SOCIEDAD DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR 2019

Cronograma preliminar

JUEVES 5 SETIEMBRE - 15:00 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR VEGETAL

Coord: O. Borsani, M.M. Sainz

Mariana Sotelo, Facultad de Agronomía, UdelaR Genomas de plantas en 3D.

Luego del conocimiento obtenido a partir de los datos de las secuencias lineales de los genomas y el paisaje epigenómico, la organización tridimensional de la cromatina dentro del núcleo es el siguiente nivel a ser explorado. Distintos organismos presentan una organización jerárquica general, en la cual los territorios cromosomales ocupan el nivel más alto. Los mapas de interacción de la cromatina, obtenidos mediante metodologías de captura de la conformación de la cromatina (3C), para ocho especies de plantas revelan puntos en común, pero también diferencias entre ellas y con los animales. Las estructuras más pequeñas, encontradas en mapas de alta resolución del genoma de Arabidopsis, son los genes individuales. Las marcas epigenéticas (modificación de histonas y metilación del ADN), la actividad transcripcional, y la interacción de la cromatina parecen estar correlacionadas. Investigaciones activas buscan descifrar si la estructura es la causa o la consecuencia de las regiones que interactúan.

............................................................................................................................................... Marcel Bentancor, Facultad de Ciencias, UdelaR. Caracterización de la familia de metacaspasas del musgo Physcomitrellapatens La muerte celular programada es un proceso ampliamente extendido entre los seres vivos, casi ubicuo en organismos multicelulares y particularmente relevante en el ciclo vital de las plantas. Durante mucho tiempo su estudio se basó en buscar mecanismos paralelos a los conocidos en células animales, y como parte de estos abordajes fueron descubiertas unas proteínas, denominadas metacaspasas. Su propia denominación hace referencia a unas proteasas centrales en los mecanismos de apoptosis animal, y cuya similitud con estas, aunque acotada, las postuló como potenciales equivalentes de las caspasas en plantas. La amplia distribución de las metacaspasas entre las plantas, generalmente integrando familias multigénicas resulta interesante estudiarla desde un punto de vista evolutivo. Es en este punto que elegimos identificar y estudiar la familia de metacaspasas de una briofita, el musgo Physcomitrellapatens. Además de su posición filogenética esta planta tiene una serie de características útiles para hacer estudios de genómica funcional. Este trabajo representa el primer estudio sistemático de una familia de metacaspasas en plantas no vasculares. Se presenta la caracterización genómica de esta familia. Se muestran estudios de localización subcelular y de perfiles de expresión. La importante dotación de metacaspasas en una planta de temprana divergencia, como P. patens, sería una señal de la importancia de estas proteasas y la pronta subfucionalización o neofuncionalizacion que las mismas habrían experimentado. ...............................................................................................................................................

............................................................................................................................................... Belén Cuadrado, Facultad de Agronomía, UdelaR.

Estudio del rol de los genes TTL en la capacidad de recuperación del crecimiento radicular en condiciones de estrés osmótico.

Desde una perspectiva de desarrollo, la raíz de Arabidopsis tiene una organización simple, en la cual un número pequeño de células madres en el ápice de la raíz generan todos los tipos de células a partir de divisiones celulares seguidas de diferenciación y expansión celular regulada. El crecimiento de la raíz requiere la regulación coordinada de programas de desarrollo en conjunto con señales medioambientales, sin embargo, se desconoce la interconexión entre ambos. Los mutantes ttl1 (Tetratrico-peptideThioredoxin-Like 1) presentan un fenotipo de arresto del crecimiento radicular y expansión radial exacerbada en condiciones de estrés osmótico lo que hace que sean un modelo muy interesante para estudiar dicha interconexión. Este trabajo busca comprender el rol de TTL1 en el crecimiento del meristemo radicular en condiciones control y de estrés osmótico. Los resultados en condiciones control muestran que ttl1 tiene un número menor de células en el meristemo proximal de la raíz, una menor tasa de producción celular, un ciclo celular más corto; pero las células pasan un intervalo de tiempo mayor en la zona de transición del meristemo en comparación a Col-0. A su vez, la expresión del promotor de la CICLINAD3:3 (CYCD3:3) fue menor en ttl1 en comparación a Col-0. Por otro lado, la respuesta a auxinas se expande hasta la zona de elongación y la expresión de BZR1 se deslocaliza en dicha zona del meristemo radicular de ttl1. Además, se observó que los problemas de crecimiento pueden estar relacionados a la síntesis de celulosa por los resultados obtenidos a través de la evaluación de la cruza de ttl1 con el mutante para la CELULOSA SINTASA 6, prc1-1.

............................................................................................................................................... Guillermo Reboledo, IIBCE Análisis transcripcional de la activación de mecanismos de defensa de la planta Physcomitrella ante la infección con el patógeno Botrytiscinerea.

