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Y B
IOQUIM
ICA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADEacuteMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIacuteMICA
TESIS I
ldquoCuantificacioacuten de flavonoides totales en los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillordquo
AUTORES Valle Vargas Brenda Jakeline
Yanac Salcedo Albino Rogger
ASESOR Mg Rengifo Penadillos Roger Antonio
Trujillo ndash Peruacute
2014
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DEDICATORIA
A Dios
Por estar a nuestro lado en cada paso dado por fortalecer nuestro corazoacuten
e iluminar nuestra mente y por haber puesto en el camino a aquellas
maravillosas personas que han sido nuestro soporte y compantildeiacutea durante
todo el periodo de estudio
A nuestros Padres
Por habernos educado Gracias por sus consejos por su apoyo por su
amor carintildeo y comprensioacuten bridada en cada momento de nuestras
vidas
A nuestros maestros
Gracias por su tiempo dedicado por su apoyo asiacute como por la sabiduriacutea que nos
transmitieron en el desarrollo de Tesis I en especial a nuestro asesor Roger
Antonio Rengifo Penadillos quien con sus conocimientos experiencia y
motivacioacuten diaria nos ha guiado en el desarrollo de este trabajo permitieacutendonos
de esta manera llegar a la culminacioacuten del mismo Muchas gracias por su amistad
por su apoyo permanente e incondicional a lo largo de nuestra formacioacuten
universitaria por el tiempo compartido y por impulsar el desarrollo de nuestra
formacioacuten profesional en el aacuterea de la investigacioacuten cientiacutefica
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PRESENTACIOacuteN
Sentildeores Miembros del Jurado
En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de
Grados y Tiacutetulos de la Facultad de Farmacia y Bioquiacutemica de la Universidad
Nacional de Trujillo sometemos a vuestro elevado criterio el presente Informe de
Tesis I intitulado
ldquoCuantificacioacuten de flavonoides totales en los extractos hidroalcohoacutelicos de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
Sea propicia esta oportunidad para manifestarles el maacutes profundo agradecimiento a
nuestra Alma Mater y toda su plana docente por su meritoria labor de educadores
y por la formacioacuten profesional que nos han brindado a traveacutes de sus ensentildeanzas
De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboracioacuten de los sentildeores
miembros del jurado
Dejamos a vuestra consideracioacuten Sentildeores Miembros del Jurado la respectiva
calificacioacuten del presente informe
Trujillo Marzo del 2014
__________________________ __________________________
Albino Rogger Yanac Salcedo Valle Vargas Brenda Jakeline
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JURADO DICTAMINADOR
MSc Mariacutea Virginia Gonzaacutelez Blas helliphelliphelliphelliphelliphellip PRESIDENTE
MSc Francisco Saavedra Suarez helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
Mg Roger Antonio Rengifo Penadillos helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
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INDICE
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipi
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipii
INTRODUCCIONhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
MATERIAL Y MEacuteTODOhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
RESULTADOS helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ii
ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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23 McMahon G Anaacutelisis Instrumental 7degedInglaterra Wiley 2007p18-5598
24 Miller J Estadiacutestica y Quimiometria para Quiacutemica Analiacutetica4deged Madrid
Pearson Educacioacuten 2002p 21-37
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34 Tyler V y Col Farmacognosia 2degedArgentina El Ateneo 1979p1-30
35 Thomson W Guiacutea praacutectica Ilustrada de las Plantas Medicinales 3deged Espantildea
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94332pdfsequence=1
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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DEDICATORIA
A Dios
Por estar a nuestro lado en cada paso dado por fortalecer nuestro corazoacuten
e iluminar nuestra mente y por haber puesto en el camino a aquellas
maravillosas personas que han sido nuestro soporte y compantildeiacutea durante
todo el periodo de estudio
A nuestros Padres
Por habernos educado Gracias por sus consejos por su apoyo por su
amor carintildeo y comprensioacuten bridada en cada momento de nuestras
vidas
A nuestros maestros
Gracias por su tiempo dedicado por su apoyo asiacute como por la sabiduriacutea que nos
transmitieron en el desarrollo de Tesis I en especial a nuestro asesor Roger
Antonio Rengifo Penadillos quien con sus conocimientos experiencia y
motivacioacuten diaria nos ha guiado en el desarrollo de este trabajo permitieacutendonos
de esta manera llegar a la culminacioacuten del mismo Muchas gracias por su amistad
por su apoyo permanente e incondicional a lo largo de nuestra formacioacuten
universitaria por el tiempo compartido y por impulsar el desarrollo de nuestra
formacioacuten profesional en el aacuterea de la investigacioacuten cientiacutefica
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PRESENTACIOacuteN
Sentildeores Miembros del Jurado
En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de
Grados y Tiacutetulos de la Facultad de Farmacia y Bioquiacutemica de la Universidad
Nacional de Trujillo sometemos a vuestro elevado criterio el presente Informe de
Tesis I intitulado
ldquoCuantificacioacuten de flavonoides totales en los extractos hidroalcohoacutelicos de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
Sea propicia esta oportunidad para manifestarles el maacutes profundo agradecimiento a
nuestra Alma Mater y toda su plana docente por su meritoria labor de educadores
y por la formacioacuten profesional que nos han brindado a traveacutes de sus ensentildeanzas
De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboracioacuten de los sentildeores
miembros del jurado
Dejamos a vuestra consideracioacuten Sentildeores Miembros del Jurado la respectiva
calificacioacuten del presente informe
Trujillo Marzo del 2014
__________________________ __________________________
Albino Rogger Yanac Salcedo Valle Vargas Brenda Jakeline
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JURADO DICTAMINADOR
MSc Mariacutea Virginia Gonzaacutelez Blas helliphelliphelliphelliphelliphellip PRESIDENTE
MSc Francisco Saavedra Suarez helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
Mg Roger Antonio Rengifo Penadillos helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
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INDICE
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipi
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipii
INTRODUCCIONhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
MATERIAL Y MEacuteTODOhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
RESULTADOS helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ii
ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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PRESENTACIOacuteN
Sentildeores Miembros del Jurado
En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de
Grados y Tiacutetulos de la Facultad de Farmacia y Bioquiacutemica de la Universidad
Nacional de Trujillo sometemos a vuestro elevado criterio el presente Informe de
Tesis I intitulado
ldquoCuantificacioacuten de flavonoides totales en los extractos hidroalcohoacutelicos de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
Sea propicia esta oportunidad para manifestarles el maacutes profundo agradecimiento a
nuestra Alma Mater y toda su plana docente por su meritoria labor de educadores
y por la formacioacuten profesional que nos han brindado a traveacutes de sus ensentildeanzas
De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboracioacuten de los sentildeores
miembros del jurado
Dejamos a vuestra consideracioacuten Sentildeores Miembros del Jurado la respectiva
calificacioacuten del presente informe
Trujillo Marzo del 2014
__________________________ __________________________
Albino Rogger Yanac Salcedo Valle Vargas Brenda Jakeline
