LA MICROBIOLOGÍAes la rama de la biología encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños

también conocidos como microbios. Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos, estos pueden estar constituidos por una sola célula(unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados por células equivalentes (sin diferenciación celular); estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como hongos y protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las bacterias. Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patógenos entre BACTERIAS, VIRUS Y HONGOS Y PARASITOS. BACTERIAS: Las bacterias poseen una estructura relativamente simple. Son microorganismos procariotas, es decir, unos microorganismos unicelulares sencillos, sin membrana nuclear mitocondrias, aparato de Golgi ni retículo endoplásmico que se reproducen por división asexual. La pared celular que rodea a las bacterias es compleja, y existen dos formas básicas: una pared celular grampositiva con una gruesa capa de peptidoglucano y una pared celular gramnegativa con una delgada capa de peptidoglucano, así como una membrana externa. El organismo humano está habitado por miles de especies bacterianas distintas; mientras algunas mantienen una relación parasitaria tem­ poral, otras habitan en el ser humano de manera permanente.

La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfológicos, lo que se conoce como pleomorfismo. De todas formas, podemos distinguir tres tipos fundamentales de bacterias:

Coco (del griego kókkos, grano): de forma esférica. o Diplococo: cocos en grupos

de dos. o Tetracoco: cocos en grupos

de cuatro. o Estreptococo: cocos en

cadenas. o Estafilococo: cocos en

agrupaciones irregulares o en racimo.

Bacilo (del latín baculus, varilla): en forma de bastoncillo.

Formas helicoidales: o Vibrio: ligeramente curvados

y en forma de coma, judía o cacahuete.

o Espirilo: en forma helicoidal rígida o en forma de tirabuzón.

o Espiroqueta: en forma de tirabuzón (helicoidal flexible).

VIRUS: Los virus son las partículas infecciosas de menor tamaño, con un diámetro que oscila entre los 18 hasta casi los 300 nm (el tamaño de la mayor parte de los virus es inferior a 200 nm y no pueden visualizarse mediante el microscopio óptico). Los virus están formados por ácido desoxirribonucleico (ADN) o ácido ribo­ nucleico (ARN) (no por ambos a la vez) así como por las pro­teínas necesarias para su replicación y patogenia. HONGOS: A diferencia de las bacterias, la estructura celular de los hongos es más compleja. Son microorganismos eucariotas que poseen unnúcleo bien definido, mitocondrias, aparato de Golgi y retículo endoplásmico. Los hongos pueden existir en una forma unicelular (levadura) capaz de replicarse de manera asexual, o en una forma filamentosa (moho), capaz de replicarse de forma tanto asexual como sexual. PARASITOS: Los parásitos son los microorganismos con mayor grado de complejidad. Aunque todos los parásitos se clasifican como eucariotas, algunos son unicelulares y otros son pluricelulares. Su tamaño oscila desde diminutos protozoos de 1-2 ¡im de diámetro (es decir, el tamaño de muchas bacterias) a los artrópodos y cestodos que llegan a medir hasta 10 m de largo

“BACTERIAS”

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS: Son aquellas bacterias que NO se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue. Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptiglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS: Son aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, la envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico A diferencia de las Gram-negativas, las Gram-positivas no presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa. Clasificación de las bacterias por Gram:

Cocos Gram-positivos Aerobios

Cocos Catalasa-positivos Cocos Catalasa-negativos Micrococcus Staphylococcus

Aerococcus Alloiococcus Enterococcus Lactococcus Leuconostoc Pediococcus Streptococcus

Cocos y Cocobacilos Gram-negativos Aerobios

Branhamella Moraxella Neisseria

Bacilos Gram-negativos Aerobios

Enterobacteriaceae Citrobacter Escherichia Klebsiella Morganella Plesiomonas Proteus Salmonella Serratia Shigella Yersinia

Vibrionaceae Gram-negativos Aerobios

Vibrio Aeromonadanceae Aeromonas Campylobacteriaceae Arcobacter Campylobacter Helicobacteriaceae Helicobacter Pseudomonadaceae Pseudomonas Pasteurellaceae Actinobacillus Haemophilus Pasteurella

