separaciÓn cromatogrÁfica e identificaciÓn de trabajo de …
TRANSCRIPT
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN TIPO I
“SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA E IDENTIFICACIÓN DE
METABOLITOS SECUNDARIOS DE HOJAS DE Artemisia
absinthium L.”
AUTORES:
SILVA CORREA, CARMEN ROSA
SERRATO BOBADILLA, CINTHIA ANGELA
ASESOR:
Dr. WILLIAM SAGÁSTEGUI GUARNIZ
CO-ASESOR:
Mg. MAYAR GANOZA YUPANQUI
TRUJILLO – PERÚ
2010
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
DEDICATORIA
En primer lugar:
A DIOS
Por su gran amor, por guiarme por el sendero de la verdad y el bien, por estar a mi lado para poder superar los obstáculos que se presentan, además de darme la oportunidad de lograr una de mis más anheladas metas: el ser profesional.
CARMEN.
Con todo amor y cariño para mis padres:
MARTÍN y ROSA
Por sus grandes esfuerzos, y sabios consejos, por el sacrificio abnegado, comprensión e invalorable apoyo que siempre me han brindado, lo que me inspira para ser cada día mejor.
CARMEN.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
A mi hermano:
MANUEL MARTÍN
Por su inmenso cariño, por su apoyo incondicional en cada momento de mi vida y darme ánimos para alcanzar esta meta tan importante en mi carrera profesional.
CARMEN.
A mis padrinos:
GRIMALDO y LUZMILA
Por su comprensión, confianza y apoyo incondicional, haciendo así posible el desarrollo de mi carrera profesional. Por ello mi eterno agradecimiento.
CARMEN.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
A mis amigos:
GLEND SANDOVAL
MARÍA VIOLETA LAU
CINTHIA SERRATO
Por su amistad y compañía brindada durante estos años, por sus palabras de aliento en los momentos difíciles y por compartir gratos momentos, que perdurarán por siempre.
CARMEN.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
Son muchas las personas especiales a las que me gustaría agradecer su amistad, apoyo, ánimo y compañía en las diferentes etapas de mi vida. Sin importar en donde estén y si alguna vez llegan a leer esta dedicatorias quiero darles las gracias por formar parte de mi vida, por todo lo que me han brindado desinteresadamente y por todas sus bendiciones.
CINTHIA.
Padre Celestial.
Como hija no soy la mejor pero procuro serlo y siendo así, nunca me has abandonado, a veces me he sentido tan sola….pero siempre me sabias hacer llegar el más caluroso abrazo que un padre puede dar a sus hijos, gracias por amarme así con mis miles de defectos y errores, nunca me dejes de cuidar y aunque grande te necesito más que antes, te amo mi papito, todo te lo debo a ti mi Dios.
CINTHIA.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
CESAR
Esposo mío, soy tan afortunada al tenerte a mi lado...pude dejar todo pero siempre me distes ánimo para seguir con mi carrera…te amo por ser la fuerza de mi vida, para mí siempre serás el mejor ejemplo de lucha pues tu sólo y sin apoyo alguno, más que tu voluntad lograste superarte en la vida, te amo tanto aunque a veces no lo diga, gracias por estar a mi lado siempre, te amo.
CINTHIA.
HÉCTOR.
Hijo mío, eres toda mi vida entera, si en algún momento lo olvide, créeme que ahora lo tengo como un sello en mi corazón…se que reniegas cuando te corrijo o cuando te digo que no a lo que pides; créeme, que por mi te diera todo y nunca te dijera que no, pero no siempre estaré a tu lado, mi chiquito bello, eres el motivo de mi existir.
CINTHIA.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
Miss ELENA MANTILLA RODRÍGUEZ,
Como no decirle gracias por esas palabras de aliento que siempre me dio, siempre me ha escuchado y más que una profesora ha sido un ángel que Dios ha puesto en mi camino, créame que sus palabras me han hecho levantarme y ver mis problemas no tan grandes como uno lo creía, gracias miss Elenita, que Dios derrame muchas bendiciones sobre Ud. Le quiero mucho.
CINTHIA.
CARMEN SILVA
Tu sí que eres una amiga, te doy el premio nobel por la paciencia que siempre me has tenido …gracias amigocha por comprenderme, por preocuparte por mí, por ayudarme, en fin se que siempre has querido que sea una buena amiga, esposa y buena alumna…gracias por estar a mi lado Camuchita…que todas tus metas profesionales se te cumplan y conociéndote a ti, de seguro que será así …Además Camuchita, tus padres se deben de sentir muy orgullosos de tener una hija como tú, muchos éxitos amiga.
CINTHIA.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
AGRADECIMIENTOS
A nuestros Asesores:
Dr. WILLIAM SAGÁSTEGUI GUARNIZ
Mg. MAYAR GANOZA YUPANQUI
Por su valiosa orientación durante el desarrollo del presente trabajo de investigación.