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JURADO DICTAMINADOR
MSc Mariacutea Virginia Gonzaacutelez Blas helliphelliphelliphelliphelliphellip PRESIDENTE
MSc Francisco Saavedra Suarez helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
Mg Roger Antonio Rengifo Penadillos helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
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INDICE
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipi
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipii
INTRODUCCIONhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
MATERIAL Y MEacuteTODOhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
RESULTADOS helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
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VI REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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2007p 43-50 60-72
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6 Araujo A y Col Intraspecific variability of dihydrochalcone chromenes and
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(10) 2157-2162
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httpwwwresearchgatenetpublication228355192_Intraspecific_variability_of_
dihydrochalcone_chromenes_and_benzoic_acid_derivatives_in_leaves_of_Piper_
aduncum_L(Piperaceae)
7 Bedascarrasbure E y Col Contenido de fenoles y flavonoides de Propoacuteleos
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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JURADO DICTAMINADOR
MSc Mariacutea Virginia Gonzaacutelez Blas helliphelliphelliphelliphelliphellip PRESIDENTE
MSc Francisco Saavedra Suarez helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
Mg Roger Antonio Rengifo Penadillos helliphelliphelliphelliphelliphelliphellipMIEMBRO
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INDICE
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipi
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipii
INTRODUCCIONhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
MATERIAL Y MEacuteTODOhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
RESULTADOS helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
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VI REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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2007p 43-50 60-72
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6 Araujo A y Col Intraspecific variability of dihydrochalcone chromenes and
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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INDICE
RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipi
ABSTRACThelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipii
INTRODUCCIONhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
MATERIAL Y MEacuteTODOhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
RESULTADOS helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip19
CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
REFERENCIAShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
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VI REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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2007p 43-50 60-72
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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RESUMEN
El propoacutesito de la presente investigacioacuten fue la cuantificacioacuten de
flavonoides totales expresados como quercetina en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo Las muestras
fueron recolectadas en el distrito de Chota departamento de Cajamarca y en el
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo en el mes de febrero-2012
La identificacioacuten preliminar de flavonoides se realizoacute mediante la
reaccioacuten de Shinoda y la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de
Shinoda se obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con Aacutecido sulfuacuterico
qp se obtuvo una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la
presencia de flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos
preparados
Posteriormente se realizoacute la cuantificacioacuten de flavonoides utilizando la
teacutecnica espectrofotomeacutetrica obtenieacutendose que la cantidad de flavonoides
totales expresados como quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas
de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento
de Cajamarca fue 00201 mgmL en comparacioacuten con 00097 mgmL
cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenida en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Palabras claves Flavonoides totales Piper aduncum espectrofotometriacutea
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ii
ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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1
I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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ii
ABSTRACT
The purpose of the present investigation was the quantification of total
flavonoids expressed as quercetin in the hydroalcoholic extracts of the leaves
of Piper aduncum ldquomaticordquo The Samples were collected in the district of
Chota department of Cajamarca and in the Botanical Garden Rosa Elena Rios
Martinez at the National University of Trujillo in February-2012
The preliminary identification of flavonoids was performed through by
reaction of Shinoda and the reaction with concentrated sulfuric acid in the
reaction of Shinoda was obtained a red coloration and in the reaction with
concentrated sulfuric acid was obtained an intense yellow coloration both
colorations indicate the presence flavones and flavonols in the prepared
hydroalcoholic extracts
Subsequently the quantification of flavonoids was performed using the
spectrophotometric technique it was found that the amount of total flavonoids
expressed as quercetin in hydroalcoholic extract of the leaves of Piper
aduncum ldquomaticordquo from the district of Chota Cajamarca was 00201 mg mL
in compared with 00097 mg mL amount of total flavonoids expressed as
quercetin found in the hydroalcoholic extract of the leaves of Piper aduncum
ldquomaticordquo of the Botanical garden Rosa Elena Rios Martinez at the UNT
Keywords Flavonoids assay Piper aduncum spectrophotometry
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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23 McMahon G Anaacutelisis Instrumental 7degedInglaterra Wiley 2007p18-5598
24 Miller J Estadiacutestica y Quimiometria para Quiacutemica Analiacutetica4deged Madrid
Pearson Educacioacuten 2002p 21-37
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94332pdfsequence=1
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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I INTRODUCCIOacuteN
El reino vegetal posee infinidad de plantas que contienen sustancias de gran
valor medicinal y que auacuten estaacuten por descubrirse otro gran nuacutemero de plantas son
ensayadas constantemente respecto a su posible valor farmacoloacutegico1
El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una praacutectica que
se ha utilizado desde tiempos inmemoriales siendo el principal recurso disponible
para los seres humanos con el fin de aliviar sus dolencias18
En las civilizaciones primitivas la poblacioacuten estaba interesada
principalmente en las virtudes curativas de las plantas Los poderes curativos de
ciertas hierbas raiacuteces y jugos fueron descubiertos indudablemente por accidente29
Cada zona geograacutefica del mundo tiene una vegetacioacuten autoacutectona a partir de
la cual se realizan extractos unguumlentos elixir y una serie de productos que
contribuyen a mejorar la salud del ser humano16
El 80 de la poblacioacuten mundial utiliza las plantas como principal remedio
medicinal seguacuten nos sentildeala la Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS)Eacutesta
praacutectica estaacute asociada al empirismo en muchos casos faltan estudios quiacutemicos
cliacutenicos y epidemioloacutegicos que confirmen de forma fehaciente los efectos
fisioloacutegicos de las plantas y los principios activos responsables sin embargo es
importante reconocer que el 25 de los faacutermacos existentes se obtienen de
