TÉCNICAS HISTOLÓGICASTIPOS DE TINCIÓNCLASES DE COLORANTESMaría José Pico Vela

Karla Vizuete

TÉCNICAS HISTOLÓGICASLa técnica histológica es una serie secuencial de pasos a través de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados

cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Obtención Fijación Inclusión

Corte Coloración Montaje

OBTENCIÓN:

Biopsia

•Consiste en la extracción de pequeños fragmentos de tejido de un organismo vivo.

Resección

Quirúrgica

•Consiste en la extirpación de órganos completos o de grandes partes de los mismos, a través de un procedimiento quirúrgico.

Autopsia o necropsi

a

•Es el examen de los órganos luego de la muerte, generalmente con el objetivo de determinar las causas de la misma.

Consiste en la provisión del material que se desea estudiar por medio del microscopio.

FIJACIÓN:Producen una rápida

muerte celular, evitando la autolisis

Preservan la morfología celular y

tisular

Preservan la composición

química

Penetran a los tejidos con relativa

rapidez

Facilitan la coloración posterior

Inhiben el crecimiento

microbiano y por lo tanto la

putrefacción

Aumentan la consistencia de los

tejidos

Algunos de ellos colorean sustancias

de los tejidos

Fijadores

Físicos

Calor

Desecación

Microondas

Químicos Simples

Alcoholes

Metanol

Aldehídos

Formaldehido

Ácidos

Ác. Acético

Sales

Bicromato de Potasio

Mezclas de Químicas

Alcohol Etílico+ Acido Acético

Acido pícrico + Formol + Acido

acético

Bicromato de potasio +

Bicloruro de mercurio +

Acido acético

Formaldehido +

Glutaraldehído

Parafina

•Observaciones en microscopios ópticos

•Los tejidos fijados se deshidratan en alcoholes pasándolos solventes intermediarios como el xileno o el benceno Y son colocados en una estufa con parafina fundida.

•Luego de impregnar al tejido, se deja solidificar a la parafina con el tejido incluido, constituyendo los bloques o tacos histológicos.

Resina Epoxi

•Observaciones en microscopios electrónica

•Los bloques resultantes, de gran dureza, son seccionados por la navaja de diamante o de vidrio del ultramicrótomo

INCLUSIÓN:

El tejido se impregna en un material que le confiere una consistencia adecuada para el corte.

COLORACIÓN:La coloración rutinaria trata

de posibilitar el estudio

morfológico o estructural, sin que se pueda

obtener mayor información

sobre la naturaleza

química de las estructuras observadas.

La histoquímica utiliza métodos

tendientes a identificar a un

determinado tipo de molécula o

sustancia, visualizándola

microscópicamente.

La mayoría de los colorantes citológicos o

histológicos son de naturaleza

naturaleza orgánica y

aromáticos.

MONTAJE:Consiste en colocar sobre el corte histológico ya coloreado una delgada lámina de vidrio llamada cubreobjetos, el cual se adhiere con algún adhesivo transparente conocidos como medios de montaje.

PREPARACIÓN DE UN FROTIS

Limpiar y secar el

portaobjetos

Colocar una gota de agua

Desinfectar el aza

Flamear la boca del tubo de cultivo

Tomar una muestra de

cultivo

Mezclar la muestra en la gota de

agua

Secar el frotis al aire

Fijar la muestra

pasándola por el

mechero

TINCIÓN

La tinción es una técnica auxiliar en

microscopía para mejorar el

contraste en la imagen vista al microscopio.

Las tinciones pueden ser usadas para

definir y examinar tejidos

en bruto, poblaciones celulares u

orgánulos dentro de células

individuales.

TIPOS DE TINCIONES:

Método “in vivo

”

•Se realiza a organismos o células vivas en su estado natural. Se utilizan colorantes llamados colorantes vitales, estos no causan daño al organismo o célula durante un tiempo corto, a largo plazo son tóxicos y mortales.

Método “in Vitro”

• Estudia al organismo vivo pero colocado en condiciones artificiales. Se realiza en células aisladas y fáciles de separar. Estas células se colocan sobre un sustrato adecuado que se llama medio de cultivo en el cual se mantienen con vida mientras dura el estudio.

SIN COLORANTE

No se utiliza ningún tipo de colorante.

Las muestras se extienden directamente sobre la superficie de

un portaobjetos para su observación.

El material puede diluirse con igual volumen de solución salina

fisiológica estéril.

Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie

del material.

En la imagen: Candida sp en un examen en fresco.

Este tipo de preparación se emplea para detectar trofozoítos móviles de parásitos intestinales

como Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros

parásitos, larvas y gusanos adultos, Trichomonas, hifas de

hongos, etc

TINCIÓN SIMPLE:

El Hidróxido de potasio permite ver

elementos de hongos ya que este

digiere parcialmente los

componentes proteicos, pero no

actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares

de los hongos.

Azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las

preparaciones en fresco de heces para observar la

presencia de leucocitos.

Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las

estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad.

TINCIÓN DIFERENCIADA

Se utilizan varios colorantes combinados.

Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química.

Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-Neelsen

En la imagen: BGN y levaduras en una tinción GRAM

LA TINCIÓN NEGATIVA

Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.

Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células.

La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células.

En la imagen: Cryptococcus neoformans en una tinción con tinta china.

TIPOS DE COLORANTES

La mayoría de los colorantes

son compuestos orgánicos .

Tienen alguna afinidad específica por los materiales

celulares.

Estos colorantes se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleídos y los polisacáridos ácidos.

Colorantes catiónicos

Azul de metileno

Cristal VioletaSafranina

Se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas.

Colorantes Aniones

Eosina

Rojo congo

Fuscina ácida

Los colorantes de este grupo se combinan con los

materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de los depósitos de grasa.

Colorantes Liposolubles

Negro Sudán

RECOMENDACIONES:

Algunos colorantes teñirán mejor sólo

después de que la célula haya sido tratada con otra

sustancia química.

Esta sustancia se denomina mordiente; habitualmente ácido

taníco. El mordiente se combina con un

constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el

colorante.

El azul de metileno es un buen colorante simple

que actúa sobre todas las células bacterianas

rápidamente y que no produce un color tan

intenso que oscurezca los detalles celulares.

Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben

usarse siempre con precaución, ya que pueden

conducir a errores.

Las moléculas de colorante forman en ocasiones

precipitados o agregados que parecen estructuras celulares

auténticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el

mismo colorante.

¡Gracias!