técnicas in vitro para la valoración espermatica en bovinos

Técnicas in vitro para la valoración espermática en bovinos

Estudiante

Diego Fernando González Clavijo

Asesor

Dunia Yisela Trujillo Piso

MVZ, MSc, Phd©

SEMINARIO DE PROFUNDIZACIÓN EN REPRODUCCIÓN BOVINA VII COHORTE

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

IBAGUÉ – TOLIMA

2018

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Este obra está bajo una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional.

Técnicas in vitro para la valoración espermática en bovinos

1 Diego Fernando González Clavijo

1. Estudiante De Medicina Veterinaria Y Zootecnia, Universidad Cooperativa De Colombia, Facultad de Medicina

Veterinaria y Zootecnia, Sede Ibagué – Espinal.

Resumen

La implementación de técnicas in vitro para la valoración espermática es

fundamental en la implementación de programas reproductivos con el fin de generar

el uso eficiente del semen bovino. Logra mejorar la probabilidad de generar

animales de alta calidad genética y tener proyección a un sexo determinado,

haciendo el uso de técnicas como Citometría de Flujo, Computer Assisted Semen

Análisis (CASA), Reacción Acrosómica in vitro con Heparina, y test de host, siendo

estos los de mayor transcendencia laboratorial y comercial, por su fácil manejo y

acceso rápido, igualmente por el alto porcentaje en efectividad de evaluación

espermática. El presente trabajo busca, a través de un análisis comparativo de

varias técnicas in vitro, establecer cuáles son las ventajas y desventajas en la

valoración espermática del semen bovino.

Palabras clave: Citometría, Semen, Reproducción, Andrologia.

Abstract

The implementation of in vitro techniques for sperm assessment is fundamental

in the implementation of reproductive programs in order to generate the efficient use

of bovine semen. It manages to improve the probability of generating animals of high

genetic quality and have projection to a specific sex, making use of techniques such

http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/


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as Flow Cytometry, Computer Assisted Semen Analysis (CASA), Acrosome

Reaction in vitro with Heparin, and host test, being These are of greater laboratory

and commercial importance, because of their easy handling and rapid access, also

due to the high percentage of sperm evaluation effectiveness. The present work

seeks, through a comparative analysis of several in vitro techniques, to establish

which are the advantages and disadvantages in the sperm valuation of bovine

semen.

Key words: Cytometry, Semen, Reproduction, Andrology.

INTRODUCCIÓN

Para poder garantizar que el semen bovino a emplear en una técnica como

fertilización in vitro o inseminación artificial sea de óptima calidad y los

espermatozoides cumplan las características requeridas es necesario realizar un

examen completo del potencial reproductivo del macho a colectar, este análisis

consiste en efectuar una exploración física, sanitaria y una evaluación básica

macroscópica y microscópica del eyaculado (In vitro) (Moron, 2015).

En la valoración espermática la calidad del semen va a depender de que

contenga un número suficiente de espermatozoides viables, morfológicamente

normales y funcionalmente competentes (Garcia, 2015) esto se determina por

técnicas In vivo (Inseminaciones) o In vitro (Técnicas en laboratorio)

Las características básicas que se valoran macroscópicamente son el

volumen, color y aspecto del eyaculado. El volumen se expresa en mililitros (ml) y

normalmente un toro joven puede eyacular aproximadamente 2 ml de semen, y en



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adultos puede ser ≥ a 4 ml pudiendo llegar hasta 12 ml. El color y aspecto seminal

optimo debe ser cremoso, puede variar en aspecto lechoso hasta completamente

claro siendo estos últimos indeseables, con esta característica se pueden identificar

anormalidades como semen de color rojizos o amarillentos, indicando muestras

contaminadas (Brito, 2017)

Las características básicas que se valoran microscópicamente son la Motilidad

masal e individual, indica la capacidad de movimiento de los espermatozoides, La

Morfología que es muy importante para que el espermatozoide desempeñe su

función biológica, cumpliendo su estructura típica de cabeza, cuello, parte

intermedia y cola (Nuñez, 2015). En las técnicas de valoración espermática in vitro

se pueden encontrar el sistema CASA, La citometría de flujo, la reacción acrosómica

con heparina, y el test de host; (Veloz, 2017) las cuales son automatizadas, fiables,

de fácil ejecución y elevada repetibilidad (Fernandez, 2005) que permiten al

veterinario, técnico y propietario conocer si el semen de su reproductor es apto o

no, además existe la posibilidad de predecir el sexo, siendo esta técnica de gran

importancia en el sector lechero demostrando un avance significativo (Larocca,

2017)

En el sector productivo los avances que se llevan a cabo en la reproducción

animal son muy relevantes, logrando determinar aspectos importantes como la

clasificación de los gametos que darán como resultado un sexo específico en las

especies de producción (Agûero, 2012), con el fin de dar un uso adecuado a los

diferentes sistemas, para el caso específico de las lecherías, va en pro de generar

hembras y en ganaderías de carne generar machos y algunas hembras para el



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reemplazo (Jiménez, 2011), De esta manera se da cumplimiento a muchas

exigencias por parte de los ganaderos que van en pro del uso de nuevas tecnologías

y realizan aportes de desarrollo productivo al gremio (Alfonso, 2011).