A los Miembros de Jurado:
Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO
Mg. FRANCISCO SAAVEDRA SUÁREZ
Nuestro agradecimiento por sus valiosos aportes y desinteresada ayuda en la realización del presente trabajo.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
A los Sres. Técnicos de Laboratorio
Srta. ROSARIO CORVERA
Sr. LUIS LUJÁN
Sr. SANTIAGO LEÓN
Por su apoyo brindado durante la realización de este trabajo de investigación
CARMEN Y CINTHIA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
JURADO DICTAMINADOR
Mg. LIZARDO CRUZADO RAZCO ……………………………………….. (PRESIDENTE)
Dr. WILLIAM SAGÁSTEGUI GUARNIZ…………………………………… (MIEMBRO)
Mg. FRANCISCO SAAVEDRA SUÁREZ …………………………………… (MIEMBRO)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:
Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de la Facultad de
Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, presentamos a
vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente Trabajo de
Investigación Tipo I titulado: “SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA E
IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS DE HOJAS DE
Artemisia absinthium L.”
Es propicia esta oportunidad para manifestarles nuestro más sincero
reconocimiento a nuestra alma mater y a toda su plana docente, que con su
capacidad y buena voluntad contribuyeron a nuestra formación profesional.
Dejamos a vuestro criterio, señores miembros del jurado dictaminador, la
calificación del presente Trabajo de Investigación
Trujillo, Julio del 2010
CARMEN ROSA SILVA CORREA CINTHIA ÁNGELA SERRATO BOBADILLA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
1
SUMARIO
Pág.
I. INTRODUCCIÓN………………………………………………………….. .2
II. DISEÑO DE CONTRASTACIÓN…………………………………….……9
III. RESULTADOS…………………………………………………………..…14
IV. DISCUSIÓN………………………………………………………………...21
V. RESUMEN Y CONCLUSIONES…………………………………….…..25
VI. RECOMENDACIONES …………………………………………………..26
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………..…..27
VIII. ANEXOS…………………………………………………………………...31
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
2
I. INTRODUCCIÓN
Durante mucho tiempo los remedios naturales y, principalmente el uso de
plantas, fueron el principal y único recurso de que se disponía para intentar
prolongar la vida humana. En un principio las plantas se usaban ya sea por
experiencias adquiridas empíricamente o por intuición al observar las
propiedades de estas, lo anterior aún persiste, pero con la diferencia de que
hoy en día contamos con recursos para estudiarlas a fondo y de esta forma
conocer y valorar las maravillas que nos proporcionan 31.
Las plantas constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de
los países en desarrollo. Aunque no existen datos precisos para evaluar la
extensión del uso global de plantas medicinales, la Organización Mundial de la
Salud (OMS) ha estimado que más del 80% de la población mundial utiliza,
rutinariamente la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de
atención primaria de salud y que gran parte de los tratamientos tradicionales
implica el uso de extractos de plantas o sus principios activos. De acuerdo a la
OMS una planta medicinal es definida como cualquier especie vegetal que
contiene sustancias que pueden ser empleadas para propósitos terapéuticos o
cuyos principios activos pueden servir de precursores para la síntesis de
nuevos fármacos 2,10.
El organismo vivo puede ser considerado un laboratorio biológico, no sólo
para compuestos químicos (hidratos de carbono, proteínas, grasas, etc.) que
son utilizados por el hombre, conocidos como metabolitos primarios, sino para
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
3
una multitud de compuestos (compuestos fenólicos, alcaloides, terpenoides,
etc.) que ejercen un efecto fisiológico, llamados metabolitos secundarios 3, 32.
Estos son considerados compuestos no esenciales para el funcionamiento de
la célula vegetal, por cuanto no participan en las transformaciones bioquímicas
comunes o su función no está bien entendida. La variabilidad cualitativa entre
especies y familias botánicas se mantiene, en muchos casos, dependiendo de
factores climáticos, fenológicos, genéticos y edáficos, con sus diferentes
interacciones. Muchos de los compuestos producidos por las plantas silvestres
son aprovechados por éstas para protegerse de condiciones ambientales
adversas 1.
Mayormente los metabolitos secundarios más comunes son los
alcaloides, esteroides, diterpenos, sesquiterpenlactonas, flavonoides,
cumarinas, benzofuranos, xantatos, quinonas. Estos son compuestos químicos
de estructura relativamente compleja cuya función metabólica aún no es clara,
en los cuales sus propiedades terapéuticas están siendo científicamente
comprobadas, para sustentar su uso tradicional en problemas de salud 14.
Muchos de los metabolitos secundarios de las plantas, constituyen una
fuente de productos naturales con actividad biológica diversa, como por
ejemplo, actividad antibacteriana, antifúngica, anticancerígena, anticoagulante,
citotóxica, hipocolesterolémica, antihelmíntica, insecticida, neurotóxica,
molusquicida, inhibidores o promotores de crecimiento vegetal. Esta gama de
propiedades, permite a estos compuestos tener un gran potencial de
aplicación, ya sea aislándolo o usando directamente el extracto o infusión del
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
4
compuesto al que se le ha detectado una actividad biológica específica,
empleándolo como precursor en la síntesis de compuestos orgánicos, con el fin
de modelar nuevas sustancias con propiedades preestablecidas 9,30.