extractos vegetales o bien se han sintetizado a partir de sustancias halladas en la
investigacioacuten fitoquiacutemica1718
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Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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33 Skoog D y Col Anaacutelisis Instrumental 4deged Madrid Mc Graw Hill 1998 p 353-
360 371-381
34 Tyler V y Col Farmacognosia 2degedArgentina El Ateneo 1979p1-30
35 Thomson W Guiacutea praacutectica Ilustrada de las Plantas Medicinales 3deged Espantildea
Blume SA 1996 p10-21
36 Valares C Variacioacuten del metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y
al ambiente Tesis para obtener el grado de Doctora en Ciencias [en liacutenea]
[consultado 8 de diciembre del 2013]Espantildea Universidad de Extremadura
Departamento de biologiacutea vegetal ecologiacutea y ciencias de la tierra 2011
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33
Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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60
Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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62
La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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2
Las virtudes medicinales de las plantas pueden explicarse por la existencia
de determinados compuestos quiacutemicos en ellas que son los llamados principios
activos11
Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas deben
su actividad terapeacuteutica a compuestos quiacutemicos de gran importancia
denominados metabolitos secundarios El rol de eacutestos compuestos en los vegetales
no es del todo bien conocido se sabe que no son esenciales para el desarrollo del
vegetal sin embargo cumplen funciones importantes como las relacionadas con
los mecanismos de defensa o proteccioacuten actuacutean como biocidas repelentes yo
inhibidores de la alimentacioacuten de patoacutegenos herbiacutevoros y competidores de
manera que pueden garantizar su sobrevivencia1735
Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en
algunas partes anatoacutemicas o por toda la planta y a los que se les atribuye
propiedades terapeacuteuticas estaacuten los aceites esenciales alcaloides flavonoides
gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extraccioacuten aislamiento e
identificacioacuten de los mismos8
El Peruacute posee una gran variedad topograacutefica y diversidad de climas que
favorece a la existencia de numerosas plantas medicinales entre ellas tenemos a la
Especie Piper aduncum o tambieacuten llamado popularmente ldquocordoncillordquo
ldquomaticordquo o ldquoHierba de soldadordquo1527
El ldquomaticordquo es un arbusto perenne de 4 m de alto perteneciente a la Familia
PIPERACEAE prefiere los sitios huacutemedos las orillas de los riachuelos y fangos
Su tallo es lentildeoso ramificado de color verde o gris paacutelido presenta hojas alternas
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pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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60
Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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3
pecioladas simples con 5 nervaduras Inflorescencia axilar o terminal en espigas
de hasta15 cm flores pequentildeas seacutesiles e imperceptibles a la vista olor
caracteriacutestico427
En el Peruacute crece en la costa selva alta y baja en los valles interandinos de la
sierra crece entre 2 600 ndash 2 700 msnm se ha reportado eacutesta especie en los
departamentos de la Libertad Amazonas Ayacucho Cajamarca Cusco Huaacutenuco
Juniacuten Lambayeque Lima Loreto Madre de Dios Pasco Piura San Martiacuten
Ucayali27
En la actualidad el uso medicinal del ldquomaticordquo es muacuteltiple siendo empleado
para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y
antitusiacutegeno) dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o croacutenicas)
toacutepicamente en infusioacuten de las hojas para hacer gaacutergaras y como vulnerario (para
lavar y curar llagas y heridas externas)Igualmente la tisana de eacutestas hojas
juntamente con otras como la malva de olor es muy uacutetil en infecciones del aparato
genital mediante la aplicacioacuten de bantildeos de asiento y lavados vaginales siendo
indicado en los casos de descensos fluidos y blanquecinos causados por el paraacutesito
Trichomonas vaginalis2528
Entre los compuestos activos del ldquomaticordquo se informa la presencia de taninos
ademaacutes de alcaloides y numerosos glucoacutesidos especialmente de tipo
flavonoides26
Rengifo R en su trabajo de investigacioacuten in titulado Determinacioacuten de la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum
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4
ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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5
Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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6
reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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ldquomaticordquo sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que
las hojas presentan flavonoides taninos alcaloides31
Los flavonoides son pigmentos naturales muy importantes pues protegen a
las plantas del dantildeo producido por agentes oxidantes como los rayos ultravioleta
El organismo humano no puede producir eacutestas sustancias quiacutemicas protectoras
sin embargo se encuentran presentes en frutas verduras semillas y flores asiacute
como en el teacute verde teacute negro y soya los cuales pueden ser consumidos en la dieta
humana de forma habitual1921
Los flavonoides se encuentran en forma de soacutelidos cristalinos solubles como
glicoacutesidos en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgaacutenicos apolares su
caraacutecter fenoacutelico y su intensa absorcioacuten en la regioacuten ultravioleta los hace
faacutecilmente identificables debido a la presencia de sistemas conjugados y
aromaacuteticos1120
Los flavonoides son un grupo extenso de compuestos fenoacutelicos derivados
del Benzo-Y pirano poseen varios grupos hidroxilos unidos a estructuras anulares
C6-C3-C6 designadas como A B y C (Fig 1) Dependiendo del grado de
oxidacioacuten y de sustitucioacuten del anillo pirano central pueden subdividirse en
flavonas flavonoles flavononas isoflavonas flavanos y antocianinas El anillo
pirano puede ser abierto (chalconas) y ciclado en un anillo furano (auronas)19
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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24 Miller J Estadiacutestica y Quimiometria para Quiacutemica Analiacutetica4deged Madrid
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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Fig 1 Estructura baacutesica un flavonoide15
Estaacute comprobado que los flavonoides desempentildean una gran variedad de
funciones ecoloacutegicas cumplen funciones de defensa contra depredadores y
patoacutegenos Inhiben el desarrollo de insectos hongos y bacterias mejorando el
crecimiento de la planta Otra funcioacuten importante es la de favorecer la atraccioacuten
de polinizadores dispersores de semillas Ademaacutes ejercen funcioacuten protectora
frente a los rayos ultravioleta21
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo como colorantes de
lana y actualmente se usan en la conservacioacuten de grasas o jugos de frutas debido
a las propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas por su notable
proteccioacuten contra los radicales libres14
Existe un consenso de que la actividad antioxidante de los flavonoides
resulta de una combinacioacuten de sus propiedades quelantes de hierro y
secuestradoras de radicales libres (RL)Otros autores se refieren ademaacutes a la
inhibicioacuten de oxidasas como la lipoxigenasa (LO) la ciclooxigenasa (CO) la
mieloperoxidasa (MPO) ect Por otra parte se ha podido conocer que tambieacuten
inhiben enzimas involucradas indirectamente en los procesos oxidativos como la
fosfolipasa A2 (FLA2) al mismo tiempo que estimulan otras enzimas con
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reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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6