La implementación de nuevas tecnologías en la reproducción bovina es

importante para la salud, el mantenimiento y la calidad del producto que se estará

generando, la compra de pajillas o la adquisición de machos reproductores

(Cabrera, 2014) en un hato puede garantizar ejemplares de buenas características

genotípicas y fenotípicas para las producciones, y el gremio ganadero bovino,

dejando un material genético competitivo (Jiménez, 2011)

MARCO TEÓRICO

La evaluación de las técnicas para la valoración espermática puede llegar a

determinar la calidad seminal para eliminar aquellos eyaculados que puedan

presentar características no apropiadas para lograr pajillas de calidad (Aquino,

2017).

Los métodos in vitro están siendo utilizados frecuentemente por su economía

y su rapidez en comparación con los métodos in vivo. La calidad seminal con estos

métodos puede ser identificada pero no la fertilidad real. Estas pruebas deben ser

objetivas, precisas, rápidas, sencillas y de bajo costo. Con estas características se

desarrollaron las siguientes técnicas. el sistema CASA, La citometría de flujo, la

reacción acrosómica con heparina, y el test de host (Veloz, 2017).



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La valoración espermática es un método que día a día a estado tomando

fuerza, debido a su importancia en la producción de pajillas de mejor calidad, la

realización de semen sexado, la disminución de espermatozoides alterados (Trujillo,

2017), y otros beneficios en la reproducción bovina (Muiño, 2008)

CITOMETRÍA DE FLUJO

La citometría de flujo es una técnica que se basa en el recuento o

caracterización de células por medio de un citómetro, fue desarrollada en los años

50 cuando su fin era contar y caracterizar células sanguíneas, actualmente está

técnica representa un método rápido, objetivo y cuantitativo de análisis de células,

núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión (Izquierdo et

al, 2016)

La citometría de flujo es la principal herramienta en el sexaje de semen bovino,

por medio de la cual se hace la diferenciación de los espermatozoides con

cromosoma X y los que tienen el Y (Echeverry , 2015) logrando también determinar

algunas características morfológicas y fisiológicas de los mismos, y clasificando los

de mejor desempeño, y obteniendo cantidades de semen de óptima calidad y con

una probabilidad superior al 85% en producto final de la preñez con el sexo escogido

sea macho o hembra (Oliveira, 2009).

Los espermatozoides son sometidos a un colorante específico

(bisbenzimidazol, Hoechst 33342) que se fija de manera selectiva al ADN (Schenk

et all, 1999) que genera fluorescencia cuando es sometido a luz ultravioleta emitida



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por un láser de onda corta; la fluorescencia que emite el espermatozoide X es un 4

% mayor comparado con la emitida por el espermatozoide Y (Seidel, 2007).

Para detectar la diferencia de fluorescencia y separar los espermatozoides

deseados, se utiliza un citómetro de flujo. Consiste en un circuito cerrado de alta

velocidad de flujo de líquidos que permite alinear y “leer” los espermatozoides

individualmente en microgotas. La fluorescencia que produce cada espermatozoide

teñido es procesada por un software que permite al operador seleccionar la

población espermática con mínima o máxima luminosidad, según el sexo. Los

espermatozoides elegidos son cargados eléctricamente, desviados del flujo original

en un campo magnético y finalmente recolectados para su posterior congelación

(Teruel, 2009)

Esta técnica posiblemente sea la de mayor uso y desempeño en la

programación de sistemas de reproducción aplicados a diferentes ganaderías,

elevando sus índices de natalidad tanto de hembras para las lecherías, como de

machos para las de propósito cárnico (Ramirez et al, 2016), así se garantiza que los

tiempos de reemplazo y el crecimiento adecuado de los rebaños sea el indicado

para la región donde se establecerá y sus resultados sean favorables para el

productor (Franchini, 2016).