La fitoquímica es la encargada del estudio de estas sustancias activas,
relacionando la química orgánica de los productos naturales y la bioquímica de
la planta; es decir que se interesa por la enorme variedad de sustancias
orgánicas que son elaboradas y almacenadas por las plantas, la estructura
química de esos compuestos, su biosíntesis y metabolismo 11. Para esto, usa
técnicas de separación, aislamiento y análisis espectroscópicos con el
propósito de determinar sus estructuras químicas; y técnicas de síntesis para
efectuar modificaciones estructurales en busca de mejorar la actividad y
selectividad 5,14.
El término separación es amplio, básicamente puede considerarse como
una operación que consiste en dividir una mezcla en partes de composición
distinta. La separación es un proceso físico, pero a menudo implica procesos
químicos, que utiliza técnicas de cromatografía en capa fina, en columna y de
cromatografía de líquidos de alta resolución, que son herramientas que
permiten aislar, purificar e identificar los componentes bioactivos en una gran
diversidad de plantas 8, 9,29.
La cromatografía plana o en capa fina es un tipo de cromatografía liquida
en la que la fase estacionaria está extendida sobre la superficie de un plano y
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
5
la fase móvil fluye a través de ella. La fase móvil siempre es un líquido,
mientras que la fase estacionaria puede ser un líquido soportado en un sólido
(cromatografía de partición) o un solido sorbente (cromatografía de adsorción,
cambio iónico o exclusión. El flujo de la fase móvil se produce por capilaridad
(cromatografía horizontal y ascendente o por capilaridad y gravedad
(cromatografía descendente) 29.
Este tipo de cromatografía es considerada la más simple de todas las
técnicas cromatográficas. La diferencia principal con la cromatografía en
columna es de tipo técnico, es decir, sólo difieren en el medio de soportar el
adsorbente. En ambas técnicas se emplea alúmina (Al2O3) o gel de sílice como
fase estacionaria y una fase móvil orgánica. En la cromatografía en columna el
adsorbente se introduce en un tubo o columna (generalmente de vidrio),
mientras que en la cromatografía en capa fina, el adsorbente se deposita en
forma de capa delgada sobre una placa de vidrio o de plástico. Los dos
adsorbentes más corrientes, el gel de sílice y la alúmina, son diferentes, pero
actúan esencialmente del mismo modo. Ambos efectúan la separación
principalmente por retención de los componentes sobre la superficie mediante
de fuerzas de ácido de Lewis y base de Lewis; con diferente intensidad sobre
las muestras 6, 29.
Con el paso del tiempo las investigaciones químicas relacionadas con el
aislamiento, biosíntesis y elucidación estructural de nuevos compuestos
provenientes de la naturaleza han contribuido al avance farmacéutico en el
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
6
tratamiento de enfermedades mediante la formulación de nuevos
medicamentos, es por ello importante continuar investigando los metabolitos
secundarios de las diversas especies de plantas, en busca de nuevos
principios activos 8, 9.
En el Perú se encuentra la especie Artemisia absinthium L. “ajenjo” que
es una especie herbácea que pertenece a la familia Asteraceae, de
aproximadamente 90 cm de altura, con sus órganos vegetativos pilosos. Es
originaria del Centro y Sur de Europa, Norte de África y Centro de Asia. Toda
la planta contiene un aceite esencial (oleum absinthii) que contiene tuyona,
tuyol, proazuleno, felandreno y otros compuestos como mirceno y acetato de
trans-sabinyl (26,4%) Además, las partes verdes contienen un glucósido
lactónico sesquiterpénico, (absintiina) que es un principio amargo 12, 13, 14, 15, 22,
25.
El “ajenjo” es tóxico en grandes dosis, pero es un excelente tónico
amargo, febrífugo, antiséptico, diurético, emenagogo y antihelmíntico. En su
uso tradicional se le conoce como uno de los mejores tónicos estomacales
contra la dispepsia, la gastralgia y la insuficiencia hepática. De sus hojas y
flores se obtiene una infusión de “coñac” que se utiliza contra la gota.
Igualmente es utilizada para estimular el apetito y facilitar la digestión; y como
tónico para el hígado y la vesícula biliar. En aplicaciones externas, se puede
utilizar contra dolores de cabeza y torceduras. También el “ajenjo” goza de gran
reputación como tónico contra la escrofulosis, la anemia, la artritis y como
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
7
abortivo, así como el licor de “ajenjo” como tónico del sistema nervioso central.
Su uso prolongado engendra un proceso de degeneración nerviosa irreversible
(absintismo), que se manifiesta con grandes perturbaciones psíquicas, motrices
y sensoriales que conducen al decaimiento total del individuo. El agente
responsable es la esencia rica en α-tuyona 19, 23, 27, 33.
Además existe investigaciones que demuestran que Artemisia
absinthium presenta actividad antioxidante, atribuyendo este efecto a
compuestos fenólicos y flavonoides presentes en esta planta 4,16.
En base a estos antecedentes, en el presente trabajo se pretende
realizar la separación cromatográfíca e identificación de los metabolitos
secundarios presentes en hojas de Artemisia absinthium L., con el propósito de
que en posteriores investigaciones se evalué el efecto farmacológico de dichas
fracciones para así contribuir al descubrimiento de nuevos principios activos
que sirvan de precursores para la síntesis de nuevos fármacos en el
tratamiento de diversas enfermedades.
Para ello nos planteamos el siguiente problema:
¿Cuáles son los metabolitos secundarios presentes en las fracciones
cromatográficas de hojas Artemisia absinthium L?