reconocidas propiedades antioxidantes la catalasa (CAT) y la
superoacutexidodismutasa (SOD)30
La accioacuten farmacoloacutegica de los flavonoides es extensa y variada se ha
demostrado que modifican la reaccioacuten del cuerpo frente a elementos dantildeinos
como son los aleacutergenos son muy conocidas sus actividades protectoras de la
pared vascular o capilar (bioflavonoides del geacutenero Citrus rutina y derivados)
dilatadores de las arterias coronarias (pro-antocianidinas) espasmoliacutetica
antihepatotoacutexica estroacutegena y diureacutetica Asiacute mismo la actividad antimicrobiana de
flavonoides prenilados y otros fenoles y la accioacuten fungitoacutexica de las
isoflavonas1421
En la actualidad los flavonoides son utilizados para tratar diversos
desoacuterdenes cardiovasculares como la arterioesclerosis debido a la actividad que
ejercen sobre el sistema circulatorio mejorando la circulacioacuten perifeacuterica la
movilizacioacuten del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar asiacute mismo
presentan actividad antialeacutergica antibacteriana hepatoprotectora antifuacutengica e
incluso puede ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas1036
El proceso de extraccioacuten de los diferentes flavonoides a partir de una planta
medicinal es diverso Pudieacutendose utilizar diferentes teacutecnicas o procesos
extractivos En cuanto a la extraccioacuten de flavonoides en Piper aduncum
ldquomaticordquo se realiza a partir del material fresco o incluso seco siempre y cuando
no se altere su composicioacuten Se utilizan inicialmente disolventes no polares o
ligeramente polares para separar las clorofilas gomas y agliconas de flavonoides
altamente metoxiladas Los flavonoides que poseen un gran nuacutemero de grupos
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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8
Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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hidroxilos insustituidos o azucares son considerados polares por lo que son
ligeramente solubles en disolventes polares como el metanol y etanol Eacuteste
proceso es favorable para la extraccioacuten de la mayoriacutea de flavonoides pero no para
las antocianidinas o flavonoides de baja polaridad los cuales aparecen en la
superficie de las plantas1334
La espectrofotometriacutea UV-visible es una teacutecnica analiacutetica que permite
determinar la concentracioacuten de un compuesto en solucioacuten Para realizar este tipo
de medida se emplea un espectrofotoacutemetro en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucioacuten y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma33
Los flavonoles muestran dos bandas definidas La banda I de mayor
longitud de onda en el rango 330-360 nm asociada con la funcionalidad
cinamoiacutelo y la banda II entre 250-280 nm debida al anillo aromaacutetico A
(funcionalidad benzoiacutelo) La posicioacuten la banda II permite cuantificar diversos
tipos de flavonoides por la similitud estructural que poseen3233
Es importante tambieacuten la aplicacioacuten correcta de operaciones unitarias
previas como son el secado de la droga vegetal la molienda el tamizado la
extraccioacuten filtrado para realizar un buen proceso de cuantificacioacuten en
vegetales2223
No todas las plantas de la misma especie producen siempre igual cantidad y
concentracioacuten de principios activos Estos pueden variar mucho de una planta a
otra dependiendo de diversos factores bioloacutegicos o ambientales3
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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IOQUIM
ICA
38
M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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40
Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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Uno de los aspectos maacutes importantes en el estudio de plantas medicinales es
elegir aquella muestra que nos permita obtener elevados contenidos de principios
activos y por ende un mayor rendimiento del material vegetal esto va a depender
tanto de factores internos de la planta (adecuado crecimiento de la especie) como
de factores externos (la influencia de las condiciones geograacuteficas y climaacuteticas)
Esencialmente el clima y los diversos factores ambientales como son la
temperatura rayos ultravioleta altitud precipitaciones influyen en un momento
determinado en el crecimiento desarrollo y en especial en la produccioacuten de los
metabolitos secundarios presentes en los vegetales336
Debido a que la zona geograacutefica influye en la cantidad de metabolitos
secundarios presentes en las plantas entonces convendriacutea cuantificar los
flavonoides para usar la especie Piper aduncum ldquomaticordquo que contiene mayor
cantidad de estos principios activos que nos permita una mejor dosificacioacuten en el
tratamiento de enfermedades de las viacuteas respiratorias digestivas y genitourinaria
y tambieacuten porque se evitariacutea la depredacioacuten de los recursos naturales puesto que
para preparar un extracto de mayor concentracioacuten se requeriraacute menos droga
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9
2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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10
II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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23 McMahon G Anaacutelisis Instrumental 7degedInglaterra Wiley 2007p18-5598
24 Miller J Estadiacutestica y Quimiometria para Quiacutemica Analiacutetica4deged Madrid
Pearson Educacioacuten 2002p 21-37
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94332pdfsequence=1
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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2 PROBLEMA
iquestCuaacutel es la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de la especie Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
3 HIPOTESIS
Impliacutecita
4 OBJETIVOS
Realizar la identificacioacuten cualitativa de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del Jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Determinar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
Comparar la cantidad de flavonoides totales contenidos en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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26
V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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II MATERIAL Y MEacuteTODO
1 MATERIALES
11 Material de Estudio
Material Botaacutenico
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de
Chota departamento de Cajamarca
1000 g de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
12 Material de Laboratorio
Material de vidrio
-El de uso comuacuten en el laboratorio
Equipos de Laboratorio
- Balanza Analiacutetica ldquoSartoriusrdquo Serie BP301S
- Bantildeo Mariacutea Serie DINI12877-KI
- Bomba de vaciacuteo ldquoGeneral Electricrdquo Serie 5KH33DM68
- Espectrofotoacutemetro ldquoHPrdquo Serie 8450 con arreglo de diodos
- Estufa ldquoMemmertrdquo Serie UM-300
- Refrigerador ldquoColdexrdquo
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13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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13
233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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IOQUIM
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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Y B
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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IOQUIM
ICA
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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52
4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Y B
IOQUIM
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53
Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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IOQUIM
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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IOQUIM
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56
A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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57