Igualmente es una de las técnicas con mayor antigüedad en la innovación

reproductiva, y que presenta en la actualidad el más alto índice de resultados

acertados con su finalidad (Magali, 2012), logrando que quienes han usado la



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técnica incrementen sus rebaños, también productivamente eleven sus tasas y

económicamente han sido favorecidos positivamente (Urruego, 2008).

Esta técnica es de las más seguras y que representa un gran porcentaje de

viabilidad del semen, ya que tiene una seguridad casi del 100% en tener

espermatozoides vivos y solo el 10% de estos podrían lograr ser el sexo no deseado

(Muiño, 2008), pero mayormente el resultado en los procesos reproductivos es

siempre el deseado, lo que infiere mucho en la productividad de los hatos y el

crecimiento favorable de los rebaños (Quintero, 2017), y se destaca en alta

proporción en la producción de animales genéticamente valiosos.

El citómetro de flujo evalúa la calidad, estructura, función y motilidad del

esperma luego de ciclos de congelación/descongelación; valorar daños en el

esperma y su calidad para la fertilización (Izquierdo et al, 2016) además el

porcentaje de daño espermático encontrado en los espermatozoides sexados

mediante citometría de flujo puede ser el doble o hasta el triple que los detectados

mediante microscopía de fluorescencia en los espermatozoides criopreservados de

la forma tradicional (Echeverry , 2015).

COMPUTER ASSISTED SEMEN ANÁLISIS (CASA)

El sistema de análisis computarizado asistido del semen se ha desarrollado

con el paso de tiempo y con relación a los diferentes métodos manuales que han

servido de ayuda como los son: videomicrografia, cinemicrografia, fotografía con

tiempo de exposición y fotografía con exposición múltiple, siendo el primero el más

acertado e implementado en el acoplamiento a sistemas computarizados dando



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como finalidad el CASA (Agûero, 2012), dando como resultado positivo el desarrollo

de un equipo que se encarga de medir características morfológicas y funcionales

del semen, que a su vez determina el porcentaje de viabilidad y efectividad fértil del

mismo (Urrego, 2005).

El sistema está conformado por una cámara de video conectada a un

microscopio de fases y a una computadora que digitaliza las imágenes del tamaño

y de los movimientos espermáticos. Las imágenes digitalizadas permiten analizar la

velocidad de las células, el movimiento rectilíneo, circular o lateral (Anchatuña,

2017)

Esta técnica de gran innovación a nivel laboratorial y tecnológico, ha logrado

garantizar a los diferentes productores e investigadores la herramienta con un

mayor porcentaje de efectividad y elección indicada en la estandarización del

manejo seminal de los animales (Almela, 2014), lo que es uno de los avances quizás

con mayor relevancia y el que cada vez cumple con mayores requerimientos

exigidos por el gremio reproductivo de bovinos, generando un incremento y

fortalecimiento del mismo (Farfán, 2015), al lograr producir pajillas, embriones y

fertilizaciones in vitro de calidad óptima y con garantías bastante prometedoras, que

se encargan cada vez mas de darle beneficios al sector pecuario, a nivel de

producción bovina (Medina, 2007).

Por medio de este proceso se busca determinar principalmente la motilidad de

los espermatozoides, lo cual es determinante para el tiempo de recorrido a la hora

de generar la fecundación y logra así, que las concepciones sean más probables



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(González, 2013), ya que este parámetro microscópico del semen se debe mantener

en el semen fresco y congelado, de tal forma que la calidad y la garantía que den

los productores de pajillas sea siempre la misma, sin importar el tiempo de

congelación que han tenido los espermatozoides (Bury, 2016).

Esta técnica se basa en la captura de imágenes para observar los

espermatozoides en movimiento, estas imágenes son digitalizadas identificando las

células espermáticas, luego se procede a observar los espermatozoides en

imágenes sucesivas para poder establecer las trayectorias definitivas de los mismos

(Barragán, 2017)

Las trayectorias se procesan matemáticamente, obteniendo así resultados

numéricos 22 precisos. Los parámetros determinados para cada espermatozoide

son la velocidad de movimiento sobre la base de varios descriptores, las trayectorias

que realiza la cabeza del espermatozoide y la frecuencia de los cambios de

dirección que efectúa (Hidalgo, 2005).

