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Últimos eventos, charlas y conferencias de las que participó CDV 10 y 11 de septiembre El 10 y 11 de Septiembre se desarrolló en Santiago del Estero el módulo de Salud y Sanidad del Ganado Bovino de la Especialización en Producción Bovina de la Universidad Católica de Salta y el Colegio de Médicos Veterinarios de Santiago del Estero. Ante una concurrencia de 50 veterinarios de las regiones del NOA y NEA, el Dr. Fernando Luna disertó a cerca del diagnóstico y prevención de las Enfermedades Infecciosas más comunes en dicha región, haciendo especial hincapié en las Enfermedades de la Reproducción. Además disertó el Dr. Leonardo De Lucca sobre las Enfermedades Carenciales del Ganado Bovino. Durante las clases, además, pudimos asistir a una muy interesante puesta en común de los diversos puntos de vista y experiencias de Colegas de diferentes regiones del país. 17 de septiembre En el marco de la Fiesta del Chivo, evento que congrega a toda la comunidad de Pampa del Infierno, Chaco, CDV tuvo el agrado de dar una conferencia acerca del manejo de la prevención de las enfermedades de la reproducción. El evento fue organizado junto a Veterinaria Quequén, de la Dra. Daniela Lhez y el Dr. Sergio Lifschitz, y a la distribuidora AVI srl. (Alianzas Veterinarias Integradas). El uso de vacunas fue el tema recurrente a la hora de las preguntas de los productores, las cuales fueron evacuadas tanto por el Dr. Fernando Luna como por el asesor técnico-comercial de la zona, Dr. Diego Dayer. 28 de septiembre Tuvimos el agrado de ser invitados por la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Lomas de Zamora a dar una clase sobre Toma y Remisión de Muestras para Laboratorio. El expositor fue el Dr. Fernando Luna, Gerente de Diagnóstico de CDV.

7 de octubre En Veterinaria El Cencerro, del Dr. Marcelo Ravanelli, localizada en Vivorata, Pcia. de Bs. As., cliente de la distribuidora VIA (Veterinarias Integradas Argentinas), se organizó una reunión para 50 productores de la Cuenca Mar y Sierras, y de la Cuenca del Salado, para escuchar una disertación por parte de CDV, acerca de la prevención y buenas prácticas del manejo general y particular de las vacunas. El Dr. Fernando Luna y el asesor técnico-comercial Dr. Mauro Baiona evacuaron las dudas de los asistentes y cerraron el evento compartiendo cena de camaradería.

Jornada Ganadera para Miembros CREA El 14 de Octubre pasado se realizó en la Sociedad Rural de Villaguay la Jornada Ganadera para Miembros CREA. El lema de la jornada fue “Capitalizar lo que aprendimos”. Contó con disertantes de primer nivel: el Ing. Agr. Francisco Corte, Asesor de CREA, expuso alternativas de producción en función del ambiente (Sistemas de recría). El Ing. Agr. Sebastian Riffel desarrolló sus experiencias en corrales de recría. El Med. Vet. Leandro O. Abdelhadi detalló el rol de los silajes en los sistemas de intensificación de producción de carne. Y por último, cerró la jornada el Lic. Victor Tonelli, quién expuso su visión sobre la situación actual y futura perspectiva del negocio de la carne. Centro Diagnóstico Veterinario fue uno de los auspiciantes del evento en el que asistieron 140 productores de todo el litoral sur de nuestro país.

Leptospirosis Interpretación del Diagnóstico de Laboratorio y Presentación de Casos Clínicos Fernando Acuña Pamela Agüero

La Leptospirosis, enfermedad producida por la bacteria Leptospira interrogans, produce fuertes pérdidas económicas en la ganadería debidas a afecciones reproductivas variadas. Se pueden encontrar abortos, natimortos,

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nacimientos de animales débiles y muerte embrionaria. También deben ser consideradas la pérdida económica asociada a la disminución de la producción láctea, y la mortalidad en terneros. Cabe recordar también que es la zoonosis de mayor difusión en el mundo.

