrategias más
saludables insertados en los sistemas de producción orgánica y sistemas de
Manejo Integrado de Plagas (IMP) donde el uso del control biológico, con los
bioplaguicidas microbianos incluidos, viene a ser una solución viable. [1]
De esta manera, el control biológico se convierte en una alternativa
ambientalmente segura para reducir el uso de nematicidas químicos en el
Manejo Integrado de Plagas, dentro del cual se han evaluado varios agentes de
control biológico como los hongos Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson,
Trichoderma spp., Arthrobotrys spp., Pochonia chlamydosporia; las bacterias
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Pasteuria penetrans (Thome) Sayre y Starr, Tsukamurella paurometabola
cepa C-924 y Bacillus thurigiensis Berliner cepa LBT-2 [10]
, entre otros, los
cuales han logrado disminuir las infestaciones de Meloidogyne spp. en
cultivos susceptibles. [11]
La rizósfera es una zona importante para la actividad de los
fitonemátodos, y por tanto para sus antagonistas, entre los que se incluyen a
hongos nematófagos como P. chlamydosporia (Goddard) Zare y Gams, que es
un parásito facultativo de huevos de nematodos formadores de agallas y de
quistes, tiene la capacidad de desarrollarse saprofíticamente en el suelo y
colonizar las raíces de las plantas sin causarle lesiones, ni afectar su
crecimiento [11] [12]
.
Un prerrequisito para el éxito de P. chlamydosporia como agente de
control biológico (ACB) es precisamente su capacidad de colonización de las
raíces de las plantas hospedantes. [13]
El hongo coloniza la superficie e invade
las masas de huevos que sobresalen al exterior. La destrucción de los huevos y
el consiguiente control de las poblaciones de nematodos dependen de dicha
invasión. [14] [15]
Actualmente para el control de plagas se está implementando un
programa de manejo integrado de plagas (MIP), qué plantea el uso racional e
integrado de métodos culturales, biológicos y químicos, para el control de
insectos, ácaros y otras plagas. En el MIP el control biológico es primordial,
pero se puede justificar o “integrar” el uso adecuado de productos químicos
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solo cuando la densidad de la plaga es de tal magnitud que sobrepasa el
umbral de daño económico y a la vez, la presencia de enemigos naturales es
escasa. [16]
La compatibilidad de los agentes controladores biológicos con los
pesticidas es una de las principales preocupaciones de los programas del
manejo integrado de plagas (MIP). Las evaluaciones más comunes de
compatibilidad consiste en simples comparaciones de toxicidad aguda entre
agentes peste y agentes biocontroladores. Un enfoque más sofisticado,
desarrollado por la Organización Internacional de Control Biológico (IOBC),
está basada en la jerarquía de los valores umbrales de mortalidad y efectos
subletales que usaronn usados para determinar la compatibilidad de pesticidas
y controladores biológicos. [17]
Se han realizado trabajos sobre compatibilidad con el hongo
biocontrolador Beauveria bassiana in-vitro, encontrándose que no existe
compatibilidad con los pesticidas flufenoxuron, teflubenzuron + phuzalon,
amitraz y endosulfano y si es compatible con imidaclopride [18]
. Asimismo
Oliveira y Neves, al trabajar con el mismo hongo encontró compatbilidad con
abamectina y acrinatrina [19]
. También se han realizado trabajos de
compatibilidad con Metarhizium anisoplae y Paecelomyces lilacinus,
enfrentándolos con insecticidas [20]
. A pesar de que muchos de los trabajos son
realizados a nivel de laboratorio utilizando a diferentes biocontroladores y
pesticidas que son utilizados para controlar a la misma plaga [21] [22] [23] [24]
,
también hay pocos trabajos realizados a nivel de campo, como el realizado por
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Mochi, Monteiro y Barbosa que trabajaron con M. anisoplae e hicieron
enfrentamientos con mancozeb, tebuconazol, chlorothalonyl, abamectina,
óxido de fenbutatina, glifosato, trifluralina, ametrin, triclorfón encontrándose
compatibilidad, ya que debido a factores propios del suelo, los pesticidas no
afectan al biocontrolador. [25] [26]
Sin embargo son pocos los hongos biocontroladores que vienen siendo
evaluados. Ante ello, nace la necesidad de determinar la compatibilidad de
Pochonia chlamydosporia con los pesticidas Oxamilo “Vydate”, propineb
“Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado “Sulfocalcio R” en condiciones de laboratorio y de campo, de
manera que al combinar dos métodos de control distintos, logren erradicar las
plagas o al menos detenerlas, sin interferir en sus mecanismos de acción entre
sí. Para lograrlo es fundamental conocer si los pesticidas no afecten la
germinación y crecimiento de P. chlamydosporia, de manera que se demuestre
que no hay interferencia entre los métodos a utilizar, teniendo en cuenta que
uno es un producto biológico que podría verse afectado por otro de naturaleza
química; aun cuando, el producto químico no ha sido diseñado para afectar al
hongo biocontrolador. Además, que las condiciones de laboratorio y de campo
son diferentes[2]
, de manera que al aplicar el hongo biocontrolador y los
pesticidas al suelo, los resultados pueden ser diferentes a los encontrados en
laboratorio.
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MATERIAL Y MÉTODO
1. Material de estudio
Cultivo puro de Pochonia chlamydosporia proveniente de la
empresa agroindustrial Camposol, Distrito de Virú, La Libertad.
5 Kg de suelo de cultivo agrícola libre de fitopatógenos
proveniente de los campos de cultivo del Fundo Mar Verde de la
Empresa Camposol, Distrito de Virú, La Libertad.
225 Plántulas de Gomphocarpus fruticosus “planta globo” libres de
fitopatógenos, provenientes del Fundo Mar Verde de la Empresa
Camposol, Distrito de Virú, La Libertad.
1 Kg de suelo agrícola infestado con Meloidogyne sp.
Pesticidas: Oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”,
clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado “Sulfocalcio R”
2. Procedimiento
2.1. Evaluación de la compatibilidad de P. chlamydosporia con
Oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado en condiciones de laboratorio
2.1.1. Reactivación del cultivo de P. chlamydosporia
Se realizó sembrando por puntura a partir de un cultivo
puro de P.chlamydosporia en tres frascos planos de vidrio,
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que contenían agar Papa Sacarosa los cuales se incubaron a
25°C durante siete días.