Las plantas briofitas, como primeras colonizadoras terrestres, tuvieron que adaptarse a la deshidratación, a la mayor variación de temperatura y a los patógenos, generando novedosos mecanismos para lograrlo. Physcomitrellapatens es un modelo avascular de planta briofita que puede ser infectada por importantes patógenos de cultivo. Botrytiscinerea, es un hongo patógeno de fácil dispersión con un estilo de vida nectrotrófico de amplio rango de hospedero que puede atacar a más de 200 cultivos y por lo cual genera grandes pérdidas a nivel económico. Por ello, se ha convertido en uno de los hongos más utilizado en el estudio de interacciones moleculares entre plantas y patógenos. En este trabajo se utilizó P. patens con el propósito de estudiar sus mecanismos de defensa en respuesta a B. cinerea y compararlos con los de otras plantas modelo como Arabidopsisthaliana, una planta vascular. Es así que mediante análisis transcriptómicos se han identificado genes diferencialmente expresados en P. patens, analizado las vías de los diferentes mecanismos de defensa activados y comparado los resultados de los transcriptomas de P. patens con lo publicado para otras plantas modelo. Es de destacar que, de los 2989 genes que se encontraron diferencialmente expresados, 807 genes (más de un cuarto del total) son de función desconocida. Seguramente algunos de estos genes aún no descritos tengan un rol directo en la respuesta de esta planta ante la infección

por patógenos. Dada la posición basal en la evolución que ocupa P. patens, los datos generados aportan información que ayudará a entender la evolución de los mecanismos de defensa de las plantas ante patógenos.

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JUEVES 5 SETIEMBRE - 16:30 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: CIENCIAS ÓMICAS Y BIOINFORMÁTICA

Coord: P. Smircich, F. Álvarez

Conferencista: Najib El-Sayed (EEUU)

Dr. Najib El-Sayed is Professor of Cell Biology and

Molecular Genetics at the University of Maryland, with a

joint appointment in the Center for Bioinformatics and

Computational Biology at the University of Maryland

Institute of Advanced Computer Studies (UMIACS). He

received his Ph.D. from Yale University in Molecular

Parasitology and then trained as a Howard Hughes Medical

Institute post-doctoral fellow in the laboratory of John

Donelson at the University of Iowa. In 1998, he joined The

Institute for Genomic Research (TIGR) in Rockville,

Maryland where he led the sequencing, annotation, and comparative and functional genomic

analyses of several human pathogens. He has been at the University of Maryland since 2006.

He currently directs the Computational Biology, Bioinformatics and Genomics graduate

concentration area of studies as well as the Next-Generation Sequencing facility.

Dr. El-Sayed’s research program is focused on the study of the biology of parasitism and host-

pathogen interactions using genomic and bioinformatics approaches with the ultimate goal of

better understanding infection and survival mechanisms. These approaches include the

development and application of molecular, computational and genomic tools. He has

published over 80 research papers. He serves on the Scientific Advisory Board for the National

Institute of Allergy and Infectious Diseases’ Genome Sequencing Centers for Infectious

Diseases.

Exploring the trypanosomatid host-pathogen infectome

We have adopted a novel approach aimed at characterizing host-pathogen infectomes. We

define the infectome as the component of the pathogen’s genome/transcriptome/proteome

that allows it to subvert the functions of host cell molecular machineries, receptors, and

signaling proteins, as well as the portion of the host cell's -omes that play a role in the

infection process. Our screens include the use of a combination of 1) bioinformatic tools aimed

at predicting surface and secreted components, 2) simultaneous interrogation of the host and

pathogen transcriptomes during infection and intracellular survival and 3) protein-protein

interaction screens between a selection of host and pathogen proteins informed by the first

two steps. The application of this approach to Trypanosoma cruzi and Leishmania major, two

intracellular pathogens that parasitize mammalian cells has yielded significant biological

insights into host-pathogen interactions. The identification and quantification of co-regulated

genes has provided evidence regarding the mechanisms used by each of the two parasites to

elude host defenses.

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JUEVES 5 SETIEMBRE - 17:30 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: CIENCIAS ÓMICAS Y BIOINFORMÁTICA

Coord: P. Smircich, F. Álvarez

#52 - Agustín Correa et al. Generación de un ensamble proteico para vincular el

reconocimiento tumoral con la modulación de la respuesta inmune

#457 - Florencia Díaz et al. Ensamblado genómico de Trypanosoma cruzi utilizando Oxford

Nanopore Technology

#216 - Héctor Oberti et al. Análisis de genes preferencialmente expresados en tejidos florales

de Paspalum dilatatum cv Estanzuela Chirú

#417 - Guillermo Eastman et al. Ribosome profiling uncovers novel functions of translational

repressor PDCD4 in neuron models

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JUEVES 5 SETIEMBRE - 18:30 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOTECNOLOGÍA

Coord: F. Silveira, M. Dalla Rizza

Invitados: Dr. Iván Marcipar. Universidad Nacional del Litoral, Argentina. Desarrollo y caracterización de un adyuvante basado en nanopartículas lipídicas. Los adyuvantes ISCOM e ISCOMATRIX fueron descriptos los años 1980 y han sido ampliamente evaluados desde entonces, incluso en numerosos ensayos clínicos en humanos que han mostrado su eficacia y su inocuidad para su uso en vacunas humanas. Estos consisten en partículas lipídicas conformadas por saponina, colesterol y fosfolípidos. Al administrase con antígenos permiten generar una respuesta inmune balanceada TH1/TH2 y una fuerte respuesta celular de Linfocitos T citotóxicos (LTC) que es difícil de obtener con otros adyuvantes. En nuestro laboratorio estamos trabajando en la obtención de una vacuna para el

control de la infección por Trypanosoma cruzi. Dado que es un parásito intracelular, es clave que la respuesta inmune contra el mismo sea mediada por LTC. En ese contexto, hemos evaluado diversos candidatos antigénicos habiendo seleccionado a la proteína Trasnsialidasa como el antígeno vacunal que mejor protección brinda. En paralelo, desarrollamos un adyuvante basado en nanopartículas lipídicas con características similares a ISCOMATRIX pero con variantes en relación a su densidad de carga superficial y sus componentes ya que incorporan Tocoferol y Esterilamina. También se simplificó su método de preparación. Se obtuvieron partículas de 62 nm de tamaño medio que permitieron mejorar la cinética de la respuesta humoral y el perfil de subclases en relación a Hidróxido de aluminio, Adyuvante de Freund y Montanide ISA206 en ratonesusando Albúmina bovina como antígeno. En un modelo de infección por Trypanosomacruzi, los ratones inmunizados con ISPA y transialidasa desarrollaron una alta protección generando un perfil de respuesta inmune te Tipo TH1 con alta activación de LTC. La formulación permitió además modular el brazo regulador de la respuesta inmune en forma favorable para el control de la infección.

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Dr. Henrique Marques-Souza. Universidad Estadual de Campinas, Brasil. Use of RNAi silencing molecules to control agricultural pests and diseases. The recognition of double stranded RNA (dsRNA) in most eukaryotic cells by the RNAi machinery results in sequence-specific fragmentation of the endogenous RNA, preventing its use as template for protein synthesis. This powerful tool to inactivate gene function has been widely used to unveil the role of genes essential for insect development and, more recently, RNAi has been applied in agriculture for the control of pests and diseases. By identifying genes essential for the targeted species, one can develop silencing molecules highly specific for these genes and introduce them into transgenic plants or through topic application directly on the plant. Our laboratory develops silencing molecules for the control of several agricultural pests and diseases with focus on topic application. RNAi technology represents a great promise of an innovative, non-toxic and highly specific product to provide additional solutions for pests and diseases control in agriculture. ...............................................................................................................................................

Presentaciones orales seleccionadas: Mariana Rivera-Patron “Novedosa estrategia contra el virus de la gripe: vacunas adyuvantizadas con ISCOMs basados en saponinas nativas” La gripe es una infección respiratoria causada por el virus de influenza que provoca 650.000 muertes anuales a nivel mundial. Aunque las vacunas son la mejor estrategia para prevenirla, no protegen adecuadamente a poblaciones inmunocomprometidas, niños y adultos mayores. Los adyuvantes aumentan la eficacia de las vacunas y polarizan la respuesta inmune hacia el fenotipo deseado. Las saponinas son compuestos anfipáticos de origen vegetal utilizados como adyuvantes en salud humana y animal. Nuestro grupo reportó por primera vez la formulación de complejos inmunoestimulantes (ISCOMs) basados en saponinas de la especie nativa Quillaja brasiliensis, como alternativa a las