Ilustración 1 – Leptospira sp. Microscopía electrónica. Existen actualmente dos posibles clasificaciones en cuanto a la especie. La clasificación fenotípica, que es la que habitualmente se utiliza, y que aporta información en cuanto a patogenicidad, y la clasificación genotípica, basada en características genéticas. De acuerdo a la primer clasificación, existen solamente dos especies: una saprófita (Leptospira biflexa), y otra patógena (Leptospira interrogans). Dentro de la especie patógena, podemos encontrar 24 serogrupos, que a su vez tienen más de 200 serovares. Los serogrupos incluyen conjuntos de serovares emparentados por reactividad antigénica cruzada. La clasificación genotípica comprende 17 genomoespecies, y no presenta correspondencia alguna con la clasificación fenotípica, es decir, que no aporta información sobre patogenicidad, manifestaciones clínicas o preferencia de huésped. El taxón básico más útil sigue siendo el serovar, que es definido de acuerdo a la especificidad de los antígenos O de superficie (LPS). El Diagnóstico de la enfermedad puede ir desde sencillo y rápido, hasta muy dificultoso. En el caso de contar con la información clínica y epidemiológica adecuada, asociada a muestras frescas de órganos, se puede detectar el agente en menos de 24 horas, y llegar al diagnóstico final. Muchas veces se cuenta solamente con un sangrado de vacas que abortaron hace un tiempo incierto, y es difícil llegar a determinar si

el aborto se debió a una infección por Leptospirosis. Con respecto a la remisión de muestras, es fundamental acompañarlas de un protocolo completo con la siguiente información: 1) Sobre el establecimiento: Tipo de explotación, Localidad, Presencia de zonas bajas 2) Sobre el rodeo: Vacunaciones, Historial sanitario, Alimentación 3) Sobre el caso: Especie, Edad, Sintomatología, Cantidad de afectados sobre cantidad total de animales, Cantidad de muertes sobre cantidad de afectados, Tratamiento/s implementado/s, Diagnóstico/s presuntivo/s. Diagnóstico en casos de Pérdida de la Gestación Recordemos que, si bien la presentación típica de Leptospirosis en hembras bovinas preñadas corresponde a una “tormenta de abortos” en el tercio final de la gestación, se pueden encontrar también natimortos, nacimientos de animales débiles y muerte embrionaria. Esto último es muy importante cuando el agente involucrado corresponde a Leptospira hardjobovis. Este serovar viene cobrando altísima relevancia en todo el mundo, y día a día se descubre que su prevalencia es mayor. Se lo relaciona con muerte embrionaria temprana. En nuestro país todavía falta conocer más acabadamente su importancia, aunque la detección por serología es alta. Ante casos de abortos, lo ideal es contar con un feto fresco (o varios), y remitirlo entero y refrigerado la Laboratorio (evitar la congelación, ya que daña severamente a la Leptospira). Debe ser acompañado de la placenta, sangre de la madre, y otras vacas abortadas, para realizar búsqueda de anticuerpos anti Leptospira (y contra otras enfermedades). El feto así remitido será necropsiado obteniendo: -lesiones anatomopatológicas de necropsia -material para cultivo bacteriológico (Campylobacter, Brucella, Leptospira, Haemophillus, Listeria, Arcanobacterium, Enterobacterias, hongos, etc.) -material para cultivo virológico (IBR, DVB) -material para cultivo de Trichomonas

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-material para inmunofluorescencia directa (Campylobacter, Brucella, Leptospira, Neospora, IBR, DVB) -material para observación directa en campo oscuro (Leptospira) -material para serología a partir de líquidos fetales (Brucella, IBR, DVB, Neospora, Leptospira) -material para histopatología Las lesiones anatomopatológicas son orientativas en caso de Leptospirosis, siendo casi infaltable la presencia de ictericia marcada. Pueden aparecer otras lesiones como congestión en varios órganos, colectas serosanguinolentas en abdomen y tórax, hemorragias renales, etc., todas inespecíficas, inconstantes y de grado variable.

Ilustración 2 - Feto abortado por Leptospirosis. Notar la marcada ictericia.

Ilustración 3 - Congestión de órganos y colecta abdominal serosanguinolenta. El cultivo bacteriológico de Leptospira demanda mucho tiempo y es dificultoso. La contaminación acompañante y el tiempo de llegada al laboratorio, atentan contra la viabilidad del agente. Lo ideal es incluir en el proceso la inoculación en hámster. Se obtienen

mejores resultados al recolectar orina de las vacas abortadas en medio Fletcher o Solución Salina Tamponada (dilución 1:2). La observación directa en campo oscuro, permite obtener un diagnóstico casi instantáneo, pero tiene la desventaja de ser poco sensible. El agente debe estar presente en altas cantidades. Por otro lado, la inmunofluorescencia directa también es rápida (demora horas), y mucho más sensible, ya que permite detectar al agente en cantidades menores.