2.1.2. Evaluación del efecto de oxamilo, propineb, clorpiriphos y
azufre más sulfato de cobre pentahidratado sobre la
germinación de P. chlamydosporia
2.1.2.1. Estandarización del inóculo
Se agrego 10 mL de una solución de tween 80 al
0,1% a cada frasco plano con Agar Sabouraud que
contenía a P. chlamydosporia. Luego se agitó
moderadamente con el fin de liberar las conidias del
hongo y la suspensión resultante se colocó en un matraz
estéril, donde se determinó la concentración de esporas
mediante el recuento en Cámara de Neubauer. Luego,
esta suspensión se diluyó hasta obtener una
concentración de 68 x 102 conidias/mL (doble
concentrado), mediante un recuento en cámara de
Neubauer.
2.1.2.2. Preparación de las soluciones con pesticidas
A partir de las muestras originales de cada pesticida, se
realizaron diluciones en agua destilada estéril, hasta
obtener 10 mL de las concentraciones dobles
concentradas de 1 y 4.5 % de oxamilo, 0.4 y 0.5 % de
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propineb, 0.2 y 0.5 % de clorpirifos y, 1 y 3 % de
sulfato de cobre pentahidratado respectivamente.
2.1.2.3. Enfrentamiento de las conidias de P. chlamydosporia
con las diferentes concentraciones de cada pesticida
En frascos estériles de 10 mL de capacidad se
agregó 1 mL del inóculo de 68 x 102 conid/mL y 1 mL
de cada concentración doble concentrada de cada
pesticida, de manera que las concentraciones finales
sean 0.5 y 2.25 % de oxamilo, 0.2 y 0.25 % de
propineb, 0.1 y 0.25 % de clorpirifos y, 0.5 y 1.5 % de
sulfato de cobre pentahidratado respectivamente. Como
control se utilizó 1 mL de agua destilada y 1 mL del
inóculo estandarizado.
Este proceso se realizó por triplicado para cada
concentración y todos los frascos fueron incubados a
temperatura ambiente durante 24 horas
.
2.1.2.2. Lectura
Transcurrido el tiempo de incubación se procedió al
conteo de conidias germinadas en cada concentración de
pesticidas, realizándose dos lecturas por cada frasco
inoculado.
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2.1.3. Evaluación del efecto de oxamilo, propineb, clorpiriphos y
azufre más sulfato de cobre pentahidratado sobre el
crecimiento de P. chlamydosporia
2.1.3.1. Preparación del medio envenenado con las
diferentes concentraciones de los pesticidas
Se preparó agar Sabouraud-Dextrosa al 4%(Merk)
en nueve matraces conteniendo 60 mL de medio cada
uno, los que se esterilizaron en autoclave y luego se
dejaron enfriar hasta una temperatura aproximada de
50ºC. Estando aún fundido el medio, a cada uno de ocho
matraces se les agregó respectivamente, diversas
cantidades de cada pesticida hasta obtener
concentraciones finales de 0.5 y 2.25 % de oxamilo, 0.2
y 0.25 % de propineb, 0.1 y 0.25 % de clorpirifos y, 0.5
y 1.5 % de sulfato de cobre pentahidratado. Al medio
contenido en el matraz restante no se le adicionó
pesticida alguno a fin de utilizarlo como control. Luego,
el medio de cultivo de cada uno de los matraces fue
servido en placas de Petri estériles (cuatro placas por
cada concentración, incluyendo el control).
2.1.3.2. Siembra e incubación de Pochonia chlamydsporia
Se sembró por puntura en la parte central de cada
una las placas que contuvieron agar Sabouraud con las
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concentraciones respectivas de cada pesticida, un
inóculo del cultivo de P. chlamydosporia. Este proceso
se realizó por triplicado y las placas fueron incubadas a
temperatura ambiente; durante doce días.
2.1.3.3. Lectura
Desde el tercer día de siembra y durante los doce
días siguientes se midió diariamente el radio de
crecimiento en las diferentes direcciones de la colonia
que se formó a partir del inóculo sembrado,
obteniéndose un radio promedio de crecimiento por día.
Para calcular el porcentaje de crecimiento se empleo la
siguiente fórmula:
Radio prom. de crecimiento de la colonia prob.
% C = X 100
Radio promedio de la colonia control
2.2. Evaluación de la compatibilidad de P. chlamydosporia con
Oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado en condiciones de campo (vivero experimental)
2.2.2. Propagación en masa de P. chlamydosporia. en sustrato de
arroz.
2.2.2.1. Preparación e inoculación del sustrato de arroz con
el medio líquido.
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Para esto se utilizaron bolsas de polipropileno de
11 x 16 pg x 2 micras, a cada una se le agregó 800 gr
de arroz y 200 mL de agua destilada, se selló y se
agitó para distribuir homogéneamente el agua a todos
los granos de arroz, luego se esterilizó en autoclave a
121°C y 15 lb. de presión por 20 minutos, después del
autoclavado, se agitaron las bolsas con la finalidad de
evitar aglomeraciones, y se dejó enfriar a temperatura
ambiente. Posteriormente las bolsas se llevaron a un
ambiente estéril para desinfectar los bordes con
algodón embebido en alcohol, luego se abrió
cuidadosamente un extremo y se agregó a cada bolsa
de arroz, 30 mL de una suspensión de 106 conid/mL
de P. chlamydosporia. Terminada la inoculación las
bolsas estas fueron selladas y agitadas para distribuir
el inoculo en forma homogénea en todos los granos de
arroz y se incubaron a temperatura ambiente por un
periodo de 2 semanas.
2.2.3. Preparación de macetas en el vivero experimental
Se prepararon 15 tratamientos que fueron previamente
infestados con nematodos, estando constituido cada tratamiento por
15 macetas, colocándose aproximadamente 3 Kg por maceta. El suelo
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control sólo tuvo suelo de dunas. Se instaló el sistema de riego por
goteo para cada planta en las macetas.