saponinas comerciales, evidenciando que estas saponinas o sus nanoformulaciones promovieron potentes respuestas humorales y celulares, polarizadas hacia Th1, necesarias para combatir patógenos intracelulares y cáncer, similares a las desencadenadas por las saponinas comerciales, pero con menores efectos secundarios. En este trabajo se evaluó la respuesta inmune desencadenada en modelo murino por una vacuna contra influenza, adyuvantizada con ISCOMs de Q. brasiliensis y se realizó una aproximación a la comprensión del mecanismo de acción de estos adyuvantes. A partir de un ensayo de vacunación en ratones Balb/c, utilizando dos vías de inoculación (subcutánea o intranasal), se analizó la respuesta humoral en suero y fecas y el título de anticuerpos neutralizantes (inhibición de la aglutinación). Además, se evaluó la eficacia de la vacuna frente al desafío (H1N1pdm09 50 ?L 1x105 TCID50/mL). Por otro lado, dado que se ha propuesto que los ISCOMs activarían el inflamasoma, se estudió la respuesta desencadenada por estas nanoformulaciones en ratones C57Bl/6 knock-out (Casp1/11), comprobando que entre éstos y los wild-type no hay diferencias en la respuesta humoral, pero sí en la respuesta celular. Nuestros resultados indican que estas novedosas nanoformulaciones promovieron potentes y efectivas respuestas humorales y celulares frente a influenza, un patógeno de gran relevancia en salud humana. ............................................................................................................................................... Estefania Sicco “Generación de un biofármaco basado en el aptámero Sgc8-c: Potencial agente terapéutico en cáncer” Los aptámeros son oligonucleótidos que reconocen su diana con alta afinidad y especificidad, teniendo propiedades equiparables a las de los anticuerpos. Sin embargo, tienen ventajas significativas en cuanto a su tamaño, producción y modificación. Estas características los hacen excelentes candidatos para el desarrollo de nuevas plataformas biotecnológicas, para su aplicación como agentes de imagen o terapia. Sgc8-c es un aptámero de ADN, tiene 41 bases y se une específicamente al receptor PTK7, el cual se sobreexpresa en diferentes tipos de células tumorales. En nuestro laboratorio se ha evaluado la marcación del Sgc8-c, generado sondas fluorescentes y radiactivas para imágenes multimodales en cáncer. Estas sondas mostraron una óptima captación tumoral, con rápida depuración sanguínea. Estos resultados sientan las bases para desarrollar potenciales agentes terapéuticos utilizando este aptámero para dirigir moléculas anti-tumorales al sitio de acción. El agente terapéutico se sintetizó por incorporación covalente del agente anti-tumoral dasatinib a la estructura del Sgc8-c, mediante un conector carbamato; agrupamiento hidrolizable química o enzimáticamente. Primeramente se acopló al dasatinib (inhibidor de tirosina quinasa) un agrupamiento reactivo, carbonato, confirmado por 1H-RMN/HSQC. Posteriormente, el producto resultante se incorporó covalentemente al Sgc8-c. Las condiciones de reacción fueron optimizadas, probándose diferentes disolventes para el dasatinib-carbonato, relaciones molares con respecto al aptámero, temperaturas, tiempos y buffer de reacción. Los controles analíticos se realizaron por RP-HPLC y se confirmó por ESI-MS que el dasatinib estaba acoplado al aptámero. El potencial agente terapéutico se obtuvo con un alto grado de pureza y se caracterizó fisicoquímicamente. Se observó un LogD de -1,34, óptimo para la para un entorno biológico, y presentó estabilidad en disolución salina y a diferentes temperaturas. Además, demostró ser completamente hidrolizable a pH endosomal. Estos resultados son prometedores, y ameritan la evaluación biológica del potencial biofármaco.

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VIERNES 6 SETIEMBRE - 9:00 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR ANIMAL

Coord: M. Rodriguez, A. Caliari, M.A. Duhagon

Martina Crispo (Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación, Instituto Pasteur Montevideo) "Generación de Modelos Animales Genéticamente Modificados y sus aplicaciones"

Desde 2006, la Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación del Instituto Pasteur de Montevideo ha proporcionado modelos animales genéticamente modificados (GM) a medida para investigadores de la región y el mundo, a través de técnicas estándar como la microinyección de ADN, la recombinación homóloga en células madre embrionarias, lentivirus y transposones. En 2014, la incorporación del sistema CRISPR/Cas a nuestro laboratorio permitió acelerar la producción de animales GM tanto en roedores como en animales de producción, mejorando la eficiencia de las técnicas y la reducción de los costos. Desde entonces, hemos producido modelos animales KO, KI y cKI con aplicaciones en los campos de la biomedicina y la agropecuaria. La gran mayoría de las aplicaciones de los modelos murinos han sido en el campo del cáncer, inmunología, enfermedades neurodegenerativas y metabólicas. En animales productivos, los modelos que hemos generado están vinculados a mejoras en la producción animal, resistencia a enfermedades y modelos de enfermedades humanas. Todas estas tecnologías de vanguardia nos han posicionado como una plataforma tecnológica de referencia en América del Sur, manteniéndonos siempre a la vanguardia en las técnicas de generación de animales GM.

............................................................................................................................................... Flavio Zolessi (Sección Biología Celular, Facultad de Ciencias, UdelaR) "Biología celular en un organismo intacto: bases moleculares de las transiciones de polaridad celular en el desarrollo neural del pez cebra."

Las neuronas, células altamente polarizadas, diferencian a partir de células progenitoras inicialmente epiteliales, en un proceso que implica una transición entre los dos tipos de organizaciones celulares. Esto no ocurre en una situación en cultivo, en la cual las células suelen perder su morfología normal, así como se encuentran en un entorno carente de señales localizadas. Para comprender cómo ocurre el proceso in vivo, utilizamos embriones intactos de pez cebra, que presentan características únicas en cuanto a su accesibilidad genética y óptica. Mediante el marcado transgénico de las células y estructuras subcelulares de interés, hemos analizado el proceso de diferenciación de neuronas diferentes en la retina, como las células ganglionares de la retina (CGR) y los fotorreceptores, con resolución subcelular. Encontramos que las CGR postmitóticas sufren una transición gradual, expresando marcadores de polaridad epitelial tempranamente, los cuales se pierden a medida que retraen su proceso apical y adquieren la estructura neuronal típica, con un axón basal y dendritas apicales. El posicionamiento del axón, una estructura que ha sido comparada equivocadamente con el compartimiento apical de células epiteliales, depende de la combinación de dos señales, una positiva (la Laminina1 de la lámina basal) y otra negativa (el factor secretado Slit2 en el interior

de la retina). En el caso de los fotorreceptores, que permanecen con características de células epiteliales al diferenciar, la transición de polaridad se restringe a la retracción del proceso basal (y pérdida de contacto con la lámina basal). En este caso, las señales provenientes de los complejos sub-apicales de adhesión celular aparecen esenciales para mantener su correcta orientación en el tejido. Hemos demostrado que la cilia primaria acompaña las transiciones de ambos tipos celulares, con un aparente rol en el posicionamiento de las CGR, pero no en la orientación de éstas o de los fotorreceptores.