6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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58
Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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59
Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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60
Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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61
El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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62
La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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11
13 Material Quiacutemico
-Aacutecido Sulfuacuterico qp
- Aacutecido Clorhiacutedrico cc
- Agua destilada
-Etanol al 50
-Etanol 96ordm Gay Lussac
-Quercetina patroacuten
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12
2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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13
233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Y B
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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34
Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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ICA
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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IOQUIM
ICA
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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41
Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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2 MEacuteTODO
21 Recoleccioacuten de la materia prima
Las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo fueron recolectadas en el distrito de
Chota departamento de Cajamarca y en el jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de
Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillo en el mes de febrero del
2012
22 Seleccioacuten de la muestra
En esta etapa se descartoacute toda parte de la muestra que no reunioacute las condiciones
necesarias para su utilizacioacuten se eliminoacute las hojas secas marchitas que
estuvieron cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra etc
23 Preparacioacuten de la muestra
231 Lavado de la droga
Luego de la separacioacuten de las sustancias extrantildeas se procedioacute a lavar el
material vegetal con agua potable a chorro y despueacutes con agua destilada
232 Secado de la muestra
Despueacutes de lavar las hojas maduras de Piper aduncum ldquomaticordquo se dejoacute
secar ambas muestras bajo la sombra por espacio de dos diacuteas y en seguida
se continuoacute con el secado en estufa a una temperatura menor de 40degC
durante 24 horas
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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VI REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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2007p 43-50 60-72
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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233 Pulverizacioacuten y tamizaje
Se pulverizoacute las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizoacute
el polvo de las hojas con un tamiz No 075 para clasificar el tamantildeo de
partiacutecula
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en frascos de vidrio de
boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extraccioacuten
24 Identificacioacuten cualitativa de flavonoides
REACCIOacuteN DE SHINODA20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Se antildeadioacute pequentildeos Trozos de Mg
Luego se agregoacute 1 ml de HCl cc
Se observoacute coloracioacuten
caracteriacutestica
Coloracioacuten rojiza Indicoacute
la presencia de Flavonas
y Flavonoles
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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26
V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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REACCIOacuteN CON H2SO4 20
Filtrar
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum ldquomaticordquo
Se agregoacute 10 ml de Etanol al 50 y se llevoacute a reflujo por 10
minutos
Se midioacute 1 ml del filtrado obtenido
Luego se agregoacute 1 ml de H2SO4 qp
Se observoacute coloracioacuten caracteriacutestica
Coloracioacuten amarilla intensa Indicoacute
la presencia de Flavonas y
Flavonoles
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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IOQUIM
ICA
39
ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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25 Obtencioacuten del extracto
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la hoja
de Piper aduncum ldquomaticordquo durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50 luego se enfrioacute y filtroacute al vaciacuteo
lavaacutendose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50
para desecharlo finalmente el filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo
mariacutea hasta la mitad del volumen inicial se enfrioacute en bantildeo de hielo durante
30 minutos y luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con
4 porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se eliminoacute el
filtrado y los lavados y el filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40
oC durante 12 horas luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de
etanol al 96 que se calentoacute previamente a 50 deg C la solucioacuten se pasoacute a
un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute el volumen con etanol al 96
(solucioacuten muestra) El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
El procedimiento se repitioacute para obtener un total de seis muestras de
extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo Tres muestras
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y tres muestras del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad
Nacional de Trujillo
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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IOQUIM
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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26 Cuantificacioacuten de flavonoides
Se transfirioacute 1 ml del extracto hidroalcohoacutelico a una fiola de 10 ml
aforaacutendose con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la absorbancia de
eacutesta solucioacuten a 258 nm
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las muestras
obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de quercetina los cuales se disolvieron
con etanol de 96 ordm GL y se aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1
ml a una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
La expresioacuten matemaacutetica para los caacutelculos es
Determinacioacuten de flavonoides totales expresados como quercetina en
el extracto hidroalcohoacutelico
X = Am x CST x 10 x PST
AR
DONDE
X Contenido de flavonoides totales expresados como
Quercetina (mgmL)
Am Absorbancia de la solucioacuten muestra
CST Concentracioacuten del estaacutendar de lectura (mgmL)
AR Absorbancia de la solucioacuten de referencia
PST Potencia del estaacutendar
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27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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19
IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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35
Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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56
A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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60
Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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62
La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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17
27 Tratamiento estadiacutestico de los datos obtenidos de las muestras
A los resultados obtenidos se les aplicoacute las pruebas estadiacutesticas Media
desviacioacuten estaacutendar coeficiente de variacioacuten y t de Student5
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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19
IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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35
Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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56
A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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60
Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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62
La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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III RESULTADOS
Cuadro 1 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito
de Chota departamento de Cajamarca
Cuadro 2 Flavonoides totales expresados como Quercetina en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Flavonoides totales
mgmL
M1
00199
M2
00200
M3
00204
Promedio 00201
Muestra Flavonoides totales
mgmL
00094 M1
00098
M2
00099 M3
Promedio 00097
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19
IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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IOQUIM
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35
Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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63
7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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19
IV DISCUSIOacuteN
Se ha demostrado seguacuten estudios que aunque dos muestras sean de la misma
especie la variacioacuten en la produccioacuten de sus metabolitos secundarios entre ellos
los flavonoides estariacutea condicionada por distintos factores ambientales como son
La altitud el clima las radiaciones ultravioleta y las precipitaciones Por tanto una
elevada variacioacuten quiacutemica en una especie puede jugar un papel muy importante ya
que nos permitiraacute evaluar la adaptacioacuten de la planta frente a diferentes factores
bioacuteticos abioacuteticos y elegir aquella que nos proporcione oacuteptimos resultados en
cuanto a su concentraciograven3
En el presente estudio se cuantificoacute flavonoides totales en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo con el fin de obtener
informacioacuten acerca de como variacutea la cantidad de flavonoides de una misma
especie en dos haacutebitats distintos y que factores ambientales estariacutean involucrados
en dicha variacioacuten
Para ello se realizoacute la identificacioacuten de flavonoides mediante la reaccioacuten de
Shinoda y la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp en la reaccioacuten de Shinoda se
obtuvo una coloracioacuten rojiza y en la reaccioacuten con aacutecido sulfuacuterico qp se obtuvo
una coloracioacuten amarilla intensa ambas coloraciones indican la presencia de
flavonas y flavonoles en los extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca
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y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional
de Trujillordquo
Seguacuten los cuadros 1 y
2 la cantidad de flavonoides totales expresados
como Quercetina encontrados en el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca fue 00201 mg mL eacuteste valor es superior a 00097 mg mL cantidad
de flavonoides totales expresados como Quercetina hallada en el extracto
hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten
Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo Ambas muestras son de la misma especie sin embargo se encuentran
diferencias significativas (Anexo 2) respecto a la cantidad de flavonoides
Los resultados descritos anteriormente nos permiten inferir que las
diferencias encontradas en Chota y Trujillo estariacutean dadas por la influencia de
diversos factores ambientales asiacute detallan Araujo A y Col quienes realizaron un
anaacutelisis quiacutemico en hojas de 18 ejemplares de Piper aduncum L (Piperaceae) en
distintas regiones de Brasil Mediante un diagrama de caja se indicoacute la variacioacuten
en la concentracioacuten de los compuestos de metabolismo secundario de Piper
aduncum entre las poblaciones estudiadas Eacutestas variaciones estariacutean asociados
con las distintas condiciones ambientales la influencia de sus haacutebitats y la
actividad enzimaacutetica de la composicioacuten de las hojas de Piper aduncum6
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21
Se debe tener en cuenta que las concentraciones de metabolitos secundarios
de una planta pueden variar dependiendo de diversos factores ecoloacutegicos como
cambios estacionales luz temperatura humedad contaminacioacuten la presencia o
ausencia de organismos patoacutegenos deacuteficit hiacutedrico etc Asiacute Caldwell C y Col
(2005) sentildealan que el contenido y perfil de metabolitos secundarios puede variar
con las diferentes condiciones climaacuteticas y geograacuteficas En la investigacioacuten
realizada en semillas de soya (Glycine max L) observaron un incremento en la
concentracioacuten de isoflavonas al aumentar la temperatura la concentracioacuten de CO2
y el deacuteficit hiacutedrico9
La provincia de Chota de donde procede una de las muestras se caracteriza
por ser un valle interandino ubicado a 2 388 msnm gran variedad climaacutetica desde
caacutelido seco hasta subhuacutemedo y friacuteo Durante los meses de Enero a Marzo hay un
invierno de intensas lluvias en esta zona
La segunda muestra procede de la provincia de Trujillo ubicada a 34
msnm se caracteriza tener un clima caacutelido y soleado durante buena parte del antildeo
Su temperatura promedio oscila entre los 20 ordmC y 21 ordmC y en verano (Enero a
Marzo) supera los 30 ordmC
Existen variaciones cuantitativas dependientes de la estacioacuten asiacute la induccioacuten
de la siacutentesis de flavonoides depende de la luz ultravioleta y del contenido de agua
en las hojas siendo la suma de estos factores relevantes en su produccioacuten total El
estreacutes hiacutedrico la altitud las altas temperaturas y alta radiacioacuten ultravioleta son
condiciones que en las cuales la secrecioacuten de flavonoides es potenciada36
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Valares C en su trabajo de investigacioacuten intitulado ldquoVariacioacuten del
metabolismo secundario en plantas debida al genotipo y al ambienterdquo concluye
que las hojas joacutevenes presentan mayor cantidad de flavonoides y diterpenos que
los tallos y las hojas maduras son las que tienen menor cantidad Asiacute mismo
existe una gran variacioacuten estacional respecto a la concentracioacuten de los
compuestos del metabolismo secundario de Cistur ladanifer siendo en verano
cuando se segrega la mayor cantidad de flavonoides y en invierno la menor En
cuanto a la variacioacuten interpoblacional de los compuestos del metabolismo
secundario en Cistur ladanifer los resultados sugieren que la cantidad de
flavonoides estaacute relacionada de forma positiva con las temperaturas maacuteximas y
la altitud36
La altitud influye significativamente de forma positiva en la secrecioacuten de
flavonoides Debido a que la radiacioacuten recibida por las plantas es mayor en zonas
de altura los flavonoides actuacutean como filtros solares en la epidermis de las hojas
verdes potenciaacutendose asiacute la siacutentesis y almaceacuten de estos compuestos fenoacutelicos
cumpliendo un posible rol de proteccioacuten contra el dantildeo fotooxidativo causado por
la radiacioacuten ultravioleta Asiacute Bedascarrasbure E (2004) sentildeala en su
investigacioacuten que el contenido de flavonoides fue 37 para el Parque Chaquentildeo
y 129 para el Valle Calchaquiacute Esta diferencia probablemente podriacutea deberse
entre otros factores a la radiacioacuten recibida por las plantas en el Valle Calchaquiacute
(por tratarse de un valle de altura)7
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La temperatura cumple un papel importante en la produccioacuten de metabolitos
secundarios influye en el crecimiento acelerado y en el equilibrio entre el proceso
de fotosiacutentesis y respiratorio por consiguiente en la produccioacuten de los principios
activos Asiacute Doll U y Col en el trabajo de investigacioacuten intitulado
ldquoPropagacioacuten de estacas y concentracioacuten de taninos y flavonoides en hojas de dos
procedencias de Ugni molinae de la regioacuten del Maule (Chile)rdquo concluyen que la
concentracioacuten de flavonoides fue significativamente mayor en las hojas de sol que