A las dos semanas de la infestación del suelo, se sembraron
Gomphocarpus fruticosus “planta Globo” de aproximadamente 7 cm
de altura en cada una de las macetas, siendo los tratamientos los
siguientes:
Tratamiento 01: Planta Globo sin inocular (Control)
Tratamiento 02: Planta Globo + nematodo (Control)
Tratamiento 03: Planta Globo + nematodo + P. chlamydosporia
(Control).
Tratamiento 04: Planta Globo + nematodo + oxamilo al 2,25 %
Tratamiento 05: Planta Globo + nematodo + oxamilo al 2,25% +
P. chlamydosporia.
Tratamiento 06: Planta Globo + nematodo + con azufre más sulfato
de cobre pentahidratado al 0.5%
Tratamiento 07: Planta Globo + nematodo + azufre más sulfato de
cobre pentahidratado al 0.5% + P.
chlamydosporia.
Tratamiento 08: Planta Globo + nematodo + azufre más sulfato de
cobre pentahidratado al 1.5%
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Tratamiento 09: Planta Globo + nematodo + azufre más sulfato de
cobre pentahidratado al 1.5% + P.
chlamydosporia.
Tratamiento 10: Planta Globo + nematodo + propineb al 0.2 %
Tratamiento 11: Planta Globo + nematodo + propineb al 0.2 % + P.
chlamydosporia.
Tratamiento 12: Planta Globo + nematodo + clorpiriphos al 0.1%
Tratamiento 13: Planta Globo + nematodo + clorpiriphos al 0.1% +
P. chlamydosporia.
Tratamiento 14: Planta Globo + nematodo + clorpiriphos al 0.25%
Tratamiento 15: Planta Globo + nematodo + clorpiriphos al 0.25%
+ P. chlamydosporia.
2.2.4. Primera aplicación de pesticidas químicos
Para cada concentración de pesticida se procedió de la siguiente
forma: Transcurrido 7 días después de la siembra de las planta Globo,
se disolvió el pesticida a aplicar, dividiendo la dosis total para el suelo
entre dos dosis parciales. La primera parte de la dosis se aplicó en la
superficie de la maceta.
2.2.5. Primera aplicación de P. chlamydosporia y evaluación inicial
A los 15 días de la siembra de plantas Globo, se obtuvo un
suspensión de P. chlamydosporia a partir de las bolsas con arroz y se
aplicó en la capa superficial de la maceta. Luego se tomó una muestra
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de suelo, se hicieron diluciones decimales sucesivas en agua destilada
estéril y se sembró por incorporación las dos últimas diluciones en
Agar Papa Sacarosa para conocer la cantidad de hongo en el suelo,
para esto la lectura se realizó a los cuatro días de la siembra.
2.2.6. Segunda aplicación de pesticidas químicos
A los 21 días de la siembra de plantas Globo, se aplicó la
segunda dosis de los pesticidas químicos procediéndose de igual
forma que en la primera aplicación
2.2.7. Evaluación y segunda aplicación de Pochonia chlamydosporia
A los 30 días de la siembra de plantas Globo, se aplicó la
segunda dosis del hongo biocontrolador en la superficie de las
macetas según el tratamiento que lo requirió.
2.2.8. Evaluación final
A los 30 días de la primera aplicación de la dosis del hongo
biocontrolador, se tomaron muestras de suelo y de cada muestra se
hicieron diluciones decimales sucesivas para conocer la cantidad de
hongo en el suelo. Se sembraron por incorporación las dos últimas
diluciones en Agar Papa Sacarosa y se realizó la lectura a los cuatro
días de la siembra.
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Asimismo, se retiraron todas las plantas Globo sembradas en
cada uno de los tratamientos para realizar una evaluación cuantitativa
basada en el número de nódulos por planta en cada tratamiento para
evaluar el rendimiento de P. chlamydosporia como controlador de
nematodos.
2.2.9 Lectura y análisis de datos
Se tomaron como datos iniciales la cantidad de conidias de P.
chlamydosporia en el suelo después de la primera aplicación. Los
demás datos se tomaron después de las aplicaciones de los pesticidas
químicos y del hongo en el suelo para conocer la permanencia de las
conidias de P. chlamydosporia.
2.10. Métodos estadísticos utilizados
Se realizó la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional
(ANAVA) para la comparación entre las medias de los cantidad de
conidias obtenidas frente a cada una de las concentraciones que se
utilizaron de oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato
de cobre pentahidratado, aplicándose un post-anava cuando fue
necesario
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II. RESULTADOS
En la Fig. 1 se observa que el porcentaje de germinación de Pochonia
chlamydosporia disminuye hasta 0% conforme aumentan las concentraciones de los
pesticidas; mientras que en las figuras 2a y 2b se observan las conidias germinadas
y no germinadas de P. chlamydosporia frente a las diferentes concentraciones de los
pesticidas en condiciones de laboratorio.
En las figuras 3, 4a y 4b se observa que el porcentaje de crecimiento de Pochonia
chlamydosporia disminuye conforme aumenta las concentraciones de los pesticidas,
ocurriendo el mayor crecimiento frente al oxamilo al 0.5% y el menor crecimiento
frente al sulfato de cobre al 1.5 %
En la Fig. 5 se observa que el número de conidias de P. chlamydosporia no
disminuye significativamente frente a las diferentes concentraciones de los
pesticidas en condiciones de campo.
En la Fig. 6 se observa que el mayor número de nódulos radiculares se presenta en
la combinación “planta globo + nematodos + azufre con sulfato de cobre
pentahidratado al 1.5 % (T8) mientras que el menor número se presenta en la
combinación “planta globo + nematodos + azufre con sulfato de cobre
pentahidratado clorpiriphos al 0.5 % (T6).
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Fig. 1. Porcentaje de germinación de P. chlamydosporia frente a diferentes
concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y
azufre más sulfato de cobre pentahidratado a las 24 horas de incubación
en condiciones de laboratorio.
a: p<0.05, si existe diferencia significativa
b: p>0.05, no existe diferencia significativa
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Fig. 2a. Observación microscópica (40x) de conidias de P. chlamydosporia frente a
diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo y propineb a
las 24 horas de incubación en condiciones de laboratorio; nótese las
conidias germinadas (g) y no germinadas (ng).