............................................................................................................................................... Celia Quijano (Facultad de Medicina, UdelaR) “Alteraciones metabólicas asociadas al balance energético negativo en un modelo bovino”

El balance energético negativo (BEN) es una condición frecuente de las vacas lecheras durante la lactancia temprana; cuando la demanda energética, debida a la producción de leche, excede el consumo energético obtenido de la dieta. Esto conduce a la movilización de ácidos grasos del tejido adiposo que son captados en gran parte por el hígado. Alteraciones en el metabolismo de estos lípidos conducen a la esteatosis y cetosis, amenazando la salud del animal y la productividad. El uso de dietas totales mezcladas (DTM) en lactancia temprana es una estrategia posible para evitar el BEN.

En este trabajo estudiamos la función mitocondrial hepática en vacas lecheras Holstein-Friesian sometidas a dos estrategias de alimentación diferentes durante la lactancia. Durante los primeros 180 días posparto, las vacas fueron alimentadas con DTM (70% de forraje: 30% de concentrado) ad libitum (grupo sin pastoreo) o con Festuca arundinacea o Mendicago sativa más suplementos (grupo con pastoreo). Entre 180 y 250 días después del parto, todas las vacas pastaban Festuca arundinacea y eran suplementadas con DTM.

La cadena de transporte electrónico mitocondrial se evaluó midiendo el consumo de oxígeno en biopsias hepáticas criopreservadas. La máxima capacidad respiratoria disminuyó y se detectó un aumento significativo en la acetilación de lisinas proteicas mitocondriales en vacas en pastoreo durante la lactancia temprana, pero no en vacas alimentadas con DTM. La acetilación mitocondrial correlacionó positivamente con los niveles de triglicéridos hepáticos y los niveles plasmáticos de β-hidroxibutirato, marcadores de BEN. También se encontró una correlación negativa entre la máxima capacidad respiratoria y los niveles de la Sirtuina 3, una desacetilasa mitocondrial.

Nuestros resultados indican que la función mitocondrial se ve afectada durante la lactancia temprana en vacas en pastoreo y sugieren que el uso de DTM durante este periodo puede ser una estrategia de protección eficiente frente al BEN.

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Francesco Crea (The Open University, UK) http://www.open.ac.uk/people/fc3298 An evolutionary conserved long non-coding RNA drives neuroendocrine prostate cancer progression

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VIERNES 6 SETIEMBRE - 15:00 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOQUÍMICA DE PROTEÍNAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS

Coord: S. de Ovalle, M. Machado

Conferencista:

Pilar Moreno - Laboratorio de Virología Molecular, Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de

Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay

CVUy

Variantes del virus de la Hepatitis C traduccionalmente ineficientes: ¿debilidad o fortaleza?

Echeverría N1, Gámbaro F1, Hernández N2, López P3, Chiodi D2, Sánchez A2, Boschi S4, Cristina J1,

Moratorio G1,5, Moreno P1

1- Laboratorio de Virología Molecular, Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias,

Universidad de la República, Montevideo, Uruguay

2- Clínica de Gastroenterología, Hospital de Clínicas, Facultad de Medicina, Universidad de la República,

Montevideo, Uruguay

3- Laboratorio de Patología Clínica, Hospital de Clínicas, Facultad de Medicina, Universidad de la

República, Montevideo, Uruguay

4- Laboratorio de Biología Molecular, Asociación Española Primera de Socorros Mutuos, Montevideo,

Uruguay

5- Viral Populations and Pathogenesis Laboratory, Institut Pasteur de Paris, París, Francia

El Virus de la Hepatitis C (VHC) es un virus ARN, caracterizado por una gran variabilidad

genética. Estos virus circulan como una compleja población de variantes genéticamente

relacionadas entre sí denominadas cuasiespecies. VHC, emplea un mecanismo de traducción