Otros Géneros Gram-negativos Aerobios

Acinetobacter Bartonella Bordetella Brucella Burkholderia Capnocytophaga Cardiobacterium Eikenella Francisella Kingella

Legionella Stenotrophomonas Streptobacillus

Bacilos Gram-positivos Aerobios

Actinomicetos con

ácidos micólicos en la pared celular

Corynebacterium Gordonia Nocardia Rhodococcus Tsukamurella Mycobacterium

Actinomicetos sin ácidos micólicos en la

pared celular

Actinomadura Dermatophüus Nocardiopsis Oerskovia Rothia Streptomyces Saccharomonospora Saccharopolyspora Thermoactinomyces Tropheryma

Otros bacilos Gram-positivos

Arcanobacterium Bacillus Brevibacterium Erysipetothrix Gardnerella Listeria Turicelia

Bacterias Gram-positivas Anaerobias

Cocos Gram-positivas Bacilos Gram-positivos

Anaerococcus Finegoldia Micromonas Peptostreptococcus Schleiferella

Actinomices Bifidobacterium Clostridium Eubacterium Lactobacillus Mobiluncus Propionibacterium

Bacterias Gram-negativas Anaerobias

Cocos Gram-negativos Bacilos Gram-negativos

Veillonella Bacte mides Fusobacterium Porphyromonas

BACTERIAS PATOLOGIA

Brucellaspp Brucelosis

BacillusAnthracis Carbunco

Vibrio Cholerae Cólera

CorynebacterioumDiphtheriae Difteria

StreptococcusPyogenes Escarlatina

Streptococcusspp Erisipela

CoxiellaBurnetii Fiebre Q

Salmonella Typhi, S. Paratyphi Fiebre Tifoidea

LegionellaPneumophila Legionelosis

StreptococcusPneumoniae, StaphylococcusAureus, Neumonía

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS Microscopia El estudio microscópico mas sencillo es la preparación en fresco, que se utiliza en el examen

de ciertas muestras como el LCR para detectar CryptococcusNeoformans, con tinta china como fondo, donde destacan las levaduras con sus grandes cápsulas. También se utilizan preparaciones en fresco con iluminación en campo oscuro para descubrir espiroquetas en las lesiones genitales y para detectar Borrelia o Leptospira en la sangre.

Tincion de Gram Permite distinguir entre los microorganismos con paredes gruesas de peptidoglucanos y los que tienen membranas exteriores que se disuelven con alcohol, se utilizan a menudo para clasificar a los microorganismos teñidos en grupos como estreptococos, estafilococos y clostridios, esta tincion es especial para examinar esputos y buscar bacterias y leucocitos polimorfonucleares.

Tincion Acidorresistente

Permite distinguir a los microorganismos que absorben al colorante carbolfucsina después de tratarlo con un disolvente ácido/orgánico, esta se emplea en esputos, otros líquidos y muestras de tejidos cuando se sospecha la presencia de bacilos acidorresistentes.

Tinciones Fluorocrómicas

Como el naranja de acridina se utiliza para identificar leucocitos, levaduras y bacterias en los líquidos corporales

Tinciones Inmunofluorescente

Directa: utiliza anticuerpos unidos a un compuesto fluorescente que se dirigen contra un objetivo antigénico con el fin de observar microorganismos o estructuras subcelulares. Indirecta: un anticuerpo sin marcar se une a un antígeno especifico.

Detección Macroscópica de los antígenos

Los análisis de aglutinación con látex y los enzimoinmunoanálisis son métodos que permiten identificar microorganismos, toxinas extracelulares y virus utilizando proteínas o polisacáridos antigénicos.

Por medio de Cultivos

Algunas veces conviene sembrar la muestra en la placa al momento de la obtención, cuanto antes se siembre en el cultivo correspondiente mayores serán las probabilidades de aislar a las bacterias patógenas, es mas probable obtener un resultado útil del cultivo cuando la muestra proviene de un tejido profundo o de un líquido (pus) que cuando se obtiene de exudados superficiales.