Oxamilo 0% Oxamilo 0.5% Oxamilo 1.5%
Propineb 0% Propineb 0.2% Propineb 0.25%
g
g ng
ng
ng
ng
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Fig. 2b. Observación microscópica (40x) de conidias de P. chlamydosporia frente
a diferentes concentraciones (%) de los pesticidas clorpiriphos y azufre
más sulfato de cobre pentahidratado a las 24 horas de incubación en
condiciones de laboratorio; nótese las conidias germinadas (g) y no
germinadas (ng).
Clorpiriphos 0% Clorpiriphos 0.1% Clorpiriphos 0.25%
Azufre más sulfato
de cobre 0%
Azufre más sulfato
de cobre 0.5%
Azufre más sulfato
de cobre 1.5%
g
g ng
ng
ng
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Fig. 3. Porcentaje de crecimiento de P. chlamydosporia frente a diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo, propineb,
clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 12 días de incubación en condiciones de laboratorio.
a: p<0.05, si existe diferencia significativa
b: p>0.05, no existe diferencia significativa
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Fig. 4a. Crecimiento de P. chlamydosporia frente a diferentes concentraciones (%) de los
pesticidas oxamilo y propineb a los 12 días de incubación en condiciones de
laboratorio.
a. Oxamilo 0% b. Oxamilo 0.5% c. Oxamilo 2.25%
d. Propineb 0% e. Propineb 0.2% f. Propineb 0.25%
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Fig. 4b. Crecimiento de P. chlamydosporia frente a diferentes concentraciones (%) de los
pesticidas clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 12 días
de incubación en condiciones de laboratorio.
g. Clorpiriphos 0% h. Clorpiriphos 0.1% i. Clorpiriphos 0.25%
j. Azufre más sulfato de cobre 0%
k. Azufre más sulfato de cobre 0.5%
l. Azufre más sulfato de cobre 1.5%
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Fig. 5. Porcentaje de número de conidias (ufc/g) de P. chlamydosporia en muestras de
suelo inoculadas con diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo,
propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 30
días de evaluación en campo.
T3. Planta + Nematodo + P.
chlamydosporia
T5. Pt + Nt + P. ch + Oxamilo
2.25%
T7. Pt + Nt + P. ch + Azufre más
Sulfato de Cobre 0.5%
T9. Pt + Nt + P. ch + Azufre más
Sulfato de Cobre 1.5%
T11. Pt + Nt + P. ch +´Propineb
0.2%
T13. Pt + Nt + P. ch +
Clorpiriphos 0.1%
T15. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos
0.25%
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Fig. 6. Número de nódulos radiculares promedio en raíz de Gomphocarpus fruticosus
“planta globo” parasitado con nematodos frente a P. chlamydosporia y a las
diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos
y azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 30 días de evaluación en
campo.
T1. Planta sin inocular T2. Planta + nematodo (Nt)
T3. Planta + Nt + P. chlamydosporia T4. Pt + Nt + Oxamilo 2.25%
T5. Pt + Nt + P. ch + Oxamilo 2.25% T6. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 0.5%
T7. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato de
Cobre 0.5%
T8. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 1.5%
T9. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato de
Cobre 1.5%
T10. Pt + Nt + Propineb 0.2%
T11. Pt + Nt + P. ch + Propineb 0.2% T12. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.1%
T13. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos 0.1% T14. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.25%
T15. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos 0.25%
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III. DISCUSIÓN
En relación al efecto de las diferentes concentraciones de los pesticidas
oxamilo, clorpiriphos, propineb y azufre más sulfato de cobre pentahidratado
sobre la germinación de Pochonia chlamydosporia (Fig. 1, 2a y 2b), se observa
que estos químicos poseen un efecto inhibitorio sobre el hongo, a medida que se
aumenta la concentración de los químicos, mayor es el impacto sobre P.
chlamydosporia. El porcentaje de germinación se reduce hasta niveles bajos.
Respecto al porcentaje de germinación de P. chlamydosporia frente a las
concentraciones del pesticida oxamilo, se encontró que el porcentaje de
germinación (Fig. 1, 2a y 2b) disminuye de un 13.2% a 0%, al aumentar la
concentración del químico de 0.5% hasta 2.25% (Fig 1). A pesar de que hay una
ligera diferencia, ésta no es estadísticamente significativa entre ambas
concentraciones de oxamilo evaluadas, ya que ambas afectan la germinación del
hongo con el mismo efecto inhibitorio. De igual manera ocurrió al evaluar el
porcentaje de germinación del azufre más sulfato de cobre pentahidratado, en el
que a la concentración de 0.5% se encontró un porcentaje de 12.9%, el que
disminuye al aumentar las concentración del mismo hasta un 1.5%, disminuyendo
el porcentaje de germinación hasta un 1.3%. Estadísticamente no hay diferencia
significativa entre ambos valores, lo que manifiesta que ambas concentraciones
presentan el mismo efecto inhibitorio sobre la germinación de P. chlamydosporia.
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Al evaluar el efecto de clorpiriphos a la concentraciones de 0.1% y de
0.25% y de propineb a las concentraciones de 0.2% y de 0.25% sobre el porcentaje
de germinación de P. chlamydosporia (Fig. 1, 2a y 2b) se encontró que tanto con
las concentraciones bajas como con las concentraciones altas, el porcentaje de
germinación se mantiene en 0%. Esto nos manifiesta que los químicos presentan
un efecto inhibitorio sobre P. chlamydosporia al evitar que sus conidias germinen.
