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UNIVERSIDAD DE HUÁNUCO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

E.A.P. ODONTOLOGÍA

EFICACIA ANTIBACTERIANA IN VITRO DEL

EXTRACTO DE HOJA DE COCA EN COMPARACIÓN

CON CLORHEXIDINA FRENTE A STAPHYLOCOCCUS

Y STREPTOCOCCUS

HUANUCO 2011

Presentado por el Bachiller Ricardo A Rojas Sarco.

HUÁNUCO – PERÚ

2011

“Año del Centenario de Machu Picchu para el Mundo”

INDICE

DATOS GENERALES DE LA TESIS

Pág.

RESUMEN

PRESENTACIÓN

INTRODUCCIÓN

CAPITULO I

1. EL PROBLEMA DE INVESTIGACION

1.1 Fundamentación del Problema ………………………………………………. 7

1.2 Formulación del Problema………………...……………………….……….….. 8

Problema General……………………………………………………………… 8

Problema Específico…………………………………………………………... 8

1.3 Justificación………………………………………………………….….……….. 9

1.4 Objetivos. ……………………………………………………………….….…….. 9

Objetivo General………………………………………………….…….….…. 9

Objetivos Específicos………………………………...……………………... 9

1.5 Limitaciones o Dificultades………………………………………………..…..…. 10

CAPITULO II

2. MARCO TEÓRICO

2.1 Antecedentes…………………………………………….……………………...... 11

2.2 Base Teóricas y Científicas……………………………………………….…….. 14

2.2.1 Coca (Erythroxylum)………………………………………………….. 14

2.2.2 Clorhexidina…………………………………………………………….. 19

2.2.3 Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.……………………. 22

2.3 Definición de Términos…………………………………………….…………….. 32

2.4 Hipótesis………………………………………………………….……………….. 35

2.5 Identificación de variables………………………………………….………….... 35

2.6 Operacionalización de Variables………….……………….….......…..……… 36

CAPITULO III

3. DISEÑO METODOLOGÍCO

3.1 Tipo de Investigación……………………………………………………………. 37

3.2 Población y Muestra ……….…………………………………………………. 38

3.3 tecnica de recoleccion de instrumentos……………………………………………. 39

3.4 plan de tabulacion y analisis de datos……………………………………………… 40

CAPITULO IV

4. RESULTADOS

4.1resultados De Las Observaciones………………………………………….. 41

4.2 Prueba De Hipótesis………………………………………………………… 44

DISCUSIÓN……………………………………………………………………… 55

CONCLUCIONES……………………………………………………………….. 57

RECOMENDACIONES………………………………………………………………… 58

BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………… 59

ANEXOS……………………………………………………………………………….. 65

7

CAPITULO I

EL PROBLEMA 1.1 FUNDAMENTACION DEL PROBLEMA

La cavidad oral esta formada por un conjunto de tejidos, con numerosos microorganismos

asociados a ellos, constituyendo un ecosistema. Cuando este sistema ecológico se

encuentra en equilibrio se denomina eubiosis y, en cambio, cuando estas relaciones se han

alterado, pasara a llamarse disbiois, que correspondería a una boca enferma.

La gran mayoría de la población andina del Perú, padecen de enfermedades buco dentales

debido a la carencia de conocimiento sobre la higiene bucal. Pero de manera

compensatoria e inconsciente, el consumo de la hoja de coca en la población, ha

demostrado interferir con el rol del proceso carioso, debido a los componentes beneficiosos

que contiene dicha hoja; al mismo tiempo la excesiva actividad masticatoria a perjudicado

las estructuras dentales produciendo traumas en las estructuras duras del diente y en las que

lo rodean, conllevando ha enfermedades periodontales, ocasionando la perdida dentaria.

Gracias a la investigación realizada por la U.N.M.S.M. sobre la hoja de coca como

antibacteriano sobre microorganismos de la cavidad oral, se pretende comparar la eficacia

antibacteriana de dicha hoja con la clorhexidina en el tratamiento de staphylococcus aureus

8

y streptococcus mutans., y dar una opción en el futuro de revertir la dramática situacional

de la salud bucal de la población andina del Perú. Es por tal motivo que dicha

investigación tiene como propósito principal dar solución a las enfermedades buco dentales

de las personas de bajo recursos económicos y menos accesibilidad a un establecimiento de

salud bucal.

1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

Eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en comparación con la

clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

Para este estudio se elabora la siguiente pregunta:

General

• ¿Cuál es la eficacia antibacteriana in vitro del extracto de hoja de coca en

comparación con la clorhexidina 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus

aureus y streptococcus mutans?

Especifico

• ¿Será el extracto de hoja de coca un eficaz antibacteriano in vitro frente a

staphylococcus aureus y streptococcus mutans?

• ¿Habrá diferencia entre la eficacia antibacteriana in Vitro de la clorhexidina 0.12%

en comparación con extracto de hoja de coca frente a staphylococcus aureus y

streptococcus mutans?

9

1.3 JUSTIFICACION

Una de las incógnitas que se tratan de explicar de manera, es la causa de los bajos niveles

de lesiones cariosas en personas que practican el hábito de masticar la hoja de coca

crónicamente, pero la mayoría de las investigaciones de la hoja de coca en el área de la

Odontoestomatología no logran explicar, de manera clara dicha eficacia. Es necesario que

se consideren todos los factores que puedan intervenir en la baja incidencia de las lesiones

cariosas en los chacchadores de hoja de coca, y uno de los factores que necesita mayor

importancia de estudio, es la actividad antibacteriana de la hoja de coca, para poder aportar

un mayor conocimiento en el área de la Odontoestomatología y aclarar las incógnitas sobre

el beneficio de dicha planta. Con los resultados positivos que se obtengan de la existencia

de la eficacia antibacteriana del extracto alcohólico de la hoja de coca, se podrá comparar

con otro agente bactericida efectivo que es la clorhexidina y encaminar una planificación

para el tratamiento, tanto preventivo como interceptivo, de enfermedades orales de origen

infeccioso con el uso de extractos de la hoja de coca o con los componentes exactos de la

planta que causen dicho efecto antibacteriano.

1.4 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

Objetivo General:

• Determinar la eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en

comparación con la clorhexidina al 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus

aureus y streptococcus mutans

Objetivos Específicos:

• Identificar la eficacia del extracto de hoja de coca como antibacteriano in vitro en

el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

• Evaluar la eficacia antibacteriana in vitro entre la clorhexidina 0.12% en

comparación con el extracto de hoja de coca en el tratamiento de staphylococcus

aureus y streptococcus mutans.

10

1.5 LIMITACIONES O DIFICULTADES

• Los pocos estudios realizados con la hoja de coca a nivel local, la cual

impide obtener datos importantes para realizar este trabajo.

• El crecimiento inadecuado de la bacteria con la que se esta trabajando.

• Contaminación del los agares con otros microorganismos

11

CAPITULO II

MARCO TEORICO

2.1 ANTECEDENTES

• Según GOICOCHEA, A., en 1954; realizo un estudio en 30 masticadores de la

hoja de coca, que el número de piezas que faltaban y el porcentaje de caries eran

bajos. Mientras que el grado de abrasión dentaria fue alto.1

• Según AYALA, C., en 1963; realiza un estudio a 40 individuos en Puno, en el

cual da como uno de sus resultados, que los chacchadores (masticadores) de la hoja

de coca presentaban lesiones cariosas en un mínimo porcentaje, mientras que la

abrasión dentaria fue elevada.2

• Según ÚNGARO, M., en 1972; realiza un estudio en un grupo de 500

chacchadores de la hoja de coca, que la prevalecía de lesiones cariosas era de un

68%.3

12

• Según CORONEL, M., en 1988; realizó estudios en comunidades de

chacchadores de hoja de coca con un tiempo de hábito mayor de 10 años y edades

comprendidas entre los 30 y 50 años.4

• Según NAVARRO A., Ángel, en 1988; realizo un estudio con 67 sujetos entre 30

y 45 años de edad y con un tiempo del habito mayor a 10 años.5

• Según PANDO, R., en 1988; realiza un estudio en una comunidad de

chacchadores con 60 individuos, con edades comprendidas entre los 30 y 50 años y

con un tiempo de chacchado de la hoja de coca mayor de 10 años.6

• Según LI SING, C., en 1994; estudio las propiedades inhibitorias del

Erythroxylum coca lam. var. coca y del Erythroxylum Novogranatense var.

truxillense contenidos en el filtro de mate de coca frente a las especies de hongos.7

• Según AGUILAR, E. y ENCARNACIÓN, J., en 1995; realizaron un estudio para

observar el comportamiento “in vitro” de algunas especies del género

Mycobacterium frente a Erythroxylum coca-Erythroxylum novogranatense (Mate

de coca).8

• Según CASTRO, P. y CHAVEZ, J., en 1995; realizaron un estudio sobre la

acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum coca Lam var. coca y Erythroxylum

Novogranatense var. truxillense contenidas en el filtro de “Mate de Coca” frente a

cepas de uropatógenos Gram negativos multiresistentes.9

• Según CAM, O. y VILLANUEVA, P., en 1996; hicieron un estudio de actividad

inhibitoria del extracto acuoso metanólico de los principios activos totales extraídos

de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby

frente a cepas bacterianas de bacterias Gram (-), Gram (+) y levaduras aisladas.10