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
8
OBJETIVOS:
Separar mediante cromatografía en capa fina y en columna los
metabolitos secundarios de Artemisia absinthium L.
Realizar la identificación fitoquímica de las fracciones obtenidas.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
9
II. DISEÑO DE CONTRASTACIÓN
1) Identificación de Muestras de Artemisia absinthium L.
La planta de Artemisia absinthium L fue recolectada en el Departamento
de Cajamarca, provincia de Contumazá, e identificada y clasificada
según el syllabus de Engler comparando con el material disponible en el
Herbarium Truxillense de la Facultad de Ciencias Biológicas de la
Universidad de Trujillo.
DIVISIÓN……………………………………………………Angiospermae
CLASE…………………………………………………….Dicotyledoneae
SUBCLASE…………………………………………….Metachlamydeae
ORDEN……………………………………………….Campanulales
FAMILIA…………………………………………... Asteraceae
SUBFAMILIA…………………………………… Tubulifloras
GENERO…………………………………….. Artemisia
ESPECIE………………………………….absinthium L.
2) Secado y Pulverización de Artemisia absinthium L.
Las muestras de hojas se lavaron y secaron a temperatura ambiente y
luego se llevó a secado en estufa a 45 ºC por 48 horas. Finalmente se
pulverizaron las muestras secas con la ayuda de un molino eléctrico y se
almacenaron en bolsas de papel.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
10
3) Preparación de los extractos
Se pesó 200 gramos de hojas secas y molidas, luego se colocó en
frascos de boca ancha al 10% P/V, se agregó en cada uno cantidad
suficiente de hexano, éter de petróleo, diclorometano, acetato de etilo,
metanol, agua, exactamente hasta cubrir las hojas, se dejó macerar por
agitación magnética por 24 horas, a excepción del extracto acuoso, el
cual sólo fue llevado a reflujo por 1h. Luego cada extracto se filtró
obteniéndose dos productos: el marco y el extracto con solvente. El
marco se volvió a macerar 2 veces más con el respectivo solvente y
luego los extractos se juntaron para ser llevados a rotavapor Heidolph ®
a 37 ºC y 5 bar de presión constante. Para el caso del extracto acuoso
se filtró obteniéndose nuevamente el marco y el solvente. El extracto
seco se obtuvo a partir de una evaporación del solvente mediante una
estufa a 40 o 45 ºC, para luego llevarlo a refrigeración.
4) Separación de los metabolitos secundarios: Fraccionamiento en
columna
La columna fue empacada usando silicagel G-60. El aislamiento de los
metabolitos a separar de cada extracto se llevó a cabo haciendo pasar
suficiente cantidad de fase móvil elegida, a través de la columna hasta
que las bandas individuales eluyan de de la columna y se puedan
recoger.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
11
Extracto Fase Móvil
Hexano Hexano-Metanol
Acetato De Etilo Acetato De Etilo – Metanol
Diclorometano Diclorometano- Metanol
Metanol Metanol - Hexano
Acuoso Metanol - Hexano
Las fracciones recogidas fueron evaluadas utilizando cromatografía en
capa fina, uniendo las fracciones que tuvieron el mismo Rf , para luego
llevarse a la identificación fitoquímica 25,26.
5) Análisis Fitoquímico
Se colocó las fracciones obtenidas en cantidades menores de 0.1 g y se
diluyó con el solvente y medio adecuado para cada reacción de
coloración y precipitación.
a) Identificación de Flavonoides
Reacción de Shinoda. Se colocó una cantidad de 0.1 g del extracto,
agregar etanol y luego una pequeña porción de limaduras de magnesio
y dos gotas de ácido clorhídrico concentrado. Con el desarrollo de
coloración es indicativo de la presencia de Flavonas (amarillo rojo),
Flavononoles (rojo a magenta), flavononas (rojo magenta o azul
violeta), isoflavonas (amarillo) 14.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
12
b) Identificación de Esteroles y Terpenoides
Reacción de Lieberman – Buchardat. Se colocó un 1 mL del extracto
y añadir 10 gotas de anhídrido acético, 20 gotas de ácido acético y una
gota de ácido sulfúrico 14.
Esta reacción sirve para revelar la presencia de esteroides que dan
coloraciones que varían del rosa al verde y finalmente pardas 17.
c) Identificación de Alcaloides
Reacción de Mayer. Se aforó 1.35 g de bicloruro de mercurio y 4 g de
yoduro de potasio en una fiola de 100 mL con agua destilada. Luego el
extracto se aciduló con una solución de ácido clorhídrico al 1%. El
reactivo de Mayer precipita al alcaloide en medio ácido, dando un color
blanquecino amarillento, sin embargo este precipitado es poco soluble
en exceso de reactivo y completamente soluble en alcohol 14.
d) Identificación de Cumarinas
Fluorescencia con luz UV. Se diluyó 0.1 g del extracto en 2 mL de
alcohol etílico 96º. Luego se colocó en un tubo de ensayo y se llevó a
lámpara UV, las fluorescencias se intensifican agregando amoniaco 14.