In vitro Constan de agar, que no es metabolizado por las bacterias, de nutrientes que favorecen la proliferación de las especies microbianas que interesan y de sustancias que inhiben la

KlebsiellaPneumoniae, Mycoplasmaspp., Chlamydia spp.

Mycobacterium Tuberculosis Tuberculosis

ClostridiumTetani Tétanos

BordetellaPertussis Tos Ferina

Chlamydia Trachomatis Conjuntivitis

ClostridiumPerfringens Gangrena Gaseosa

ClostridiumBotulinum Botulismo

EscherichiaColi Diarrea

Listeria Monocytogenes Encefalitis

MycobacteriumLeprae Lepra NeisseriaGonorrhoeae Gonorrea

NeisseriaMeningitidis Meningitis

Salmonella sp Salmonelosis

StreptococcusPyogenes Escarlatina

Treponema Pallidum Sífilis

YersiniaEnterocolitica Gastroenteritis

YersiniaPestis Peste

proliferación de otros microorganismos.

TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo Chistian Gram, que desarrolló la técnica en1884. Permite diferenciar entre dos grupos de bacterias: - Bacterias Gram positivas - Bacterias Gram negativas El distinto comportamiento de estos dos grupos de bacterias es debido a las diferencias que muestran en la estructura de sus membranas.

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.

Metodología Recoger muestras. Hacer el extendido en espiral. Dejar secar a temperatura ambiente. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.) Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram

positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura. Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. Enjuagar con agua. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion) Enjuagar con agua. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color

rosado-rojizo las bacterias Gram negativas. Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión

COLORACIÓN GRAM: 1. Fijar un frotis Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco. Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra. Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con

una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa. Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la

muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.

Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.

2. Tinción Con violeta cristal, violeta de genciana, azul de metileno o en todo caso tinta china utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 °C.

3. Enjuague Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un milímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina portaobjetos en posición inclinada hacia abajo... La solución de cristal violeta, se recomienda sea al 1%.

4. Mordiente Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 3 minuto más. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su fijación a las bacterias.

5. Decoloración Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul.

6. Lavado y secado Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.

7. Tinción de contraste Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.

8. Nuevo enjuague Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita. De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su respectiva observación microscópica.

CULTIVO:es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como

bacterias , hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que el medio de cultivo sólido contiene un 1,5-2% de agar-agar, mientras que el medio líquido no contiene agar-agar. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para caracterizarlas incluyen :tamaño, morfología celular, forma de agrupación, reacción a la tinción de Gram, formación de esporas, movilidad,presencia de inclusiones de reserva y características culturales en medios líquidos y sólidos en los que presentanpatrones de desarrollo en cuanto a la forma, tamaño, elevación y color de las colonias.

Técnicas de siembra: El método de siembra por estría en placa: Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se tomauna muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólidopreparado en una placa petri. Conforme se vanh a c i e n d o e s t r í a s e n z i g z a g c o n e l a s a , c a d a v e z s e v a n d e p o s i t a n d o e n l a s u p e r f i c i e d e l m e d i o m e n o s microorganismos. Los métodos de vertido en placa y extensión en placa: En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyenantesde su siembra en placa. Se siguenestas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede realizar en unasola etapa. Por ejemplo, una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107veces paraobtener una suspensión con un centenar de células por milil itro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas(envarias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Para realizar diluciones de diez endiez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Seagita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario

1. Bacterias Gram. positivas: o Estreptococos: pueden ser responsables de infección en la sangre, faringitis, infección de las válvulas del

corazón, fiebre reumática, escarlatina, neumonía, etc. o Corinebacterias: difteria, infección de orina, etc. o Clostridios: tétanos, botulismo, gangrena gaseosa, infección de la sangre, etc. o Bacillus: antrax. o Estafilococos: pueden causar Neumonía, infecciones supuradas (con pus) en la piel y abscesos en otros

lugares, síndrome del shock tóxico, meningitis, artritis, osteomielitis, enteritis, etc.