Ilustración 4 - Leptospira por Inmunofluorescencia (1000X).

Ilustración 5 - Lesiones renales: necrosis tubular renal multifocal, infiltrado inflamatorio intersticial. La histopatología suele aportar información valiosa cuando la detección del agente falla (o no se cuenta con el equipamiento necesario para hacerlo). Si bien existen tinciones especiales para detectar al agente, su observación es dificultosa. Puede observarse en los túbulos renales, parénquima hepático, y placenta. Las lesiones observadas serán necrosis tubular renal multifocal o infiltrado inflamatorio

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intersticial, usualmente mononuclear (células plasmáticas) o ambos. En la placenta se puede observar edema y leve infiltrado inflamatorio, con presencia de grupos de Leptospiras en el epitelio coriónico.

Ilustración 6 - Tinción Warthin Starry (1000X). Se observa la Leptospira de color oscuro. El análisis serológico ayuda a orientar el diagnóstico, aunque su interpretación no es simple. La prueba de referencia internacional es la microaglutinación (MAT o Técnica de Martin y Petit). Esta prueba no detecta anticuerpos vacunales (salvo en vacunaciones muy recientes), por lo que cualquier titulo significa contacto con el agente infeccioso. En la mayoría de los casos, en el momento del aborto los niveles de anticuerpos son bajos, incluso pueden ser negativos. Los títulos altos significan un contacto reciente, de pocos días. Con respecto a la seroconversión, se debe tener en cuenta que se presenta rápidamente luego de la infección, y que no la encontraremos en la mayoría de los casos de aborto, ya que ocurren mucho después. Sin embargo, siempre debemos buscarla. La búsqueda de anticuerpos en los líquidos fetales es contundente, pero el resultado negativo no permite descartar la enfermedad. En nuestro país predomina la serología a Leptospira wolffi, pero se encuentran también bovinos con título a Pomona, Hardjobovis, Tarassovi, Icterohaemorragiae, Canicola, Ballum, Grypotiphosa y Pyrogenes. Generalmente, los serovares más correlacionados con problemas reproductivos son Pomona y Hardjobovis. En el Laboratorio de Diagnóstico de CDV S.A., hemos recopilado la información de 4891

muestras que han ingresado con solicitud de análisis de Leptospirosis (por MAT), en el período enero 2008 – junio 2010. Para este estudio, con el objetivo de eliminar el sesgo lo más posible, hemos dejado de lado las muestras

Figura 1 - Los anticuerpos aparecen a los pocos días post infección, y suben rapidamente.

provenientes de casos de aborto o muertes con presuntivo de la enfermedad. Hemos tomado aquellas muestras en las que determinamos un “relevamiento serológico” del establecimiento. El 60% de las muestras ha resultado negativa para todos los serovares ensayados. Los más importantes, en cuanto prevalencia, han sido: Wolffi 29.01%, Pomona 9.43%, y Hardjobovis 1.06%. Esta distribución de serovares ha sido similar en todas las provincias. Es notable que la prevalencia de L. hardjobovis sea inferior a la declarada por otros países, pero debemos tener en cuenta, también, que esta ha ido subiendo y seguramente lo seguirá haciendo. Debemos aquí señalar algo importante: la técnica de Martin y Petit es serogrupo específica. Esto quiere decir que podemos determinar contra que serogrupo están reaccionando los anticuerpos de la sangre, y no contra que serovar. Pero como la cepa de referencia que se utiliza en los laboratorios está genotipificada a nivel de serovar (que sigue

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siendo el taxón básico), nos referimos de esa forma. Por ejemplo: el serovar Hardjo (que tiene dos tipos, Hardjobovis y Hardjoprajitno), pertenece al serogrupo Sejroe, justo a otros serovares como: Sejroe y Saxkoebing. Diagnóstico en casos de Mortalidad La muerte por Leptospira es más frecuente en terneros, pero debemos tenerla en cuenta también para bovinos adultos. El diagnóstico está basado, en primera medida, en la observación o aislamiento del agente, tal como ocurre en los casos de aborto. Existe también la posibilidad de diagnosticarlo a través de serología, siendo más útil que en los casos de abortos, ya que generalmente al momento de solicitar el análisis la infección es reciente, y el título de anticuerpos es alto, o bien se encuentra seroconversión. Lo ideal sería contar con material de necropsia fresco y refrigerado, a partir del cual se hará el cultivo bacteriológico, la inmunofluorescencia directa, la observación en campo oscuro, y la histopatología.