En el mercado existen variedad de sistemas CASA, desarrollando diferencias

en sus sistemas ópticos, técnicas de captura, reconocimiento espermático,

algoritmos para la construcción de trayectorias espermáticas, y manejo y análisis de

los datos obtenidos (Muiño, 2008) además Las desventajas del CASA están

relacionadas con el costo del equipo, la necesidad extrema de validación y la

normalización de las medidas realizadas (Hernandez, 2014)



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REACCIÓN ACROSÓMICA IN VITRO CON HEPARINA

Para llevar a cabo una evaluación espermática también se debe tener en

cuenta el índice de fertilidad de los espermatozoides, para eso la técnica de reacción

acrosómica con heparina es la más indicada (Cabrera, 2014). La heparina es una

sustancia que se encuentra a nivel oviductal y tiene como principal funcionalidad la

capacitación espermática y contribuir en la reacción acrosómica por medio de la

activación de las proteínas presentes en el acrosoma. (Fernández, 2014). De esta

forma, si se usa in vitro puede mejorar las tasas de fecundación en los bovinos

(Montes & et al, 2012)

Durante la capacitación se da la alteración de la membrana plasmática para

permitir al espermatozoide fusionarse a la membrana plasmática y membrana

acrosomal externa, denominada reacción acrosómica (In vivo), la capacitación

espermática es adquirida durante la migración de los espermatozoides a través del

tracto reproductivo de la hembra y la reacción acrosómica ocurre cuando los

espermatozoides se unen a la zona pelúcida. La técnica in vitro más utilizada

consiste en la exposición del semen a la heparina para que puede adquirir la

capacidad fertilizante (Salgado, 2005) se ha podido determinar que la concentración

de 10 µg/ml de heparina utilizada demuestra resultados óptimos para que los

espermatozoides sean activados (shamsuddin et al, 1996).

La heparina se une al espermatozoide de bovino a través de proteínas de

unión situadas en la membrana celular produciendo un aumento en la fosforilación



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de proteínas y en el Ca2+ libre que conlleva a un incremento del pH intracelular

(Risopatron et al, 2005)

Hasta el momento se ha indicado como la técnica más revolucionaria que

genera un porcentaje de determinación de fertilidad en machos con resultados

exitosos hasta de un 75% y a su vez logra establecer la capacidad de incremento

en la motilidad de los mismos, siendo un dato relevante a la hora de parametrizar

las características del semen usado en las pruebas (Ruiz, 2010), generando la

herramienta indicada para los poseedores de toros de valor genético bueno y

fabricación de pajillas para su correcto y exitoso desarrollo en el mercado (Salgado,

2005).

La capacitación espermática en bovinos, dada por la heparina, depende de su

concentración en el medio de incubación con tasas de fecundación in vitro sobre el

70%, utilizando dosis entre 10 µg/ml a 20 µg/ml de heparina (Reyes, 1992).

Investigaciones actuales demuestran que concentraciones de heparina de 10 ug/ml

y de semen de 1x106 espermatozoides/ml han arrojado las mejores tasas de

penetración de oocitos bovinos de manera in vitro observados en una resolución 4x

en el microscopio (Salgado, 2005) .

Finalmente el lograr un incremento en la determinación de los mejores

espermatozoides y sus características morfológicas, fisiológicas y de fertilidad sería

la mayor tecnología aplicada en la biotecnología de reproducción (MINITUBE,

2017), siendo muy relevante en la investigación de nuevos procesos y la

determinación del más adecuado para el avance en producción y eficiencia



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económica del sector ganadero tanto del país como de Latinoamérica, siendo

países con deficiente desarrollo comparado con Europa y Estados Unidos (Bury,

2016)

TEST HIPOSMÓTICO (Test de Host)

Su función es evaluar la integridad funcional de la membrana plasmática de la

célula espermática, considerando que el espermatozoide sea móvil y que sea capaz

de realizar la fecundación (Mejía Gutiérrez, 2017)

Esta técnica se basa en la observación de las alteraciones morfológicas que

sufren los flagelos de los espermatozoides (incremento de tamaño y flagelos

flectados o curvos) al ser expuestos a un medio hiposmótico, el cual ocasiona un

desequilibrio osmótico entre el medio extracelular e intracelular, situación que el

espermatozoide trata de vencer difundiendo agua al compartimiento intracelular,

aumentando la célula su volumen, lo cual se evidencia al observar la torsión de sus

flagelos en diferentes grados (Quintero et al, 2013)

Se debe preparar una solución con 0.735 gr de citrato de sodio, 1.35 gr de

fructosa y se disuelve en 100 ml de agua destilada y filtrar, agregar en un vial 1000

micro litros de solución hipo-osmótica y llevar a baño maría a 37 grados centígrados

por 15 minutos, adicionar a esta solución 50 micro litros de semen y llevar a baño

maría por 30 minutos colocar una muestra en un portaobjetos y contar (Barragán,

2017)