• Según MERTZ, M. y REYES, E., en 1996; realizaron un trabajo de investigación

sobre la propiedad inhibitoria de Erythroxylum coca lam. Y Erythroxylum

novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby contenidas en el filtro de “Mate de

coca”, sobre el crecimiento de Enterobacterias, Cocos Gram (+) y Bacillus.11

13

• Según SOLANO, D., en 1996; la presente investigación ha comprendido el estudio

de 40 muestras; correspondientes a placa bacteriana, caries dental, cálculo dental,

absceso radicular y gingivitis, frente a dos extractos de Erythroxylum

Novogranatense (Morris) var. truxillense. Rusby: Acuoso y metanólico de

principios activos totales.12

• Según FLORES MIR, F., en 1997; realizo un estudio para determinar la

prevalencia de lesiones cariosas, enfermedad periodontal y desgaste dentario y su

relación con la presencia, tiempo y frecuencia del habito de masticación de hojas de

coca.13

• Según GALVEZ, O., en 1997; realizó un estudio sobre la acción inhibitoria de

crecimiento del extracto acuoso de Erythroxylum Novogranatense Morris var.

truxillense (Rugby) frente a bacterias Gram negativas que presentaron resistencia a

5 antibacterianos.14

• Según BORROVIC RAMOS, F., en el 2006; realizo una investigación acerca del

efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca frente a la

microflora oral.15

• Según VENTURA G., CASTRO A., ROQUE M., RUIZ J., en el 2009; estudió

la actividad antibacteriana del aceite esencial de la hoja de coca, frente a las cepas

de Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis, y Pseudomonas

aeruginosa.16

14

2.2 BASES TEORICAS

2.2.1 COCA (ERYTHROXYLUM):

2.2.1.1 Generalidades:

Etimológicamente la palabra coca proviene del quechua “kuka” o “koka” que debe

interpretarse, según Storni, “ku” o “ko”, parte más destacada o principal de algo, “ka” o

“kau” vivificante, que da vida, vigorosa y fuerte.17

El género Erythroxylum, “familia Erythroxylaceae”. (Anexo 1). Se encuentra ampliamente

distribuido en las regiones tropicales de Sudamérica, principalmente en el Perú y Bolivia y

en menor escala en Colombia, Ecuador, Venezuela y Brasil.18

Actualmente se cultivan varias especies de coca en el país. El Erythroxylum coca, planta

arbustiva de crecimiento silvestre en las laderas de los Andes Peruanos, principalmente

entre los 1000 y 2000 m de altitud, cultivadas desde tiempos remotos en el Perú, Bolivia y

otros países cálidos. En la población andina tradicional, donde el uso más conocido que se

le da a las hojas de coca es el “chacchado”. Sin embargo también las usan como

“lubricante” para la interacción social, como medicina, instrumento para adivinar el futuro

y diagnosticar enfermedades.19, 20

___________________________ 17. BORGHELLI, R.: Revista de la Asociación Odontológica Argentina. 18. BURCHARD, R.: la masticación de la coca. América Indígena. 19. TERRAN, M. y SANDAGORDA, A.: Aspectos socioculturales del consumo de la coca. 20. CARTER, W.; MAMANI, M. y PARKENSON, P.: Coca en Bolivia. Universidad de Florida. Miami.

15

2.2.1.2 Botánica:

Erythroxylum (Erythroxylaceae) es un género de 250 especies que se hallan distribuidos en

las regiones tropicales de Sudamérica. No obstante que la mayoría de las especies contiene

alcaloides relacionados con la cocaína, Erythroxylum Lambran coca y Erythroxylum

Novogranatense son las especies más conocidas y extensamente cultivadas en el Perú.18, 21

De acuerdo al lugar de su probable procedencia, la coca peruana es separada en dos

variedades:

1. Variedad de Huanuco o boliviana: Hojas anchas y gruesas, color verde oscuro,

sabor amargo, con alto porcentaje de cocaína. Derivada de Erythroxylum lambran.

Coca (Anexo 2), es cultivada en los valles tropicales de las faldas occidentales de

los Andes (desde Ecuador hasta Bolivia). Sus hojas son oblongas, elípticas,

grandes, anchas, gruesas y de color verde oscuro. Es la más importante por su

contenido promedio de alcaloide, que presenta el más alto de todas las especies

1.1%.22

2. Variedad de Trujillo: Hojas pequeñas y delgadas, color verde claro, sabor dulce y

aromático. Derivada de Erythroxylum Novogranatense (Anexo 3), cultivada en

áreas secas de Colombia y la variedad truxillense, cultivada en el norte del Perú, su

contenido promedio de cocaína es de 0.56%. Esta coca es de gran comercialización

por el agradable sabor se sus hojas debido a su alto contenido de ácidos grasos

volátiles que son usados como saborizantes en la industria de bebidas gaseosas.22

_____________________________ 18. BURCHARD, R.: Una nueva perspectiva sobre la masticación de la coca. Instituto Indigenista Interamericano. 21. MACHADO, E.: El Género Erythroxylum en el Perú. 22. MACHADO GARZOLA, EDGARDO: “El género Erythroxylum en el Perú”.

16

2.2.1.3 Efectos:

Sobre el Organismo:

Los efectos del hábito de la masticación de la coca sobre el individuo se deben

principalmente a la dosis de alcaloides que ellos ingieren. Se calcula que extraen un

promedio de 86% de los alcaloides y que el 80% de los alcaloides es cocaína, el efecto del

resto de los alcaloides (menores) no puede ir más allá de un planeamiento teórico, pues no

existen estudios farmacológicos adecuados.23, 25

Estos efectos son de diversa índole, pero entre ellos destacan los de carácter fisiológico y

psicológico, tanto agudos como crónicos. Las manifestaciones fisiológicas agudas se

caracterizan por taquicardia, ligero aumento de presión arterial y de la temperatura

corporal, alteraciones respiratorias, aumento de resistencia a la fatiga, entre otros. En

cuanto a las manifestaciones fisiológicas de carácter crónico, su delimitación se ve

obstaculizada por el alcoholismo, la deficiente alimentación y en general por las

desfavorables condiciones higiénicas en que viven los chacchadores, pero generalmente se

asocia a malnutrición, hepatomegalia, linfadenopatias, deficiencias visuales, etc.

Respecto a las alteraciones psicológicas, como de la personalidad, se hicieron diversos

estudios los cuales se contradicen entre sí, además en algunos ellos se usaron técnicas que

ahora no pueden aceptarse como válidas ni fidedignas, por lo tanto tendríamos que esperar

nuevos trabajos acerca del efecto del hábito sobre el estatus mental de los individuos que lo

practican.24, 25, 26

______________________ 23. CABIESES, F.: Apuntes de medicina tradicional. 24. CABIESES, F.: Aspectos etnológicos de la coca y la cocaína. Cocaína 25. DOMIC, Z.: Revisión crítica bibliográfica y consideraciones generales acerca del masticado de coca. 26. ZAPATA O., V.: El problema de la masticación de la coca en el Perú.

17

Sobre la Cavidad Oral:

La mucosa oral, es una de las estructuras de nuestro cuerpo que constantemente está

expuesta a substancias extrañas dependiendo de muchos factores, entre ellos los hábitos de

cada persona, de allí que sustancias como el tabaco, alcohol, café, etc. Han sido motivo de

diversas investigaciones sobre el efecto de dichas sustancias sobre la mucosa oral, en el

caso de la masticación de la hoja de coca y su efecto sobre las estructuras orales, los

estudios son limitados.

Sobre la Mucosa Oral:

El chacchador crónico mantiene el bolo de coca, durante un tiempo promedio de 6 horas

diarias, habiéndose sugerido que la acción irritante y/o friccional de estas sustancias,

causan a largo plazo, alteraciones en la mucosa oral 28, tales como zonas blanquecinas,

rugosas, agrietadas, paraqueratosis, acantosis, hiperqueratosis, leucoedema y leucoplasia.17,

27, 28

Sobre los Dientes y Periodonto:

Según la mayoría de estudios realizados, el desgaste dentario y la enfermedad periodontal

tienden a incrementarse con el hábito del chacchado. Se cree que la primera de ellas es

causada tanto por efectos físicos (abrasión) como químicos (erosión) y la segunda por el

contacto de las sustancias usadas en el chacchado con las estructuras de soporte dentario,

las cuales son debilitadas.1, 3 Pero ninguno de estos estudios tiene un sustento científico con

respecto a la relación entre los componentes de la hoja de coca y la incidencia a caries.

________________________ 1. GOICOCHEA I., A.: Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a la masticación de hojas de coca 3. UNGARO, M.: Patología oral en masticadores de hojas de coca. 17. BORGHELLI, R.: Lesiones de la mucosa bucal por el uso de hojas de coca 27. HAMER, J. E : The effect of coca leaf chewing on de buccal mucosa of Aymara and Quechua Indians in Bolivia. 28. BERNAL, J.: Odontoestomatología y Precancerosis oral.