2. Bacterias Gram negativas: o Salmonella, Shigella y Campylobacter: pueden provocar infección en el intestino. o Escherichiacoli y otras enterobacterias: pueden provocar neumonía, infección de orina, infección en la

sangre, etc. o Legionella: puede provocar una neumonía grave y atípica (la enfermedad del legionario) o Meningococos: puede causar meningitis cerebroespinal. o Haemophyllus: infección respiratoria, meningitis, etc. o Gonococo: causa la gonorrea o Brucella: brucelosis (fiebre de malta). o Pseudomonas: infecciones de oído e infecciones en múltiples lugares en personas debilitadas (neumonías en

pacientes de UVI, infección en los pies en diabéticos, infección respiratoria en pacientes con fibrosis quística, etc.).

o Bordetella: tosferina o Otras bacterias importantes no se tiñen bien con este método y para ellas se usan otros; por ejemplo, para

las bacterias (micobacterias) que causan la tuberculosis o la sífilis (treponemas).

EL HEMOCULTIVO: es un medio diagnóstico que se realiza para la

detección e identificación de microorganismos en la sangre utilizando el examen directo y cultivo, y definir los patrones de susceptibilidad de las bacterias por medio del antibiograma.(

Toma de muestra

Colocarse los guantes estériles manteniendo la técnica aséptica.

Insertar la aguja sin tocar o palpar el sitio de la venopunción. Utilizar sistema al vacío que consta de una camisa que se adapta al cuello del frasco del hemocultivo teniendo la precaución de mantener siempre el frasco en posición vertical con relación a las venas del paciente, para evitar que el líquido refluya a la vena. De lo contrario utilice jeringa con un pericraneal para darle extensión y posibilidad de inocular la sangre en dos botellas.

Extraer la cantidad de sangre que se menciona a continuación y distribuirla en los frascos (previa asepsia del tapón con alcohol), así:(1,2,18)

• Para hemocultivos de rutina: extraer 15 mL de sangre en el paciente adulto, introduzca 10 mL en el frasco #1 (tapa amarilla) y los 5 mL restantes en el frasco #2 (uno de los frascos tapa azul) • Para pacientes que estén recibiendo terapia antimicrobiana: extraer 10 mL de sangre en el paciente adulto, inocule 5 mL en el frasco #1 (tapa amarilla) y los 5 mL restantes en el frasco #2 (frasco tapa azul) • Para cultivos de hongos: extraer 10 mL de sangre en el paciente adulto, inocúlelo en el frasco #1 tapa verde. • Para cultivo de micobacterias: extraer 10 mL de sangre en el paciente adulto, inocule 5 mL en el frasco #1 (frasco tapa blanca) y los 5 mL restantes en el frasco #2 (frasco tapa blanca).

Mezclar suavemente los frascos utilizando la técnica de inversión.

La hematología comprende el estudio del paquete celular, el perfil o el estado sanguíneo, los cuales son:

Recuento de eritrocitos (y valor hematocrito)

Recuento de leucocitos

Determinación de hemoglobina

Velocidad de sedimentación globular (VSG)

Fórmula leucocitaria (recuento diferencial de leucocitos)

Funciones del Hemograma:

Analisis de anemias

Estados infecciosos inflamatorios

Leucemias y discrasias sanguíneas

Parametros de salud, hierro, nutrición

Control de enfermedad

Analisis de parasitoshematicos

UROCULTIVO: El examen bacteriológico permite, en caso de infección de las

vías urinarias, identificar el agente patógeno responsable. Se deben utilizar envases estériles para evitar la contaminación de la muestra.

El urocultivo se realiza mediante la siembra de una pequeña cantidad de orina homogeneizada, lo que permite la cuantificación de las eventuales bacterias presentes. Las bacterias se contabilizan utilizando el criterio de «UFC/ml»,5 porque de acuerdo a esta técnica se considera que cada bacteria en la muestra diluida dará origen a una colonia. El conteo de las mismas se efectúa luego de un período de incubación de 24 horas a 37º C , para permitir la multiplicación bacteriana. La muestra de orina se siembra en uno o más medios de cultivo específicos, generalmente MacConkey y CLED, que permiten el crecimiento de bacterias Gram negativas y Gram positivas , así como de hongos, en el 99% de las veces del género Cándida Funciones del Urocultivo:concluyente de la infección de vías urinarias desde que Kass definió como urocultivo positivo el hallazgo de por lo menos 105 UFC/ml de un mismo patógeno aislado de un individuo, sintomático o no. Sin embargo, para el caso de IVU nosocomial, consideramos positivo un recuento mayor de 10