Ilustración 7 - Muerte por Leptospirosis. Marcada ictericia en grasa perirrenal. La estructura del riñón está conservada. El material a enviar debe ser: riñón, hígado y orina. Recomendamos siempre hacer una necropsia completa, e incluir además otros órganos para realizar los análisis lo más completos posible, y así descartar diagnósticos diferenciales (Clostridiosis, hemoparásitos, intoxicaciones, etc.). El uso de serología es útil cuando no se cuenta con material de necropsia. Los títulos altos (1:800 o más) junto a la sintomatología y lesiones, son bastante indicativos y permiten llegar al diagnóstico. Ante ausencia de título o

títulos bajos (1:200), se debe realizar un segundo sangrado a los 10-15 días para buscar la seroconversión (recordar que en Leptospira suele ser más rápida). Los títulos basales (1:200) pueden permanecer por años, y no tienen relación con la vacunación, con la leptospiuria, ni con el cuadro clínico. Así, un animal seropositivo, puede haberse infectado subclínicamente hace mucho tiempo, haber transcurrido por un período de leptospiuria intermitente, luego haber eliminado al agente de su organismo y, sin embargo, continuar con anticuerpos circulantes.

Ilustración 8 - Vejiga con orina sanguinolenta (hemoglobinuria). Todavía, en nuestro país, las técnicas de biología molecular no están al alcance de todos y no pueden ser utilizadas rutinariamente. De todas formas, hoy en día contamos con sobrados elementos para llegar al diagnóstico en casi todos los casos. Presentación de Casos Clínicos Solamente en la Región Litoral de nuestro país, ya hemos diagnosticado, en lo que va del año 2010, Leptospirosis en 5 fetos bovinos. Estos fetos provenían de campos de cría de las localidades de Galarza, Gualeguay, Gualeguaychú, y Montecarlo. Es interesante notar que en 4 de ellos obtuvimos el diagnóstico definitivo en 24 horas, a través de la observación del agente por Inmunofluorescencia Directa (IFD), lo que permitió que el Veterinario y el Productor pudieran tomar las medidas necesarias muy rápidamente.

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En un caso, el diagnóstico se obtuvo tardíamente (7 días) a través del estudio histopatológico en combinación con serología de los animales abortados. En los 5 casos, se envío el material necesario para descartar otras enfermedades infecciosas abortigénicas, las cuales fueron descartadas a la vez que se confirmó la Leptospirosis. Las lesiones de los fetos fueron exclusivamente ictericia marcada, con algún grado de congestión visceral y colecta serosanguinolenta abdominal. En ninguno de los casos se obtuvo serología fetal positiva a Leptospira, comprobando que la ausencia de anticuerpos en el feto no demuestra ausencia de infección. Dos fetos fueron recibidos sin tener como complemento una muestra de sangre de la madre, sin embargo, se arribó al diagnóstico por IFD, con lo cual no fue necesario profundizar con la serología.

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En un solo caso se envió la sangre de la madre acompañando al feto, y resultó tener título de 1/200 para L. wolffi. En los otros dos casos se recibió sangre de un grupo de vacas abortadas, y no se pudo determinar si la madre del feto estaba en ese grupo. En estos casos se obtuvo títulos variados (1/200 y 1/400) para diferentes serovares. En nuestro laboratorio contamos con 9 cepas de referencia, que pertenecen a los serovares Pomona, Wolffi, Hardjobovis, Tarassovi, Icterohaemorragiae, Canicola, Ballum, Grypotiphosa y Pyrogenes, y en estos dos casos, las únicas no detectadas fueron Hardjobovis y Ballum. A modo de conclusión quisiéramos afirmar que, como hemos visto a lo largo de este texto, para arribar a un diagnóstico lo más preciso posible, se debe contar con muestras diversas, e interpretar los diferentes diagnósticos en conjunto con la historia clínica.

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