Los porcentajes de germinación obtenidos en la presente investigación,
muestran que estos químicos son incompatibles en relación a los estándares de
calidad para hongos controladores biológicos utilizados en el Manejo Integrado de
Plagas, el cual establece que el valor óptimo del porcentaje de germinación debe
ser mayor a 90%. [28] [29]
Para que se produzca el proceso de germinación, la conidia tiene que
atravesar por dos fases cruciales: la primera es el hinchamiento hidrostático, donde
la espora absorbe agua y aumenta de tamaño y, la segunda es el hinchamiento
metabólico, donde la conidia incorpora material del medio externo a su interior. [30]
[31] De esta manera, al contrario los agroquímicos disueltos en agua logran
atravesar la pared celular para así afectar el metabolismo de la conidia y así evitar
su germinación. [30] [32]
Sin embargo, algunas conidias lograron germinar (Fig. 1,2a y 2b), esto
podría deberse a las diferencias estructurales entre estas y las conidias que no
germinaron; posiblemente por la variabilidad genética (heterocariosis) que existe
entre ellas, ya sea por el incremento del grosor de la pared de la conidia, evitando
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que ciertas sustancias del medio externo puedan penetrar o en su defecto que
mínimas concentraciones lo hagan; actuando como barrera mecánica. También
podría ser un factor favorable para la conidia, la constitución o estructura de su
membrana citoplásmatica con las propiedades de selectividad y permeabilidad, que
confiere protección frente a sustancias tóxicas o nocivas, actuando como un sensor
de señales externas, que le permite a la célula alterar su comportamiento en
respuesta a estímulos de su entorno. [30] [33]
Por otro lado, la disminución del porcentaje de germinación en la
evaluación con oxamilo y del clorpiriphos se puede deber a que ejercen una
potente acción inhibidora de la actividad de las ATP-asas relacionadas con la
fosforilación oxidativa, bloqueando la respiración celular, disminuyéndose de esta
manera, la producción de energía para que se lleve a cabo el proceso de
germinación. Esto explicaría, los valores bajos en el porcentaje de germinación
que se muestran en la Fig. 1 y 2a. [4]
Asimismo, la disminución del porcentaje de germinación en la evaluación
con propineb tendría como causa la lisis de la membrana celular ya que este
químico puede penetrar la conidia al transportarse vía translaminar, dañando
además la condición heterocarótica del núcleo, de manera que la conidia quede
inactiva. [33]
En relación al porcentaje de germinación con azufre, se conoce que al ser
éste un fungicida de acción multisitio, inhibe la síntesis de tubulinas interfiriendo
con el proceso de mitosis, lo que impide la germinación de la conidia y además, se
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ve afectada la membrana de la conidia. Asimismo, interfiere en la obtención de
energía al ser un inhibidor del metabolismo energético, ya que interfiere en el
proceso de fosforilación para la formación de ATP, disminuyendo la asimilación
de oxígeno, impidiendo que se forme cantidades suficientes de energía almacenada
en forma de carbohidratos, ácidos grasos y otros compuestos energéticos; esto
sumando a la poca disponibilidad de lípidos y ácidos nucleicos afecta a la conidia
llegando a morir. [4]
En cuanto al efecto en condiciones de laboratorio de diferentes
concentraciones de los químicos oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más
sulfato de cobre pentahidratado sobre el crecimiento de P. chlamydosporia (Fig. 3,
4a y 4b) se observa que existe un efecto inhibitorio pero este no es el mismo en
todos los químicos empleados.
Así tenemos que respecto al crecimiento de P. chlamydosporia frente a
las concentraciones del pesticida oxamilo (Fig. 3, 4a y 4b), éste disminuye de un
86% a 66.2% a los 12 días de incubación, al aumentar la concentración del
químico de 0.5% hasta 2.25% (Fig 3). También para el azufre más sulfato de cobre
pentahidratado hay una disminución del porcentaje de crecimiento desde 76.1% a
la concentración de 0.5% hasta 20% a la concentración de 1.5%. En ambos
químicos para la menor concentración, la diferencia no es estadísticamente
significativa presentando por lo tanto el mismo efecto sobre el crecimiento que el
control, siendo compatibles en crecimiento a esas concentraciones; mientras que
para las concentraciones de oxamilo al 2.25% y sulfato de cobre pentahidratado al
1.5%, el crecimiento es menor y estadísticamente significativa, siendo por lo tanto
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icnompatibles con P. chlamydosporia (Fig. 3 y 4b), ya que los pesticidas influyen
en el crecimiento del hongo.
Al evaluar el crecimiento de clorpiriphos a las concentraciones de 0.1% y
de 0.25% y de propineb a las concentraciones de 0.2% y de 0.25% (Fig. 3, 4a y 4b)
se encontró que éstos influyen negativamente sobre el crecimiento de P.
chlamydosporia en comparación con el control, sin embargo, se observa además
que no existe diferencia estadística significativa entre las cuatro concentraciones
evaluadas, es decir que las concentraciones evaluadas de propineb y clorpiriphos
presentan el mismo efecto negativo sobre el crecimiento de P. chlamydosporia,
siendo incompatibles en condiciones de laboratorio.
La disminución del crecimiento en oxamilo y en clorpiriphos se puede
deber a su acción inhibidora de la actividad de las ATP-asas relacionadas con la
fosforilación oxidativa, bloqueando la respiración celular, de esta manera que no
hay energía para que el micelio pueda crecer. [4]
En la evaluación con propineb, la disminución del crecimiento puede
deberse al efecto sobre la membrana celular ya que el químico se transporta vía
translaminar penetrando a la conidia y produce la lisis de ésta, dañando la
condición heterocarótica del núcleo, sin embargo, por su actividad multisitio,
también puede inhibir la síntesis de lípidos, influyendo en la síntesis bioquímica de
la membrana e interviniendo en la respiración de los hongos, inactivando el
sistema de la deshidrogenasa pirúvica. [33]
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En relación al crecimiento del hongo frente al azufre, al ser éste un
fungicida de acción multisitio, altera la membrana celular de los hongos, ya que se
inhibe la síntesis de lípidos y por lo tanto la biosíntesis de la membrana lipídica lo
que impide el crecimiento micelial. Además, inhibe la síntesis de tubulinas que
inteerfiere que se dé el proceso de mitosis, y por consiguiente la germinación de la
conidia y el crecimiento. [33]
En la evaluación en campo, se tiene que tener en cuenta la carga
microbiana del hongo a evaluar según sea el ensayo. Para el ensayo se tuvo en
cuenta que el suelo no contenga conidias de P. chlamydosporia previas a la
evaluación. En la Fig. 5 podemos observar que el mayor porcentaje de conidias de
P. chlamydosporia se obtuvo frente al azufre más sulfato de cobre pentahidratado
al 0.5% con un 97.56% y la menor fue el tratamiento con clorpiriphos al 0.25%
con un 85.34% de conidias presentes en el suelo. La disminución en el suelo de
conidiaa de P. chlamydosporia fue debido a que los pesticidas inhibieron por
diferentes vías que el hongo germine y crezca como los resultados obtenidos a
nivel de laboratorio.