en las hojas de sombra La diferente concentracioacuten de flavonoides entre hojas de
sol y hojas de sombra demuestra la influencia ambiental en este paraacutemetro12
Con relacioacuten a las precipitaciones las mismas juegan un rol fundamental al
modificar los efectos ecoloacutegicos de otros factores por ejemplo regulador de las
temperaturas Las lluvias ademaacutes influyen sobre la distribucioacuten geograacutefica de las
plantas y los metabolitos de las plantas son seriamente afectados por su exceso o
por ausencia de las mismas26
Acevedo (2003) Encontroacute diferencias en la concentracioacuten de flavonoides
entre poblaciones de boldo (Peumus boldus Mol) del norte centro y sur del paiacutes
El contenido de flavonoides fue similar en las descendencias cultivadas en un
mismo ambiente por lo que las diferencias encontradas entre poblaciones
distintas tendriacutean su origen en efectos ambientales tales como el aumento o
disminucioacuten de temperaturas la presencia o ausencia de precipitaciones y la
altitud2
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De acuerdo a los resultados estadiacutesticos en los cuadros 6 y 7 (Anexo 1) los
extractos hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa
Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo presentan una desviacioacuten estaacutendar correspondiente a
000026 mg mL
La desviacioacuten estaacutendar es una medida de dispersioacuten muy uacutetil que nos
permite estandarizar los datos con los que trabajamos y sobre todo comparar dos
poblaciones en las cuales se estaacute estudiando la misma variable seguacuten el resultado
obtenido ambas muestras presentan un mismo grado de dispersioacuten siendo eacuteste
muy pequentildeo24
Con respecto al coeficiente de variacioacuten seguacuten los cuadros 6 y 7(Anexo 1)
eacuteste fue de 13 y 27 para los extractos hidroalcohoacutelicos de las hojas de
Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
respectivamente
El coeficiente de variacioacuten es una medida relativa de dispersioacuten que expresa
a la desviacioacuten estaacutendar como un porcentaje de la media Analizando los datos
encontrados la primera muestra presenta mayor homogeneidad en cuanto a su
distribucioacuten de datos sin embargo en modo general la dispersioacuten de datos es
pequentildea con respecto a la media para ambas muestras encontraacutendose dentro de
los rangos permitidos por lo tanto los valores obtenidos son precisos ya se
mantuvieron constantes todas aquellas condiciones que si cambiariacutean podriacutean
causar desviaciones sistemaacuteticas de medicioacuten
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Asiacute mismo el intervalo de confianza para el extracto hidroalcohoacutelico de las
hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota
departamento de Cajamarca fue (00201 00006) mgmL (Anexo 1) y para el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT fue (00097 00006)
mgmL (Anexo 1) Un intervalo de confianza es un rango de valores (calculado
en una muestra) en el cual se encuentra el verdadero valor del paraacutemetro con una
probabilidad determinada
En el caso del extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca con un
intervalo de confianza (00201 00006) mgmL podemos afirmar que a un
nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra tendriacuteamos
que dicha media se encuentra comprendida entre 00195 mg mL y 00207 mg
mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten inicial de
00201 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006 puntos de
la verdadera media de la muestra
En cuanto al extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
UNT cuyo intervalo de confianza fue (00097 00006) mgmL se afirma que a
un nivel de confianza del 95 a partir de los datos tomados de la muestra
tendriacuteamos que dicha media se encuentra comprendida entre 00091 mg mL y
00103 mg mL lo que nos indica que a ese nivel de confianza la estimacioacuten
inicial de 00097 mg mL puede desviarse por defecto o por exceso hasta 00006
puntos de la verdadera media de la muestra
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V CONCLUSIONES
Se identificoacute cualitativamente la presencia de flavonoides en los extractos
hidroalcohogravelicos de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del distrito
de Chota departamento de Cajamarca y del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de Trujillordquo
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina obtenidos en
el extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente
del distrito de Chota departamento de Cajamarca fue 00201 mgmL
La cantidad de flavonoides totales expresados como quercetina en el
extracto hidroalcohoacutelico de las hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedente del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo fue 00097 mgmL
Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que existen diferencias
significativas entre los extractos hidroalcohogravelicos las hojas de Piper aduncum
ldquomaticordquo procedente del distrito de Chota departamento de Cajamarca y del
jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la Universidad Nacional de
Trujillo
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Anexo 1
Cuadro 3 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Cuadro 4 Absorbancias del extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Muestra Abslt258 nmgt Promedios de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0118
Lectura 2 ndash 0118
Lectura3 ndash 0119
0118
M2
Lectura 1 ndash 0119
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0119
0119
M3
Lectura 1 ndash 0122
Lectura 2 ndash 0120
Lectura 3 ndash 0121
0121
Muestra Abslt258 nmgt Promedio de las
Absorbancias
M1
Lectura 1 ndash 0054
Lectura 2 ndash 0056
Lectura 3 ndash 0058
0056
M2
Lectura 1 ndash 0058
Lectura 2 ndash 0057
Lectura 3 ndash 0059
0058
M3
Lectura 1 ndash 0060
Lectura 2 ndash 0059
Lectura 3 ndash 0059
0059
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Cuadro 5 Absorbancia de 00080 mgmL de quercetina estaacutendar
Nombre
Lecturas
Abslt258 nmgt
Promedio de las
Absorbancias
Estaacutendar
Lectura 1
Lectura 2
Lectura 3
Lectura 4
Lectura 5
0474
0476
0475
0473
0476
0475
Cuadro 6 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del distrito de Chota departamento de
Cajamarca
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
13
Liacutemites de Confianza
(00201 00006) mgmL
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Cuadro
7 Valores del anaacutelisis estadiacutestico para los flavonoides totales
expresados como Quercetina en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper
aduncum ldquomaticordquo procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos
Martiacutenezrdquo de la UNT
Desviacioacuten Estaacutendar
000026 mgmL
Coeficiente de Variacioacuten
27
Liacutemites de Confianza (00097 00006) mgmL
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ANEXO 2
Cuadro 8 Prueba ldquoFrdquo
PRUEBA F PARA VARIANZAS DE DOS MUESTRAS
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Grados de libertad 2 2
F 1
P(Flt=f) una cola 05
Valor criacutetico para F (una cola) 19
Cuadro 9 Prueba ldquot de Studentrdquo
PRUEBA T PARA DOS MUESTRAS CON VARIANZAS IGUALES
Chota Trujillo
Media 00201 00097
Varianza 7E-08 000000007
Observaciones 3 3
Varianza agrupada 7E-08
Diferencia hipoteacutetica de las
medias
0
Grados de libertad 4
Estadiacutestico t 481426452
P(Tlt=t) una cola 55687E-07
Valor criacutetico de t (una cola) 213184678
P(Tlt=t) dos colas 11137E-06
Valor criacutetico de t (dos colas) 277644511
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Anexo 3
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0056
X = 00094 mgmL
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M2 Absorbancia 0058
X = 00098 mgmL
M3 Absorbancia 0059
X = 00099mgmL
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ANEXO 4
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la UNT
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mgmL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 10
Muestra
1 00094 -00003 000000009
2 00098 00001 000000001
3 00099 00002 000000004
Suma 000000014
S =
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 27
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00097 00006) mgmL