18

2.2.1.4 Composición Química de la Coca:

La hoja de coca (anexo 04, 05, 06), depende de factores intrínsecos y extrínsecos. Entre los

factores extrínsecos, se tiene a la ubicación geográfica, la forma en que ha sido cultivada la

planta y el medio ambiente en el que se desarrolla la especie; como intrínsecos tenemos la

edad de la especie vegetal. La hoja de coca también presenta en su composición química:

Aceites esenciales y son los que le dan a las hoja de coca su aroma especial.10

Propiedades Nutricionales de la Hoja de Coca: Gracias a la investigación realizada por

la Universidad de Harvard, en 1975, titulada “Valor nutricional de la hoja de coca”, se ha

probado que la masticación diaria de 100 gramos de hojas de coca, satisface la ración

alimentaría recomendada tanto para el hombre para la mujer. Su contenido en vitaminas y

determinados oligoelementos hacen que al mismo tiempo el mate de coca constituya un

complemento nutritivo de la dieta diaria. Estos mismos estudios de la Universidad de

Harvard sostienen que en 100 gramos de coca se pueden tener casi dos gramos de potasio

que son necesarios para el equilibrio del corazón y se le atribuyen además propiedades

adelgazantes. Sabiendo que estos mates son tan ricas en estos nutrientes, se convierten en

alimento y medicina. La concentración de cocaína en la hoja es muy baja, según

investigaciones realizadas por médicos farmacólogos de la Universidad de Caldas, y por lo

tanto, ingerida en forma natural, no produce toxicidad ni genera dependencia. Actúa como

estimulante leve, mejora la atención y la coordinación de ideas. ___________________________ 10. CAM ALBUJAR, O. y VILLANUEVA VÍLCHEZ, P. Acción Inhibitoria in vitro del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de Erythroxylumnovogranatense (Morris) var. truxillense (Rusby) frente a bacterias Gram (-) y Gram (+). Tesis de bachiller para Químico farmacéutico UNMSM. Lima, 1996

19

2.2.2 CLORHEXIDINA (Bucoxidina 0.12%)

INTRODUCCIÓN

La clorhexidina fue desarrollada en la década de los 40 por Imperial Chemical Industries

en Inglaterra por científicos que realizaban un estudio sobre la malaria. En ese momento

los investigadores fueron capaces de desarrollar un grupo de compuestos denominados

polibiguanidas, que demostraron tener un amplio espectro antibacteriano y salió al

mercado en 1954 como antiséptico para heridas de la piel. Posteriormente comenzó a

usarse en medicina y cirugía tanto para el paciente como para el cirujano. En odontología

se utilizó inicialmente para desinfección de la boca y endodoncia.29, 30

2.2.2.1 Concepto:

La clorhexidina es un potente antiséptico del grupo de las biguanidas que actúa eficaz y

rápidamente como bactericidas sobre microorganismos Gram. (+) y (-) 31 ,pero poco eficaz

sobre bacterias acido resistentes hongos o virus. se utiliza para enjuagues bucales en el

tratamiento de la gingivitis y de la enfermedad periodontal y tópicamente en la preparación

de la piel del paciente antes de una operación quirúrgica, lavado de heridas, y tratamiento

del acné vulgar. Otros usos de la clorhexidina incluyen la profilaxis y el tratamiento de las

infecciones de boca, la estomatitis, la estomatitis ulcerativa y la gingivitis aguda ulcerativa

necrotizante. ________________________ 29. BASCONES MARTÍNEZ A. Antisépticos en el tratamiento de la enfermedad periodontal. 30. MARISOL BETANCOURTH, Microorganismos inusuales en surcos y bolsas periodontales. 31. HERNÁN PÉREZ TORRES (2005) Farmacología Y Terapéutica Odontológica..

20

2.2.2.2 Composición:

Este compuesto es una base fuerte dicatiónica a pH superior a 3,5 con dos cargas positivas

en cada extremo del puente de hexametileno. Es esta naturaleza dicatiónica la que la hace

extremadamente interactiva con los aniones, lo que es relevante para su eficacia, seguridad,

efectos secundarios locales y dificultad para formularla en productos.32

Cada 100 ml de solución contiene:

Clorhexidina gluconato……………...0.12g.

Excipientes csp……………………...100 ml.

2.2.2.3 Mecanismo de Acción:

La clorhexidina desestabiliza y penetra las membranas de las células bacterianas. La

clorhexidina precipita el citoplasma y interfiere con la función de la membrana, inhibiendo

la utilización de oxígeno, lo que ocasiona una disminución de los niveles de ATP y la

muerte celular. En las bacterias Gram-negativas, la clorhexidina afecta la membrana

exterior permitiendo la liberación de las enzimas periplasmáticas. La membrana interna de

estos microorganismos no es destruída, pero sí que es impedida la absorción de pequeñas

moléculas. A bajas concentraciones, la clorhexidina exhibe un efecto bacteriostático,

mientras que a altas concentraciones es bactericida. Los siguientes microorganismos

muestran una alta susceptibilidad a la clorhexidina: Estreptococos, estafilococos, Cándida

albicans, Escherichia coli, salmonellas, y bacterias anaeróbicas.32, 33

________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina,

21

2.2.2.4 Reacciones Adversas

Ocasionalmente se puede presentar alteración transitoria en el gusto, efecto cuya

incidencia es reducida por la baja concentración de principio activo.33

2.2.2.5 Concentraciones:

La clorhexidina suele presentarse en dos concentraciones, al 0,12% y al 0,2%, 0.4%.32, 33

2.2.2.6 Indicaciones y Dosificación:

Colutorios: la clorhexidina para enjuagues orales se comercializa en envases que

contienen un vasito o medida de unos 15 ml. Esta es la dosis que se debe mantener en la

boca durante aproximadamente 1 minuto. 34

Clorhexidina para aplicación tópica: utilizar una gasa o algodón para tratar el área

deseada. Evitar el contacto con los ojos, los oídos y la boca. Si esto ocurriera, enjuagar

inmediatamente con agua abundante.

La clorhexidina se debe mantener fuera de la luz, evitando temperaturas extremas. 33, 34

2.2.2.7 Contraindicaciones:

Hipersensibilidad al gluconato de clorhexidina.33

2.2.2.8 Interacciones

Aunque la clorhexidina se absorbe muy poco por el tracto digestivo puede haber una

interacción potencial con el disulfiram, debido al contenido en alcohol de los enjuagues

orales. La ingestión de alcohol en los pacientes tratados con disulfiram puede ocasionar

serios efectos secundarios. Los pacientes tratados simultáneamente con metronidazol y

clorhexidina pueden experimentar una reacción similar a la del disulfiram.33

________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina. 34. DRA. MILEYDI. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en; la estomatología.

22

2.2.3 STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS MUTANS. 2.2.3.1 Generalidades: Ecología de la Boca

La boca alberga innumerables microorganismos en un ecosistema de complejidad

considerable que todavía no ha sido investigado en su totalidad y está lejos de ser

comprendido en toda su magnitud. Hasta hace muy poco, la boca se consideraba como un

hábitat simple para los microorganismos pero en la actualidad se reconoce que los dientes,

el surco gingival, la lengua, otras superficies mucosas y la saliva, todos forman habitáis o

sitios diferentes donde los microorganismos se multiplican. Cada zona o hábitat contiene

su propia población característica, a menudo, con muchas especies microbianas distintas,

las cuales pueden complementarse o competir con otras en la misma población, por tanto,

la flora bucal es una entidad dinámica afectada por numerosos cambios durante la vida del

huésped.35

_______________________ 35. JOSE LIÉBANA UREÑA. Microbiología Oral.

23

2.2.3.2 Staphylococcus Aureus

Los estafilococos son células esféricas Gram positivas, generalmente dispuestas en racimos

irregulares parecidos a racimos de uvas; crecen con rapidez sobre muchos tipos de medios

y son metabolitamente activos, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían

desde el color blanco hasta amarillo intenso. Algunos son miembros de la flora normal de

la piel y de las mucosas de los humanos; otros causan supuración, formación de abscesos,

varias infecciones piógenas e incluso septicemia mortal. Los estafilococos patógenos casi

siempre causan hemólisis y coagulación del plasma; y producen varias encimas y toxinas

extracelulares.37

El tipo más común de envenenamiento alimentario es causado por una enterotoxina

termoestable de los estafilococos. Estos desarrollan con rapidez resistencia a muchos

antimicrobianos y presentan problemas terapéuticos difíciles.37

El genero staphylococcus contiene al menos 30 especies. Las tres de importancia clínica

son staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis, staphylococcus saprophyticus. El

primero es coagulasa – positivo que lo diferencia de las otras especies, el S. aureus es un

patógeno importante para los humanos. Casi toda persona padece algún tipo de infección

por S. aureus durante su vida, que varia en gravedad desde intoxicación alimentaría o

infecciones cutáneas menores hasta infecciones graves potencialmente mortales.37

1. Características del Género:

Los estafilococos son células esféricas de casi 0.5 a 1.5 um de diámetro 36, dispuestas en

grupos irregulares, en líquidos de cultivos también se observan cocos únicos en parejas,

tétradas y cadenas. Los cocos jóvenes son fuertemente Gram positivos; después de

envejecer muchas células se hacen Gram negativas 37. Los cocos están desprovistos de

motibilidad y no forman esporas. Bajo la influencia de fármacos los estafilococos sufren

lisis 37. En la actualidad este género comprende 35 especies o más y junto con otros

géneros integra la familia de micrococcaceae 36. Viven de manera libre en el ambiente y

forman paquetes regulares de 4 u 8 cocos, sus colonias pueden ser de color amarillo, rojo o

naranja 37.

__________________________________ 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.

24

2. Cultivo:

Los estafilococos crecen con facilidad sobre casi todos los medios bacteriológicos en

condiciones aeróbicas o microaerofilicas. Crecen con mayor rapidez a 37º C, pero el

pigmento se forma mejor a temperatura ambiente (20 a 25 ºC), sobre medios sólidos las

colonias son redondas, lisas prominentes o brillantes. El S. aureus comúnmente forma

colonias de color gris o amarillo dorado intenso 37.

3. Características de Crecimiento:

Los estafilococos producen catalasa que los diferencia de los estreptococos, fermentan

latentemente muchos carbohidratos y producen acido láctico pero no gas. Los estafilococos

son relativamente resistentes a la desecación al calor (resisten 50º C durante 30 min.) y al

cloruro de sodio al 9%, pero se inhiben con facilidad mediante ciertas sustancias químicas,

por ejemplo, hexaclorofeno al 3%. Los estafilococos muestran resistencia a muchos

fármacos por la producción de beta lactamasa baja el control de un plasmido y confiere al

microorganismo resistencia a muchas penicilinas 37.