Tanto para el oxamilo al 2.25% y para el azufre más sulfato de cobre
pentahidratado al 0.5%, el número de nódulos se incrementa en relación con su
control. Asimismo, las conidias de P. chlamydosporia disminuyeron más en el
ensayo con oxamilo al 2.25%, mientras que en el ensayo con azufre más sulfato de
cobre pentahidratado al 0.5%, la población de P. chlamydosporia aumenta a
rangos muy similares al control. Estos resultados nos muestran que a pesar que el
hongo biocontrolador estuvo presente, no puediron actuar simultáneamente, los
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pesticidas junto al biocontrolador, para disminuir la cantidad de nódulos presentes
en Gomphocarpus fruticosus “planta globo” de los tratamientos evaluados,
mostrando así su incompatibilidad a nivel de campo debido a que ambos pesticidas
influyen en los procesos para la obtención de energía del hongo. [34]
Sin embargo, para el tratamiento con azufre más sulfato de cobre
pentahidratado al 1.5%, ocurrió que a pesar del incremento del número de conidias
presentes en el suelo, la cantidad de nódulos disminuyó en más de un 40% en
relación del control. Esto pudo haberse debido a la desigualdad de la aplicación del
hongo en campo, de manera que durante la evaluación, el hongo biocontrolador no
tuvo contacto con el pesticida y los resultados obtenidos no muestran la
interacción de ambos controles. [9]
Para la evaluación con propineb al 0.2%, clorpiriphos al 0.1% y
clorpiriphos al 0.25%, la cantidad de nódulos disminuye aproximadamente en un
50%. En el tratamiento con clorpiriphos al 0.1% estadísticamente hay diferencia
significativa en relación con su control, ya que la cantidad de nódulos disminuyó a
un 81.26% con clorpiriphos al 0.1%. El número de conidias de P. chlamydosporia
se mantiene alto por encima del 90% en el tratamiento, lo que muestra que el
hongo biocontrolador ha logrado establecerse y está disminuyendo al número de
nódulos, siendo compatibles en campo.
Al evaluar el número de nódulos de nematodos por planta de
Gomphocarpus fruticosus “planta globo” se obtuvo que en el tratamiento con
propineb al 0.2% y el de clorpiriphos al 0.25% se muestren valores que están por
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debajo de la cantidad de nodulos del control, sin embargo estadísticamente son
iguales, ya que presentan valores de 48.35% con propineb al 0.2% y de 44.83% a
clorpiriphos al 0.25%. La concentración de conidias de P. chlamydosporia para el
ensayo con propineb al 0.2% se mantiene sobre el 90%, lo que nos indica que
tanto el control biológico como el control químico están actuando sobre los
nematodos para disminuir el número de nódulos. Asimismo, en el ensayo con
clorpiriphos al 0.25%, el número de nódulos disminuyó en relación con su control
a un 85.34%. A pesar de la ligera diferencia en relación al control, el tratamiento
disminuyó al ser utilizados ambos tratamientos en campo, tanto el químico como
el biológico. Estos resultados nos muestran que ambos mecanismo de control son
compatibles con P. chlamydosporia y pueden ser utilizados en campo
simultáneamente, sin que estos afecten entre si sus mecanismos de acción.
Debido a la diferencia de los resultados obtenidos tanto a nivel de campo
como de laboratorio, es importante que se realicen un mayor número de
investigaciones para comprobar la compatibilidad de pesticidas químicos como
biocontroladores utilizados en campos para controlar plagas, de maneras que al ser
usados simultáneamente controlen a sus organismos blanco y no interfieran entre
sí.
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IV. CONCLUSIONES
Con respecto a la evaluación de los pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb
“Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado “Sulfocalcio R” para determinar la compatibilidad con Pochonia
chlamydosporia se concluye lo siguiente:
Pochonia chlamydosporia no es compatible en germinación con los
pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos, azufre más sulfato de cobre
pentahidratado, disminuyendo significativamente los porcentajes, en
condiciones de laboratorio.
P. chlamydosporia es compatible en crecimiento con oxamilo al 0.5% y con
azufre más sulfato de cobre pentahidratado al 0.5% e incompatible con
oxamilo al 2.25%. propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado al 1.5% en condiciones de laboratorio
Los pesticidas propineb y clorpiriphos son compatibles con el crecimiento de
P. chlamydosporia, mientras que el oxamilo y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado no son compatibles en condiciones de campo.
Los pesticidas oxamilo y sulfato de cobre pentahidratado sn completamente
incompatibles a la actividad nematófaga de P. chlamydosporia, mientras que
los pesticidas propineb y clorpiriphos disminuyen significativamente esta
actividad en condiciones de campo.
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V. RECOMENDACIÓN
Debido a los resultados obtenidos, se recomienda repetir la evaluación en
una casa invernadero, donde se puedan controlar más variables y evitar que plagas
puedan influenciar en los resultados.
Se recomienda realizar un trabajo de investigación donde el periodo de
evaluación en campo sea más duradero para observar los resultados en la siguiente
generación de nematodos.
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nematodo degollador Meloidogyne javanica en Irak. Fao Corporate
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ANEXOS
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Anexo 1. Pochonia chlamydosporia: a) Cultivo puro y b) Observación microscópica
(40X)
a b
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Siembra de Gomphocarpus fruticosus “planta Globo”
7 días
Primera aplicación de pesticidas químicos
7 días
Primera aplicación de P. chlamydosporia
7 días
Recolección de muestra de suelo (Evaluación)
Segunda aplicación de pesticidas químicos
7 días
Segunda aplicación de P. chlamydosporia
7 días
Recolección de muestra de suelo (Evaluación final)
Anexo 2. Esquema de aplicación de los pesticidas y de Pochonia chlamydosporia en la
evaluación de la compatibilidad en campo.