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CONCLUSIÓN

La efectividad en la valoración espermática genera un impacto altamente

positivo en la reproducción bovina y sus diferentes programas, como inseminación

artificial, transferencia de embriones y la conservación de semen de animales de

alto valor genético, lo que revoluciona en la actividad económica y con mayor

espacio de tiempo iniciara un mayor impacto, logrando llevar a las producciones a

fortalecer sus ámbitos reproductivos y conjuntamente un acrecentamiento

productivo que difícilmente sea medible o sus resultados sean exitosos, llevando a

la producción de rebaños con grandes características de rusticidad y productividad,

gracias al uso de tecnologías de desarrollo pecuario y su importancia en las

ganaderías mundiales



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REFERENCIAS

Echeverri Echeverry, J. (2015). Uso De Semen Sexado En Bovinos (tesis de pregado). Universidad

Tecnológica de Pereira, Colombia.

Nuñez Villalobos, A., & Rubio Molina, A. (2015). Comparación De La Calidad Biológica Del Semen

Bovino Poscongelado Utilizando Como Crioprotector Leche Al 2% De Grasa Andromed® Y

Continental® One Step, (tesis de grado). Escuela Agrícola Panamericana, Zamorano

Honduras.

Ramírez Rodríguez Et All. (2016). Sexado de espermatozoides en ganado lechero (Holstein)

mediante microscopia confocal y tinción DAPI. Revistas Electrónicas UACJ, 98-99.

Risopatrón, J., & Et Al. (2005). Efecto de diferentes concentraciones de heparina sobre la

capacitación espermática in vitro en canino. Revista Científica, FCV-LUZ / Vol. XV, 531.

Agûero, G. (2012). Evaluación De Las Características Seminales De Sementales Bovinos Mediante El

Analizador Seminal Computarizado (Casa). Caracas: Universidad Central De Venezuela.

Alfonso, F. (2011). Proteínas Del Plasma Seminal De Toros Sanmartinero Y Cebú Y Su Relación Con

La Integridad De La Membrana Del Espermatozoide Sometido A Procesos De

Criopreservación. Bogotá D.C: Universidad Nacional De Colombia Sede Bogotá.

Almela Veracruz, L. (2014). Aportaciones A La Crioconservación De Gametos Masculinos En La Raza

Bovina Murciano Levantina: Recongelación De Espermatozoides. Murcia: Universidad De

Murcia.

Anchatuña Quinga, C. A. (2017). Efecto De Distintos Tiempos De Equilibrio Sobre La Calidad

Espermática Pre Y Post-Congelación De Semen Bovino De Toros Reproductores Holstein

Friesian.

Aquino Dávalos, M. (2017). Características Seminales En Toros De Razas Terísticas Seminales En

Toros De Razas. Obtenido De

Http://Repositorio.Lamolina.Edu.Pe/Bitstream/Handle/Unalm/3431/Aquino-Davalos-

Marco-Antonio.Pdf?Sequence=1&Isallowed=Y

Barragán Barragán, I. F. (2017). Evaluación Del Efecto Crioprotector De Diferentes Fuentes De

Antioxidantes En El Semen Bovino (trabajo de titulacion) escuela de ingeniería zootécnica,

Riobamba, Ecuador

Brito, E. A., Maricela, D., & Reinoso, N. Y. (2017). Evaluación Cuali-Cuantitativa De Semen

Colectado Con Electroeyaculador (Ee) De Toros Tratados Con Y Sin Tranquilizante (trabajo

de tesis) Universidad de Cuenca, Cuenca-Ecuador

Brogliatti, G. M. (2005). El Impacto De Calidad Seminal En Los Programas De Iatf . Buenos Aires:

Syntex.

Bury Madrid, N., Oter, M., Pérez Garnelo, S., Gutiérrez Adán, A., & De La Fuente, J. (2016). Efecto

De Diferentes Concentraciones De Heparina Sobre La Fertilización In Vitro Con Semen



15


Descongelado De Toros De La Raza Rubia Gallega. Madrid: Departamento De

Reproducción Animal Y Conservación De Recursos Zoogenéticos.

Bury, M., Pérez, G., Gutiérrez, A., & De La Fuente, J. (2016). Efecto De Diferentes Concentraciones

De Heparina Sobre La Fertilización In Vitro Con Semen Descongelado De Toros De La Raza

Rubia Gallega. Madrid: Departamento De Reproducción Animal Y Conservación De

Recursos Zoogenéticos.

Cabrera V, P., Yoong K, W., & Gamarra L., G. (2013). Evaluación De La Fertilidad In Vitro Del Semen

De Toros Jóvenes Nacionales En Ovocitos Provenientes De Ovarios De Animales

Beneficiados. Lima: Sitio Argentino De Producción Animal.