Composición Antigénica y Factores de Virulencia:

Los estafilococos poseen un antígeno específico de especie, el polisacárido A, unido al

mucopeptido, y por lo tanto, presenta en la pared celular. En dicha pared también se

encuentra la proteína A, que se une a la región Fc. De la IgG, lo que le da actividad

antifagocitica.36

El peptidoglucano de la pared, que actúa como una endotoxina, atrae leucocitos PMN y

activa la lisozima.36

Los ácidos teitoicos favorecen la adhesión, al igual que la capa del limo o slime,

constituida por hidratos de carbono y proteínas extracelulares. Esta capa facilita la

adhesión e inhibe la quimiotaxis y la fagocitosis.36

___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets.

25

Encimas y Toxinas

Catalasa: Los estafilococos producen catalasa, que convierte el peroxido de hidrógeno en

agua y oxigeno. La prueba de catalasa pude diferenciar los estafilococos que positivos, de

los estreptococos, que son negativos.37

Coagulasa y Factor de Agrupamiento: Los S. aureus produce coagulasa, una proteína

parecida a enzima que coagula. La coagulasa de une la con protronbina; juntas se vuelven

activas desde el punto de vista enzimático e inician la polimerización de fibrina. La

coagulasa puede depositar fibrina sobre la superficie de los estafilococos, alterando talvez

su ingestión por células fagocíticas o su destrucción dentro de dichas células. Se considera

que la producción de coagulasa es sinónimo de patógeno potencialmente invasor.37

Otras Enzimas: Otras enzimas producidas por los estafilococos incluyen una

hialuronidasa, o factor de propagación; una estafilocinasa que produce fibrinolisis, pero

actúa de manera mucho mas lenta en comparación con la estreptocinasa, la proteinasa, la

lipasas, y la beta lactamasa.37

Exotoxinas: La hemolisina estafilococica o toxinas alfa, beta, Y, O, se diferencia por los

tipos de eritrocitos que lisan. Estas toxinas también actúan sobre otras células 36:

• Toxina alfa: daña el músculo liso, las células de la piel, los macrófagos y las

plaquetas.

• Toxina beta: degrada esfingomielina.

• Toxina y: disuelve los eritrocitos de humanos y animales.

• Toxinas o: toxina para muchas células polimorfonucleares, macrófagos, linfocitos y

plaquetas.

Leucocidina: esta toxina posee dos compuestos (F y S) que actuan en forma sinérgica para

dañar PMN y macrófagos; si bien su mecanismo de acción no es muy claro, aparentemente

parecería que consiste en alterar la permeabilidad de la membrana celular.36


26

Exfoliatina o Toxina Epidermolitica (Exotoxina): Hay dos tipos A y B; son codificadas

por un plasmido y producen una lesión cutánea conocida como dermatitis aguda

exfoliativa.36

Toxina del Síndrome de Shock Toxico (TSSS-I) o Toxina Pirogenica: Se trata de una

toxina semejante a las que producen los estreptococos y se la considera un súper antígeno.

Puede causar una erupción escarlatiniforme. No se la encuentra en todos los casos de

shock séptico estafilococico (SSS).36

CUADROS CLINICOS 36

• Infecciones cutáneas: foliculitis, orzuela, impétigo

• Síndrome del shock toxico: Ataca a mujer en la etapa de menstruación

• Neumonía

• Osteomielitis

• Infecciones de heridas

• Enteritis o enterocolitis

• Infecciones odontológicas: Se han encontrado infecciones endodonticas, y algunos

abscesos periapicales. La osteomielitis de huesos maxilares, parotiditis,

manifestaciones gingivales, periodontitis y estomatitis.


27

2.2.3.3 Streptococcus Mutans

Los estreptococos son bacterias esféricas Gram positivas que por lo general forman pares

de cadenas durante su crecimiento. Se distribuyen ampliamente en la naturaleza. Algunos

son miembros de la flora humana normal; otros se asocian con enfermedades humanas

importantes atribuibles en parte a infección por estreptococos y en parte a sensibilización a

ellos. Elaboran varias sustancias extracelulares y enzimas.37

Los estreptococos son un grupo heterogéneo de bacterias y no hay un sistema apropiado

para clasificarlos.37

Morfología e Identificación

1. Características del Género

Los estreptococos son microorganismos sumamente difundidos y, la cavidad bucal alberga

gran número de especies de este género 36. Los estreptococos tienen formas esféricas u

ovoides y se disponen en cadenas, se agrupan en cadenas de longitud variable. Cada uno de

los elementos aisladamente tiene un diámetro que oscila entre 0.6 y 1 a 2 um 36. Los

miembros de esta cadena con frecuencia presentan una aspecto de diplococos. Los

estreptococos son Gram positivos, sin embargo, conforme un cultivo envejece y las

bacterias mueren, pierden su Gram positividad y se tornan Gram negativos; esto puede

ocurrir después de incubación durante una noche.37

Algunos estreptococos elaboran un polisacárido capsular. La mayor parte de las cepas de

los grupos A, B y C producen capsulas compuestos de acido hialuronico. Las capsulas son

mas notables es los cultivos jóvenes. Impiden la fagocitosis. La pared de la célula

estreptocócica contiene proteínas (antígenos M, T, R), carbohidratos (específicos del

grupo) y peptidoglucanos. Los Pili semejantes a vellosidades se prolongan a través de la

capsula de los estreptococos del grupo A. los Pili contienen parte proteína M y están

cubiertos de acido lipoteicoico. Este último es importante para la adhesión de los

estreptococos a otras células epiteliales.37


28

2. Clasificación de los Estreptococos:

Las clasificaciones que se han propuesto para estas bacterias son innumerables y se basan

en sus distintas características; las más actuales tienen encuesta la biología molecular.37

Según la doctora lancefield (1933), ubico a estas bacterias en grupos identificados con

letras. Estas son 37:

Grupo A: S. pyogenes. Beta hemolítico

Grupo B: S. agalactia. Beta hemolítico.

Grupo D: enterococcus faecalis (y otros enterococos). Alfa hemolítico y no hemolítico.

Grupo C, G: S. dysgalalactiae. Alfa y beta hemolítico.

Grupo D: S. Bovis. No hemolíticos

Grupo F (A, C, G) y no tipicables: S. anginosus (S. intermedius, constellatus, millen).

Alfa y beta hemolíticos y no hemolíticos

No tipificados: S. viridans (S. mutans). Alfa hemolíticos y no hemolíticos.

Sin grupo: S. pneumoniae. Alfa hemolíticos

Sin grupo: peptostreptococcus (muchas especies). Alfa hemolíticos y no hemolíticos.

Factores de Virulencia

Los mayores factores de virulencia son los anfígenos de superficie. La llamada proteína M

se comporta como un factor antifagicitico (hay mas de 80 tipos de proteína M), esta

proteína contribuye a la adhesión y, por lo tanto a la colonización.36

Existen dos proteínas útiles para la identificación, la T (tripsina –resistente) y la R,

pero hasta el momento no a demostrado que confiera virulencia al microorganismo.36

Las fimbrias de los estreptococos, que desempeñan un papel en la adherencia, están

recubiertas por proteína M y acido teitoico. 36

La secreción de una capsula de acido hialuronico les confiere cierto poder

antifagocitico.36


29

El acido lipoteitoico también actúa como un factor de adherencia y se une la fibronectina

de las células del hospedero. Se ha detectado una proteína F estreptocócica de unión a la

fibronectina que genera una unión mas firme que la del acido lipoteitoico.36

Enzimas y Toxinas

Que no son muy específicas de cada una. Casi todas producen 37:

• Exotoxina Pirogenica Estreptocócica o Toxina Eritrogenica: Esta toxina que es

excretada por la cepas que se encuentran en estado lisogénico, es responsable

citotoxicidad, erupción escarlatina y pirogenicidad, inmunosupresion y alteraciones

de la permeabilidad de las células de la corteza cerebral.36

• Estreptolisina O: Que se llama así por su labilidad frente al oxigeno y que es

segregado por los estreptococos del grupo A y por algunos del grupo C y G,

conduce ala lisis de os glóbulos rojos, y es citotóxica para los neutrofilos, las

plaquetas y las células del tejido cardiaco. Se inactiva con el oxigeno, de ahí la letra

que lo identifica.36

• Estreptolisina S: Que debe su nombre a que la producen algunas cepas en

presencia de suero, sirve para identificar a los estreptococos en agrar sangre, tiene

acción lítica para los leucocitos pero no es un antígeno.36

• Estreptocinasa (Fibrinolisina): Es una proteína natural antigénica que secretan los

estreptococos del grupo A, C y G. esta proteína digiere la fibrina y así impide la

formación de una barrera de esta sustancia por lo que favorece la diseminación.36

• Desoxirribonucleasa: Hay 4 tipos de esta enzima presentes en los de los grupos A,

C y G. las desoxirribunucleasas hidrolizan ácidos nucleicos y nucleoproteínas que

utilizan como nutrientes. Al reducir la viscosidad del pus, facilitan la diseminación

de la infección.36


30

• Hialuronidasa: Que es producida por los grupos A, B, C y G, favorece la

disfunción en los tejidos y por eso también se le conoce como factor de

disfunción.36

• NADasa: Se relaciona al efecto leucotoxico y es producido por los estreptococos

del grupo A, C y G.36

• Lipoproteinaza o Factor de Opacidad del Suero: Esta enzima es característica

del grupo A tipo M; la lipoproteinaza esta relacionada con la proteína M, es

antigénica y sirve para identificar a los estreptococos. Los estreptococos del grupo

A también pueden segregar C5a peptidasa; esta enzima inactiva al componente C5a

del complemento que impide que se una a los PMN y altera la efectividad de este

elemento de defensa.36

Fuentes De Infección

Boca (presente en la saliva), colonizan el tracto gastrointestinal, la vagina, el aparato

respiratorio superior.36

CUADROS CLÍNICOS 36

• Erisipela (puede conllevar a una celulitis de la zona)

• Fiebre Puerperal (posparto)