e) Identificación de Sesquiterpenlactonas
Reacción de Baljet. Se emplearon dos soluciones que se mezclaron
en volúmenes iguales antes de usarse. Solución A, 1 g de ácido pícrico
en 100 mL de etanol de 96º, solución B, 10 g de hidróxido de sodio en
100 mL de agua. Para la prueba se colocó 2-3 mg del extracto y unas
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
13
III-IV gotas de reactivo, siendo positiva si se forma coloración
anaranjada o roja oscura 14.
f) Identificación de Antraquinonas
Reacción de Bortranger. Se colocó en un tubo de ensayo una
pequeña porción de extracto y se añadió unos 5 mL de benceno,
agítese. El benceno toma color amarillo. Luego se trasvasó el benceno
a otro tubo de ensayo y añadir unas gotas de solución de KOH. La
aparición de una coloración roja indica la presencia de antraquinonas
14, 17.
g) Identificación de Saponinas
Reacción de Rossel. Se colocó en una cápsula de porcelana cantidad
suficiente de extracto, y se añadió unas gotas de ácido sulfúrico
concentrado. 14.
h) Identificación de Taninos
Reacción de Tricloruro férrico. Se preparó una solución de Tricloruro
de hierro al 3% y se agregó 20 gotas al extracto. Esta reacción se
utiliza para identificar compuestos que posean en su estructura una
función fenólica, como los taninos. Según la naturaleza química del
tanino se observarán coloraciones que varían desde el azul-negro
(pirogálicos) hasta verde (catéquicos) 14,17.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
14
III. RESULTADOS
Los resultados del Análisis Fitoquímico de las fracciones cromatográficas
obtenidas de hojas de Artemisia absinthium L. se muestran en las siguientes
tablas:
En la Tabla Nº 1 se presenta los metabolitos secundarios encontrados
en extractos Hexánico, Acetato Etílico, Diclorometano, Metanol y acuoso de
hojas de Artemisia absinthium “ajenjo”, identificados con reacciones de
coloración y precipitación.
En la Tabla Nº 2 se presenta los metabolitos secundarios encontrados
en fracciones cromatográficas en el extracto hexánico de hojas de Artemisia
absinthium “ajenjo” (fase móvil hexano-metanol), identificados con reacciones
de coloración y precipitación.
En la Tabla Nº 3, Nº 4, Nº 5 y Nº 6 se presenta los metabolitos
secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto acetato
etílico, diclorometano, metanólico y acuoso, respectivamente.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
15
TABLA Nº 1: Metabolitos secundarios encontrados en extractos Hexánico, Acetato Etílico, Diclorometano, Metanol y acuoso de
hojas de Artemisia absinthium “ajenjo”, identificados con reacciones de coloración y precipitación.
METABOLITOS PRUEBA
EXTRACTO
HEXANO
EXTRACTO
ACETATO ETILO
EXTRACTO
DICLOROMETANO
EXTRACTO
METANÓLICO
EXTRACTO
ACUOSO
Alcaloides Mayer - - +
+ +
Antraquinonas Bortranger - - + - -
Esteroles y
Terpenos
Lieberman –
Burchardat + + + + -
Flavonoides Shinoda - + + + +
Lactonas Baljet + + + - -
Taninos FeCl3 + + - + -
Cumarinas Fluorescencia - - - - -
Saponinas Rossel - - - - -
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
16
TABLA Nº 2: Metabolitos secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto hexánico de hojas de Artemisia
absinthium “ajenjo” (fase móvil hexano-metanol), identificados con reacciones de coloración y precipitación.
Metabolitos Prueba Fracciones Cromatográficas del Extracto Hexánico
1 2 3 4 5 6 7 8
Alcaloides Mayer - - - - - - - -
Antraquinonas Bortranger - - - - - - - -
Esteroles y
Terpenoides Lieberman – Burchard - + - - + + - -
Flavonoides Shinoda - - - - - - - -
Lactonas Baljet - - + + - - - -
Taninos FeCl3 + - - - - - + +
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
17
TABLA Nº 3: Metabolitos secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto acetato etílico de hojas de
Artemisia absinthium “ajenjo” (fase móvil: acetato móvil – metanol), identificados con reacciones de coloración y
precipitación.
Metabolitos Prueba Fracciones Cromatográficas del Extracto Acetato Etílico
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Alcaloides Mayer - - - - - - - - - -
Antraquinonas Bortranger - - - - - - - - - -
Esteroles y
Terpenoides
Lieberman –
Burchard + - - - + - - - + -
Flavonoides Shinoda - + + - - - - - - +
Lactonas Baljet - - - - - + - + - -
Taninos FeCl3 - - - + - - + - - -
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
18
TABLA Nº 4: Metabolitos secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto diclorometano de hojas de
Artemisia absinthium “ajenjo” (fase móvil: diclorometano – metanol), identificados con reacciones de coloración y
precipitación.
Metabolitos Prueba Fracciones Cromatográficas del Extracto Diclorometano
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Alcaloides Mayer + - + + - - - - - -
Antraquinonas Bortranger - + - - - - - - - -
Esteroles y
terpenoides
Lieberman –
Burchard - - - - - - - + + -
Flavonoides Shinoda - - - - - - + - - +
Lactonas Baljet - - - - + + - - - -
Taninos FeCl3 - - - - - - - - - -
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
19
TABLA Nº 5: Metabolitos secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto metanólico de hojas de
Artemisia absinthium “ajenjo” (fase móvil: metanol - hexano), identificados con reacciones de coloración y
precipitación.