2 UFC/ ml de orina, por las razones antes

mencionadas. Después de la inoculación en medios de cultivo debe permitirse una incubación de por lo menos 24 horas, para obtener un recuento preciso de las colonias y se requieren otras 12-24 horas para la tipificación del organismo y para conocer su sensibilidad antibiótica; cuando la infección de vías urinarias es nosocomial, la variedad microbiológica de los gérmenes exige incubaciones más prolongadas

Valores normales

Menos 10,000 U.F.C/ml se considera contaminación

Entre 10,000 y 100,000 U.F.C/ml se considera sospecha de infección

Mayor a 100,000 U.F.C/ml se considera infección *U.F.C. Unidades Formadoras de Colonias.

OROCULTIVO: Es una prueba de laboratorio que se hace para aislar e identificar microorganismos que puedan

causar una infección en la garganta.

Tomas de Muestra: A usted se le solicitará que incline la cabeza hacia atrás con la boca bien abierta. El médico frota con un hisopo o aplicador de algodón estéril a lo largo de la parte posterior de la garganta cerca de las amígdalas. Usted debe contener las náuseas y cerrar la boca mientras el aplicador toca esta área.

Funciones del orocultivo:

El examen se realiza cuando se sospecha de una infección en la garganta, en particular, una infección de garganta por estreptococos.

Este examen se usa principalmente para identificar estreptococos en la garganta, sin embargo, se pueden detectar otros organismos, dependiendo del tipo de medio de cultivo utilizado.

ASPIRADO TRAQUEAL Colecte el espécimen a través de una traqueotomía o tubo endotraqueal.

Con cuidado pase el catéter de polyetileno a través del sitio dentro de la tráquea.

Aspire el material de la tráquea utilizando una jeringuilla o un succionador intermitente.

Remueva el catéter y descarte la jeringuilla.

Envíe al laboratorio.

No refrigere la muestra.

Funciones del aspirado traqueal:

Trastornos neuromusculares

Secreciones abundantes y espesas

Perdida de reflejo tusígeno

Obstrucción de la vía aérea

Fijación de maxilares post-quirúrgico

Después de drenaje postural

Después de nebulizaciones

PRUEBA DEL ESPUTO:La muestra de esputo se obtiene tosiendo profundamente y expulsando el material que

viene de los pulmones dentro de un envase estéril. Se lleva la muestra a un laboratorio y se coloca en un medio que tenga

las condiciones que permita que los microorganismos se reproduzcan.

Funciones de la prueba de esputo:

Determinar si el microorganismo es Gram + o Gram -: mediante tinción de Gram, cuyos resultados están disponibles en pocas horas, siendo útil para seleccionar la antibioterapia hasta que estén otros resultados.

Determinar presencia de bacilos de tuberculosis: mediante tinción acidoalcoholresistente (BAAR). Resultado en pocas horas.

Determinar mediante cultivo específico la evidencia o no de mycobacterium tuberculoso: mediante cultivo de Lowestein. Resultado en 3-6 semanas; se requieren muestras de 3 días consecutivos.

Determinar la presencia de células malignas: muestra de esputo aislada con solución fijadora.

Bronquitis, un absceso pulmonar, una neumonía o cáncer de pulmón.

Procedimiento:

El esputo se recoge a primera hora de la mañana (más concentrado y más abundante por el acumulo que se produce con el sueño)

La muestra se recoge en un contenedor estéril y se transporta de forma rápida al laboratorio.

La recolección del esputo se puede realizar por: 1. Obtención directa:

o El paciente tose de forma voluntaria, o Si no se consigue producir una muestra (esputo inducido):

Enjuagar la boca con agua destilada estéril o solución salina. Obtener el esputo tras una expectoración profunda, preferentemente matinal. De no producirse expectoración espontánea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisiológico estéril (15 ml durante 10 minutos), siendo útil además realizar un drenaje postural o fisioterapia respiratoria.