• Sepsis (en heridas y politraumatizados)

• Faringitis

• Impétigo o Piodermia (en niños)

• Facitis Necrotizante

• Miositis

• Sd. de Shock Estreptocócico (Px. HIV)

___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”.

31

Enfermedades Pos-Estreptocócicas: 36

• Fiebre reumática

• Glomerulonefritis

En Odontología: 36

• Lengua afranbuesada

• Palidez peribucal

• Abscesos

• Caries dental

___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”.

32

2.4 DEFINICION DE TERMINOS

o Microorganismos: También llamado microbio, es un ser vivo que sólo puede

visualizarse con el microscopio.42

o Antibacteriano: Relativo a una sustancia que destruye las bacterias o inhibe su

crecimiento y reproducción.42

o Bactericida: Que mata las bacterias./ Poder bactericida: La más débil

concentración de una sustancia capaz de provocar la destrucción definitiva de la

vitalidad de un microbio.42

o Bacteriostático: Concentración mínima de una sustancia capaz de impedir el

desarrollo de una bacteria sin llegar a destruirla.42

o Grampositivo: Que conservan el color violeta de la tinción que se utiliza en el

método de Gram. para teñir microorganismos.42

o Gramnegativo: que posee la coloración rosada de la contra tinción que se utiliza

en el método de Gram. para teñir microorganismos.42

o Carbohidrato: Grupo de compuestos orgánicos entre los que se hallan la glucosa,

la fructuosa, el almidón, la celulosa y la goma.42

o Pigmentos: Cualquier material colorante orgánico producido en el organismo,

como la melanina.42

o Enzimas: Proteína producida por las células vivas que cataliza las reacciones

químicas en la materia orgánica.42

o Toxinas: Veneno o toxico, generalmente producido por una planta o

microorganismo.42

33

o Coagulasa: Enzima producida por bacterias en especial staphylococcus aureus, que

desencadena la coagulación.42

o Lisis: Sufijo que significa degradación o destrucción.42

o Aeróbio: Microorganismo que vive y crece en presencia de oxigeno libre. Los

aerobios se dividen en aerobios facultativos y aerobios obligados.42

o Proteína: Compuesto nitrogenado natural de carácter organico complejo,

constituido por muchos aminoácidos.42

o IgG.: Uno de los 5 tipos de anticuerpos hormonales producido por el organismo. Es

una proteína especializada que se sintetiza como respuesta a la invasión de

bacterias, hongos y virus.42

o Quimiotaxis: respuesta que supone un movimiento positivo, hacia un estimulo

químico, o negativo alejándose del mismo.42

o Fagocitosis: Proceso por el cual determinadas células engullen y desechan

microorganismos y detritus celulares.42

o Protrombina: Proteína plasmática precursora de la trombina. La transformación de

protrombina en trombina para la formación de coagulo.42

o Fibrina: Proteina filamentosa insoluble que proporciona su carácter semisólido al

coagulo sanguíneo y esta producida por la acción de la trombina sobre el

fibrinogeno en el proceso de la coagulación.42

o Patógeno: Cualquier microorganismo capaz de producir una enfermedad.42

o Virulencia: capacidad de un microorganismo para producir una enfermedad.42

34

o Hialuronidasa: Enzima que hidroliza el acido hialuronico.42

o Eficacia: Es la capacidad de lograr un efecto deseado o esperado.42

o Necrotizante: Muerte de una porción de tejido consecutiva a enfermedad o

lesión.42

o Interacción: Modificación del efecto de un fármaco que se produce cuando este se

administra con otro. El efecto puede consistir en el aumento o disminución de la

acción42.

35

2.5 HIPÓTESIS:

Hipótesis de Investigación

La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca es mayor que la eficacia de la

clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.

Hipótesis Nula

La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250

ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, no es mayor que la eficacia de la


Hipótesis Alterna

La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250

ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, es igual que la eficacia de la


2.6 IDENTIFICACION DE VARIABLES

2.6.1 Variables Independiente

Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina 0.12%.

2.6.2 Variable Dependiente

Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca.

36

2.6 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES

Variable Definición Indicadores Escala Categoría

Independiente

Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca

y clorhexidina.

Cantidad del extracto

alcohólico de la hoja de coca

contenidos en un volumen

determinado de agua destilada y

alcohol rectificado al 80º

y clorhexidina al 0.12%

250µg/ 20µl.

Numérica

De Razón

500µg/ 20µl.

Numérica

De Razón

1000µg/ 20µl.

Numérica

De Razón

1500µg/ 20µl.

Numérica

De Razón

0.12% Numérica

De Razón

Dependiente

Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca.

Es la inhibición en el desarrollo o crecimiento

de las bacterias debido a la

presencia del extracto

alcohólico de Hoja de coca.

8 mm. resistencia

11 mm. sensible

Numérica

De Razón

37

CAPITULO III

METODOLOGIA

3.1 TIPO DE ESTUDIO

La presente investigación se realizó con un diseño de tipo experimental y longitudinal.

3.1.1 Tipo De Investigación

Según el propósito: Aplicativa

Según la ocurrencia de hechos: prospectivo

Según el periodo y secuencia: longitudinal

Según el análisis y la secuencia: experimental

Según la participación del investigador: Participativo

3.1.2 Método

Comparativo

38

3.1.3 Nivel De Estudio

Experimental

3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA

3.2.1 Población

20 Cepas staphylococcus aureus y 20 cepas streptococcus mutans.de diferentes espécimen

clínicos, adquiridos del banco de bacterias del laboratorio del H.R.H.V.M.

3.2.2 Muestra

Muestreo no probabilístico, intencional por conveniencia (al azar).

CRITERIOS DE INCLUSION Y EXCLUSION

• Criterios de inclusión:

Cepas que pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

• Criterios de exclusión:

Cepas que no pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

Unidad maestral:

• Cepas de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

Unidad de análisis:

• Cultivos bacterianos de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

Diseño experimental

G1 O1 X1 O2

G2 O3 X2 O4

G3 O5 X3 O6

G4 O17 X4 O8

G5 O9 X5 O10

39

G1 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 250µg/ 20µl de extracto alcohólico de

hoja de coca.


hoja de coca.


hoja de coca.


hoja de coca.

G5 muestra de estudio recibirá tratamiento con 0.12% de clorhexidina.

3.3 TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DE DATOS

INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS

• Protocolo de trabajo

• Guía de observación. Para detallar la medición de halos bajo la inspección clínica

Procedimiento para la extracción de los principios activos totales

El medio de extracción utilizado es el método de maceración alcohólica. En un envase de

vidrio estéril (2 litros de capacidad) forrado con papel aluminio, se coloco en su interior ¼

kg de hojas de erythroxylum lambran (coca) previamente cortada, luego se añadio el

alcohol rectificado al 80º, se dejo reposar por 7 días (se agito la botella 3 veces al dia).

Luego se filtro el macerado de hoja de coca a través de un papel estéril y el líquido

obtenido se evaporo en un horno al vacio en 40º, para poder obtener los principios activos

totales de la hoja de erythroxylum lambran (coca de Huanuco).

El insumo de hoja de coca obtenido se diluyó en agua destilada, luego fue impregnado en

discos de papel filtro con las diferentes concentraciones, para simular discos de

sensibilidad. “Ejemplo: 250µg (microgramos), diluido en 20µl (microlitros) de agua

destilada

40

Técnica de Observación Directa.

• Examen De Laboratorio

Con las cepas proporcionadas por el del laboratorio del H.R.H.V.M., se procedio

a realizar el antibiograma en el agar Muller Hinton en el cual se coloco los discos

de sensibilidad preparados con las distintas concentraciones del extracto alcohólico

de la hoja de coca y con la clorhexidina. Los que se incubaron a 37°C por 24 y 48

horas.

Medición del halo inhibición

Las muestras son evaluadas en las primeras, 24 horas, 48 horas, periodo en cual se

realiza las mediciones correctamente estipuladas de los halos de inhibición con una

regla flexible milimetrada para determinar con una escala categórica de sensible

halo > 11 mm , resistente halo <8mm.

3.4 PLAN DE TABULACIÓN Y ANÁLISIS DE DATOS

Procesamiento de Datos

El proceso de recolección de datos se realizo mediante la aplicación una guía de

observación de campo. El procesamiento de datos se realizo de manera automatizada

empleando una computadora utilizando el siguiente software:

• Procesador de texto Microsoft Word XP.

• Programa de Análisis Estadístico SPSS 15.

Análisis de Datos

Prueba U de Mann-Whitney (prueba no paramétrica)

41

CAPITULO IV

RESULTADOS

4.1 RESULTADOS DE LAS OBSERVACIONES

4.1.1 MUESTRA

La muestra de estudio lo constituye 20 cepas de staphylococcus aureus y 20 cepas de

streptococcus mutans de diferentes especimenes clínicos, adquiridos del Banco de

bacterias del Laboratorio del Hospitar Regional Hermilio Valdizan Medrano de Huánuco.

4.1.2 RESULTADOS

Las observaciones se realizaron en cada una de las muestras indicadas anteriormente. El

tratamiento consistió en la aplicación de dos diferentes concentraciones del extracto seco

obtenido por extracción alcoholica; el cual luego se diluyó en agua destilada en las

siguientes concentraciones: 1000 µg/20 µl y 1500 µg/20 µl. Comparándolo con un

antibiótico convencional como clorhexidina al 0.12 %; observándose el tamaño de los

halos como medida de la inhibición bacteriana ante el extracto de coca y el del antibiótico.

Los resultados se presentan en las tablas 1 y 2 respectívamente

42

Tabla 1: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre staphylococcus Aureus.