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Anexo 5
Caacutelculo para determinar la concentracioacuten de Flavonoides totales en el
extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo procedentes
del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Peso del estaacutendar 00402 g
Potencia del estaacutendar 994
Concentracioacuten del estaacutendar de lectura
CST = 00402 x 1 = 000000804 gml
100 50
CST = 000804 mgmL
Factor de dilucioacuten de la muestra 1000
Mp ---------------100
I------------------10
M1 Absorbancia 0118
X = 00199 mgmL
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M2 Absorbancia 0119
X = 00200 mgmL
M3 Absorbancia 0121
X = 00204mgmL
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ANEXO 6
Tratamiento estadiacutestico de los resultados para el contenido de flavonoides
totales en el extracto hidroalcohoacutelico de hojas de Piper aduncum ldquomaticordquo
procedentes del distrito de Chota departamento de Cajamarca
Determinacioacuten de la Media ldquoxrdquo
Se utilizoacute la siguiente foacutermula
Donde
n=Nuacutemero de determinaciones
mg mL
Determinacioacuten de la Desviacioacuten Estaacutendar ldquoSrdquo
Para hallarla se empleoacute la foacutermula siguiente
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Cuadro 11
Muestra
1 00199 -00002 000000004
2 00200 -00001 000000001
3 00204 00003 000000009
Suma 000000014
S=
S= 000026 mgmL
Determinacioacuten del Coeficiente de variacioacuten
Para calcularlo se utilizoacute la foacutermula descrita a continuacioacuten
Donde
S= Desviacioacuten Estaacutendar
CV = 13
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Determinacioacuten de los intervalos de Confianza de la Media
Donde
ttab = Valor de t tablas para un 95 de confianza y n ndash 1 grados
de libertad
S= Desviacioacuten Estaacutendar
n=Nuacutemero de determinaciones
(00201 00006) mg mL
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ANEXO 7
REACCIOacuteN DE SHINODA (para identificar flavonoides)
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ANEXO 8
Tabla de los valores de la distribucioacuten ldquotrdquo
Los valores criacuteticos de ldquotrdquo son adecuados para un contraste de dos colas Para un
contraste de una cola el valor se toma de la columna par dos veces el valor P
deseado es decir para un contraste de una cola P=005 2 grados de libertad el
valor criacutetico se lee de la columna P=010 y es igual a 292
TABLA A1 La Distribucioacuten ldquotrdquo
n=Grados de
libertad
90
010
95
005
98
002
99
001
1 6314 12706 31821 63657
2 2920 4303 6965 9925
3 2353 3182 4541 5841
4 2132 2776 3747 4604
5 2015 2571 3365 4032
6 1943 2447 3143 3707
7 1895 2365 2998 3499
8 1860 2306 2896 3355
9 1833 2262 2821 3250
10 1812 2228 2764 3169
11 1796 2201 2718 3106
12 1782 2179 2681 3055
13 1771 2160 2650 3012
14 1761 2145 2624 2977
15 1753 2131 2602 2947
16 1746 2120 2583 2921
17 1740 2110 2567 2898
18 1734 2101 2552 2878
19 1729 2093 2539 2861
20 1725 2086 2528 2845
30 1697 2042 2457 2750
40 1684 2021 2423 2704
60 1671 2000 2390 2660
120 1658 1980 2358 2617
infin 1645 1960 2326 2576
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ANEXO 9
Tabla de dilucioacuten de alcoholes
TABLA A2 Dilucioacuten de alcoholes
Para preparar el alcohol de la concentracioacuten deseada se debe agregar a 100 ml de
alcohol que se dispone la cantidad de agua que indica la tabla de dilucioacuten
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ANEXO 10
FOTOGRAFIacuteAS DE LA INVESTIGACIOacuteN REALIZADA
1 Recoleccioacuten y Seleccioacuten de la Materia Prima
2 Lavado y Secado de las muestras
Ambas muestras fueron recolectadas en el mes de
febrero del 2012
Se eliminoacute las hojas secas marchitas que estuvieron
cubiertas por hongos ademaacutes de materias extrantildeas como tallos
raiacuteces tierra
Se procedioacute a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y
despueacutes con agua destilada Luego se dejoacute ambas muestras bajo la
sombra por espacio de 2 diacuteas en seguida se continuoacute con el secado
en estufa a una temperatura menor a 40degC durante 24 horas
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3 Pulverizacioacuten y Tamizaje
El producto obtenido se guardoacute hermeacuteticamente en
frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz
hasta el momento de la extraccioacuten
Se pulverizoacute las hojas
secas con la ayuda de
un mortero y luego se
tamizoacute el polvo de las
hojas con un tamiz
No 075 para
clasificar el tamantildeo
de partiacutecula
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4 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN DE SHINODA
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten de Shinoda se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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Se midioacute 1 ml del filtrado y se le antildeadioacute un pequentildeo trozo de
magnesio (granallas) seguido por gotas de HCl cc el desarrollo
inmediato de coloracioacuten indicoacute la presencia de flavonoides
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El desarrollo inmediato de una coloracioacuten rojiza
caracteriacutestica indicoacute la presencia de flavonas y
flavonoles en ambas muestras
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5 Identificacioacuten Cualitativa de flavonoides REACCIOacuteN CON H2SO4 qp
La identificacioacuten de Flavonoides mediante la Reaccioacuten con H2SO4 qp se
realizoacute en ambas muestras
Se pesoacute 1 g de muestra seca y molida de Piper aduncum
Se agregoacute 10 ml de etanol al 50 y llevoacute a reflujo por 10 minutos
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A IV gotas del filtrado obtenido se le antildeadioacute I gota de H2SO4 qp
El desarrollo inmediato de una coloracioacuten amarilla intensa
indicoacute la presencia de flavonas y flavonoles en ambas muestras
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6 Obtencioacuten del extracto El procedimiento se repitioacute para obtener un total de 6
muestras de extracto hidroalcohoacutelico de Piper aduncum ldquomaticordquo
3 muestras del distrito de Chota departamento de Cajamarca
3 muestras del jardiacuten Botaacutenico ldquoRosa Elena de Riacuteos Martiacutenezrdquo de la
Universidad Nacional de Trujillo
Para la extraccioacuten de los flavonoides se reflujoacute 05 g de polvo de la
hoja de Piper aduncum durante 2 horas con 20 ml de aacutecido sulfuacuterico
al 10 y 20 ml de etanol al 50
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Luego se enfrioacute y posteriormente se filtroacute al vaciacuteo lavaacutendose el
residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 para
desecharlo finalmente
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Posteriormente se enfrioacute el filtrado en bantildeo de
hielo durante 30 minutos
El filtrado obtenido se evaporoacute en bantildeo mariacutea hasta la mitad
del volumen inicial
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Luego se filtroacute al vaciacuteo lavando el precipitado formado con 4
porciones de 10 mL de agua destilada friacutea (10-15 deg C) Se
eliminoacute el filtrado y los lavados
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El filtro se secoacute en una estufa a temperatura de 40 oC
durante 12 horas
Luego el residuo del filtro se disolvioacute con 70 ml de etanol al 96 que
se calentoacute previamente a 50 deg C
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La solucioacuten se pasoacute a un volumeacutetrico de 100 mL y se completoacute
el volumen con etanol al 96 (solucioacuten muestra)
El extracto hidroalcohoacutelico obtenido se conservoacute en
frascos de color aacutembar
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7 Cuantificacioacuten de Flavonoides
El procedimiento se repitioacute por triplicado para cada una de las
muestras obtenidas
Como estaacutendar se empleoacute 004 g de Quercetina
los cuales se disolvieron con etanol de 96 ordm GL y se
aforoacute a 50 ml de esta solucioacuten se transfirioacute 1 ml a
una fiola de 100 ml aforaacutendose con etanol al 50
Como blanco se utilizoacute etanol al 50
Se transfirioacute 1 ml del extracto preparado a una fiola de 10
ml y se aforoacute con etanol al 50 posteriormente se leyoacute la
absorbancia de eacutesta solucioacuten a 258 nm
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