Cap-independiente, que le permite reclutar al ribosoma directamente a una región

estructurada del genoma denominada sitio interno de entrada del ribosoma (IRES), sin la

necesidad de muchos de los factores de inicio de la traducción. Si bien esta región se

encuentra muy conservada, existen mutaciones que modifican su estructura impidiendo la

correcta unión/liberación del ribosoma y/o del factor eIF3, lo cual conlleva a una traducción

menos eficiente afectando la capacidad replicativa del virus. Una de nuestras líneas de

investigación se ha focalizado en estudiar la presencia de variantes naturales de VHC

ineficientes traduccionalmente tanto a nivel de secuencias mayoritarias, como a nivel de las

variantes de baja frecuencia dentro de la cuasiespecie viral. Los resultados obtenidos

muestran, a nivel de la secuencia mayoritaria, la existencia de variantes virales con mutaciones

en los dominios II y II del IRES, las cuales en su gran mayoría tiene eficiencias traduccionales

similares a las secuencias de referencia. Dentro de las secuencias de baja frecuencia (<10%) se

observó la existencia de variantes con una reducción significativa en sus eficiencias

traduccionales. Dentro del genotipo 1a algunas variantes mostraron una reducción de un 40%

en la eficiencia, mientras que variantes de genotipo 3a demostraron ser aún más ineficientes

(70% de reducción). El análisis de mutantes únicos reveló la existencia de mutaciones en

posiciones nucleotídicas claves, las cuales parecen ser responsables de los fenotipos

observados. Estas variantes ineficientes podrían ser consideradas como el talón de Aquiles de

la población viral y ser utilizadas con fines antivirales? o podrían explicar la persistencia de VHC

en sitios extra-hepáticos y su cronicidad?

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Gerardo Ferrer Sueta - Laboratorio de Fisicoquímica Biológica. Facultad de Ciencias y Centro

de investigaciones biomédicas (CEINBIO), Universidad de la República

CVUy

Glutarredoxina 1 y cómo los tripanosomas cambiaron su sistema de reducción de glutatión a

tripanotión

Bruno Manta1,2, Matías N. Möller1, Mariana Bonilla1,2, Matías Deambrosi2, Karin Grunberg1, Sebastián Villar1, Massimo Bellanda3, Marcelo A. Comini2 y Gerardo Ferrer-Sueta1 1Laboratorio de Fisicoquímica Biológica. Facultad de Ciencias y Centro de investigaciones biomédicas

(CEINBIO), Universidad de la República.2Laboratorio de biología redox de tripanosomas, Institut Pasteur

Montevideo.3Dipartimento di ScienzeChimiche, UniversitàdegliStudi di Padova, Padua, Italia.

Los tripanosomátidos poseen un sistema de reducción basado en tripanotión que es bastante diferente a la mayoría de los demás organismos, no obstante, poseen aún algunas enzimas (glutarredoxinas y tiorredoxinas) remanentes de los sistemas más universales. Hemos estudiado las características enzimáticas y biofísicas de la glutarredoxina 1 citosólica de Trypanosomabrucei(Grx1) mediante técnicas de cinética rápida, fluorescencia y resonancia magnética nuclear. Nuestros resultados muestran diferencias importantes respecto a glutarredoxinas de otras especies, en particular respecto a algunas velocidades de reacción y la capacidad de actuar por mecanismos de uno o dos tioles. Grx1 tiene como peculiaridades su lentitud para reducirse con glutatión y su enorme velocidad para oxidarse con cualquier sustrato glutationilado. Encontramos que el tripanotión reducido es capaz de actuar como sustrato reductor y que la forma disulfuro de la Grx1 es particularmente estable, obligando al sistema a actuar por un mecanismo ditiólico. Estas propiedades enzimáticas permitirían establecer la función de la Grx1 como puente durante la transición de glutatión a tripanotión en el metabolismo redox de tripanosomátidos.

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SABADO 7 SETIEMBRE - 9:00 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE MICROORGANISMOS Y PARÁSITOS

Coord: M. Sanguinetti, M.E. Francia, A. Martinez

Conferencistas:

Sonia Rodríguez Giordano - CVUy

Carlos Robello - CVUy

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Resúmenes seleccionados

Matias Preza (Facultad de Ciencias)

“Vías de neurotransmisión en platelmintos parásitos: posibles nuevas vías en las larvas de

cestodos”

Los platelmintos parásitos son organismos con una biología única y de gran importancia a

nivel sanitario y económico. Dentro de estos parásitos, los cestodos son un subgrupo que

presentan ciclos de vida complejos que pueden involucrar a varios hospederos. Se identifican

tres estadios bien diferenciados: oncósfera (estadio infectivo para humanos en las especies

más peligrosas), metacestodo y adulto. Desde el punto de vista del tratamiento, los sistemas

de neurotransmisión de estos organismos son considerados posibles blancos para el desarrollo

de nuevos fármacos contra ellos. En este trabajo se indagó en la presencia de sistemas de

neurotransmisión clásica y neuropeptidérgica en el ciclo de vida de cestodos, utilizando a

Hymenolepismicrostoma cómo modelo. Se buscaron genes relacionados a estas vías de

señalización en el genoma de H.microstoma y otros platelmintos parásitos por métodos

bioinformáticos, encontrando la pérdida evolutiva de algunos sistemas de neurotransmisión

clásica en cestodos cómo ser Dopamina, Octopamina, Tiramina, Histamina y GABA. Por otro

lado se demostró la presencia de los genes necesarios para las vías serotoninérgicas,

colinérgicas y glutamatérgicas, así como para sistemas de señalización peptidérgica.