ANTIBIOGRAMA Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja de Coca

Clorhexidina

Staphylococcus Aureus

250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12%

Cultivo #01 24 horas - - 10mm 12mm 15mm Cultivo #01 48 horas - - 10mm 13mm 15mm Cultivo #02 24 horas - 10mm 10mm 12mm 20mm Cultivo #02 48 horas - 10mm 11mm 12mm 20mm Cultivo #03 24 horas - - 11mm 12mm 23mm Cultivo #03 48 horas - 8mm 11mm 12mm 23mm Cultivo #04 24 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #04 48 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #05 24 horas - 7mm 13mm 18mm 15mm Cultivo #05 48 horas - 7mm 15mm 18mm 15mm Cultivo #06 24 horas - - 10mm 13mm 24mm Cultivo #06 48 horas - - 11mm 13mm 24mmCultivo #07 24 horas - - 10mm 15mm 20mm Cultivo #07 48 horas - - 10mm 15mm 20mm Cultivo #08 24 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #08 48 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #09 24 horas - 8mm 11mm 13mm 17mm Cultivo #09 48 horas - 8mm 11mm 13mm 17mm Cultivo #10 24 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #10 48 horas - - 11mm 12mm 15mm Cultivo #11 24 horas - - 10mm 15mm 18mm Cultivo #11 48 horas - - 10mm 15mm 18mm Cultivo #12 24 horas - - 12mm 14mm 15mm Cultivo #12 48 horas - - 13mm 14mm 15mm Cultivo #13 24 horas - - 10mm 12mm 20mm Cultivo #13 48 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #14 24 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #14 48 horas - - 11mm 12mm 20mm Cultivo #15 24 horas - 10mm 15mm 15mm 18mm Cultivo #15 48 horas - 10mm 15mm 15mm 18mm Cultivo #16 24 horas - 8mm 14mm 17mm 22mm Cultivo #16 48 horas - 8mm 14mm 17mm 22mm Cultivo #17 24 horas - - 10mm 13mm 20mm Cultivo #17 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #18 24 horas - - 10mm 12mm 25mm Cultivo #18 48 horas - - 10mm 12mm 25mm Cultivo #19 24 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #19 48 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #20 24 horas - - 14mm 15mm 25mm Cultivo #20 48 horas - - 15mm 15mm 25mm

43

Tabla 2: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre Streptococcus Mutans

ANTIBIOGRAMA Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja de Coca

Clorhexidina

Streptococcus Mutans 250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12% Cultivo #01 24 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #01 48 horas - - 15mm 17mm 23mm Cultivo #02 24 horas - 10mm 15mm 20mm 25mm Cultivo #02 48 horas - 10mm 15mm 20mm 25mm Cultivo #03 24 horas - - 10mm 20mm 15mm Cultivo #03 48 horas - - 10mm 20mm 15mm Cultivo #04 24 horas - - 10mm 16mm 20mm Cultivo #04 48 horas - - 10mm 16mm 20mm Cultivo #05 24 horas - - 10mm 15mm 17mm Cultivo #05 48 horas - - 11mm 15mm 17mm Cultivo #06 24 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #06 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #07 24 horas - 8mm 11mm 16mm 15mm Cultivo #07 48 horas - 8mm 11mm 16mm 15mm Cultivo #08 24 horas - 8mm 10mm 15mm 17mm Cultivo #08 48 horas - 8mm 11mm 15mm 17mm Cultivo #09 24 horas - 9mm 12mm 15mm 15mm Cultivo #09 48 horas - 9mm 13mm 15mm 15mm Cultivo #10 24 horas - - 12mm 15mm 20mm Cultivo #10 48 horas - - 12mm 15mm 20mm Cultivo #11 24 horas - - 11mm 13mm 20mm Cultivo #11 48 horas - - 11mm 13mm 20mm Cultivo #12 24 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #12 48 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #13 24 horas - - 10mm 14mm 20mm Cultivo #13 48 horas - - 10mm 14mm 20mm Cultivo #14 24 horas - - 14mm 15mm 19mm Cultivo #14 48 horas - - 15mm 15mm 19mm Cultivo #15 24 horas - - 15mm 15mm 23mm Cultivo #15 48 horas - - 15mm 16mm 23mm Cultivo #16 24 horas - 10mm 12mm 16mm 20mmCultivo #16 48 horas - 10mm 12mm 16mm 20mm Cultivo #17 24 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #17 48 horas - - 12mm 14mm 20mm Cultivo #18 24 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #18 48 horas - - 13mm 15mm 25mm Cultivo #19 24 horas - 10mm 11mm 13mm 20mm Cultivo #19 48 horas - 10mm 11mm 13mm 20mm Cultivo #20 24 horas - - 15mm 18mm 22mm Cultivo #20 48 horas - - 15mm 18mm 22mm

44

4.2 PRUEBA DE HIPÓTESIS

La hipótesis de investigación plantea la eficacia antibacteriana del extracto de coca,

comparándola con un antibiótico convencional como la clorhexidina al 0.12 %, en el

tratamiento de staphylococcus Aureus y de Streptococcus Mutans.

En primer lugar vamos a probar que el tratamiento con una concentración de extracto de

coca de 1500 µg/20µl es superior al de 1000 µg/20µl. En la siguiente tabla se comparan los

datos del halo obtenido con las dos concentraciones del extracto de coca.

Tabla 3: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca sobre staphylococus aureus medido después de 24 horas

Concentración del extracto de coca Cultivo Nº 1000 µg/20 µl 1500 µg/20 µl

1 10 12 2 10 12 3 11 12 4 15 17 5 13 18 6 10 13 7 10 15 8 11 12 9 11 13 10 11 12 11 10 15 12 12 14 13 10 12 14 11 12 15 15 15 16 14 17 17 10 13 18 10 12 19 13 15 20 14 15

45

El planteamiento de nuestra hipótesis lo realizamos utilizando una prueba estadística no

paramétrica que es la U de Mann-Whitney, en previsión a la no normalidad de los datos

1. Hipótesis nula: No hay diferencias entre los dos tratamientos con el extracto de coca. Lo

planteamos matemáticamente por Ho: µ1000, 24 hr = µ1500, 24 hr.

2. HA: µ1500, 24 hr.> µ1000, 24 hr (La concentración a 1500 es superior a la de 1000)

3. α = 0.05 (nivel de significación)

4. Estadística U de Mann Whitney, se utiliza para probar la hipótesis nula de dos muestras

independientes, asumiendo que los datos no son normalmente distribuidos.

5. Utilizaremos el programa SPSS 15. Los resultados del procesamiento de los datos se dan

a continuación:

La U de Mann Whitney es el más pequeño de los valores calculado para los 2 grupos. En

este caso es de 68.5. De tablas se obtiene para n=19, m=19 y α=0.05 prueba de una cola

wα=123. Puesto que 68.5<123; se rechaza la hipótesis nula. Además el valor de Asymp.

Sig (una cola), que es la probabilidad extrema es de 0.005<0.05; por lo que también se

rechaza la hipótesis nula y se conviene que el tratamiento con una concentración de 1500

µg/20 µl, es más eficaz que con 1000 µg/20 µl.

Tabla 4: Salida del SPSS para los datos de la tabla 3

HALO U de Mann-Whitney 68.500

W de Wilcoxon 258.500Z -3.317Sig. asintót. (bilateral) .001

Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)]

.001(a)

a No corregidos para los empates.

b Variable de agrupación: CONCENT

46

La contrastación de los datos a 48 horas de tratamiento prácticamente arrojaría el mismo

resultado, ya que no se observan cambios en el halo después de 24 horas.

Por lo tanto utilizaremos la concentración de coca de 1500 µg/20 µl y tiempo de

tratamiento de 24 horas para probar la hipótesis de que es equivalente al tratamiento con

clorhexidina al 0.12 %. A continuación se presenta en las siguientes tablas el diámetro de

halo obtenido con extracto acuoso de coca versus clorhexidina al 0.12 % sobre

staphylococus aureus, así como sobre Streptococcus Mutans, medido después de 24 horas

de aplicación.

Tabla 5: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina

sobre staphylococus aureus, medido después de 24 horas

Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos

Cultivo Nº Extracto acuoso de coca, 1500 µg/20µL

Clorhexidina al 0.12 %

1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22

47

Tabla 6: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina

sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas

Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos

Cultivo Nº Extracto acuoso de coca, 1500 µg/20µL

Clorhexidina al 0.12 %

1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22

48

Gráfico 1: Histograma del diametro del halo de staphylococcus aureusaplicando clorhexidina al 0.12 %

diámetro del halo en mm

25,0022,5020,0017,5015,00

Frec

uenc

ia10

8

6

4

2

0

Media =19,90Desviación típica

=2,989N =20

La distribución de tamaños observada en el gráfico no es normal, observamos una

concentración de los diámetros entre 19 a 21 mm, los datos no son simétricos más bien

están concentrados al lado negativo de la distribución, es decir se tiene una gráfica con

asimetría negativa. Esto significa que la mayoría de tamaños alcanzados serán superiores a

19 mm en el caso de clorhexidina.

El gráfico 2 nos muestra la distribución de tamaños del halo en el caso de utilizar un

extracto de coca sobre staphylococus aureus

49

diametro del halo, mm22,0020,0018,0016,0014,0012,00

Frec

uenc

ia

10

8

6

4

2

0

Histograma


=2,003N =20

Gráfico 2: histograma del diámetro del halo de staphylococus aureus aplicando extracto de coca

Nuevamente se observa que la distribución de tamaños difiere de la normal, observándose

que la mayoría de los diámetros se concentra en tamaños que oscilan entre 14 y 16 mm;

con una concentración de datos entre 13 y 17 mm, teniendo la distribución una asimetría

positiva.

La observación de los datos nos inducen a sostener que la eficacia de la clorhexina es

superior al del extracto de coca; para probarlo utilizaremos nuevamente la prueba

estadística no paramétrica U de Mann Whitney.

