Departamento de Ciencias Naturales IES Alpajés

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PRÁCTICA: TÉCNICAS BÁSICAS DE MICROBIOLOGÍA-I CULTIVO DE BACTERIAS A PARTIR DE UN FROTIS FARÍNGEO CIENCIAS NATURALES DE 3º DE E.S.O OBJETIVOS

o Comprender el concepto de colonia bacteriana, medio de cultivo y halo de inhibición

o Conocer las técnicas de siembra y cultivo de bacterias o Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulación

de materiales biológicos. o Comprender la importancia de la eliminación de los residuos orgánicos o Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los

procedimientos para su utilización MATERIALES

o Depresor de lengua o Torunda estéril o Placas de agar-sangre o Asa de siembra o Rotulador de vidrio o Cinta adhesiva o Contenedor de residuos orgánicos

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Antes de empezar

o No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones.

o Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores serán llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biológicos, donde serán incinerados.

o Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.

o Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra.

o Al acabar la práctica, se deben lavar bien las manos. Toma de la muestra

o Se abre con cuidado, por un extremo, el depresor de madera, sin tocar el otro extremo para mantenerlo estéril.

o Distribuidos por parejas, uno de los miembros de la pareja sujeta con el depresor la lengua del otro, colocándola pegada al suelo de la boca, manteniendo despejada la abertura bucal.

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o CON CUIDADO, se introduce una torunda y se tocan suavemente las amígdalas, en donde se encuentran bacterias, intentando evitar el contacto con la lengua u otras zonas. Es normal que se provoque un reflejo de arcada. En este caso, se separa la torunda y se vuelve a intentar.

o Al finalizar, se tira el depresor al contenedor de desechos orgánicos.

o Se tapa la torunda y se rotula con el nombre del donante y la fecha, indicando con una F, que se trata de un frotis faríngeo.

Siembra

o A continuación se toma una placa de agar-sangre y se procede a la siembra del material recogido con la torunda. Se extrae la funda de la torunda y se pasa SUAVEMENTE por la superficie, cubriendo el área señalada en el dibujo como (A)

o Al finalizar, se tira la torunda al contenedor de desechos orgánicos.

Aislamiento

o Para intentar que las colonias crezcan separadas tomamos un asa de siembra y se realizan resiembras en dos zonas:

o (B) Tocando con el asa la zona (A) se realiza una línea zig-zagueante SUAVEMENTE sobre la superficie (no hay que perforar la superficie del agar-sangre)

o (C) Sin tocar las anteriores zonas. o Se tapa y se sella la placa con cinta adhesiva. o Se rotula la tapa indicando el nombre del donante, su grupo-clase,

la fecha y la F (de frotis faríngeo). Incubación y observación Se llevan las placas a incubar a 37ºC (temperatura corporal), durante 24 horas. Tras este período se recogen las placas y SIN ABRIR se observa

el crecimiento bacteriano. Al finalizar la práctica se entregan las placas al profesor para que sean destruidas junto con el resto de material empleado. OBSERVACIÓN

El medio de cultivo agar-sangre es un medio nutritivo general, no selectivo, en el cual pueden crecer casi todos los tipos de microorganismos. Su nombre deriva de que contiene un 5-10% de sangre desfibrinada (no coagula) extraída de caballo, conejo o, sobre todo, de carnero.

Las bacterias existentes en la faringe pueden ser de dos tipos:

o Flora bacteriana propia o normal, de vida saprofita (crecen sobre restos de comida). o Flora patógena, que provoca enfermedades (especialmente Streptococcus pyogenes,

responsable de la faringitis aguda, la fiebre reumática, angina estreptocócica, escarlatina, erisipela)

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Al tomar una muestra de la faringe, las bacterias existentes empiezan a dividirse. De una bacteria se forman miles o millones, dando lugar a una colonia, visible a simple vista. Todas las bacterias de una colonia son genéticamente idénticas a la bacteria que las originó e iguales entre sí.

Las resiembras tienen por objetos intentar conseguir que se formen colonias aisladas de la masa principal.

Al contener el medio de cultivo glóbulos rojos (agar-sangre) si existiera algún microorganismo patógeno se produciría la destrucción de estos glóbulos rojos, ya que estas bacterias tienen enzimas que rompen las paredes de los glóbulos rojos, y se formaría un halo de hemólisis: alrededor de la colonia de bacterias patógenas se forma una zona transparente. Así se detecta su presencia en la faringe.

Placa normal (sin hemólisis) Placa con microorganismos patógenos (hemólisis)

RESULTADOS

Dibuja la placa representando las colonias que han crecido en ella. Responde a las siguientes preguntas:

1) ¿Se observa un único tipo de colonias o hay varios tipos distintos? En caso de que haya tipos distintos describe las diferencias entre las colonias

2) ¿Qué es un halo de hemólisis?

3) ¿Por qué se produce?

4) ¿Para qué hay que resembrar?

5) ¿Qué ocurriría si tocáramos el material biológico con las manos?