COPROCULTIVO o examen coproparasitoscópico consiste en el cultivo de materia fecal. Es un método de

diagnósticomicrobiológico que permite identificar diferentes organismos causantes de enfermedades gastrointestinales.

Toma de muestras: La materia fecal para coprocultivo debe estar libre de contaminantes como

orina o papel higiénico. Se puede obtener la muestra recogiendo las heces en una bolsa plástica

adosada a la taza del inodoro o utilizando equipos de recolección comerciales. En caso de bebés

se puede adosar la bolsa al pañal. Una vez obtenida la muestra se debe colocarla en un recipiente

estéril y derivarla al laboratorio lo más rápido posible.

Es indicado para el diagnóstico de ciertas afecciones del aparato gastrointestinal, especialmente aquellas infecciones provocadas por bacterias. Se lo utiliza para estudiar casos de diarrea severa, persistente o recurrente sin causas conocidas, y en caso de diarreas asociadas al consumo de antibióticos.

Funciones del Coprocultivo: Se usa de preferencia en la búsqueda de patógenos intestinales productores de enterocolitis aguda. La muestra se obtiene directamente de la deposición recientemente emitida o bien de un hisopado rectal. Debe usarse un medio de transporte adecuado (Cary-Blair) si ésta no va a ser procesada de inmediato. La selección de los medios de cultivo, así como el procedimiento de aislamiento a seguir, dependen del agente etiológico que se esté investigando. Si no se explicita otra situación, rutinariamente, la búsqueda se concentra en los patógenos habituales como Salmonella y Schigella. En los casos especiales, debe indicarse si se sospecha de EscherichiaColienteropatógena, enteroinvasora, enterotoxigénica, enterohemorrágica , o entero agregante; Campylobacter, SPP.,Vibriocholera, Yersiniaenterocólitica, etc.

EL ANTIBIOGRAMA ¿Por qué se hace un antibiograma? Y ¿Qué es? Cuando hacemos un cultivo de orina, sangre, heces, piel o de cualquier otra parte de nuestroorganismo, lo que intentamos conocer es que microorganismo es el causante de la infección o enfermedadque estemos pasando. Una vez hemos logrado aislarlo, diagnosticarlo y cultivarlo, procederemos a averiguar cuál es el tratamiento adecuado. Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibióticos para ver cuál de ellos es el que mejor va como tratamiento. Se cultivan en "discos", los cuales son unos receptáculos circulares con sustancias que favorecenel crecimiento de los microorganismos. Al mismo tiempo, contienen cada uno de ellos, un antibiótico que, por supuesto, sabemos cuál es. Luego de unas horas, y en algunos casos, días, observaremos que ha sucedido. En los cubetasque apreciemos que los gérmenes han seguido creciendo "como si nada" ... nos indicará que esos antibióticos no son activos contra ese microorganismo. Sin embargo, en aquellos en que las bacterias no han crecido, nos indicará que los antibióticosque contienen son eficaces contra ellos. Casi nunca es "blanco" o "negro" y la situación viene dada porque que crecen poco, lentamente,o por el contrario lo hacen más rápidamente. Hemos de escoger por tanto aquel que permita un menor crecimiento y con él y las propias defensas del organismo se intentará erradicarlo, es decir, curar la enfermedad.

Sensibilidad bacteriana a los antibióticos La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la medida de la sensibilidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIM se define como la menor concentración de una gama de diluciones de antibiótico que provoca una inhibición de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas. Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en función de su sensibilidad frente al antibiótico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o Resistente (R) al antibiótico.

Lectura del antibiograma

Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos impregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas, se procede a la lectura de los resultados, que puede hacerse a intervalos periódicos, basada en la medición del halo de inhibición. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en:

RESISTENTES: Si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.

SENSIBLES: Si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual.

INTERMEDIA: Cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posología).

Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y, por tanto, no es una medida absoluta de la eficacia. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso, la historia clínica del paciente, el mecanismo de acción del antibiótico, la toxicidad, las posibles sensibilizaciones del paciente, la vía de administración, etc.