1. Ho : µdiametros clorhexidina = µdiámetros coca

2. HA: µdiámetros clorhexidina> µdiámetros coca

3. Nivel de significación α= 0.05

4. Estadística de prueba: U de Mann Whitney

5. Cálculos obtenidos por el SPSS 15

50

Tabla 7: salida SPSS de la prueba estadística para staphylococus aureus

DIAMET

RO U de Mann-Whitney 53.500W de Wilcoxon 263.500Z -4.029Sig. asintót. (bilateral) .000Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] .000(a)

a No corregidos para los empates. b Variable de agrupación: CULTIVO

Siendo la significación asintótica bilateral 0.00<0.05; concluimos con un nivel de

significancia del 0.05; que la media de los diámetro obtenidos con clorhexidina es mejor

que la obtenida con extracto de coca aplicado a stapylococus aureus; lo que confirma la

distribución de los datos.

En el diagrama de cajas que se presenta a continuación se puede confirmar esta conclusión.

CULTIVOCOCACLORHEX

DIA

MET

RO

24,00

22,00

20,00

18,00

16,00

14,00

12,00

22

23

Gráfico 3: diagrama de cajas de los diámetros del halo para staphylococcus aureus

La mediana del halo para clorhexidina es de 20mm y para coca es de 15 mm; con

clorhexidina el 50 % de los datos oscila entre 18 y 22 mm y en el caso de coca los datos

51

están entre 14 y 17 mm. Nuevamente se puede confirmar la ganancia en eficacia de la

clorhexidina, pero también se debe percibir la eficacia como tratamiento aunque en menor

cuantía del extracto de coca.

En el caso del tratamiento sobre streptococcus mutans, los datos que se presentan a

continuación comparan la eficacia entre el tratamiento con clorhexidina al 0.12 % y

extracto de coca de 1500 µg/20 µl, por medición del halo en mm, donde un tamaño mayor

del halo representa mejor eficacia de tratamiento. Los datos para 24 horas después de su

aplicación son los siguientes:

Tabla 8: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas

Diametro del halo obtenido (mm)

aplicando los siguientes tratamientos Cultivo Nº Extracto acuoso de coca,

1500 µg/20µL Clorhexidina

al 0.12 % 1 17 23 2 20 25 3 20 15 4 16 20 5 15 17 6 14 20 7 16 15 8 15 17 9 15 15 10 15 20 11 13 20 12 18 22 13 14 20 14 15 19 15 15 23 16 16 20 17 14 20 18 15 25 19 13 20 20 18 22

52

Gráfico 4: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans

Aplicando extracto de coca

STRPCOC22,0021,0020,0019,0018,0017,0016,0015,0014,0013,0012,00

Frec

uenc

ia

10

8

6

4

2

0

STRPCOC


=2,003N =20

Gráfico 5: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans

Aplicando clorhexidina

STRPCLR25,0022,5020,0017,5015,00

Frec

uenc

ia

10

8

6

4

2

0

STRPCLR


=2,989N =20

53

En el gráfico de cajas podemos observar el comportamiento de los datos.

CULTIVOCOCACLORHEX

DIA

MET

RO

24

22

20

18

16

14

12

22

23

Gráfico 4: Diagrama de cajas del diámetro del halo para streptoccus mutans

Los histogramas obtenidos nos confirman la no normalidad de los datos, siendo más bien

asimétrico positivo en el caso de coca y streptococcus; y en el caso de clorhexidina nos

presenta una ligera asimetría negativa.

Nuevamente se observa que los diámetros obtenidos con clorhexina son superiores a los

obtenidos con el extracto de coca. Los tamaños para el intervalo entre el percentil 25 y el

percentil 75 para la clorhexina es de 18 a 22 mm, teniendo una mediana de 20 mm. Para la

coca oscila entre 14.5 a 16.5, con una mediana de 15 mm. De modo que nuevamente se

determina que que el tratamiento con clorhexina es superior al obtenido con extracto de

coca a esa concentración.

La prueba estadística no paramétrica U de Mann Whitney se proporciona en la siguiente

tabla:

54

Tabla 9: salida SPSS de la prueba estadística para streptococcus mutans

DIAMETROU de Mann-Whitney 53.500W de Wilcoxon 263.500Z -4.029Sig. asintót. (bilateral) .000

Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] .000(a)

Nuevamente la probabilidad extrema es 0.00 < 0.05; lo que nos indica que el diámetro

medio obtenido con clorhexidina es superior al obtenido con el extracto de coca.

Si consideramos que la eficacia de la clorhexidina es del 100%, siendo su mediana 20

mm; entonces la coca con una mediana de 15mm, tendría una eficacia de 75 % en el caso

de streptococcus mutans y en el caso de staphylococcus aureus la efectividad es también de

75 %.

Del análisis de los datos se concluye que la clorhexidina es más eficaz que la coca para el

tratamiento de 2 bacterias, pero que la coca representa el 75 % de la eficacia del

antibiótico.

CONCLUSIONES DE LA PRUEBA DE HIPÓTESIS

1. El aumento de la concentración de extracto de coca aumenta la eficacia del tratamiento;

por ejemplo se ha demostrado que el tratamiento con 1500 µg/20 µL; es mejor que con

1000 µg/20µL.

2. El tratamiento de staphylococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % resulta más eficaz,

que con extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); donde el extracto de coca tiene una

eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina.

3. El tratamiento de streptococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % es más eficaz que con

extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); pero el extracto de coca también tiene una

eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina.

55

DISCUSIÓN En la presente investigación se busco evaluar si el extracto de la hoja de Erythroxylum

lambran ejercía una eficacia antibacteriana en el tratamiento de staphylococcus aureus y

streptococcus mutans de la flora oralen comparación con la clorhexidina al 0.12%

normalmente utilizado como colutorio, lo cual quedó demostrado, la existencia de un

efecto de inhibición de desarrollo bacteriano del extracto estudiado, según los resultados

obtenidos; pero no demuestra superioridad para con los resultados obtenidos con la

clorexidina a además se encontró diferencias significativas (según los análisis estadísticos)

con respecto al tamaño de los halos de inhibición en las distintas concentraciones utilizadas

del extracto de Erythroxylum lambran (coca de Huanuco).

Los resultados indican que existe una accion antibacteriana del extracto de la hoja

Erythroxylum lambran, lo cual da sustento a otras investigaciones realizadas en

chacchadores de coca, como son los trabajos de investigación de Goicochea1, Ayala2,

Coronel4, Navarro5 y Pando6, quienes obtuvieron como resultados una disminución en la

prevalencía e incidencia de caries en sus grupos poblacionales que tenían el habito del

chacchado. Además en los resultados de Coronel4, Pando6 y Flores13 sobre la enfermedad

periodontal en personas que presentan el hábito de chacchado de hoja de coca, se observa

una tendencia de aumento en la prevalencia de enfermedad periodontal .

Existen estudios que tratan sobre las propiedades antibacterianas del extracto de

Erythroxylum lambran como en el caso de Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11, por el

contrario si hay estudios sobre el mismo genero de la planta pero distinta especie como en

el caso de investigaciones de Can y Villanueva10, Solano12, Gálvez14 los cuales obtienen

resultados positivos del efecto antibacteriano del Erythroxylum Novogranatense var.

truxillense en distintos agentes microbianos como son respectivamente bacterias Gram (-)

y Gram (+), Stretococcus de la cavidad bucal, bacterias Gram (-) resistentes.

Aguilar y Encarnación8, Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11 basaron sus estudios sobre el

efecto bacteriano sobre el mate de coca de Erythroxylum coca Lambran-Erythroxylum

Novogranatense var. truxillense sobre agentes microbianos como Mycobacterium

56

tuberculosis, uropatógenos Gram (-) multiresistentes, enterobacterias, obteniéndose

resultados positivos con respecto al efecto antibacteriano del mate de coca estudiado por

los autores antes mencionados. Por los tanto, se observa que los distintos estudios

observados se obtiene un efecto antibacteriano del Erythroxylum, ya sea que la extracción

de los principios activos totales hayan sido bajo el método de la extracción alcohólica (la

utilizada en el presente estudio) o la extracción acuosa (mate de coca), en distintos agentes

microbianos se obtuvieron resultados de un efecto antibacteriano del Erythroxylum (coca).

Pero en ningunos de las investigaciones mencionadas realizan comparaciónes con agentes

bactericidas (clorhexidina 0.12% u otros), como en el caso de la presente investigación.

En el caso de estudios microbiológico de índole oral solo se halló el realizado por

borrovic15, en dicho estudio solo se analizó la flora mixta salival para ello tomo la muestra

solo de origen salival.

borrovic15 utilizo un medio de cultivo enriquecido no selectivo como es el Agar Tripticasa

Soya, para tratar de desarrollar al máximo todas las bacterias presentes en la saliva, con el

fin de observar un efecto antibacteriano de la flora salival, a diferencia de la presente

investigación que se utilizó un medio de antibiograma como es el agar muller hinton con el

fin de observar un efecto eficas frente a las bacterias de staphylococcus aureus y

streptococcus mutans en comparación con la clorhexidina.

Con respecto a los resultados se observo coincidencia en la inhibición bacteriana, sin

embargo, en la presente investigación se encontró un efecto antibacteriano en las

concentraciones (1000 y 1500 μg) pero no una eficacia en la comparación con la

clorhexidina al 0.12%, a diferencia de borrovic15 que hallo efecto antibacteriano a partir de

las concentraciones de (250, 500, 1000 y 1500 μg) con un control negativo sobre la flora

mixta salival.

Cabe resaltar que a mayor sea la concentración utilizada del extracto de hoja de

Erythroxylum (coca), mayor será el halo de inhibición producida sobre las bacterias para

determinar el efecto antibacteriano de dicha planta, motivo que demuestra tal

investigación.