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Anexo 3. Macetas con plantas de G. fruticosus “planta globo” inoculadas con los
pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre
pentahidratado y con Pochonia chlamydosporia.
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Anexo 4. Tamaño promedio de la raíz de Gomphocarpus fruticosus “planta
globo” parasitado con nematodos frente a P. chlamydosporia y a las
diferentes concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo, propineb,
clorpiriphos y azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 30
días de evaluación en campo.
T1. Planta sin inocular T2. Planta + nematodo (Nt)
T3. Planta + Nt + P. chlamydosporia T4. Pt + Nt + Oxamilo 2.25%
T5. Pt + Nt + P. ch + Oxamilo 2.25% T6. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 0.5%
T7. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 0.5%
T8. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 1.5%
T9. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 1.5%
T10. Pt + Nt + Propineb 0.2%
T11. Pt + Nt + P. ch + Propineb 0.2% T12. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.1%
T13. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos 0.1% T14. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.25%
T15. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos
0.25%
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j
Anexo 5. Raíces de Gomphocarpus fruticosus parasitado con nematodos frente a
P. chlamydosporia y a las diferentes concentraciones (%) de los
pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y azufre más sulfato de
cobre pentahidratado a los 30 días de evaluación en campo.
T1. Planta sin inocular T2. Planta + nematodo (Nt)
T3. Planta + Nt + P. chlamydosporia T4. Pt + Nt + Oxamilo 2.25%
T5. Pt + Nt + P. ch + Oxamilo 2.25% T6. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 0.5%
T7. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 0.5%
T8. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 1.5%
T9. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 1.5%
T10. Pt + Nt + Propineb 0.2%
T11. Pt + Nt + P. ch + Propineb 0.2% T12. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.1%
T13. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos 0.1% T14. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.25%
T15. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos
0.25%
5
e 4 3 2 1
10 9 7 6 8
15 14 13 12 11
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Anexo 6. Peso promedio de la raíz de Gomphocarpus fruticosus “planta globo”
parasitado con nematodos frente a P. chlamydosporia y a las diferentes
concentraciones (%) de los pesticidas oxamilo, propineb, clorpiriphos y
azufre más sulfato de cobre pentahidratado a los 30 días de evaluación
en campo.
T1. Planta sin inocular T2. Planta + nematodo (Nt)
T3. Planta + Nt + P. chlamydosporia T4. Pt + Nt + Oxamilo 2.25%
T5. Pt + Nt + P. ch + Oxamilo 2.25% T6. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 0.5%
T7. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 0.5%
T8. Pt + Nt + Azufre más Sulfato de
Cobre 1.5%
T9. Pt + Nt + P. ch + Azufre más Sulfato
de Cobre 1.5%
T10. Pt + Nt + Propineb 0.2%
T11. Pt + Nt + P. ch + Propineb 0.2% T12. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.1%
T13. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos 0.1% T14. Pt + Nt + Clorpiriphos 0.25%
T15. Pt + Nt + P. ch + Clorpiriphos
0.25%
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Anexo 7. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y número
de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta globo” en el
ensayo realizado con oxamilo al 0.5% y al 2.25%
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Anexo 8. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y número
de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta globo” en el
ensayo realizado con propineb al 0.2% y al 0.25%
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Anexo 9. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y número
de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta globo” en el
ensayo realizado con clorpiriphos al 0.1% y al 0.25%
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Anexo 10. Valores promedio obtenidos en la evaluación del porcentaje de
germinación, crecimiento, número de conidias en campo y número
de nódulos en Gomphocarpus fruticosus “planta globo” en el
ensayo realizado con azufre más sulfato de cobre pentahidratado al
0.5% y al 1.5%
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Anexo 11. Tratamientos de la evaluación de la compatibilidad de Pochonia
chlamydosporia frente s las diferentes concentraciones de los pesticidas
oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos
48 CE”, azufre más sulfato de cobre peentahidratado “Sulfocalcio R” en
condiciones de campo.
Tratamiento Componentes
T1 Planta
T2 Planta + Nemátodo
T3 Planta + Nemátodo + Pochonia
T4 Planta + Nemátodo + Oxamilo 2.25%
T5 Planta + Nemátodo + Sulfocalcio R 0.5%
T6 Planta + Nemátodo + Sulfocalcio R 1.5%
T7 Planta + Nemátodo + Propineb 0.2%
T8 Planta + Nemátodo + Clorpiriphos 0.1%
T9 Planta + Nemátodo + Clorpiriphos 0.25%
T10 Planta + Nemátodo + Pochonia + Oxamilo 2.25%
T11 Planta + Nemátodo + Pochonia + Sulfocalcio R 0.5%
T12 Planta + Nemátodo + Pochonia + Sulfocalcio R 1.5%
T13 Planta + Nemátodo + Pochonia + Propineb 0.2%
T14 Planta + Nemátodo + Pochonia + Clorpiriphos 0.1%
T15 Planta + Nemátodo + Pochonia + Clorpiriphos 0.25%
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Anexo 12. Poblaciones estadísticas del número de nódulos de nematodos en
plantas de G. fruticosus con aplicaciones de P. chlamydosporia frente s
las diferentes concentraciones de los pesticidas oxamilo “Vydate”,
propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos 48 CE”, azufre más
sulfato de cobre pentahidratado “Sulfocalcio R” en condiciones de
campo
Número de Nódulos
18 .0018 13.00 13.0018 19.67 19.6718 23.39 23.39 23.3918 25.22 25.22 25.2218 36.00 36.00 36.0018 42.39 42.39 42.3918 49.00 49.00 49.0018 49.00 49.00 49.0018 51.67 51.67 51.6718 52.17 52.17 52.1718 57.39 57.39 57.3918 62.94 62.9418 68.2818 69.28
.112 .439 .189 .094 .123 .156 .20518 .0018 13.00 13.0018 19.67 19.67 19.6718 23.39 23.39 23.39 23.3918 25.22 25.22 25.22 25.22 25.2218 36.00 36.00 36.00 36.00 36.0018 42.39 42.39 42.39 42.39 42.3918 49.00 49.00 49.00 49.0018 49.00 49.00 49.00 49.0018 51.67 51.67 51.6718 52.17 52.17 52.1718 57.39 57.3918 62.94 62.9418 68.2818 69.28
.126 .242 .260 .112 .071 .071 .07218 .0018 13.00 13.0018 19.67 19.67 19.6718 23.39 23.39 23.39 23.3918 25.22 25.22 25.2218 36.00 36.00 36.00 36.0018 42.39 42.39 42.39 42.3918 49.00 49.00 49.00 49.0018 49.00 49.00 49.00 49.0018 51.67 51.67 51.6718 52.17 52.17 52.1718 57.39 57.39 57.3918 62.94 62.9418 68.28 68.2818 69.2818 .0018 13.00 13.0018 19.67 19.6718 23.39 23.3918 25.22 25.2218 36.00 36.0018 42.39 42.3918 49.00 49.00 49.0018 49.00 49.00 49.0018 51.67 51.67 51.67 51.6718 52.17 52.17 52.17 52.1718 57.39 57.39 57.3918 62.94 62.9418 68.2818 69.28
.112 .175 .067 .084 .110 .139 .058
TratamientoT1T5T4T15T13T12T14T3T10T9T2T11T7T8T6Sig.T1T5T4T15T13T12T14T3T10T9T2T11T7T8T6Sig.T1T5T4T15T13T12T14T3T10T9T2T11T7T8T6T1T5T4T15T13T12T14T3T10T9T2T11T7T8T6Sig.