Detectamos por datos transcriptómicos, RT-PCR e hibridación in situ la expresión diferencial de

estos genes en los diferentes estadios. En el estadio adulto se identificó la expresión de genes

marcadores de cada una de estas vías en forma localizada al sistema nervioso. En cambio, en el

estadio de oncósfera, sumamente reducido en tamaño y morfología, sólo existe expresión de

marcadores glutamatérgicos y peptidérgicos. En particular detectamos la expresión de un

nuevo neuropéptido específico de este estadio, y nuestros resultados sugieren que existen

solamente dos a tres células peptidérgicas en esta larva. En este momento estamos realizando

experimentos de cultivo in vitro de los diferentes estadios que permitan dilucidar la función de

estos neuropéptidos durante las transiciones del ciclo de vida de cestodos.

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Gabriela Specker (Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad de la

República).

“Peroxirredoxina mitocondrial de Trypanosomacruzi: actividad peroxidasa, holdasa y de

señalización”

El parásito intracelular Trypanosomacruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, tiene

un conjunto de sistemas antioxidantes enzimáticos que actúan para detoxificar los oxidantes

producidos en el parásito y por la respuesta inmune del huésped. Dentro de este sistema se

encuentran dos peroxirredoxinas típicas de dos cisteínas dependientes de triparredoxina,

localizadas en la mitocondria y en el citosol.

La participación de estas peroxirredoxinas en la defensa contra las especies reactivas derivadas

del huésped llevó a postularlas como factores de virulencia. En los últimos años se ha

establecido que las peroxirredoxinas cumplen otras funciones además de la actividad

peroxidasa, como actuar en la señalización redox celular y adquirir actividad holdasa. En este

trabajo se pretende ahondar en la función de los sistemas antioxidantes de T. cruzi como

factores de virulencia para el establecimiento de la infección. En particular, se plantea estudiar

el rol de las diferentes funciones de TcMPX en el contexto de la infección a macrófagos y de

estrés generado por el fármaco nifurtimox (NFX).

Hemos observado que parásitos sobreexpresantes de TcMPX aumentan el nivel de infección a

macrófagos sin estimular y/o inmunoestinulados (LPS/IFN), en comparación con parásitos

salvajes. Esto indica el rol protector de la TcMPX durante la infección. Adicionalmente, los

sobreexpresantes de TcMPX fueron más resistentes al tratamiento con NFX y muestran mayor

actividad holdasa. Los parásitos salvajes tratados con NFX aumentan el contenido de TcMPX

sugiriendo el rol de esta enzima y la actividad holdasa en la respuesta al estrés generado por el

fármaco. Finalmente, bajo condiciones de estrés causado por NFX o H2O2, se detectaron

aductosdisulfuro de la TcMPX con otras proteínas blanco, lo que sugiere que la TcMPX podría

participar en procesos de señalización celular en el contexto de estrés.

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Juan Andres Imelio (Laboratorio de Microbiología Molecular y Estructural, Institut Pasteur

Montevideo, Uruguay).

“CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE HEMK, UNA HISTIDÍN-QUINASA INVOLUCRADA EN LA

REGULACIÓN DEL METABOLISMO DE HEMO EN LEPTOSPIRA”

Las especies patógenas del género Leptospira son bacterias causantes de la leptospirosis, una

zoonosis desatendida en Uruguay. Este trabajo apunta a comprender mecanismos de

patogenicidad y virulencia de Leptospira, enfocándonos en una vía de señalización;

específicamente, un sistema de dos componentes involucrado en la regulación del

metabolismo de hemo. El primer componente, HemK, es una histidín-quinasa sensora de

transmembrana, cuya actividad catalítica es regulada por la presencia/ausencia de una señal

ambiental o intracelular hasta el momento desconocida. La activación de HemK depende de su

autofosforilación ATP-dependiente en una histidina conservada. El fosforilo es luego

transferido a un aspartato conservado del segundo componente de la vía, HemR, un regulador

de respuesta citoplasmático que actúa como factor de transcripción, regulando la expresión de

genes involucrados en el metabolismo de hemo. Nuestro objetivo es caracterizar bioquímica y

molecularmente HemK, y descubrir la señal específica que regula su activación. Se

sobreexpresó y purificó el dominio citoplasmático catalíticamente competente de HemK y se

caracterizaron sus actividades enzimáticas. Adicionalmente, se analizó la transcripción de

genes de la vía anabólica y catabólica de hemo utilizando PCR cuantitativa en tiempo real.

Distintas señales potenciales (hemina, ácido aminolevulínico, ausencia de sales de hierro)

fueron así ensayadas en cultivo líquido de Leptospirabiflexa. En particular reduciendo la

cantidad de hierro libre, se observó una regulación dual de ambas vías, con represión del gen

hemA (involucrado en biosíntesis de hemo) y simultáneamente, activación del gen de la

hemooxigenasahmuO (primera enzima de degradación del hemo, y un factor de virulencia en

la especie patógena L. interrogans). Con el fin de facilitar la evaluación cuantitativa de dichas

respuestas señal-dependientes, se diseñó un sistema de gen reportero con la proteína

fluorescente verde (GFP) bajo promotor regulado por HemR, logrando su clonado en un

plásmido capaz de replicarse en Leptospira.