57

CONCLUSIONES • Existe un efecto antimicrobiano positivo a las concentraciones de 1000 y 1500 μg/

20 μl del extracto de Erythroxylum lambran en el tratamiento de staphylococcus

aureus y streptococcus mutans.

• A mayor concentración del extracto de Erythroxylum lambran mayor efecto

antimicrobiano.

• Las concentraciones 1000 y 1500 μg/ 20 μl utilizadas tienen una diferencia

estadísticamente significativa pero no superior con respecto al grupo control.

58

RECOMENDACIONES • Se recomienda continuar con las investigaciones utilizando microorganismos

patógenos de la microflora oral.

• Se recomienda realizar estudios con respecto a la composición de la hoja de coca

con el fin de determinar el o los compuestos químicos que causan la acción

antimicrobiana.

• Se recomienda hacer estudios sobre la posibilidad de una acción sinérgica entre el o

los compuestos antimicrobianos del Erythroxylum lambran y los distintos fármacos

antimicrobianos.

• Se recomienda realizar trabajos comparativos entre las distintas especies de hoja de

coca.

59

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65

ANEXOS

66

ANEXO Nº1

PRINCIPALES ESPECIES ERYTHROXYLUM EN EL PERÚ

REINO : Vegetal DIVISION : Discífloras SUBDIVISION : Displotemonas CLASE : Dicotiledóneas ORDEN : Gerianales FAMILIA : Erythroxylaceae GENERO : Erythroxylum ESPECIE : Erythroxylum coca Lambran (Huanuco) Erythroxylum Novogranatense Var. Truxillense (trijillo)

67

ANEXO Nº2

ERYTHROXYLUM COCA LAMBRAN (HUANUQUEÑA)

68

ANEXO Nº3

ERYTHROXYLUM NOVOGRANATENSE VAR. TRUXILLENSE (TRUJILLO)

69

ANEXO Nº4

PRINCIPAL COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA HOJA DE COCA HUMEDAD 6.5 CALORÍAS 305 cal % PROTEÍNAS 12.99 g % CARBOHIDRATOS 46.2 g % GRASAS 5 g %

VITAMINAS VITAMINA A 11000 UI VITAMINA C 1.46 mg % VITAMINA E 43.50 UI VITAMINA B12 1.05 mg % RIBOFLAVINA 1.90 mg % NIACINA 1.29 mg % ÁCIDO PANTOTENICO 0.6684 mg % PIRIDOXINA 0.503 mg % TIAMINA 0.35 mg % BIOTINA 0.0863 mg %

MINERALES FÓSFORO 911.00 mg % BARIO 4.67 mg % MAGNESIO 213.00 mg % CINC 2.70 mg % FIERRO 45.80 mg % POTASIO 2.02 mg % SODIO 40.60 mg % CALCIO 1.54 mg % ALUMINIO 39.50 mg % COBRE 1.21 mg % ESTRONCIO 9.71 mg % CROMO 0.359 mg % MANGANESO 6.65 mg % YODO 5.0 mg % BORO 5.35 mg %

ALCALOIDES TOTALES 0.25 % A 2.25 % COCAÍNA TROPOCAINA BENZOILECGONINA ALFA-TRUXILLENSE CINNAMOILCOCAINA BETA-TRUXILLENSE BENZOILTROPINA HYGROLINA CUSCOHIGRINA METILCOLINA DIHIDROXITROPINA METILECGONIDINA HIGRINA NICOTINA

OTROS TANINOS SAPONINAS FLAVONOIDES ACEITES ESENCIALES FENOLES GLICOSIDOS

70

ANEXO Nº5

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LAS HOJAS DE COCA (HUANUCO)

CONTENIDO EN 100 gr.

71

ANEXO Nº6

Alcaloides Naturales de la Hoja de Coca Cocaína Es el éter metílico de la benzoilegnonina, tiene propiedades anestésicas y

analgésicas. Egnonina Es un derivado carboxilado de la atropina, tiene propiedades de metabolizar

grasas, glúcidos y carbohidratos. Adelgaza la sangre. Atropina. O escopolamina

es anestésico que produce sequedad en el árbol respiratorio.Pectina. Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel.

Pectina Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel

Papaína Esta proteasa, que en mayor proporción contiene la papaya, es muy parecida a la catepsina animal, es una especie de fermento que acelera la digestión.

Higrina Excita las glándulas salivares cuando hay deficiencia de oxígeno en el ambiente

Globulina Es un cardiotónico que regula la carencia de oxígeno en el ambiente, mejorando la circulación sanguínea. Evita el sorojche (mal de altura)

Piridina Acelera la formación y funcionamiento del cerebro, aumenta la irrigación sanguínea a la hipófisis y las glándulas, traduciéndose en una mejoría del cuerpo en general

Quinolina Evita la formación de la caries dental junto al fósforo y al calcio. Conina Es un anestésico poderoso. Cocamina Es un analgésico que junto a la anterior, ayuda a aumentar las propiedades

anestésicas y analgésicas de la cocaína natural. Benzoína Acelera la formación de células musculares y evita la putrefacción de

alimentos, de ahí sus propiedades terapéuticas para gastritis y úlceras. Reserpina Regula la presión arterial en hipo e hipertensión y ayuda a la formación de

células óseas. Inulina Refresca y mejora el funcionamiento del hígado, la secreción de la bilis y su

acumulación a la vesícula. Es diurético, Es un polisacárido, muy parecido a las vitaminas B-12, que produce aumento de células de la sangre.

Estos 14 alcaloides, los aminoácidos que contienen, los ácidos y las vitaminas A, B1, C y E, la tiamina, niacina y riboflavina, la convierten en la planta más completa del universo en Nitrógeno No Proteico, que es el que elimina las toxinas y patologías del cuerpo, obteniendo combinaciones óptimas con frutas y plantas medicinales

72

ANEXO Nº7

Materiales para el proceso de maceración alcohólica de la hoja de coca Erythroxylum Coca Lambran (Huanuqueña)

Botella de vidrio transparente alcohol rectificado al 80º

Papel aluminio para forrar la botella de vidrio

Hoja de coca huanuqueña

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ANEXO Nº8

Procesamiento de filtrado y evaporación en horno al vacio de extracto alcoholico de hoja de coca

Laboratorio de biotecnología de la UDH

74

ANEXO Nº9

Dilución y preparación de las concentraciones del extracto de hoja de coca de pasta sólida

75

ANEXO Nº10

Impregnado de la solución de extractote hoja de coca con la s concentraciones en los discos de papel filtro

76

ANEXO Nº11

Los discos de sensibilidad

77

Anexo nº12

Discos de sensibilidad insertados en los agares Muller Hinton ya sembrados con las bacterias en cultivo y verificación de la formación de halos

78

ANEXO Nº13

Lecturas de las láminas al microscopio

80

ANEXO Nº14

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

ACTIVIDADES

Elaboración del anteproyecto de investigación.

Elaboración del proyecto de investigación

Aprobación del proyecto de investigación

Ejecución del proyecto de investigación

Análisis e interpretación datos (estadísticos, tablas y gráficos).

Presentación del informe final.

Sustentación de la tesis

Setiembre 2010

Octubre 2010

Noviembre 2010

Diciembre 2010

Enero 2011

Febrero 2011

Marzo 2011

Abril 2011

Mayo 2011

Junio 2011

X x X X

x x x

x

x

x

x x

x

81

1.‐ FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

2.‐ OBJETIVOS 3.‐ JUSTIFICACIÓN 4.‐ HIPÓTESIS 5.‐VARIABLES

GENERAL ‐ ¿Cuál es la eficacia antibacteriana in vitro del extracto de la hoja de coca en comparación con la clorhexidina 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans?

GENERAL ‐ Determinar eficacia antibacteriano in Vitro del extracto de la hoja de coca en comparación con la clorhexidina al 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans

Aclarar las incógnitas sobre el beneficio de dicha planta. Con los resultados positivos que se obtengan de la existencia de la eficacia antibacteriana del extracto alcohólico de la hoja de coca, se podrá comparar con otro agente bactericida efectivo que es la clorhexidina y encaminar una planificación para el tratamiento, tanto preventivo como interceptivo, de enfermedades orales de origen infeccioso con el uso de extractos de la hoja de coca o con los componentes exactos de la planta que causen dicho efecto antibacteriano.

Hipótesis de Investigación La efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca es mayor que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.

VARIABLE INDEPENDIENTE (Vi) Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina 0.12%. INDICADORES ESCALA CATEGORIA250µg/ 20µl. Numérica De Razón

500µg/ 20µl. Numérica De Razón



0.12% Numérica De Razón

ESPECÍFICOS ‐ ¿Será el extracto de la hoja de coca un eficaz antibacteriano in vitro frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans? ‐ ¿Habrá diferencia entre la eficacia antibacteriana in Vitro de la clorhexidina 0.12% en comparación con extracto de la hoja de coca frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans?

ESPECÍFICOS ‐ Identificar la eficacia del extracto de la hoja de coca como antibacteriano in vitro en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. ‐ Evaluar la eficacia antibacteriano in vitro entre la clorhexidina 0.12% en comparación con el extracto de la hoja de coca en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

Hipótesis NulaLa efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca a las concentraciones de 250, 500, 1000, 1500ug / 20ul, no es mayor que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Hipótesis Alterna La efectividad antibacteriana in Vitro del extracto de la hoja coca a las concentraciones de 250, 500, 1000, 1500ug / 20ul, es igual que la efectividad de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans.

VARIABLE DEPENDIENTE (Vd) Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca. INDICADORES ESCALA CATEGORIA

8 mm. resistencia

11 mm. sensible

Numérica

De Razón

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