Student-Newman-Keuls a
HSD de Tukeya
Tukey Ba
Duncana
N 1 2 3 4 5 6 7Subconjunto para alf a = .05
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.Usa el tamaño muestral de la media armónica = 18.000.a.
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Anexo 13. Poblaciones estadísticas del tamaño de la raíz (cm) en plantas de
Gomphocarpus fruticosus con aplicaciones de Pochonia
chlamydosporia frente s las diferentes concentraciones de los pesticidas
oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos “Clorfos
48 CE”, azufre más sulfato de cobre pentahidratado “Sulfocalcio R” en
condiciones de campo.
Tamaño de la raíz (cm)
18 7.833318 8.177818 8.616718 8.9056 8.905618 8.9333 8.933318 9.1389 9.138918 9.2000 9.200018 9.2389 9.238918 9.2500 9.250018 10.1056 10.105618 10.1333 10.133318 10.738918 10.933318 12.277818 12.3000
.075 .167 .304 .96318 7.833318 8.177818 8.6167 8.616718 8.9056 8.905618 8.9333 8.933318 9.1389 9.1389 9.138918 9.2000 9.2000 9.200018 9.2389 9.2389 9.238918 9.2500 9.2500 9.250018 10.1056 10.1056 10.105618 10.1333 10.1333 10.133318 10.7389 10.7389 10.738918 10.9333 10.933318 12.277818 12.3000
.168 .098 .060 .918 .07618 7.833318 8.177818 8.6167 8.616718 8.9056 8.905618 8.9333 8.933318 9.1389 9.138918 9.2000 9.200018 9.2389 9.238918 9.2500 9.250018 10.1056 10.105618 10.1333 10.133318 10.738918 10.9333 10.933318 12.277818 12.3000
TratamientoT13T9T5T7T6T11T2T4T10T12T14T3T15T1T8Sig.T13T9T5T7T6T11T2T4T10T12T14T3T15T1T8Sig.T13T9T5T7T6T11T2T4T10T12T14T3T15T1T8
Student-Newman-Keuls a
HSD de Tukeya
Tukey Ba
N 1 2 3 4 5Subconjunto para alf a = .05
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.Usa el tamaño muestral de la media armónica = 18.000.a.
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ISTE
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FORMÁTI
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N
58
Anexo 14. Poblaciones estadísticas del peso de la raíz (g) de plantas de
Gomphocarpus fruticosus con aplicaciones de Pochonia
chlamydosporia frente s las diferentes concentraciones de los
pesticidas oxamilo “Vydate”, propineb “Antracol 70 PM”, clorpiriphos
“Clorfos 48 CE”, azufre más sulfato de cobre pentahidratado
“Sulfocalcio R” en condiciones de campo
Peso de la raíz (g)
18 .128918 .2444 .244418 .2700 .2700 .270018 .3078 .307818 .3444 .3444 .344418 .3511 .3511 .351118 .3578 .3578 .357818 .3644 .3644 .364418 .3767 .3767 .376718 .4139 .4139 .413918 .4156 .4156 .415618 .4578 .4578 .4578 .457818 .4700 .4700 .470018 .5233 .523318 .6233
.083 .051 .090 .172 .06018 .128918 .2444 .244418 .2700 .2700 .270018 .3078 .3078 .3078 .307818 .3444 .3444 .3444 .344418 .3511 .3511 .3511 .351118 .3578 .3578 .357818 .3644 .3644 .364418 .3767 .3767 .376718 .4139 .4139 .4139 .413918 .4156 .4156 .4156 .415618 .4578 .4578 .4578 .457818 .4700 .4700 .470018 .5233 .523318 .6233
.058 .085 .146 .078 .10018 .128918 .2444 .244418 .2700 .2700 .270018 .3078 .3078 .3078 .307818 .3444 .3444 .344418 .3511 .3511 .351118 .3578 .3578 .357818 .3644 .3644 .364418 .3767 .3767 .376718 .4139 .4139 .413918 .4156 .4156 .415618 .4578 .4578 .4578 .457818 .4700 .4700 .470018 .5233 .523318 .6233
TratamientoT1T5T2T4T13T15T9T12T10T3T11T6T14T7T8Sig.T1T5T2T4T13T15T9T12T10T3T11T6T14T7T8Sig.T1T5T2T4T13T15T9T12T10T3T11T6T14T7T8
Student-Newman-Keuls a
HSD de Tukeya
Tukey Ba
N 1 2 3 4 5Subconjunto para alf a = .05
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.Usa el tamaño muestral de la media armónica = 18.000.a.
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