Cabrera, P., & Pantoja, C. (2012). Viabilidad Espermática E Integridad Del Acrosoma En Semen

Congelado De Toros Nacionales. Inv Vet Perú, 192-200.

Cabrera, P., Sánchez, R., & Risopatrón, J. (2014). Selección Espermática En Semen

Congelado/Descongelado De Equino: Evaluación De Las Membranas Plasmática,

Acrosomal Y Potencial De Membrana Mitocondrial. Int. J. Morphol, 725-731.

Cano Torres, R., & Felipe Perez, Y. E. (2013). Manual De Prácticas De Laboratorio De Reproducción

Aplicada. El Cerrillo Piedras Blancas: Universidad Autónoma Del Estado De México.

Córdova Izquierdo, AReyes Adrian, Espinosa Roman, Guerra Juan Eulogio,Castro Fabio, Mosqueda

Lourdes, Vazquez armando, rodriguez estela (2016). Aplicación de la citometría de flujo

en veterinaria. (2016). Revista Complutense de Ciencias Veterinarias, 61-62.

Curbelo Curbelo, M., & Rodriguez Rodriguez, Z. (2013). Relevamiento De Laboratorios De

Procesamiento De Semen Bovino En Uruguay. Montevideo: Universidad De La República.

De Oliveira Carvalho, J., Satori, R., Prudencio Lemes, A., & Barreto Mouráo, G. (2009). Cinética De

Espermatozoides Criopreservados De Bovinos Após Sexagem Por Citometria De Fluxo.

Pesq. Agropec. Bras, 1346-1351.

Echeverry , J. (2015). Uso De Semen Sexado En Bovinos. Pereira: Universidad Tecnológica De

Pererira - Facultad De Ciencias De La Salud.

Farfán, P., & Lariza, E. (2015). Evaluación De Dos Protocolos Para La Producción In Vitro De

Embriones . Bovinos. Bos Taurus En La Región De Ayacucho, 2012 - 2013. Ayacucho - Perú:

Universidad Nacional De San Cristóbal De Huamanga.

Fernandez, Muiño, & Arean. (2005). Nuevas Tecnologías Aplicadas Al Procesado Y Evaluación Del

Semen Bovino En Centros De Inseminación Artificial.

Fernández, S., & Córdoba, M. (2014). El Espermatozoide Criopreservado Bovino Es Capaz De

Modular Su Requerimiento Energético Dependiendo De Los Sutratos Oxidativos

Disponibles Para La Capacitación Inducida In Vitro Con Heparina. Invet, 69-78.

Fernández,, S., & Córdoba, M. (2014). El Espermatozoide Criopreservado Bovino Es Capaz De

Modular Su Requerimiento Energético Dependiendo De Los Sustratos Oxidativos

Disponible Para La Capacitación Inducida In Vitro Con Heparina. Invet, 69-78.



16


Franchini, M., Gens, M., & Catena, M. (2016). Evaluación Del Semen Sexado Y Su Efecto En Índices

Reproductivos. Tandil: Facultad De Ciencias Veterinarias Uncpba.

Garcia, P. S. (2015). Evaluacion Del Semen De Bovino Pos Descongelacion Segun Temperaturas De

Transporte (trabajo de tesis) Universidad Nacional de Loja.

Gardón, J., Matás, C., & Gadea, J. (2001). Efecto Del Protocolo De Preparación De Los

Espermatozoides Bovinos Sobre El Patrón De Reacción Acrosómica. An. Vet (Murcia), 19-

26.

Gonzales Aparicio, G. W., & Cabrera Villanueva, P. C. (2016). Evaluación De Tres Métodos Para Uso

De Albúmina Sérica Bovina En El Sexado De Espermatozoides De Toros. Rev Inv Vet Perú,

518-530.

González Lascarro, A., & Pallares Sierra, J. (2013). Eficiencia Comparativa Entre Dos Diluyentes Para

La Criopreservación De Semen En Toros Brahmán En El Departamento De Antioquia.

Bogotá, Colombia: Universidad De La Salle.

Hernandez Corredor, L. (2014). Evaluación De La Motilidad Espermática De Semen Caprino

Criopreservado Bajo Diferentes Medios Diluyentes A Través Del Sistema Casa (trabajo de

tesis) Escuela De Ciencias Agrícolas, Pecuarias Y Del Medio Ambiente, Cucuta, Colombia.

Hernández Corredor, L., Páez Barbosa, J., Quintero Moreno, A., Herrera Cáceres, W., & Rubio

Parada, J. (2016). Efecto De Diferentes Niveles De Prostaglandina (Dinoprost Y Cloprotenol)

Y Glicosaminoflicanos (Ácido Hialurónico) En La Motilidad, Postdescongelación De

Espermatozoides Bovinos. Venezuela: Universidad Del Zulia (Luz).