Metabolitos Prueba Fracciones Cromatográficas del Extracto Metanólico
1 2 3 4 5 6 7 8
Alcaloides Mayer + - + - - - + -
Antraquinonas Bortranger - - - - - - - -
Esteroles y
Terpenoides Lieberman – Burchard - - - - + - - -
Flavonoides Shinoda - - - + - - - +
Lactonas Baljet - - - - - - - -
Taninos FeCl3 - + - - - + - -
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
20
TABLA Nº 6: Metabolitos secundarios encontrados en fracciones cromatográficas en el extracto acuoso de hojas de Artemisia
absinthium “ajenjo” (fase móvil: metanol- hexano), identificados con reacciones de coloración y precipitación.
Metabolitos Prueba Fracciones Cromatográficas del Extracto acuoso
1 2 3 4 5 6
Alcaloides Mayer - - + - + -
Antraquinonas Bortranger - - - - - -
Esteroles y
Terpenoides Lieberman – Burchard - - - - - -
Flavonoides Shinoda + + - - - +
Lactonas Baljet - - - - - -
Taninos FeCl3 - - - - - -
+ : Presencia del metabolito secundario
- : Ausencia del metabolito secundario
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
21
IV. DISCUSIÓN
En el presente trabajo se realizaron extracciones y separaciones
cromatográficas en las hojas Artemisia absinthium L., con la finalidad de
identificar los metabolitos secundarios presentes en cada fracción
cromatográfica. Para ello se realizó la identificación preliminar mediante
reacciones de coloración y de precipitación de los metabolitos secundarios
presentes en los diversos extractos obtenidos con solventes orgánicos de
diferente polaridad (Hexánico, Acetato Etílico, Diclorometano, Metanólico y
acuoso) en hojas de Artemisia absinthium L. “ajenjo”, notándose la
presencia de esteroles y terpenos en los extractos Hexánico, Acetato
Etílico, Diclorometano y Metanólico; alcaloides en los extractos
Diclorometano, Metanólico y acuoso; flavonoides en los extractos acetato
etílico, Diclorometano, Metanólico y acuoso; lactonas sesquiterpénicas en
los extractos Hexánico, Acetato Etílico, Diclorometano; mientras que
taninos, en los extractos Hexánico, Acetato Etílico y Metanólico. Es
importante resaltar que la presencia de esteroles solo se notó en el extracto
Diclorometano, no encontrándose saponinas y cumarinas en ninguno de los
extractos (Tabla Nº 1).
Luego de esta identificación se procedió a la separación de los
metabolitos secundario encontrado en los distintos extractos, mediante
cromatografía en columna, utilizando como fase móvil solventes orgánicos
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
22
con sistemas de polaridad creciente. Las fracciones obtenidas fueron
evaluadas mediante cromatografía en capa fina, procediendo a unir
aquellas fracciones que presenten igual Rf 24,26.
Los metabolitos separados correspondientes a Alcaloides se
encontraron en las fracciones F1, F3, F4 – Diclorometano; F1, F3, F7 –
Metanólico y F3, F5- Acuoso (Tabla Nº 4, Nº 5 Y Nº 6). Los alcaloides en la
naturaleza se encuentran en forma de sales aunque también libres. Los
alcaloides son muy usados en farmacología y en medicina (analgésicos,
anestésicos, hipnóticos, cardiotónicos, hipotensores, tranquilizantes,
alucinógenos, eméticos, etc.) 5, 28.
Las fracciones que presentan antraquinonas correspondieron a F03
F04 – Diclorometano (Tabla Nº 4). Las Antraquinonas derivadas del
antraceno y el fenantreno, son principios activos laxantes y purgantes, en
sus formas de heterósido 3, 5, 6.
La presencia de Esteroles y terpenoides se identifico en las
fracciones F2, F5, F6 – Hexánico; F1, F5, F9- acetato etílico; F8, F9 –
Diclorometano; F5- Metanólico (Tabla Nº 2, Nº 3, Nº 4 y Nº 5). Los terpenos
presentan una gran diversidad de estructuras, formadas por unidades
repetidas de cinco carbonos (isopentil o isopreno), por lo que se pueden
encontrar formando parte de estructuras más complejas como por ejemplo
aceites esenciales. Los terpenos se dividen en cinco grupos de acuerdo con
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
23
el número de unidades de isopreno que contenga su molécula, por lo tanto
existen monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos, sesterterpenos,
triterpenos y politerpenos. Entre los principales usos terapéuticos se
encuentra que actúan como sedantes, tranquilizantes, hipnóticos,
antiespasmódicos, carminativos, analgésicos, antiinflamatorios, diuréticos,
coleréticos, antipiréticos, hipotensores, y antiarrítmicos 24, 28.
Se identificó flavonoides en las fracciones F2, F3 –Acetato etílico; F7.