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Valentina Blanco (Facultad de Ciencias)

“Caracterización primaria de Eg2DBDg1 de E. granulosus: miembro de una nueva subfamilia

de receptores nucleares”

La forma larvaria del platelminto parásito Echinococcusgranulosus es el agente causante de la

Echinococcosis quística, una zoonosis cosmopolita que constituye un problema de salud

pública mayor con un tratamiento costoso y complicado. Los receptores nucleares (NRs) son

reguladores transcripcionales de importantes procesos biológicos, sin embargo, en cestodos

son poco estudiados y nada conocemos respecto a los pertenecientes a la subfamilia 2DBD

(dos dominios de unión al ADN). Los 2DBD-NRs son muy interesantes desde el punto de vista

terapéutico, ya que no están presentes en los hospederos de dicho parásito, pudiendo ser

blanco de nuevas drogas antihelmínticas. Recientemente, hemos clonado un ADNc a partir de

protoescóleces de E. granulosus, que codifica para un receptor nuclear perteneciente a la

subfamilia 2DBD (Eg2DBDg1). Nos proponemos caracterizar a Eg2DBDg1 mediante la

identificación de las proteínas con quien interactúa, determinando si forma homodímeros o

heterodímeros con el Receptor X-RetinoideEgRXRb. En este sentido, utilizamos el ensayo de

doble híbrido de levadura, generado construcciones que expresan los dominios de unión a

ligandos (LBD) de los NRs. Nuestros resultados indican que Eg2DBDg1 forma homodímeros y

no interacciona con EgRXRb. Estos resultados están siendo confirmados mediante ensayos de

co-inmunoprecipitacon a partir de extractos protéicos de células de mamífero co-tranfectadas.

Este tipo de interacción abre un abanico de posibilidades para la unión del receptor al ADN

que podría depender de la unión de ligandos específicos. Debido a esto, estamos iniciando el

estudio del efecto de ligandos putativos sobre la homodimerización de Eg2DBDg1-LBD,

mediante ensayos de doble híbrido de levadura modificados. Además, generamos

construcciones truncas del LBD para investigar la región de interacción mínima utilizando este

último enfoque. Estos resultados nos ayudarán a comprender cuáles serían los ligandos de

Eg2DBDg1 y si éstos podrían derivar del hospedero, proporcionándonos información sobre la

comunicación hospedero-parásito a través de este NR.

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SABADO 7 SETIEMBRE - 11:30 hs

Sala 2 Ballroom P2

MESA: BIOLOGÍA CELULAR

Coord: R. Rodriguez, G. Ferreira

Conferencista:

Francisco Barrantes (Argentina) - Lab. Molec. Neurobiology, BIOMED UCA-CONICET.

rtfjb1@gmail.com

Cholesterol modulation of topology and dynamics of an ionic ligand-gated channel.

I will illustrate some dynamic aspects of the dialogue between the nicotinic acetylcholine

receptor (nAChR) and cholesterol, an interaction that started about 2.5 billion years ago.

I will focus on the translational motion of the nAChR, an important factor for determining

receptor number and stability at the synapse and hence, synaptic efficacy. We combine single-

molecule STORM superresolution localization microscopy with single-particle tracking and

various biophysical approaches to characterize the diffusional properties of individual, single

molecules, and their population behavior in living cells. At the single-molecule level, individual

trajectories are transiently interrupted by confinement episodes occurring in small

nanodomains (~45 nm radius), with millisecond-long lifetimes.This reversible nanoclustering

affects all trajectories and determine the resulting macroscopic motional regime and the

breadth of the heterogeneity in the population. The emerging picture is that the nAChR

operates in a complex variety of motional regimes, which are subject to cholesterol

modulation at the cell surface.

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Resúmenes seleccionados

#222 - Orrico et al. (FCien) Permeabilidad al H2O2 en eritrocitos humanos: ¿Difusión simple o

canales proteicos?

#284 - Canclini et al. (IIBCE) Microtúbulos nucleares en meiocitos

#49 - Espasandin et al. (IIBCE) Estudio de la vinculina en el corazón de un modelo murino de

Diabetes mellitus tipo 1

#290 - Di Paolo et al. (IIBCE) Proteómica axonal de nervio ciático regenerante revela

regulación local de maquinaria traduccional y componentes del citoesqueleto

#460 - Justet et al. (FMed) Activación de PKC y CaMKII durante la cicatrización de células de

endotelio de córnea de bovino en cultivo

#463 - Bresque et al. (IPMont - FMed) Regulación de SIRT6 frente a la respuesta inflamatoria

#228 - Veloz et al (IPMont-FCien) Rol de la proteína MARCKS-Like1a durante la neurulación

del pez cebra

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