Hidalgo , C., Tamargo, C., & Monforte, C. (2005). Analisis De Semen Bovino, Boletín informativo del

SERIDA - n.º 2, 39.

Jiménez Escobar, C. (2011). Técnicas De Congelación Y Sexado Del Semen Bovino Y Su Importancia

En Reproducción Bovina. Bogotá: Universidad Nacional.

Larocca, & Filipia. (2017). Semen Bovino Sexado Congelado-Descongelado En Producción De

Embriones In Vitro, SciELO Analytics.

Magali, C. C. (2012). Métodos De Sexaje De Semen Y Su Repercusión Sobre La Producción En

Bovinos De Leche. Riobamba - Ecuador: Escuela Superior Politécnica De Chimborazo -

Facultad De Ciencias Pecuarias.

Medina , R., Sanchez Carvajal, Velasco, S., & Cruz , C. (2007). Crioconservación De Semen Bovino

Usando Un Congelador Programable (Cl-8800) Y Determinación De Su Calidad

Postdescongelación Por Medio Un Sistema De Análisis Espermático Asistido Por

Computador (Casa). Orinoquia, 75 - 86.

Mejía Gutiérrez, J. E. (2017). Evaluación Pre Y Post Congelación Del Semen Obtenido Con Vagina

Artificial Y Electroeyaculador En El Ganado Criollo (trabajo de maestria)



17


(2012). Métodos De Sexaje De Semen Y Su Repercusión Sobre La Producción En Bovinos De Leche.

Riobamba - Ecuador: Escuela Superior Politécnica De Chimborazo- Facultad De Ciencias

Pecuarias.

Minitube. (2017). Tecnología De Reproducción Animal Bovino. Berlín: Minitube.

Moncayo Picerno, S. A. (2016). Evaluación De La Calidad Seminal De Reproductores Bovinos Antes

Y Despues Del Proceso De Criopreservación. Quito: Universidad Politécnica Salesiana.

Montes, J., & Et Al. (2012). Inducción In Vitro De La Reacción Acrosómica Con Heparina En Semen

Congelado De Toros Brahman Y Gyr.

Mora Candelario, O. (2016). Evaluación Espermática De Ganado Bovino Mediante Un Sistema De

Análisis Computacional (C.A.S.A.). Tlamati Sabiduría, 1-10.

Mora Muñoz, V. (2018). Uso Del Semen Sexado En Bovinos Seminario De Profundización.

Villavicencio: Universidad Cooperativa De Colombia Villavicencio.

Morales, J., Torres, M., Rugeles, C., Almanza, R., & Guimaráes, J. (2012). Inducción In Vitro De La

Reacción Acrosómica Con Heparina En Semen Congelado De Toros Brahman Y Gyr. U.D.C.A

Actualidad Y Divulgación Científica, 431-436.

Moron. (2015). Evaluacion De La Calidad Seminal En Toros Reproductores En Invierno Y Verano En

El Departamento Del Cesar (Trabajo Final de la Especialización), Universidad Nacional De

Córdoba, Barranquilla, Colombia.

Muiño Otero, R. (2008). Evaluación De La Motilidad Y Viabilidad Del Semen Bovino Mediante El

Uso De Sistemas Casa Y Citometría De Flujo: Identificación De Subpoblaciones

Espermaticas. Coruña: Universidade De Santiago De Compostela.

Muiño, R., Fernández, M., Areán, H., Viana, J. L., López, M., Fernández, A., & Peña, A. I. (2005).

Nuevas Tecnologías Aplicadas Al Procesado Y Evaluación Del Semen Bovino En Centros De

Inseminación Artificial. Itea, 175-191.

Muiño, R., Fernández, M., Areán, H., Viana, J., López, M., Fernández, A., & Peña, A. (2005). Nuevas

Tecnologías Aplicadas Al Procesado Y Evaluación Del Semen Bovino En Centros De

Inseminación Artificial. Itea, 175-191.

Nava Trujillo , H., & Quintero Moreno, A. (2017). Importancia De La Evaluación De La Cromatina

Espermática En Rumiantes. Una Revisión Importance Of Sperm Chromatin Evaluation In

Ruminants. A Review.

Norando, C. (2013). Evaluación Seminal En Toros Por Métodos Manuales O Computarizados.

Montevideo: Universidad De La República - Facultad De Veterinaria.

Oses, Teruel, & Cabodevila . (2009). Utilización De Semen Bovino Sexado En Inseminación

Artificial, Transferencia Embrionaria Y Fertilización In Vitro. Oses M.V. Et Al, 138-145.