F10- Diclorometano; F4, F8 –Metanólico, F1 F2 y F6- acuoso (Tabla Nº 3,
Nº 4, Nº 5 Y Nº 6). Los flavonoides son una familia muy diversa de
compuestos, aunque todos los productos finales se caracterizan por ser
polifenólicos y solubles en agua. Existen 6 clases principales, las
chalconas, las flavonas, los flavonoles, los flavanoles, las antocianidinas, y
los taninos condensados, y otras dos más, las xantonas y las auronas.
Poseen acciones terapéuticas muy variadas, tales como acción vitamínica,
antihemorrágica, antiarrítmicos, protectores de la pared vascular o capilar,
antiinflamatoria, antibacteriana, antifúngica, diurética, antiurémica y
antiespasmódica 28.
Las fracciones que presentan taninos fueron F1, F7, F8 – Hexánico;
F4, F7 – Acetato Etílico; F2, F6 – Metanólico (Tabla Nº 2, Nº 3 y Nº 5). Se
identificó la presencia de lactonas sesquiterpénicas en las fracciones F3,
F4-Hexánico; F6, F8 - Acetato Etílico, F5, F6 – Diclorometano (Tabla Nº 2,
Nº 3 y Nº 4). Los taninos son sustancias químicas complejas, no
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
24
nitrogenadas, de diferente estructura química, dan con las sales de hierro
precipitados azules, negros o verdes. Su interés medicinal radica
principalmente en su carácter astringente, ya que por su propiedad de
coagular las albumina de las mucosas y de los tejidos, crea una capa de
coagulación aislante y protectora, que reduce la irritación y el dolor, además
de que detiene las pequeñas hemorragias 3, 28.
Según los resultados, las lactonas de naturaleza sesquiterpénica se
obtuvieron en mayor proporción en el solvente de más baja polaridad;
siendo ausentes en metanol y agua. Esto indica la presencia de lactonas
de naturaleza lipofílica, que tiene afinidad por los solventes apolares. Cabe
resaltar, también que las lactonas pueden estar en forma de glucósidos;
pero éstos son muy inestables (Glucósidos lactónicos) y que se pudieron
destruir en el tratamiento previo de la droga, a la marcha fitoquímica. Tal es
así que no aparecieron en el extracto acuoso. Mucciarelli (1995) afirma que
en muchos casos, la presencia de monoterpenos y sesquiterpenos en las
distintas especies de Artemisia son la razón de su aplicación etnobotánica,
identificándose en A. absinthium diferentes compuestos en dependencia de
su procedencia geográfica 7,11, 18, 20.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
25
V. RESUMEN Y CONCLUSIONES
En el presente trabajo se investigó los metabolitos secundarios en las
fracciones cromatográficas obtenidas de las hojas de Artemisia absinthium L. Para
tal fin se recolectaron hojas de Artemisia absinthium L., nombre común “ajenjo”, de
la Provincia de Contumazá, Departamento de Cajamarca, que fueron desecadas a
temperatura ambiente y en estufa a 45 ºC, pulverizadas y tratadas con solventes
Hexánico, Acetato Etílico, Diclorometánico, Metanólico y Acuoso, y obtener los
extractos correspondientes con una segunda separación mediante el
fraccionamiento en columna y confirmar la presencia de los metabolitos
secundarios con reacciones de coloración y precipitación.
De los resultados encontrados se concluye que los metabolitos secundarios
encontrados en las diferentes fracciones cromatográficas evaluadas con
reacciones de coloración son: Alcaloides, Flavonoides, Taninos, Antraquinonas,
Lactonas, Esteroles y Terpenoides.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
26
VI. RECOMENDACIONES
Por el uso de Artemisia absinthium L. “ajenjo” en medicina tradicional es
importante continuar estos estudios de investigación a fin de determinar los
metabolitos responsables de los efectos farmacológicos atribuidos a esta
planta.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
27
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Albornoz, A. Productos naturales, sustancias y drogas extraídas de las
plantas. Caracas; 1980. p.84
2. Bermúdez A, Oliveira M, Velásquez D.La investigacion etnobotánica sobre
planats medicinales: Una revision de sus objetivos y enfoques actuales.
Interciencia, agosto 2005, vol. 30, número 008.
3. Bruneton J. Farmacognosia. Fitoquímica Plantas Medicinales. 2º edición.
Editorial Acribia. España; 2001.
4. Canadanovic J, Djilas S, Cetkovic G, Tumbas V. Free-radical scavenging
activity of wormwood (Artemisia absinthium L) extracts. J. Sci. Food Agric.
85(2): 265- 272; 2004.
5. Domínguez X. Métodos de Investigación Fitoquímica. 1º ed. México:
Editorial Limusa; 1979. p: 42, 84, 97, 218.
6. Durst H, Gokel G. Química Orgánica Experimental. Editorial Reverté S.A.
España; 1985, p: 79,80
7. Ganoza M. Fundamentación química de las reacciones de coloración y
precipitación en la identificación de metabolitos secundarios de plantas
medicinales. [Tesis]. UNT. Trujillo; 2000.
8. Golomm H, Feddor G: Practical HPL-Chromatography in Medicinal Plants.
3rd Ed., London, J. & A. Churchill, 1970. p 125-156.