Pía, L., Cheuquemán, C., Risopatrón, J., Felmer, R., Arias, M., & Sánchez, R. (2016). Modulación Del

Estado De Óxido-Reducción Por Peróxido De Hidrógeno En La Etapa De Maduración

Ovocitaria, Efecto Sobre El Desarrollo Embrionario En Bovinos. Int. J. Morphol, 431-435.



18


Próspero Cabrero, V., Washington Yoong , K., & Gamarra, G. (2009). Evaluación De La Fertilidad In

Vitro Del Semen De Toros Jóvenes Nacionales En Ovocitos Provenientes De Ovarios De

Animales Beneficiados. Inv Vet, 28-32.

Quintero Moreno , A., & Et Al. (2013). Correlación Entre El Test De Endosmosis (Host) Y Otros

Parámetros De Calidad Espermática En Semen Criopreservado De Búfalos Murrah.

Quintero Moreno, A., Mayorga Torres, J., & Cardona Maya, W. (2017). El Análisis Seminal Como

Herramienta Para Predecir El Potencial Reproductivo En Toros. Jorunal Of Veterinary

Andrology, 30-37.

Reyes, M. (1992).Capacitación Espermática Y Reacción Acrosómica In Vitro En Bovinos. Revista

Avances en Ciencias Veterinarias.

Rodriguez Montaña, D. (2016). Diseño E Implementacion De Una Herramienta Computacional Para

El Analisis Asistido De Motilidad Espermatica En Bovinos Mediante Tecnicas De Vision

Artificial. Fusagasugá: Universidad De Cundinamarca .

Ruiz Sesma, B., Rojas Martinez, R. I., Ruiz Hernandez, H., Mendoza Nazar, P., Oliva Llaven, M. A.,

Ibarra Hernandez, C. E., . . . Medina Sanzon, L. M. (2010). Extracción Y Cuantificación De

Adn De Pajillas De Semen Bovino Criopreservado. Chiapas: Facultad Medicina Veterinaria Y

Zootecnia, Universidad Autónoma De Chiapas.

Salgado, R., Rugeles, C., & Alvarez , J. (2005). Efecto De La Heparina Y De La Concentración

Espermática Sobre El Porcentaje De Fertilización De Ooctios Bovinos In Vitro. Rev Col Cienc

Pec, 122-126.

Salinas, P. (2016). Citometría De Flujo Y Sexaje De Espermatozoides En Animales. Int. J. Med. Surg

Sci, 893-902.

Sánchez Paniagua, D. (2013). Correlaciones Entre La Calidad Seminal Del Semen Sexado Y La

Fertilidad Del Toro. España: Universidad De Oviedo.

Schenk Et All. (1999). Cryopreservation Of Flow-Sorted Bovine Spermatozoa. Theriogenology,

Sciencedirect.

Seidel, G. E. (2007). Overview Of Sexing Sperm. Theriogenology. Sciencedirect.

Shamsuddin, & Et Al. (1996). In Vitro Maturation And Fertilization Of Bovine Oocytes.

Teruel, O., & Cabodevila. (2009). Utilización De Semen Bovino Sexado En Inseminación Artificial,

Transferencia Embrionaria Y Fertilización In Vitro.

Urbina Quito, C. (2012). Utilización De Semen Bovino Sexado En Inseminación Artificial,

Transferencia Embrionaria Y Fertilización In Vitro. Cuenca - Ecuador: Universidad De

Cuenca.

Urrego, R., Tarazona , A., Olivera , M., & Camargo, O. (2005). Biotecnología Animal. Revista

Colombiana De Ciencias Pecuarias, 339-341.



19


Urruego, R., Tarazona, A., Olivera Ángel, M., & Camargo, O. (2008). Simplificación De La

Fertilización De Ovocitos Durante La Producción In Vitro De Embriones Bovinos. Revista

Colombiana De Ciencias Pecuarias, 398-405.

Valverde, A., & Madrigal Valverde, M. (2018). Sistemas De Análisis Computadorizado De Semen En

La Reproducción Animal1. Mesoamerican Agronomy, 469-484.

Veloz Veloz, D. M. (2017). Evaluación De La Calidad Espermática De Reproductores Bovinos

Mediante El Uso De Sistemas De Evaluación Seminal Convencional Y Sistema Casa (Análisis

Seminal Asistido Por Computadora) Y Su Respuesta Con La Fertilidad Por Inseminación

Artificial. Cuenca, Ecuador: Universidad De Cuenca.



técnicas in vitro para la valoración espermatica en bovinos

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