9. González F, Silva M. Sustentabilidad de la biodiversidad un problema
actual. 1º Ed. Universidad de Concepción de Chile; 2001. p.496.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
28
10. Grabley S, Thiericke R. Drug Discovery from Nature, Springer-Verlag,
Germany, 1999 Journal of Automated Methods & Management in
Chemistry, Vol. 22, No. 5
11. Harbone J.B. Phytochemical Methods. Editorial Champan and Hill. USA;
1973. p. 6-22
12. Judþentienë A, Mockutë D. Chemical composition of essential oils of
Artemisia absinthium L. (wormwood) growing wild in Vilnius. CHEMIJA.
2004. T. 15. Nr. 4. p. 64–68
13. Lechuga J. Cultivo de tejidos vegetales en Artemisia absinthium L.
(Asteraceae). Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa. México,
D.F. 1995. [citado 5 Jun 2010]. Disponible en: URL:
http://148.206.53.231/UAM3098.PDF
14. Lock O. Investigación Fitoquímica. Métodos de Estudio de productos
Naturales. 2º ed. Lima: Editorial Pontificia Universidad Católica del Perú;
1994. p. 6, 8,10, 195-204.284-287.
15. López D, Alviano D, Kolodziejczyk P. Screening of chemical composition,
antimicrobial and antioxidant activities of Artemisia essential oils,
Phytochemistry, 69(8): 1732- 1738; 2008.
16. Mahmoudi et al. Antidepressant and antioxidant activities of Artemisia
absinthium L. at flowering stage. African Journal of Biotechnology Vol. 8
(24), p. 7170-7175, 15 December; 2009.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
29
17. Merck. Reactivos de coloración para cromatografía en capa fina y en papel,
Editorial Merck, Darmstadt, Alemania; 1972.
18. Miranda M. Farmacognosia y Productos naturales. 1ª ed. Ed. Félix Varela.
Cub; 2001. p: 141, 207, 291-292.
19. Mostacero J, Mejía F, Gamarra O. Taxonomía de las Fanerogamas útiles
del Perú. Volumen II. Trujillo-Perú: Editora Normas Legales; 2002. p.
868,870.
20. Mucciarelli M, Caramiello R, Maffei M, Chialva F. Essential oils from some
Artemisia species growing spontaneously in North- West Italy. Flavour
Fragance J 1995; 10:25-32.
21. Muñoz L. Plantas Medicinales y Aromáticas: estudio, cultivo y procesado.
Editorial Mundi-Prensa. España; 1993. p.15-20.
22. Nin S, Arfaioli P, Bosetto M. Quantitative determination of some essential
oil components of selected Artemisia absinthium plants, J. Essential Oil
Res. 7(3): 271-277; 1995.
23. Piloto J, Ramos A, Vizoso A, García A. Evaluación del potencial genotóxico
de un extracto fluido de incienso (Artemisia absinthium L.). Rev Cubana
Plant Med 2000;5(2):64-7
24. Randerath K. Cromatografía de Capa Fina, 1º ed. Ediciones URMO, S.A.
España; 1978. p.3-5
25. Rodríguez M. Evaluación de la actividad antimalárica de algunas plantas
utilizadas en la medicina tradicional cubana. Rev. Ciênc. Farm. Básica Apl.,
v. 27, n.3; 2006. p.197-205.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
30
26. Skoog-Holler-Nieman. Principios de Análisis Instrumental. 5 º ed. México.
Editorial Mc Graw Hill; 2005. p: 732,824-828
27. Tariq K, Chishti M, Ahmad F, Shawl A. Anthelmintic activity of extracts of
Artemisia absinthium against ovine nematodes, Vet. Parasitol. 160(1-2): 83-
88; 2009.
28. Trease G, Evans W. Tratado de Farmacognosia. 15ª ed. Editorial Blume.
España; 1993. p. 263-280, 728-730.
29. Valcárcel M, Gómez A. Técnicas Analíticas de Separación. Editorial
Reverté S.A, España 1988. p. 1, 389
30. Villar del Fresno. Farmacognosia General. 1era Edición. Editorial Síntesis.
España.; 1999. p. 230, 253.
31. Volák J, Stodola J. Plantas medicinales. Editorial Susaeta. Checoslovaquia;
1992. p 6-11,33.
32. Williams D, Stone M, Hauck P, Rahman S. Nat. Prod., 59, 1189-1208;
1989.
33. Wright C. Artemisia. Medicinal and aromatic plants- industrial profiles.
London: Taylor & Francis; 2002. p. 55-58.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
31
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
32
ANEXO Nº 1: Artemisia absinthium L. “Ajenjo”.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
33
ANEXO Nº 2: Separación cromatográfica de los metabolitos secundarios.
ANEXO Nº 3: Fracciones cromatográficas obtenidas.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
34
ANEXO Nº 4: Cromatografía en capa fina y determinación de Rf de
las fracciones obtenidas.
ANEXO Nº 5: Identificación de Flavonoides mediante Reacción de
Shinoda.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
35
ANEXO Nº 6: Identificación de Esteroles mediante Reacción de
Lieberman – Buchardat.
ANEXO Nº 7: Identificación de Alcaloides mediante Reacción de Mayer
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
36
ANEXO Nº 8: Identificación de Sesquiterpenlactonas mediante Reacción
de Baljet.
ANEXO Nº 9: Identificación de Taninos mediante Reacción de Tricloruro
férrico.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/